Pribavljanje i distribucija hranljivih materija integriše ishranu insekata i osobine životne istorije. Da bi nadoknadili nedostatke specifičnih hranljivih materija u različitim životnim fazama, insekti mogu dobiti ove hranljive materije kroz dopunsku ishranu, na primer, hraneći se izlučevinama kralježnjaka u procesu poznatom kao lokve. .Cilj ove studije bio je procijeniti da li je An.arabiensis agitacija na kravlji urin radi sticanja nutrijenata poboljšava karakteristike životne istorije.
Uvjerite se da je sigurno. Arabiensis je privukao miris svježeg, 24-satnog, 72-satnog i 168-satnog kravljeg urina, a ženke koje su tražile domaćina i hranjene krvlju (48-satno nakon krvnog obroka) su izmjerene u olfaktometru s Y-cijevi, a zatim je procijenjena i korišćena elektrofiziološka analiza gravidnih ženki. y bioaktivnih jedinjenja u urinu krava u sve četiri starosne klase. Sintetičke mešavine bioaktivnih jedinjenja su procenjene u Y-cevi i terenskim ispitivanjima. Da bi se istražio kravlji urin i njegovo glavno jedinjenje koje sadrži azot kao potencijalna dopunska ishrana za vektore malarije, izmereni su parametri hranjenja i karakteristike životne istorije. Ženke su procijenjene za preživljavanje, privezan let i reprodukciju.
Potražite krv i hranu domaćina. U laboratorijskim i terenskim studijama, Arape je privukao prirodni i sintetički miris svježeg i ostarjelog kravljeg urina. Trudne ženke su bile ravnodušne prema odgovorima kravljeg urina na mjestima mrijesta. ili reprodukcija.
Anopheles arabinis akvizicija i distribucija kravljeg urina za poboljšane karakteristike istorije života. Dodatno hranjenje kravljim urinom utiče direktno na kapacitet vektora povećanjem dnevnog preživljavanja i gustine vektora, a indirektno promjenom aktivnosti leta i stoga bi se trebalo razmotriti u budućim modelima.
Sticanje i distribucija hranljivih materija integriše karakteristike ishrane insekata i životne istorije [1,2,3]. Insekti su u stanju da biraju i nabavljaju hranu i obavljaju kompenzatorno hranjenje na osnovu dostupnosti hrane i potreba za nutrijentima [1, 3]. Distribucija hranljivih sastojaka zavisi od procesa životne istorije i može dovesti do različitih zahteva za kvalitetom i količinom ishrane u ishrani i količinom u određenim fazama života [comsects nutrients to competiens nutriici 1 defences nutrienti]. insekti mogu dobiti ove hranljive materije kroz dopunsku ishranu, kao što su blato, različiti izmet i izlučevine kičmenjaka, i strvina, proces poznat kao lokve [2]. Iako su razne vrste leptira i moljaca prvenstveno opisane, pojilice se javljaju i u drugim redovima insekata, a privlačnost i hranjenje na ove vrste hrane, zdravlja i drugih mogu imati značajne efekte [5]. 7].Malarijski komarac Anopheles gambiae sensu lato (sl) pojavljuje se kao 'pothranjena' odrasla osoba [8], tako da zalijevanje može igrati važnu ulogu u karakteristikama njegove životne povijesti, ali ovo ponašanje je do sada bilo zanemareno. Upotreba uznemirenosti kao sredstva za povećanje unosa nutrijenata može imati važne posljedice u ovoj važnoj epidemiološkoj situaciji.
Unos dušika kod odraslih ženki komaraca Anopheles ograničen je zbog niskih kalorijskih rezervi koje se prenose iz larve i neefikasnog iskorištavanja krvnog obroka [9]. Ženka Ann.gambiae sl to obično kompenzira suplementacijom dopunskim krvnim obrocima [10, 11], čime se više ljudi dovodi u opasnost od bolesti i rizik od zaraze. skviti mogu koristiti dopunsku ishranu izlučevinama kralježnjaka da bi stekli azotna jedinjenja koja poboljšavaju adaptaciju i upravljivost leta, kao što pokazuju drugi insekti [2]. U tom smislu, interesantna je snažna i izrazita privlačnost jedne od srodnih vrsta unutar An. Kompleks gambijskih sl vrsta, Anopheles arabinis, svježi i ostarjeli, kravlji urin, opunlesport,14 in [14] njegove preferencije domaćina i poznato je da se povezuje sa govedom i hrani se njome. Kravlji urin je resurs bogat azotnim jedinjenjima, pri čemu urea čini 50-95% ukupnog azota u svežem urinu [15, 16]. Kako kravlji urin stari, mikroorganizmi koriste ove resurse da smanje složenost azota povezanih sa 14 satima [14 sati]. pad organskog dušika, alkalofilni mikroorganizmi (od kojih mnogi proizvode jedinjenja toksična za komarce) napreduju [15], što može biti ženka Ann.arabiensis preferirano privlači urin u dobi od 24 sata ili manje [13, 14].
U ovoj studiji su traženi domaćini i Ans hranjeni krvlju. Tokom svog prvog ciklusa gonadotropina, arabiensis je procijenjen na stjecanje dušičnih spojeva, uključujući ureu, miješanjem urina. Zatim je provedena serija eksperimenata kako bi se procijenilo kako ženke komaraca raspoređuju ovaj potencijalni nutritivni resurs, te poboljšaju kooperativni resurs ili preživjeli. urin je procijenjen kako bi se utvrdilo da li oni pružaju pouzdane tragove za domaćina i An koji se hrani krvlju. U potrazi za ovim potencijalnim nutritivnim resursom, arabiensis je otkrio kemijske korelacije iza uočene diferencijalne privlačnosti. Sintetičke mirisne mješavine hlapljivih organskih spojeva (VOC) identificirane u 24-satnom odležanom urinu, dodatno su procijenjeni rezultati dobijeni u urinu u različitim uslovima rada goveda, a rezultati su dodatno procijenjeni u različitim uslovima rada goveda. fiziološka stanja.Privlačenje komaraca. Dobiveni rezultati potvrđuju da je An.arabiensis preuzima i distribuira dušična jedinjenja koja se nalaze u urinu kičmenjaka kako bi utjecala na karakteristike povijesti života. Ovi rezultati se razmatraju u kontekstu potencijalnih epidemioloških posljedica i kako se mogu koristiti za nadzor i kontrolu vektora.
Anopheles arabicans (soj Dongola) održavani su na 25 ± 2 °C, 65 ± 5% relativne vlažnosti i ciklusu svijetlo:mrak od 12:12 h. Larve su uzgajane u plastičnim posudama (20 cm × 18 cm × 7 cm) napunjenim destilovanom vodom i hranjene hranom Tetramin® W (Tetramin®, ribama Tetramin®, DE). ml šoljica (Nolato Hertila, Åstorp, SE) i zatim prebačeni u kaveze Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science, Taichung, Tajvan) kako bi se omogućilo nicanje odrasle osobe. Odraslim je davan 10% rastvor saharoze ad libitum do 4 dana nakon nicanja na kojoj su ženki odmah nakon nicanja ponuđene na prehrani (dpe). destilovana voda prije eksperimenta, kao što je opisano u nastavku. Ženke koje su korištene za eksperimente na cijevi za letenje bile su izgladnjele samo 4-6 sati s vodom ad libitum. Za pripremu komaraca koji sišu krv za naredne biotestove, 4 dpe ženke su dobile defibrotičnu ovčiju krv (Håtunalab, Bro, SE) pomoću membranskog sistema za hranjenje ženki Workshop, Workshop, Discoveryington. zatim prebačeni u pojedinačne kaveze i direktno im je davana dijeta, kao što je opisano u nastavku, ili 10% saharoze ad libitum 3 dana prije dole opisanih eksperimenata. Potonje ženke su korištene za biotestove na cijevi za letenje i prebačene u laboratorij, a zatim su imale destiliranu vodu ad libitum 4-6 sati prije eksperimenta.
Testovi hranjenja korišteni su za kvantificiranje potrošnje urina i ureje kod odraslih ženki An.Arapa. Ženke koje traže domaćina i ženke hranjene krvlju su dobile ishranu koja je sadržavala 1% razrijeđenog svježeg i starog kravljeg urina, različite koncentracije uree i dvije kontrole (10% saharoze i vode) u trajanju od 48 sati. -1; Sigma-Aldrich, Stockholm, SE) dodana je ishrani i isporučena u matrici 4 × 4 u epruvetama za mikrocentrifugu od 250 µl (Axygen Scientific, Union City, Kalifornija, SAD; Slika 1A) Napunite do ruba (~300 µl). Petrijeva posuda (12 cm u prečniku i 6 cm u visini; Semadeni, Ostermundigen, CH; Slika 1A) u potpunom mraku na 25 ± 2 cm °C i 65 ± 5% relativne vlažnosti. Ovi eksperimenti su ponovljeni 5 do 10 puta. Nakon izlaganja dijeti, komarci su stavljeni do dalje analize na -20 °C.
Potražite goveđi urin i ureu koje apsorbuje domaćin i ženka koja siše krv Anopheles arabianus. U ispitivanju hranjenja (A), ženke komaraca su dobile hranu koja se sastojala od svježeg i odležanog kravljeg urina, različitih koncentracija uree, saharoze (10%) i destilovane vode (H2O). -ženke koje traže apsorbuju 72-satni kravlji urin manje od 168-satnog kravljeg urina (B). Srednji sadržaj ukupnog azota (± standardna devijacija) u urinu je predstavljen na umetku. Ženke koje traže domaćina (D, F) i krvosise (E, G) uzimaju ureu na dozno-zavisan način, a svako drugo slovo je različito (Srednji slovo D se značajno razlikuje od drugog slova D) OVA koristeći Tukey-evu post hoc analizu; p < 0,05). Trake greške predstavljaju standardnu ​​grešku srednje vrijednosti (BE). Prava isprekidana linija predstavlja liniju log-linearne regresije (F, G)
Da bi se oslobodila apsorbirana hrana, komarci su pojedinačno stavljeni u epruvete za mikrocentrifugu od 1,5 ml koje su sadržavale 230 µl destilovane vode, a tkivo je razbijeno pomoću tučka za jednokratnu upotrebu i akumulatorskog motora (VWR International, Lund, SE), nakon čega je uslijedilo centrifugiranje na 10 µkrm (krpm u trajanju od 10 minuta). igma-Aldrich) i apsorbancija (λ620) određivani su pomoću spektrofotometarskog čitača mikroploča (SPECTROStar® Nano, BMG Labtech, Ortenberg, DE) nm). 800, Shimadzu, Kista, SE). Za kvantifikaciju unosa hranom, standardna kriva je pripremljena serijskim razrjeđivanjem kako bi se dobilo 0,2 µl do 2,4 µl 1 mg ml-1 ksilen cijanida. Zatim je korišćena optička gustina poznatih koncentracija boja u hrani za određivanje količine boje u svakoj od quimo količina hrane.
Podaci o zapremini analizirani su korištenjem jednosmjerne analize varijanse (ANOVA) praćene Tukeyjevim post hoc poređenjem u paru (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc., Cary, NC, US, 1989–2007). Analize linearne regresije su opisale koncentraciju ovisan unos uree i upoređene reakcije između primatelja i povratnog krvnog pritiska u krvi. 8.0.0 za Mac, GraphPad Software, San Diego, CA, SAD).
Otprilike 20 µl uzoraka urina iz svake starosne grupe vezano je na Chromosorb® W/AW (10 mg 80/100 mesh, Sigma Aldrich) i kapsulirano u limene kapsule (8 mm × 5 mm). ham, MA, US) za određivanje sadržaja dušika u svježem i odležanom urinu prema protokolu proizvođača. Ukupni dušik (g N l-1) je kvantificiran na osnovu poznatih koncentracija ureje korištenih kao standard.
Da bi se procijenio učinak prehrane na preživljavanje ženki koje traže domaćina i krvosise, komarci su pojedinačno stavljeni u velike Petrijeve posude (12 cm u promjeru i 6 cm u visinu; Semadeni) s rupom prekrivenom mrežom na poklopcu (3 cm u promjeru) sa Za ventilaciju i opskrbu hranom. 10% saharoze i vode. Svaka dijeta je pipetirana na zubni tampon (DAB Dental AB, Upplands Väsby, SE) umetnut u špric od 5 ml (Thermo Fisher Scientific, Geteborg, SE), klip je uklonjen i stavljen na vrh petrijeve posude (slika 1. gore opisana dijeta). Brojani su dva puta dnevno, dok su mrtvi komarci odbačeni do posljednjeg uginuća komarca (n = 40 po tretmanu). Preživljavanje komaraca hranjenih različitim dijetama statistički je analizirano korištenjem Kaplan-Meyerovih krivulja preživljavanja i log-rank testova za upoređivanje poređenja distribucije preživljavanja između dijeta. (IBM2 SPSS).0.0.
Prilagođeni leteći mlin za komarce zasnovan na Attisano et al.[17], napravljen od 5 mm debelih prozirnih akrilnih panela (10 cm širine x 10 cm dužine x 10 cm visine) bez prednjeg i stražnjeg panela (Sl. 3: vrh). Okretni sklop sa vertikalnom cijevi napravljenom od plinske hromatografske kolone; potrebno je objesiti kraj kolone za plinsku hromatografiju (0,25 mm, 5 cm pa za ljepilo od 0,25 mm, 5 cm i d). ir neodimijumskih magneta na udaljenosti od 9 cm. Horizontalna cijev napravljena od istog materijala (6,5 cm L) prepolovila je vertikalnu cijev kako bi formirala privezanu ruku i ruku koja je nosila mali komad aluminijske folije kao signal koji prekida svjetlo.
Ženke koje su bile izgladnjele 24 sata dobile su gornju ishranu 30 minuta prije obuzdavanja. Potpuno hranjene ženke komaraca su zatim pojedinačno anestezirane na ledu 2-3 minute i pričvršćene na iglice za insekte pčelinjim voskom (Joel Svenssons Vaxfabrik AB, Munka Ljungby od horizontalnog leta u SE). snimljeni su prilagođenim uređajem za snimanje podataka, zatim pohranjeni i prikazani pomoću softvera PC-Lab 2000™ (v4.01; Velleman, Gavere, BE). Mlin za letenje je postavljen u prostoriju sa reguliranom klimom (12 h:12 h, svjetlo: tamno, 25 ± 2 °C, 65 ± 5% RH).
Da bi se vizualizirao obrazac aktivnosti leta, ukupna preletena udaljenost (m) i ukupan broj uzastopnih letnih aktivnosti izračunati su po satu u periodu od 24 sata. Osim toga, prosječne udaljenosti koje su preletjele pojedinačne ženke su upoređene u različitim tretmanima i analizirane korištenjem jednosmjerne ANOVA i Tukeyeve post hoc analize (JMP Pro, v14.0.0), dok je prosjek udaljenosti zavisan od Instituta, pri čemu je tretman zavisan od Ad S. Osim toga, prosječan broj rundi se izračunava u koracima od 10 minuta.
Da bi se procijenio učinak ishrane na reproduktivni učinak An.arabiensis, šest ženki (4 dpe) prebačeno je direktno u Bugdorm kaveze (30 cm × 30 cm × 30 cm) nakon uzimanja krvi, a zatim su dali eksperimentalnu ishranu u trajanju od 48 sati kao što je gore opisano. Dijeta je zatim uklonjena i čaše za mrijest (30 ml; Nolato distrofied Hertila svaki treći dan punjene su sa 4 sata mijenjanja vode 20 ml) 24 sata. Ponovite svaki režim ishrane 20-50 puta. Jaja su prebrojana i zabeležena za svaki eksperimentalni kavez. Poduzorci jaja su korišćeni za procenu srednje veličine i varijacije dužine pojedinačnih jaja (n ≥ 200 po dijeti) korišćenjem mikroskopa Dialux-20 (DM1000; WetzFC a opremljen sa Wetzlar Demerom i Ernstom 3) 20 R2;Leica Microsystems Ltd., DE). Preostala jaja su držana u prostoriji s kontroliranom klimom u standardnim uvjetima uzgoja 24 h, a poduzorak nedavno izniklih larvi 1. stadijuma (n ≥ 200 po ishrani) je izmjeren, kao što je gore opisano. Broj jaja i veličina jednog jajeta i veličine jednog jaja upoređivani su korištenjem AN-ove analize i analize Tukeyva. (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Hlapljive hlapljive tvari iz svježeg (1 h nakon uzorkovanja), 24 h, 72 h i 168 h odležanog urina sakupljene su iz uzoraka sakupljenih od goveda Zebu, rase Arsi. Radi praktičnosti, uzorci urina su prikupljeni rano ujutro dok su krave još bile u štali. Uzorci urina su prikupljeni od 10 jedinki od 10 jedinki prebačeni su u 20 ml uzoraka (po 10 jedinki prebačeni su uzorci po 20 ml). Toppits Cofresco, Frischhalteprodukte GmbH and Co., Minden, DE) u poliamidu od 3 l sa poklopcem u plastičnim bačvama od vinil hlorida. Hlapljive materije iz svakog uzorka goveđeg urina sakupljene su direktno (sveže) ili nakon sazrevanja na sobnoj temperaturi tokom 24 h, 72 h i 168 h, svaka starosna grupa i bila je reprezentativna za svaku starosnu grupu.
Za sakupljanje hlapljivih materija, korišten je sistem zatvorene petlje za cirkulaciju struje plina filtriranog s aktivnim ugljem (100 ml min-1) kroz poliamidnu vrećicu do adsorpcione kolone u trajanju od 2,5 h korištenjem membranske vakuum pumpe (KNF Neuberger, Freiburg, DE). Kao kontrola, napravljena je pumpa za praznu vrećicu od tupspacea. ing (5,5 cm x 3 mm id) koji sadrži 35 mg Porapak Q (50/80 mesh; Waters Associates, Milford, MA, US) između čepova od staklene vune. Prije upotrebe, kolona je isprana sa 1 ml redestiliranog n-heksana (Merck, Darmstadt, DE) i 19 ml Six® purpurne 0% rastvora. Isparljive supstance su eluirane sa 400 μl pentana. Kolekcije u prostoru glave su objedinjene i zatim pohranjene na -20°C dok se ne koriste za dalju analizu.
Bihevioralni odgovori traženja domaćina i jedenja krvi An.Headspace hlapljivi ekstrakti sakupljeni iz svježeg, 24-h, 72-h i 168-satnog urina analizirani su na isparljive ekstrakte komaraca Arabidopsis koristeći olfaktometar sa ravnom staklenom cijevi [18]. Arab [19]. Olfaktometar sa staklenom cijevi (80 cm × 9,5 cm id) bio je osvijetljen sa 3 ± 1 lx crvenog svjetla odozgo. Ugalj filtriran i vlažni protok zraka (25 ± 2 °C, 65 ± 2% relativne vlažnosti) prošao je biotest, stvarajući biološki test, pri čemu je serijski prolazak od 30 A ir s serijom čelika prošao kroz biotest. minar protok i jednoliku strukturu perja. Dozator za zubne tampone (4 cm × 1 cm; L:D; DAB Dental AB), okačen na zavojnicu od 5 cm na vjetrovitom kraju olfaktometra, sa promjenom stimulatora svakih 5 minuta. Za analizu je korišteno 10 μl svakog ekstrakta prostora glave, razrijeđenog 1:10, kao jednaka količina stimulansa domaćina. ili komarci koji sišu krv stavljeni su u pojedinačne kaveze za otpuštanje 2-3 sata prije početka eksperimenta. Kavez za otpuštanje je postavljen na stranu olfaktometra niz vjetar, a komarci su ostavljeni da se aklimatiziraju 1 min, a zatim je leptir ventil kaveza otvoren da se oslobodi. .Svaki hlapljivi ekstrakt i kontrola u glavi su replicirani najmanje 30 puta, a da bi se izbjegli efekti bilo kojeg jednog dana, isti broj tretmana i kontrola je testiran svakog eksperimentalnog dana. Tražiti odgovore od domaćina i krvlju hranjenih Ans.Arapic naspram headspace skupova su analizirani korištenjem nominalne logističke regresije praćene poređenjem u parovima, 4AS odd.0 Instituta.
An-ov odgovor na mriještenje. Ekstrakti iz svježeg i ostarjelog kravljeg urina analizirani su u Bugdorm kavezima (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science). Plastične čaše (30 mL; Nolato Hertila) napunjene sa 20 mL destilovane vode daju podlogu za mriješćenje, a zatim su postavljene u kut za mriješćenje 4 cm2. 10 μl svakog ekstrakta headspace u razrjeđenju 1:10. Jednaka količina pentana je korištena za podešavanje kontrolne čaše. Tretmanske i kontrolne čaše su razmijenjene između svakog eksperimenta kako bi se kontrolirali efekti položaja. Deset ženki hranjenih krvlju pušteno je u eksperimentalne kaveze na ZT 9-11 i jaja u čašama su prebrojana 24 sata kasnije. id u čaši za tretman – broj položenih jaja u kontrolnu čašu)/(ukupan broj položenih jaja). Svaki tretman je ponovljen 8 puta.
Gasnom hromatografijom i analizom detekcije dijagrama elektronske antene (GC-EAD) ženke An.arabiensis izvedena je kao što je prethodno opisano [20]. Ukratko, svježi isparljivi ekstrakti iz glave odvojeni su korištenjem Agilent Technologies 6890 GC (Santa Clara, Kalifornija, SAD) opremljenog kolonom HP-5 × 2 mm debljine filma, 30,2 μm A, 0,2 μm debljine filma. lent Technologies).Vodonik je korišten kao mobilna faza sa prosječnom linearnom brzinom protoka od 45 cm s-1. Svaki uzorak (2 μl) je ubrizgavan 30 sekundi u načinu rada bez podjele sa ulaznom temperaturom od 225 °C. Temperatura GC pećnice je programirana od 35 °C (zadržavanje od 3 minute) na 1 minutu zadržavanja na 100 °C za 1 min. °C. razdjelnika, 4 psi dušika je dodano i podijeljeno 1:1 u Gerstel 3D/2 križanju niske mrtve zapremine (Gerstel, Mülheim, DE) između detektora ionizacije plamena i EAD-a. Efluentna kapilara GC-a za EAD je propuštena kroz Gerstel ODP-2 prijenosnu liniju, koja prati temperaturu od 1 cm × 8 °C (gdje je temperatura stakla 1 × 8 °C) pomiješano sa ugljičnim filtriranim, vlažnim zrakom (1,5 l min-1). Antena je postavljena 0,5 cm od izlaza cijevi. Svaki pojedinačni komarac predstavljao je jednu repliku, a za komarce koji traže domaćina, obavljena su najmanje tri ponavljanja na uzorcima urina svake starosti.
Identifikacija bioaktivnih jedinjenja u kolekcijama svježeg i ostarjelog goveđeg urina korištenjem kombinovanog GC i masenog spektrometra (GC-MS; 6890 GC i 5975 MS; Agilent Technologies) za izazivanje antenskih odgovora u GC-EAD analizi, koja radi u režimu ionizacije elektron udarnim ionizacijom. ilarnu kolonu (60 m × 0,25 mm unutrašnjeg promjera, 0,25 μm debljine filma) koristeći helijum kao mobilnu fazu sa prosječnom linearnom brzinom protoka od 35 cm s-1. Uzorak od 2 μl je ubrizgan korištenjem istih postavki injektora i temperature pećnice kao za GC-EAD analizu. Upoređeni su spojevi sa prilagođenom bibliotekom masenog spektra na osnovu N. K. 14 biblioteka (Agilent). Identifikovana jedinjenja su potvrđena ubrizgavanjem autentičnih standarda (Dodatna datoteka 1: Tabela S2). Za kvantifikaciju, heptil acetat (10 ng, 99,8% hemijske čistoće, Aldrich) je ubrizgan kao eksterni standard.
Procjena efikasnosti sintetičke mješavine mirisa koja se sastoji od bioaktivnih jedinjenja identificiranih u svježem i odležalom urinu da privuče Ans.arabiensis koji traži domaćina i krvopije, koristeći isti olfaktometar i protokol kao gore. Sintetičke mješavine oponašale su sastav i proporcije jedinjenja u mješovitim ekstraktima u glavi, naš svježi, hlapljivi, h, h hlapljivi, 248 i urin od 168 sati (Slika 5D-G; Dodatni fajl 1: Tabela S2). Za analizu koristite 10 μl 1:100 razrjeđenja potpuno sintetičke smjese, s ukupnom brzinom otpuštanja u rasponu od približno 140-2400 ng h-1, za procjenu potpune privlačnosti za domaćina i krvopija koji se vrši na subtraktu smjese. ive mješavine pojedinačnih jedinjenja iz kompletne mješavine su uklonjene. Tražiti odgovore od domaćina i hranjenih krvlju Ans.Arap vs sintetičke i subtraktivne mješavine analizirani su korištenjem nominalne logističke regresije praćene poređenjem u parovima za neparne omjere (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Da bi se procijenilo može li kravlji urin poslužiti kao stanište domaćina za malarične komarce, svježi i ostarjeli kravlji urin, sakupljen kako je gore opisano, i voda stavljeni su u kante od 3 l (100 ml) i postavljene u zamke za mamac domaćina.(BG-HDT verzija; BioGents, Regensburg, DE). Deset zamki postavljenih 50 m jedan od drugog na pašnjaku, 400 m od seoske zajednice (Silay, Etiopija, 5°53´24´´N, 37°29´24´´E) i bez goveda, na stalnom tlu domaćina i simultanog prisustva sela je uzgajano pet grla. zamke su ostavljene nezagrijane. Svaka lokacija za tretman se rotira svake noći ukupno pet noći. Broj komaraca uhvaćenih u zamke mamcenim urinom različite starosti upoređen je korištenjem logističke regresije sa beta binomnom distribucijom (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
U selu sa endemom malarije u blizini grada Maki, region Oromia, Etiopija (8° 11′ 08″ S, 38° 81′ 70″ E; Slika 6A). Studija je sprovedena između sredine avgusta i sredine septembra pre godišnjeg dugog padanja u zatvorenom prostoru, uz godišnji odmor u zatvorenom prostoru, 2-F. 50 m jedna od druge) koja se nalazi na periferiji sela (Sl. 6A). Kriterijumi korišćeni za odabir kuća su bili: nije dozvoljeno ulazak životinja u kuću, nije dozvoljeno kuvanje u zatvorenom (vađenje drva za ogrev ili ćumur) (barem tokom probnog perioda) i kuće sa najviše dva stanovnika, spavanje u insekticidima.pod tretiranom mrežom protiv komaraca. Etičko odobrenje dao je Odbor za provjeru etike institucionalnog istraživanja (IRB/022/2016) Fakulteta prirodnih nauka (CNS-IRB), Univerziteta u Adis Abebi, u skladu sa smjernicama utvrđenim Deklaracijom Svjetskog medicinskog udruženja iz Helsinkija. Saglasnost je dobivena od strane svih članova zdravstvene uprave na kraju lokalnog osoblja za podršku domaćinstva. nivo okruga i odjeljenja ('kebele'). Eksperimentalni dizajn slijedio je dizajn 2 × 2 latinskog kvadrata, u kojem su sintetičke mješavine i kontrole bile dodijeljene uparenim kućama prve noći i zamijenjene između kuća sljedeće eksperimentalne noći. Ovaj proces je ponovljen deset puta. Dodatno, da bi se procijenila aktivnost komaraca u odabranim kućama na kraju, postavljeno je CDC početno polje na tri sata na početku noći. isto doba dana.
Sintetička mješavina koja je sadržavala šest bioaktivnih jedinjenja otopljena je u heptanu (97,0% rastvarača GC grade, Sigma Aldrich) i puštena na 140 ng h-1 pomoću dispenzera za pamučni fitilj [20]. Dozator za fitilj je omogućio da se sva jedinjenja otpuste u konstantnim proporcijama tokom 12-satnog ulaska u kontrolni eksperiment. svjetlosna zamka za kontrolu i prevenciju (CDC) (John W. Hock Company, Gainesville, FL, SAD; slika 6A). Zamke su obješene na 0,8 – 1 m iznad tla, blizu podnožja kreveta, a volonter je spavao pod netretiranom mrežom protiv komaraca i radio je između 18:00 sati i 18:00 sati do 18:00 sati. , hranjeni, polu-trudni i trudni [21] su naknadno pregledani pomoću analize lančane reakcije polimeraze (PCR) kako bi se identificirale vrste koje su morfološki identificirane kao A. gambiae sl. Članovi kompleksa [23]. U terenskoj studiji, hvatanje uparenih kuća u zamku analizirano je korištenjem nominalnog modela logističkog uklapanja, pri čemu je varijabilni logistički model zavisan od privlačenja, a fiksirana mješavina v1 ® je fiksirana mješavina. .0.0. SAS Institute Inc.).Ovdje izvještavamo o χ2 i p-vrijednostima iz testa omjera vjerovatnoće.
Procijenite da li je siguran. Arabiensis je bio u mogućnosti da dobije urin, njegov glavni izvor dušika, ureu, direktnim hranjenjem, unutar 48 h od primjene tokom 4 dana nakon (dpe) ispitivanja hranjenja ženki koje traže domaćina i krvlju (slika 1A). 0,0001 i F(5,299) = 56,00, p < 0,0001, sl. 1B,C). Nadalje, ženke koje su tražile domaćina jele su manje u urinu 72 sata u poređenju sa urinom nakon 168 sati (slika 1B). Kada je ponuđena ishrana koja je sadržavala ureu koja je sadržavala ureu2, sve ženke9 su apsorbirale znatno veću količinu uree2 u odnosu na ženke. druge koncentracije i vodu, dok se ne razlikuje od 10% saharoze (F(10,813) = 15,72, p < 0,0001; Slika 1D). Ovo je bilo u suprotnosti s odgovorom ženki hranjenih krvlju, koje su tipično apsorbirale znatno više hrane koja sadrži ureu od vode, iako je značajno manje od 10,81% sukroze (5F8,05 = 10,805) 0001; Slika 1).1E). Nadalje, kada se uporede dva fiziološka stanja, flebotomizirane ženke su apsorbirale više uree nego ženke koje su tražile domaćina u najnižim koncentracijama, a ove ženke su apsorbirale slične količine uree u višim koncentracijama (F(1,953)= 78,82, p < 1;00.Slika 1F, G). Dok se činilo da unos iz dijete koja sadrži ureu ima optimalne vrijednosti (sl. 1D,E), ženke su u oba fiziološka stanja mogle modulirati količinu apsorbirane uree u cijelom rasponu koncentracija uree na log-linearni način (slika 1F,G).).Slično, izgleda da komarci kontrolišu unos azota regulacijom količine apsorbovanog urina, jer se količina azota u urinu odražava u količini apsorbovane (Slika 1B, C i B umetci).
Da bi se procijenili efekti urina i ureje na preživljavanje komaraca koji traže domaćina i komaraca koji sišu krv, ženke su hranjene urinom sve četiri dobi (svjež, 24 h, 72 h i 168 h nakon taloženja) i rasponom koncentracija ureje, kao i destiliranom vodom i 10 % kontrolne analize saharoze koja je imala značajan učinak na preživljenje u ishrani (Slika A je pokazala značajan učinak preživljavanja u 2). ženke koje traže domaćina (urin: χ2 = 108,5, df = 5, p < 0,0001; urea: χ2 = 122,8, df = 5, p < 0,0001; slika 2B, C) i ženke hranjene krvlju (urin: χ3.0, p. 2 = 137,9, df = 5, p < 0,0001; Slika 2D,E). U svim eksperimentima, ženke su hranjene urinom, ureom i vodom imale su značajno niže stope preživljavanja u poređenju sa ženkama koje su hranjene saharozom (Slika 2B-E). .016) sa najmanjom vjerovatnoćom preživljavanja (slika 2B). Nadalje, ženke koje su tražile domaćina hranjene 135 mM uree preživjele su duže od kontrolne vode (p < 0,04) (Sl.2C). U poređenju sa vodom, žene koje su hranjene svježim urinom i 24-satnim urinom preživjele su duže (p = 0,001 i p = 0,012, respektivno; Slika 2D), dok su žene hranjene 72-satnim urinom preživjele duže od onih koje su hranjene kratkom svježom mokraćom i 24-satnom mokraćom, odnosno 24-satnom mokraćom p. D). Kada su hranjene 135 mM uree, ženke hranjene krvlju preživjele su duže od svih ostalih koncentracija ureje i vode (p < 0,013; Slika 2E).
Preživljavanje ženke domaćina i krvosisača Anopheles arabinis koja se hrani kravljim urinom i ureom. U biološkom testu (A), ženki komaraca je osigurana ishrana koja se sastojala od svježeg i ostarjelog kravljeg urina, različitih koncentracija uree, saharoze (10%) i destilovane vode (H2O). 2 sata dok sve ženke hranjene urinom (B, D) i ureom (C, E) i kontrole, saharoza i voda, ne budu mrtve
Ukupna razdaljina i broj krugova utvrđeni u testu letačkog mlin-a u periodu od 24 sata razlikovali su se između komaraca koji traže domaćina i komaraca koji sišu krv, koji su ukupno pokazali manju aktivnost leta (Sl. 3). Komarci stari 168 sati koji su se hranili urinom pokazali su različite obrasce leta i bili su prvenstveno dnevni. Ženke komaraca koje su davale saharozu ili 72-satni urin pokazale su aktivnost tokom 24-satnog perioda, dok su ženke koje su davale vodu bile aktivnije tokom srednjeg perioda. Urin star 72 sata imao je stalni pad aktivnosti tokom 24 sata (Slika 3).
Performanse leta ženke Anopheles arabinis koja sisa krv lovaca koja se hrani kravljim urinom i urejom. U testu u mlinu, ženke komaraca su se hranile svježim i ostarjelim kravljim urinom, različite koncentracije uree, saharoze (10%) i destilovane vode (H2O) bile su privezane za ruke (slobodno rotirajuće krvoproliće). ženki, zabilježena je ukupna udaljenost i broj letova po satu za svaku dijetu u periodu od 24 sata (tamno: sivo; svjetlo: bijelo). Prosječna udaljenost i prosječan broj napada prikazani su desno od grafikona cirkadijalne aktivnosti. Trake grešaka predstavljaju standardnu ​​grešku srednje vrijednosti. Statistička analiza vidi tekst
Općenito, ukupna aktivnost leta ženki koje traže domaćina slijedila je obrazac sličan onom na udaljenosti leta u periodu od 24 sata. Na srednju udaljenost leta značajno je utjecala prehrana (F(5, 138) = 28,27, p < 0,0001), a ženke koje su tražile domaćina su progutale 72 sata i urin su letjele značajno duže dijeta u poređenju sa svim ostalim dijetama su letjele <000. Komarci su letjeli duže od svježih (p = 0,022) i urina starih 24 h (p = 0,022) hranjenih. Za razliku od obrasca aktivnosti leta opisanog urinom, ženke hranjene ureom su pokazivale upornu aktivnost leta tokom druge polovine perioda aktivnosti od 24 sata. , ženke koje traže domaćina hranjene ureom značajno su povećale srednju udaljenost leta ovisno o apsorbiranoj koncentraciji (F(5, 138) = 1310,91, p < 0,0001). Ženke koje traže domaćina hranjene bilo kojom koncentracijom ureje lete duže od ženki koje su hranjene vodom ili saharozom (p < 0,03).
Ukupna aktivnost leta komaraca koji sišu krv bila je stabilna i održala se tokom 24 sata na svim načinima ishrane, sa povećanom aktivnošću urina tokom druge polovine mračnog perioda za ženke koje su hranjene vodom, kao i za ženke hranjene svježom i stare 24 sata (slika 3). Dok je ishrana urina značajno utjecala na srednju udaljenost leta kod ženki hranjenih krvlju, 40 = 030 (030) dijeta nije bila (F(5, 138) = 1,36, p = 0,24) .sa drugim urinom i kontrolnom ishranom (svježa, p = 0,0091; 72 sata, p = 0,0022; 168 sati, p = 0,001; saharoza, p = 0,0017, p = 0,0017; p).
Učinci hranjenja mokraćom i ureom na reproduktivne parametre procijenjeni su u biotestovima polaganja jaja (Slika 4A) i istraženi su prema broju jaja koje je položila svaka ženka, veličini jaja i novoizleženim ličinkama prve faze. Broj položenih jaja. 0008; Slika 4B). Ženke su se hranile 24-satnom mokraćom, krvni obrok je polagao znatno više jaja nego ženke koje su hranile drugim urinom i bile su slične onima koje su hranile saharozom (Slika 4B). Isto tako, veličina jaja koja su položile ženke hranjene urinom varirala je u zavisnosti od prehrane (F09.02) = 01.02. Ženke hranjene 4 sata urinom i saharozom polažu značajno veća jaja od ženki hranjenih vodom, dok su jaja ženki hranjenih sa 168 h mokraće bila značajno manja (slika 4C). Osim toga, ishrana urina značajno je utjecala na veličinu larve (F(5, 187) = 7,86 eg eggr 0,86 eg eigr 0,86, p0e1). 24- i 72-časovne ženke koje su hranjene urinom nego iz jaja položenih od larvi jaja. Ženke hranjene vodom i 168-h hranjene urinom (slika 4D).
Reproduktivne performanse ženki Anopheles arabinis koje se hrane kravljim urinom i ureom. Ženke komaraca koje su hranjene krvlju hranjene su hranom koja se sastojala od svježeg i ostarjelog kravljeg urina, različitih koncentracija uree, saharoze (10%) i destilovane vode (H2O) 48 sati prije stavljanja u biotestove i dobijanje eggstra broj sati (Egg-A). Na veličinu (C, F) i veličinu larvi (D, G) značajno je utjecala ishrana (gravlji urin: BD; urea: EG). Sredstva za svaki parametar izmjerena korištenjem različitih naziva slova značajno su se razlikovala jedni od drugih (jednosmjerna ANOVA pomoću Tukeyeve post hoc analize; p < 0,05). Trake greške predstavljaju standardnu ​​grešku srednje vrijednosti.
Kao glavna azotna komponenta urina, urea, kada se davala kao ishrana ženkama hranjenim krvlju, značajno je uticala na reproduktivne parametre u svim studijama. Broj jaja koja polože ženke koje su hranjene ureom, nakon krvnog obroka, u zavisnosti od koncentracije uree (F(11, 360) = 4,69; p < 0,00013 ženke hranjene uree ), M je polagala više jaja (Slika 4E). Ženke hranjene koncentracijom uree od 134 µM ili više polažu veća jaja od ženki hranjenih vodom (F(10, 4245) = 36,7; p < 0,0001; Slika 4F), i veličina larve, iako je pod utjecajem sličnih koncentracija uree, 3 0 0 0 0 < 0,0001) je bila varijabilnija (slika 4G).
Ukupna privlačnost prema isparljivim ekstraktima goveđeg urina koji traže domaćine. Na arabiensis procijenjenu olfaktometru sa staklenom cijevi (slika 5A) značajno je utjecala starost urina (χ2 = 15,9, df = 4, p = 0,0032; slika 5B). Post hoc analiza u odnosu na druge nivoe tretmana je izazvala značajno viši nivo privlačenja u odnosu na sta hoc u poređenju sa svim drugim satima. s (72 sata: p = 0,0060, 168 sati: p = 0,012, pentan: p = 0,00070), osim mirisa svježeg urina (p = 0,13; Slika 5B). Iako je ukupna privlačnost komaraca koji sišu krv prema mirisu mokraće (χ2,07 =f7.07) značajno različita. ; Slika 5C), pokazalo se da su ove ženke značajno privlačnije za hlapljive ekstrakte u prostoru u poređenju sa mokraćom starim 72 sata u poređenju sa kontrolama (p = 0,0066; Slika 5C).
Bihevioralni odgovori na prirodne i sintetičke mirise kravljeg urina u potrazi za domaćinom i krvlju hranjeni Anopheles arabianus. Šema olfaktometra sa staklenom cijevi (A). Privlačenje isparljivih ekstrakata iz svježeg i odležanog kravljeg urina na domaćina (B) i krvosisne (C) komarce. Prikazani su naš (E), 72-časovni (F) i 168-satni (G) kravlji urin. Tragovi detekcije elektronske antene (EAD) pokazuju promjene napona kao odgovor na bioaktivna jedinjenja u prostoru iznad glave eluirane iz gasnog hromatografa i detektirane detektorom plamene jonizacije (FID). Traka skale predstavlja brzinu otpuštanja brzine (svojstva otpuštanja mµVµ). prikazani su h-1) biološki aktivnih jedinjenja. Jedna zvjezdica (*) označava konzistentan odgovor niske amplitude. Dvostruke zvjezdice (**) označavaju neponovljive odgovore. Pronađi domaćina (H) i krvopija (I) An.arabiensis ima različite privlačnosti za sintetičke mješavine svježih i starih krava. Svako slovo značilo je različito slovo od krava do upor. drugo (jednosmjerna ANOVA korištenjem Tukeyeve post hoc analize;p < 0,05). Trake grešaka predstavljaju standardnu ​​grešku skale
Ženka Ann.arabiensis, 72 h i 120 h nakon krvnog obroka, tokom mrijesta, nije pokazana preferencija isparljivim ekstraktima iz svježeg i starog kravljeg urina u odnosu na pentanske kontrole (χ2 = 3,07, p > 0,05; Dodatni fajl 1: Slika S1).
Za ženke Ann.arabiensis, GC-EAD i GC-MS analize su identifikovale osam, šest, tri i tri bioaktivna jedinjenja (Slika 5D-G). Iako su uočene razlike u broju jedinjenja koja su izazvala elektrofiziološke odgovore, većina ovih jedinjenja je bila prisutna u svakom hlapljivom ekstraktu iz glave sakupljen iz svežeg i odležanog ekstrakta ženki, koji je dao samo fiziološki odgovor urina koji je proizveo samo fiziološki odgovor ženke. prag su uključeni u dalje analize.
Ukupna hlapljiva brzina otpuštanja bioaktivnih jedinjenja u kolekciji prostora na glavi porasla je sa 29 µg h-1 u svježem urinu na 242 µg h-1 u urinu starom 168 sati, uglavnom zbog p-krezola i m-formaldehida, fenola se povećava kao i fenola. Za razliku od toga, smanjene su stope oslobađanja kao što su h-1-ex-1-ciklona i druge jedinjenja. sa povećanjem starosti urina, što je koreliralo sa uočenim smanjenjem intenziteta signala (obilje) na hromatogramu (slika 5D)-G lijevi panel) i fiziološkim odgovorima na ova jedinjenja (slika 5D-G desni panel).
Sve u svemu, sintetička mješavina je imala sličan prirodni omjer bioaktivnih jedinjenja identificiranih u isparljivim ekstraktima svježeg i ostarjelog urina (sl. 5D–G) i nije izazvala značajnu privlačnost u potrazi za domaćinom (χ2 = 8,15, df = 4, p = 0,083; slika 5H-tosucking = χ, 4 mo 9) ili , p = 0,30; Slika 5I). Međutim, post hoc poređenje u paru između tretmana pokazalo je da su komarci koji traže domaćina bili značajno privlačni za sintetičku mješavinu urina od 24 sata u poređenju sa kontrolama pentanom (p = 0,0086; Slika 5H).
Da bi se procijenila uloga pojedinačnih komponenti u sintetičkim mješavinama urina starog 24 h, šest suptraktivnih mješavina je procijenjeno u odnosu na kompletne mješavine u testu Y-cijevi, u kojem su pojedinačna jedinjenja uklonjena. Za komarce koji traže domaćina, oduzimanje pojedinačnih jedinjenja iz kompletne mješavine imalo je značajan utjecaj na bihevioralne odgovore (χ63 = p19; Dodatni fajl = 66, df19. S2A), sve su subtraktivne mješavine bile privlačnije od Manje nego potpuno pomiješane. Nasuprot tome, uklanjanje pojedinačnih jedinjenja iz potpuno sintetičke mješavine nije utjecalo na bihevioralne odgovore komaraca koji sišu krv (χ2 = 11,38, df = 6, p = 0,077), s izuzetkom manjih vrijednosti, što je rezultiralo nižim nivoima datoteke na slici 1 2 ( Slika 2). S2B).
U selu sa endemom malarije u Etiopiji, efikasnost sintetičke mješavine 24-satnog kravljeg urina u privlačenju komaraca u terenskim uslovima procjenjivana je deset noći (slika 6A). Ukupno je uhvaćen i identificiran 4.861 komarac, od čega je 45,7% komaraca bilo Anthrop.18% Anthro.18%. sis i 35,4% su Culex spp. (Dodatni fajl 1: Tabela S1).Anopheles arabinis je jedini član kompleksa vrsta An.Gambian identifikovan PCR analizom. U prosjeku je uhvaćeno 320 komaraca po noći, a tokom tog vremena zamke sa mamcima od sintetičke mješavine ulovljene su od više komaraca, χ6 komaraca17 bez mješavine (χ6 komaraca17). 0, p < 0,0001) .Zamke bez mamca postavljene su svake od pet kontrolnih noći na početku, na sredini i na kraju ispitivanja. Sličan broj komaraca je uhvaćen u svakom paru zamki, što ukazuje na odsustvo pristranosti između kuća (χ2(0, 1665)-13 × 0 pparline tokom studije. Uz kontrolne zamke, značajno je povećan broj komaraca uhvaćenih u zamke koje sadrže sintetičku mješavinu: traženje domaćina (χ2(0, 2107) = 138,7, p < 0,0001), nedavno hranjenje krvlju (χ2(0, 650) = 32,2, p < 120 ( χ2, p < 12) ( χ 0,20) = 0,0123;Dodatni fajl 1: Tabela S1). Ovo se također odražava na ukupan broj uhvaćenih komaraca: traži domaćina > krvopija > trudna > polutrudna > mužjak.
Terenska evaluacija efikasnosti 24-časovne sintetičke mješavine mirisa kravljeg urina. Terenska ispitivanja su provedena u južno-centralnoj Etiopiji (mapa), u blizini grada Maki (umetnuti), korištenjem svjetlosne zamke Centra za kontrolu bolesti (CDC) (desno) u uparenim kućama, sa slikom latinskog kvadrata sa slikom ženki privlače (Aerial Cd-S). Anopheles arabesques (B), ali ne i Anopheles farroes (C), na drugačiji način, efekat ovisan o fiziološkom stanju. Osim toga, ove zamke su uhvatile značajno povećan broj komaraca domaćina Culex.(D) U poređenju sa kontrolom. Trake na lijevoj strani predstavljaju prosječni indeks selekcije komaraca ulovljenih komaraca i od1 odpenja trapsa (kontrola1 odpeno bair) ), dok trake na desnoj strani predstavljaju prosječni indeks selekcije u parovima kontrolnih zamki (otvoreno; N = 5).).Zvjezdice označavaju nivoe statističke značajnosti (*p = 0,01 i ***p < 0,0001)
Tri vrste su uhvaćene na različite načine u zamkama koje sadrže sintetičke mješavine. Traženje domaćina (χ2(1, 1345) = 71,7, p < 0,0001), hranjenje krvlju (χ2(1, 517) = 16,7, p < 0,0001) i trudnoća (χ2(1, 1345) = 314(1, 1345) = 71,7, p < 0,0001). biensis je bio zarobljen u zamci oslobađajući sintetičku smjesu (slika 6B), dok se količina An nije razlikovala. Pharoensis u različitim fiziološkim stanjima je pronađen (slika 6C). Za Culex je samo značajno povećanje broja komaraca koji traže domaćine pronađeno u zamkama mamcima sa sintetičkom smjesom (χ19.0.0.0.0.0) (χ19.0) 6D), u poređenju sa kontrolnim zamkama.
Zamke za mamce domaćina smještene izvan potencijalnih domaćina između mjesta za razmnožavanje i ruralnih zajednica u Etiopiji korištene su za procjenu da li komarci malarije koriste miris kravljeg urina kao znak staništa domaćina. U nedostatku znakova domaćina, topline i sa ili bez prisustva mirisa kravljeg mokraće, nije bilo komaraca s visokom temperaturom: Ad3 nije bilo prisustva komaraca u hvatanju. i mirisa kravljeg urina, ženke malaričnih komaraca su privučene i uhvaćene, iako u malom broju, nezavisno od starosti urina (χ2(5, 25) = 2,29, p = 0,13; Dodatni fajl 1: Slika S3). Nasuprot tome, kontrole vode nisu uhvatile malarične komarce na visokim temperaturama1: Slika S3).
Komarci malarije nabavljaju i distribuiraju jedinjenja koja sadrže azot putem kompenzacionog hranjenja kravljim urinom (tj. lokvama) kako bi poboljšali osobine životne istorije, slično drugim insektima [2, 4, 24, 25, 26]. Kravlji urin je lako dostupan obnovljivi resurs kao što je bliska lokacija za odmor vektora i vektora malarije. Ženke komaraca lociraju ovaj resurs mirisom i mogu regulisati unos azotnih jedinjenja u urinu, uključujući ureu, glavnu azotnu komponentu u urinu [15, 16]. U zavisnosti od fiziološkog stanja ženke komaraca, hranljive materije u mokraći se raspoređuju kako bi preživjele u mokraći i preživjele kako bi preživjele ženke. sve i reproduktivne karakteristike jedinki hranjenih krvlju tokom prvog gonadotropnog ciklusa. Stoga miješanje urina igra važnu nutritivnu ulogu za vektore malarije koji su zatvoreni poput neuhranjenih odraslih osoba [8], jer ženkama komaraca daje mogućnost da stječu važna dušična jedinjenja uključenjem u niskorizično hranjenje ženki, a rezultat je značajno povećanje epimiološke aktivnosti kod ženki. što utiče na kapacitet vektora. Nadalje, ovo ponašanje može biti meta budućih programa upravljanja vektorima.