Սննդանյութերի ձեռքբերումը և բաշխումը միավորում է միջատների կեր փնտրելու և կյանքի պատմության գծերը: Կյանքի տարբեր փուլերում որոշակի սննդանյութերի պակասը փոխհատուցելու համար միջատները կարող են ստանալ այդ սնուցիչները լրացուցիչ կերակրման միջոցով, օրինակ՝ սնվելով ողնաշարավորների սեկրեցներով մի գործընթացում, որը հայտնի է որպես ջրափոսներ: .Այս ուսումնասիրության նպատակն էր գնահատել, թե արդյոք Ան.arabiensis գրգռումը կովի մեզի վրա սննդանյութերի ձեռքբերման համար բարելավում է կյանքի պատմության բնութագրերը:
Համոզվեք, որ դա անվտանգ է: arabiensis-ին գրավել է թարմ, 24-ժամյա, 72-ժամյա և 168-ժամյա կովի մեզի հոտը, իսկ հյուրընկալող և արյունով սնված (48-ժամյա կերակուրից հետո արյան կերակուր) էգերը չափվել են Y-խողովակով օլֆակտոմետրով, և հղիների համար օգտագործվել է բիոակտիվ քիմիական թեստ: Կովի մեզի միացությունները բոլոր չորս տարիքային դասերում: Կենսաակտիվ միացությունների սինթետիկ խառնուրդները գնահատվել են Y-խողովակի և դաշտային փորձարկումներում: Կովի մեզը և դրա հիմնական ազոտ պարունակող միացությունը հետազոտելու համար որպես մալարիայի վեկտորների համար լրացուցիչ սննդակարգեր, կերակրման պարամետրերը և կյանքի պատմության բնութագրերը գնահատվել են: գնահատվել են գոյատևման, կապակցված թռիչքի և վերարտադրության համար:
Փնտրեք տանտիրոջ արյունն ու սնունդը: Լաբորատոր և դաշտային հետազոտություններում արաբներին գրավում էր թարմ և հնացած կովի մեզի բնական և սինթետիկ բույրը: Հղի կանայք անտարբեր էին ձվադրման վայրերում կովի մեզի արձագանքների նկատմամբ: Հյուրեր փնտրող և արյուն ծծող կանայք ակտիվորեն կլանում են կովի մեզի և միզանյութի բոլոր ռեսուրսները: թռիչք, գոյատևում կամ վերարտադրություն:
Anopheles arabinis կովի մեզի ձեռքբերում և բաշխում կյանքի պատմության բարելավված բնութագրերի համար: Կովի մեզի լրացուցիչ կերակրումը ուղղակիորեն ազդում է վեկտորային հզորության վրա՝ մեծացնելով ամենօրյա գոյատևումը և վեկտորի խտությունը, և անուղղակիորեն փոխելով թռիչքի ակտիվությունը և, հետևաբար, պետք է դիտարկել ապագա մոդելներում:
Սննդանյութերի ձեռքբերումը և բաշխումը միավորում է միջատների կերերի և կյանքի պատմության առանձնահատկությունները [1,2,3]: Միջատները կարող են ընտրել և ձեռք բերել սնունդ և կատարել փոխհատուցվող սնուցում՝ ելնելով սննդի առկայությունից և սննդանյութերի պահանջներից [1, 3]: տրիենտներ, միջատները կարող են ստանալ այդ սննդանյութերը լրացուցիչ կերակրման միջոցով, ինչպես օրինակ՝ ցեխի, ողնաշարավորների տարբեր արտաթորանքների և սեկրեցների և լեշի վրա, մի գործընթաց, որը հայտնի է որպես ջրափոս [2]: 2, 4, 5, 6], 7]: Մալարիայի մոծակը Anopheles gambiae sensu lato (sl) առաջանում է որպես «թերսնված» չափահաս [8], ուստի ջրելը կարող է կարևոր դեր խաղալ նրա կյանքի պատմության բնութագրերում, բայց այս պահվածքը մինչ այժմ անտեսվել է: Այս գրգռվածության օգտագործումը որպես կարևոր հետևանք կարող է ունենալ սնուցման մեծացման միջոց:
Ազոտի ընդունումը չափահաս էգ Anopheles մոծակների մոտ սահմանափակ է թրթուրային փուլից փոխանցվող ցածր կալորիականության պաշարների և արյան կերակուրի անարդյունավետ օգտագործման պատճառով [9]: Կանայք Ann.gambiae sl-ը սովորաբար փոխհատուցում է դա՝ լրացնելով արյան հավելյալ սնունդը [10, 11]՝ դրանով իսկ ավելի շատ մարդկանց վտանգի ենթարկելով մոծակների վարակվելու վտանգը: մոծակները կարող են օգտագործել ողնաշարավորների արտանետումների հավելյալ սնուցումը՝ ազոտային միացություններ ձեռք բերելու համար, որոնք բարձրացնում են հարմարվողականությունը և թռիչքի մանևրությունը, ինչպես ցույց են տալիս այլ միջատներ [2]: binis-ը պատեհապաշտ է իր հյուրընկալող նախապատվություններով և հայտնի է, որ կապված է և սնվում է անասունների հետ: Կովի մեզը ազոտային միացություններով հարուստ ռեսուրս է, որտեղ միզանյութը կազմում է թարմ մեզի ընդհանուր ազոտի 50-95%-ը [15, 16]: Քանի որ կովի մեզը ծերանում է, միկրոօրգանիզմները 2 ժամում նվազեցնում են այդ միացությունների բարդությունը: Ամոնիակի արագ աճը, կապված օրգանական ազոտի նվազման հետ, զարգանում են ալկալոֆիլ միկրոօրգանիզմները (որոնցից շատերը թունավոր միացություններ են արտադրում մոծակների համար) [15], որոնք կարող են լինել իգական սեռի ներկայացուցիչները:
Այս հետազոտության ընթացքում որոնվել են հյուրընկալող և արյունով սնվող մթերքներ: Իր առաջին գոնադոտրոպինի ցիկլի ընթացքում արաբիենսիսը գնահատվել է մեզի խառնման միջոցով ազոտային միացությունների, ներառյալ միզանյութի ձեռքբերման համար: Այնուհետև, մի շարք փորձեր են իրականացվել՝ գնահատելու, թե ինչպես են էգ մոծակները հատկացնում այս պոտենցիալ սննդարար ռեսուրսը, թարմության և հետագա վերարտադրության համար: rine-ը գնահատվել է որոշելու, թե արդյոք դրանք ապահովում են հավաստի հուշումներ հյուրընկալողի և արյունով սնվող An-ի համար: Այս պոտենցիալ սննդային ռեսուրսի որոնումների ժամանակ arabiensis-ը հայտնաբերել է քիմիական փոխկապակցվածություն նկատված տարբեր գրավչության հետևում: Ցնդող օրգանական միացությունների սինթետիկ հոտի խառնուրդները (VOCs) հայտնաբերված 24-ժամյա հնեցված մեզի մեջ, ցուցադրվել են լաբորատոր պայմաններում ստացված լաբորատոր ազդեցությունը և հետագայում գնահատվել են դաշտի տարբեր պայմաններում ստացված արդյունքները: ֆիզիոլոգիական վիճակներ.Մոծակների գրավչություն։ Ստացված արդյունքները հաստատում են, որ Ան.arabiensis-ը ձեռք է բերում և տարածում ողնաշարավորների մեզի մեջ հայտնաբերված ազոտային միացությունները՝ կյանքի պատմության բնութագրերի վրա ազդելու համար: Այս արդյունքները քննարկվում են համաճարակաբանական հնարավոր հետևանքների համատեքստում և ինչպես դրանք կարող են օգտագործվել վեկտորի հսկողության և վերահսկման համար:
Anopheles arabicans (Dongola շտամ) պահպանվել է 25 ± 2 °C ջերմաստիճանում, 65 ± 5% RH և 12:12 ժամ լույս/մութ ցիկլով: Թրթուրները աճեցվել են պլաստիկ սկուտեղների մեջ (20 սմ × 18 սմ × 7 սմ), լցված թորած ջրով և կերակրել են թորած ջրով և կերակրել են թորած մթերք: 30 մլ բաժակներում (Nolato Hertila, Åstorp, SE) և այնուհետև տեղափոխել Bugdorm վանդակներ (30 սմ × 30 սմ × 30 սմ; MegaView Science, Taichung, Թայվան)՝ մեծահասակների առաջացումը թույլ տալու համար: Փորձից անմիջապես առաջ, կամ փորձից առաջ սովի են մատնվել թորած ջրով, ինչպես նկարագրված է ստորև: Թռիչքային խողովակի փորձարկումների համար օգտագործված էգերը սովի են մատնվել ընդամենը 4-6 ժամ ջրի հետ ազատորեն: Արյուն ծծող մոծակները հետագա կենսափորձերի համար պատրաստելու համար 4 dpe էգերին տրամադրվել է դեֆիբրոտիկ ոչխարի արյուն (Håt SE) Աքրինգթոն, Մեծ Բրիտանիա): Լիովին ծանրաբեռնված էգերին այնուհետև տեղափոխեցին առանձին վանդակներ և ուղղակիորեն սննդակարգ տվեցին, ինչպես նկարագրված է ստորև, կամ 10% սախարոզա ad libitum 3 օր առաջ նկարագրված փորձարկումներից:
Կերակրման անալիզներն օգտագործվել են չափահաս ան արաբ կանանց մոտ մեզի և միզանյութի սպառումը քանակականացնելու համար: Հյուրընկալող և արյունով սնվող կանանց տրամադրվել է դիետա, որը պարունակում էր 1% նոսրացված թարմ և հնացած կովի մեզ, միզանյութի տարբեր կոնցենտրացիաներ և երկու հսկիչ (10% սախարոզա և ջուր) 48 ժամվա ընթացքում: Բացի այդ, մգ1-մլ-յանիդ 1-303 (1-մլ-մլ-20ֆֆ 100 մգ-20, սննդի ներկ) 1; Sigma-Oldrich, Stockholm, SE) ավելացվել է սննդակարգին և մատակարարվել 4 × 4 մատրիցով 250 մկլ միկրոցենտրիֆուգային խողովակներում (Axygen Scientific, Union City, CA, ԱՄՆ; Նկար 1A) Լրացրեք մինչև եզրը (~ 300 μl): Խուսափեք մոծակների պոտենցիալ ազդեցությունից (10 սմ մոծակների 10 սմ-ի գույնի և մեծ մոծակների միջև պոտենցիալ ազդեցությունից): տրամագիծ և 6 սմ բարձրություն; Semadeni, Ostermundigen, CH; Նկար 1A) լիակատար մթության մեջ 25 ± 2 սմ °C և 65 ± 5% հարաբերական խոնավության պայմաններում: Այս փորձերը կրկնվել են 5-ից 10 անգամ: Դիետային ենթարկվելուց հետո մոծակները տեղադրվել են -20 °C-ում մինչև հետագա վերլուծությունը:
Փնտրեք տավարի մեզի և միզանյութ, որը կլանված է հյուրընկալողի և արյուն ծծող էգ Anopheles arabianus-ի կողմից: Կերակրման փորձարկման ժամանակ (A) էգ մոծակներին տրամադրվել է սննդակարգ, որը բաղկացած էր թարմ և հնացած կովի մեզից, միզանյութի տարբեր կոնցենտրացիաներից, սախարոզից (10%) և թորած ջրից (H2O): Հյուրընկալող էգերի կողմից ներծծված արյան (B) ավելի շատ սննդակարգ (B) հյուրընկալող փնտրող էգերը կլանել են 72 ժամ տևողությամբ կովի մեզը 168 ժամից պակաս կովի մեզի (B): Մեզի ընդհանուր ազոտի միջին պարունակությունը (± ստանդարտ շեղում) ներկայացված է ներդիրում: Հյուրընկալող (D, F) և արյուն ծծող (E, G) կանայք միզում են միզանյութից տարբեր չափաբաժնով (մյուս տառից կախված տարբեր տառերով): (միակողմանի ANOVA՝ օգտագործելով Tukey-ի հետհոկ վերլուծությունը. p <0.05): Սխալների գծերը ներկայացնում են միջինի ստանդարտ սխալը (BE): Ուղիղ գծավոր գիծը ներկայացնում է լոգ-գծային ռեգրեսիայի գիծը (F, G)
Կլանված սնունդն ազատելու համար մոծակները առանձին-առանձին տեղադրվեցին 1,5 մլ միկրոցենտրիֆուգային խողովակների մեջ, որոնք պարունակում էին 230 մկլ թորած ջուր, և հյուսվածքը խափանվեց՝ օգտագործելով միանգամյա օգտագործման նժույգ և անլար շարժիչ (VWR International, Lund, SE), որին հաջորդեց ցենտրիֆուգումը 10 մկS արագությամբ 10 րոպե: ldrich) և ներծծումը (λ620) որոշվել է սպեկտրոֆոտոմետրի վրա հիմնված միկրոափսե ընթերցողի միջոցով (SPECTROStar® Nano, BMG Labtech, Ortenberg, DE) նմ): Այլապես, մոծակները մանրացվել են 1 մլ թորած ջրի մեջ, որից 900 մկլ-ը փոխանցվել է 200 մկլ 200000 phoometric; 0, Shimadzu, Kista, SE): Սննդային ընդունումը քանակականացնելու համար ստանդարտ կորը պատրաստվեց սերիական նոսրացման միջոցով, որպեսզի ստացվի 0,2 մկլ-ից մինչև 2,4 մկլ 1 մգ մլ-1 քսիլեն ցիանիդ: Այնուհետև օգտագործվեց ներկերի հայտնի կոնցենտրացիաների օպտիկական խտությունը՝ որոշելու համար յուրաքանչյուր մոծակի ընդունած սննդի քանակը:
Ծավալի տվյալները վերլուծվել են՝ օգտագործելով միակողմանի շեղումների անալիզ (ANOVA), որին հաջորդել են Tukey-ի հետհոկ զույգային համեմատությունները (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc., Cary, NC, ԱՄՆ, 1989–2007): Գծային ռեգրեսիոն վերլուծությունները նկարագրում են կոնցենտրացիայից կախված միզանյութի ընդունման և արյան մակարդուկի ընդունման և արյան համեմատական ​​պատասխանների վերաբերյալ: .0.0 Mac-ի համար, GraphPad Software, San Diego, CA, US):
Մոտավորապես 20 մկլ մեզի նմուշներ յուրաքանչյուր տարիքային խմբից կապվել են Chromosorb® W/AW-ի վրա (10 մգ 80/100 ցանց, Sigma Aldrich) և պարկուճվել թիթեղյա պարկուճներում (8 մմ × 5 մմ): Պարկուճները տեղադրվել են այրման խցիկի մեջ (CHNS/O, CHNS/O Scientificr0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0,0, CHNS/O, Scientificr0, CHNS/O, Sciencer0, 0, 0,0, 0, 0,0, 0, 0, 0,0, 0, 0,0, 0, 0,0,0, CHNS/O, CHNS/O, վերլուծական ԱՄՆ) թարմ և հնացած մեզի մեջ ազոտի պարունակությունը որոշելու համար՝ ըստ արտադրողի արձանագրության: Ընդհանուր ազոտը (g N l-1) որոշվել է որպես ստանդարտ օգտագործվող միզանյութի հայտնի կոնցենտրացիաների հիման վրա:
Դիետայի ազդեցությունը հյուրընկալող և արյուն ծծող կանանց գոյատևման վրա գնահատելու համար մոծակներն առանձին-առանձին տեղադրվեցին խոշոր Petri ափսեների մեջ (12 սմ տրամագծով և 6 սմ բարձրությամբ, Semadeni) կափարիչի վրա ցանցով ծածկված անցք (3 սմ տրամագծով) օդափոխության և սննդի մատակարարման համար: , 10% սախարոզա և ջուր: Յուրաքանչյուր սննդակարգ դրվեց ատամնաբուժական թամպոնի վրա (DAB Dental AB, Upplands Väsby, SE), որը տեղադրվեց 5 մլ ներարկիչի մեջ (Thermo Fisher Scientific, Gothenburg, SE), մխոցը հանվեց և դրվեց ամեն օր petri dish-ի վերևում: մոծակները հաշվվում էին օրական երկու անգամ, մինչդեռ սատկած մոծակները դեն էին նետվում մինչև վերջին մոծակը մահացավ (n = 40 յուրաքանչյուր բուժման համար):
Պատվերով մոծակների թռչող գործարան՝ հիմնված Attisano et al.[17]-ի վրա, պատրաստված 5 մմ հաստությամբ թափանցիկ ակրիլային վահանակներից (10 սմ լայնություն x 10 սմ երկարություն x 10 սմ բարձրություն) առանց առջևի և հետևի վահանակների (նկ. 3: վերև): Ուղղահայաց խողովակով պատրաստված շրջադարձային հավաքակազմ, որը պատրաստված է գազային քրոմատոգրաֆիայի սյունից (0,25 մմ-ից մինչև 5 մմ սոսնձված ծայրով): 9 սմ հեռավորության վրա գտնվող զույգ նեոդիմի մագնիսների միջև: Նույն նյութից պատրաստված հորիզոնական խողովակը (6,5 սմ լ) կիսեց ուղղահայաց խողովակը` ձևավորելով կապակցված թեւ և թև, որը որպես լույսն ընդհատող ազդանշան կրում էր ալյումինե փայլաթիթեղի փոքր կտոր:
24-ժամյա քաղցած էգերին տրվել է վերը նշված սննդակարգը 30 րոպե նախքան զսպելը: Լիովին սնված էգ մոծակներին այնուհետև առանձին-առանձին անզգայացրել են սառույցի վրա 2-3 րոպե և ամրացրել միջատների քորոցներին մեղրամոմով (Joel Svenssons Vaxfabrik AB, Munka Ljungby: արձանագրվել են հատուկ կառուցված տվյալների լոգերի միջոցով, այնուհետև պահվել և ցուցադրվել PC-Lab 2000™ ծրագրաշարի միջոցով (v4.01; Velleman, Gavere, BE): Թռիչքաղացը տեղադրվել է կլիմայով կարգավորվող սենյակում (12 ժ:12 ժ, լույս՝ մութ, 25 ± 2 °C, 65 ± 5% RH):
Թռիչքի ակտիվության օրինաչափությունը պատկերացնելու համար թռիչքի ընդհանուր հեռավորությունը (մ) և անընդմեջ թռիչքների ընդհանուր թիվը հաշվարկվել է ժամում 24 ժամվա ընթացքում: Բացի այդ, առանձին կանանց թռչած միջին հեռավորությունները համեմատվել են բուժման ընթացքում և վերլուծվել՝ օգտագործելով միակողմանի ANOVA և Tukey-ի հետհոկ վերլուծությունը (JMP Pro, v14.0 Inc. Դիցիոնալ փուլերի միջին քանակը հաշվարկվում է 10 րոպեանոց հավելումներով:
An.arabiensis-ի վերարտադրողական աշխատանքի վրա սննդակարգի ազդեցությունը գնահատելու համար վեց էգ (4 dpe) արյուն հավաքելուց հետո ուղղակիորեն տեղափոխվեցին Bugdorm-ի վանդակներ (30 սմ × 30 սմ × 30 սմ), և այնուհետև տրամադրվեց փորձնական դիետա 48 ժամվա ընթացքում, ինչպես նկարագրված է վերևում: Դիետաները հեռացվեցին և ձվադրման բաժակները (30 մլ) լցրեցին 4 մլ ջուր Նոլատոյի 2 ժամվա ընթացքում 2 ժամվա ընթացքում: 24 ժամը մեկ փոխելով: Կրկնեք յուրաքանչյուր սննդակարգը 20-50 անգամ: Ձվերը հաշվվեցին և գրանցվեցին յուրաքանչյուր փորձարարական վանդակի համար: Ձվերի ենթանմուշներն օգտագործվեցին առանձին ձվերի միջին չափի և երկարության տատանումները գնահատելու համար (n≥ 200 յուրաքանչյուր սննդակարգում) օգտագործելով Dialux-20 մանրադիտակ (Ernztlar a Weeks, DM100, DM1000) մանրադիտակով: (DFC) 320 R2;Leica Microsystems Ltd., DE): Մնացած ձվերը պահվել են կլիմայով վերահսկվող սենյակում, ստանդարտ աճեցման պայմաններում, 24 ժամ, և վերջերս առաջացած 1-ին աստղի A թրթուրների ենթանմուշը (n ≥ 200 սննդակարգում) չափվել է, ինչպես նկարագրված է վերևում: գ վերլուծություն (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.):
Գլխի տարածության ցնդող նյութերը թարմ (նմուշառումից հետո 1 ժամ), 24 ժամ, 72 ժամ և 168 ժամ հնացած մեզից հավաքվել են Զեբու խոշոր եղջերավոր անասուններից, Արսի ցեղերից հավաքված նմուշներից: Հարմարության համար մեզի նմուշները հավաքվել են վաղ առավոտյան, մինչդեռ կովերը դեռ գոմում էին: Մեզի 1 նմուշը փոխանցվել է 000 մլ-ից առանձին: թխելու տոպրակներ (Toppits Cofresco, Frischhalteprodukte GmbH and Co., Minden, DE) 3 լ պոլիամիդում կափարիչով Վինիլքլորիդ պլաստիկ թմբուկների մեջ: Գլխի ցնդող նյութերը յուրաքանչյուր եղջերավորի մեզի նմուշից հավաքվել են կա՛մ ուղղակիորեն (թարմ) կամ հասունանալուց հետո յուրաքանչյուր ներկայացուցչական տարիքի նմուշի սենյակային ջերմաստիճանում 22 ժամ և 1 ժ, յուրաքանչյուր խմբում 1 ժ.
Գլխատարածքի ցնդող նյութերի հավաքման համար փակ օղակով համակարգ է օգտագործվել՝ ակտիվացված ածխածնի ֆիլտրացված գազի հոսքը (100 մլ րոպե-1) պոլիամիդային պարկի միջով դեպի կլանման սյուն 2,5 ժամ շրջանառության համար՝ օգտագործելով դիֆրագմային վակուումային պոմպ (KNF Neuberger, Freiburg, DE): n խողովակ (5,5 սմ x 3 մմ id), որը պարունակում է 35 մգ Porapak Q (50/80 ցանց; Waters Associates, Milford, MA, ԱՄՆ) ապակե բուրդի խցանների միջև: Օգտագործելուց առաջ սյունակը լվացվել է 1 մլ վերաթորված n-հեքսանով (Merck, Darmstadt, 9 ml. Ներծծված ցնդող նյութերը զտվել են 400 մկլ պենտանով: Գլխատարածքի հավաքածուները հավաքվել են և այնուհետև պահել -20°C-ում մինչև հետագա վերլուծության համար օգտագործվելը:
Հյուրընկալող և արյուն ուտող An. Headspace ցնդող քաղվածքների վարքագծային արձագանքները, որոնք հավաքվել են թարմ, 24-ժամյա, 72-ժամյա և 168-ժամյա մեզի մեզից, վերլուծվել են արաբիդոպսիս մոծակների ցնդող քաղվածքների համար՝ օգտագործելով ուղիղ ապակե խողովակի օլֆակտոմետր: .Arab [19]. Ապակե խողովակի օլֆակտոմետրը (80 սմ × 9,5 սմ id) լուսավորվել է վերևից 3 ± 1 լx կարմիր լույսով: Ածուխով զտված և խոնավացված օդի հոսքը (25 ± 2 °C, 65 ± 2% հարաբերական խոնավություն) անցնում է 1 սմ A շիշով 1 սմ A շարքի միջով: s, ստեղծելով շերտավոր հոսք և միատեսակ թմբուկի կառուցվածք: Ատամնաբուժական տամպոն դիսպենսեր (4 սմ × 1 սմ; L:D; DAB Dental AB), կախված 5 սմ կծիկից օլֆակտոմետրի քամու ծայրին, խթանիչի փոփոխությամբ յուրաքանչյուր 5 րոպեն մեկ: Վերլուծության համար օգտագործվել է 10 մկլ յուրաքանչյուր գլխի տարածության 10 մկլ: հսկողություն: Առանձին հյուրընկալող կամ արյուն ծծող մոծակները տեղադրվեցին առանձին բացթողնման վանդակներում փորձի մեկնարկից 2-3 ժամ առաջ: Բաց թողնվող վանդակը դրվեց օլֆակտոմետրի քամու ներքևի կողմում, և մոծակներին թույլ տվեցին հարմարվել 1 րոպե, իսկ հետո թիթեռի փականը բացվեց վանդակի կամ մոծակների հետ շփման մեջ: աղբյուրը թողարկվելուց հետո 5 րոպեի ընթացքում: Յուրաքանչյուր գլխամասային ցնդող էքստրակտ և հսկողություն կրկնօրինակվել են առնվազն 30 անգամ, և ցանկացած օրվա հետևանքներից խուսափելու համար փորձարկվել են նույն թվով բուժում և վերահսկում յուրաքանչյուր փորձարարական օրվա ընթացքում: Փնտրեք պատասխաններ հյուրընկալողից և արյունով սնվող Ans-ից: Արաբական ընդդեմ գլխամասի հավաքածուները վերլուծվել են՝ օգտագործելով անվանական համեմատությունը, որին հաջորդում է լոգիստիկ ռեգրեսը: .0, SAS Institute Inc.):
An-ի ձվադրման պատասխանը: Թարմ և հնացած կովի մեզից գլխի տարածության քաղվածքները վերլուծվել են Bugdorm վանդակներում (30 սմ × 30 սմ × 30 սմ; MegaView Science): Պլաստիկ բաժակներ (30 մլ; Nolato Hertila) լցված 20 մլ թորած ջրով: 1:10 նոսրացումով յուրաքանչյուր գլխամասի էքստրակտի 10 մկլ: Հսկիչ բաժակը կարգավորելու համար օգտագործվել է հավասար քանակությամբ պենտան: Բուժման և հսկողության բաժակները փոխանակվել են յուրաքանչյուր փորձի միջև՝ դիրքի ազդեցությունը վերահսկելու համար: Տասը արյունով սնված էգ բաց թողնվել է փորձնական վանդակներ ZT 9-11-ում, իսկ ձվերը բաժակների մեջ՝ հաշվարկվել են 24 ժամվա բանաձևով: բուժման գավաթում – հսկիչ գավաթում դրված ձվերի քանակը)/(դրած ձվերի ընդհանուր թիվը): Յուրաքանչյուր բուժում կրկնվել է 8 անգամ:
Իգական An.arabiensis-ի գազաքրոմատոգրաֆիկ և էլեկտրոնային ալեհավաքի օրինաչափության հայտնաբերման (GC-EAD) վերլուծությունը կատարվել է, ինչպես նախկինում նկարագրված է [20]: Համառոտ, թարմ ցնդող էքստրակտները առանձնացվել են Agilent Technologies 6890 GC (Santa Clara, CA, ԱՄՆ) սարքավորված HP-5 մմ × 5 մկմ հաստությամբ A թաղանթով (30 մմ × 5 մկմ, 0 մ հաստությամբ) սյունակով: փայլուն տեխնոլոգիաներ):Ջրածինը օգտագործվել է որպես շարժական փուլ՝ միջին գծային հոսքի արագությամբ 45 սմ վրկ-1: Յուրաքանչյուր նմուշ (2 մկլ) ներարկվել է 30 վայրկյան անընդմեջ առանց պառակտման ռեժիմում՝ 225 °C մուտքի ջերմաստիճանով: Ջրածնի ջերմաստիճանը ծրագրավորվել է 35 °C-ից (3 րոպե պահում) C-ից մինչև 300 °C րոպե (պահումը 300 °C րոպե): ent splitter, ավելացվել է 4 psi ազոտ և բաժանվել 1:1 Gerstel 3D/2 ցածր մեռած ծավալի խաչմերուկում (Gerstel, Mülheim, DE) բոցի իոնացման դետեկտորի և EAD-ի միջև: GC արտահոսքի մազանոթը EAD-ի համար փոխանցվել է Gerstel ODP-2 փոխանցման գծի միջով, որտեղ այն հետևում է 8 °C, գումարած 0 °C ջերմաստիճանը G5-ի մեջ: խառնվել է ածխածնի ֆիլտրացված, խոնավացված օդի հետ (1,5 լ min−1): Ալեհավաքը տեղադրվել է խողովակի ելքից 0,5 սմ հեռավորության վրա: Յուրաքանչյուր առանձին մոծակ կազմում է մեկ կրկնօրինակ, իսկ հյուրընկալ փնտրող մոծակների համար առնվազն երեք կրկնություն է կատարվել յուրաքանչյուր տարիքի մեզի նմուշների վրա:
Կենսաակտիվ միացությունների նույնականացում թարմ և հնացած եղջերավորների մեզի գլխամասային հավաքածուներում՝ օգտագործելով համակցված GC և զանգվածային սպեկտրոմետր (GC-MS; 6890 GC և 5975 MS; Agilent Technologies)՝ GC-EAD վերլուծության մեջ ալեհավաքի պատասխաններ ստանալու համար, որը հագեցած էր էլեկտրոնների ազդեցության eMSV-ի 7-5 ռեժիմով: մազանոթային սյուն (60 մ × 0,25 մմ ներքին տրամագիծ, 0,25 մկմ թաղանթի հաստություն) հելիումի օգտագործմամբ որպես շարժական փուլ՝ 35 սմ s-1 միջին գծային հոսքի արագությամբ։ 2 մկլ նմուշը ներարկվել է՝ օգտագործելով նույն ներարկիչի կարգավորումները և ջեռոցի ջերմաստիճանը, ինչ GC-EAD գրադարանի համար։ NIST14 գրադարանը (Agilent): Նույնականացված միացությունները հաստատվել են վավերական ստանդարտների ներարկումով (Լրացուցիչ ֆայլ 1: Աղյուսակ S2): Քանակականացման համար որպես արտաքին ստանդարտ ներարկվել է հեպտիլացետատ (10 նգ, 99,8% քիմիական մաքրություն, Aldrich):
Գնահատելով թարմ և հնացած մեզի մեջ հայտնաբերված կենսաակտիվ միացություններից բաղկացած սինթետիկ հոտի խառնուրդի արդյունավետությունը՝ ներգրավելու հյուրընկալող և արյուն ծծող Ans.arabiensis՝ օգտագործելով վերը նշված նույն հոտաչափն ու արձանագրությունը: Սինթետիկ խառնուրդները նմանակում էին միացությունների բաղադրությունը և համամասնությունները ժամ և 168 ժամ հնեցված մեզի (Նկար 5D-G; Լրացուցիչ ֆայլ 1. Աղյուսակ S2): Վերլուծության համար օգտագործեք 10 մկլ 1:100 նոսրացում ամբողջությամբ սինթետիկ խառնուրդից, ընդհանուր թողարկման արագությամբ տատանվում է մոտավորապես 140-2400 նգ h-1, որպեսզի գնահատվի մոծակների արյան գրավչությունը և արյան ամբողջականությունը: s, որոնցում հանվում են ամբողջական խառնուրդի առանձին միացությունների սուբստրակտիվ խառնուրդները: Փնտրեք պատասխաններ հյուրընկալող և արյունով սնվող Ans.Arab vs սինթետիկ և հանող խառնուրդներից, վերլուծվել են՝ օգտագործելով անվանական լոգիստիկ ռեգրեսիա, որին հաջորդել են կենտ հարաբերակցությունների զույգ համեմատությունները (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.):
Գնահատելու համար, թե արդյոք կովի մեզը կարող է ծառայել որպես մալարիայի մոծակների կենսամիջավայրի ազդանշան, թարմ և հնացած կովի մեզը, որը հավաքվել է վերևում նկարագրվածի համաձայն, և ջուրը դրվել են ցանցավոր 3 լ դույլերի մեջ (100 մլ) և դրվել հյուրընկալող խայծի թակարդներում:(BG-HDT տարբերակ; BioGents, Regensburg, DE): Տասը թակարդներ, որոնք տեղադրված են արոտավայրերում 50 մ հեռավորության վրա, գյուղական համայնքից 400 մ հեռավորության վրա (Սիլայ, Եթովպիա, 5°53´24´´ հյուսիս, 37°29´24´´ արևելյան հատված), և ոչ մի անասուն, մշտական ​​բուծման վայրերում և գյուղերում մնացին անասուններ: Բուժման յուրաքանչյուր վայր պտտվում է գիշերը հինգ գիշեր: Մոծակների թվերը, որոնք բռնվել են տարբեր տարիքի մեզի թակարդներում, համեմատվել են՝ օգտագործելով լոգիստիկ ռեգրեսիա՝ բետա երկանդամ բաշխմամբ (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.):
Եթովպիայի Օրոմիա շրջանի Մակի քաղաքի մոտակայքում գտնվող մալարիայի էնդեմիկ գյուղում (8° 11′ 08″ հյուսիս, 38° 81′ 70″ արևելյան; Նկար 6A): Ուսումնասիրությունն անցկացվել է օգոստոսի կեսերից մինչև սեպտեմբերի կեսերը, մինչև ամենամյա ներսի մնացորդային անձրևի մնացորդը 20 մնացորդային ցողում: Հետազոտության համար ընտրվել են գյուղի ծայրամասում գտնվող (նկ. 6Ա): Տների ընտրության համար օգտագործված չափանիշներն են եղել՝ տանը կենդանիներ չեն թույլատրվում, ներսում խոհարարություն (վառելափայտ կամ փայտածուխ նկարելը) չի թույլատրվում (առնվազն փորձաշրջանի ընթացքում) և առավելագույնը երկու բնակիչ ունեցող տներ, որոնք քնում են հակաինսեկտիցիդներով:Էթիկական հավանությունը տրվել է Ադիս Աբեբայի համալսարանի Բնական գիտությունների ֆակուլտետի (CNS-IRB) Ինստիտուցիոնալ հետազոտական ​​էթիկայի վերանայման խորհրդի կողմից (IRB/022/2016)՝ համաձայն Հելսինկիի Համաշխարհային բժշկական ասոցիացիայի հռչակագրի կողմից հաստատված ուղեցույցների: («kebele») մակարդակ: Փորձարարական ձևավորումը հետևեց 2 × 2 լատինական քառակուսի ձևավորմանը, որտեղ սինթետիկ խառնուրդներն ու հսկիչները նշանակվեցին զուգակցված տներին առաջին գիշերը և փոխարինվեցին տների միջև հաջորդ փորձարարական գիշերը: Այս գործընթացը կրկնվեց տասը անգամ: Բացի այդ, ընտրված տներում մոծակների ակտիվությունը գնահատելու համար, CDC-ի թակարդները սահմանվեցին ցերեկային ժամի սկզբի կեսին և միջին ժամերին: .
Վեց կենսաակտիվ միացություններ պարունակող սինթետիկ խառնուրդը լուծարվել է հեպտանի մեջ (97.0% լուծիչ GC դասարան, Sigma Aldrich) և թողարկվել է 140 նգ ժ-1՝ օգտագործելով բամբակյա վիթի դիսպենսեր [20]: Հիվանդությունների վերահսկման և կանխարգելման (CDC) լուսային թակարդ (John W. Hock Company, Gainesville, FL, US; Նկար 6A): Թակարդները կախված են եղել գետնից 0,8 – 1 մ բարձրության վրա, մահճակալի ոտքերի մոտ, և կամավորը քնել է չմշակված մոծակների ցանցի տակ և գործել է 18:06:00-ի սահմաններում: ed, սնված, կիսահղի և հղի [21] հետագայում զննվել են՝ օգտագործելով պոլիմերազային շղթայական ռեակցիայի (PCR) վերլուծություն՝ որոշելու համար ձեւաբանականորեն նույնականացված տեսակները որպես A. gambiae sl: Համալիրի անդամներ [23]: Դաշտային ուսումնասիրության մեջ զուգակցված տների թակարդի թակարդը վերլուծվել է զուգակցված տների թակարդում, որտեղ հարմարեցված խառնուրդը վերլուծվել է, որտեղ հարմարեցված է վերահսկման մոդելը ֆիքսված էֆեկտն էր (JMP® 14.0.0. SAS Institute Inc.):Այստեղ մենք հաղորդում ենք χ2 և p-արժեքները հավանականության հարաբերակցության թեստից:
Գնահատեք, թե արդյոք այն անվտանգ է: arabiensis-ը կարողացել է ստանալ մեզ՝ դրա հիմնական ազոտի աղբյուրը՝ միզանյութ, ուղղակի կերակրման միջոցով, ընդունվելուց հետո 48 ժամվա ընթացքում՝ հյուրընկալող փնտրող և արյունով կերակրվող կանանց սնուցման փորձարկումներից հետո (dpe) 4 օրվա ընթացքում (նկ. 1A): Թե՛ հյուրընկալող, թե՛ արյուն ծծող կանայք: < 0,0001 և F(5,299) = 56,00, p < 0,0001, համապատասխանաբար, Նկար 1B,C: Ավելին, հյուրընկալ փնտրող կանայք 72 ժամվա ընթացքում ավելի քիչ մեզ էին ուտում, քան 168 ժամվա մեզը (նկ. 1B): Երբ առաջարկվում էր զգալի քանակությամբ սննդակարգ, որը պարունակում էր մեծ քանակությամբ հյուրընկալող կին: 69 մՄ՝ համեմատած բոլոր մյուս կոնցենտրացիաների և ջրի հետ, մինչդեռ չի տարբերվում 10% սախարոզայից (F(10,813) = 15.72, p <0.0001; Նկար 1D): Սա ի տարբերություն արյունով սնվող կանանց արձագանքին, որոնք սովորաբար կլանում էին զգալիորեն ավելի շատ միզանյութ, քան 50F պարունակող սննդակարգը (50% պարունակող սննդակարգ) 78.35, p <0.0001; Նկար 1): 1E): Ավելին, երկու ֆիզիոլոգիական վիճակների համեմատության ժամանակ ֆլեբոտոմացված էգերը ամենացածր կոնցենտրացիաներում ներծծում էին ավելի շատ միզանյութ, քան հյուրընկալող էգերը, և այդ կանայք ներծծում էին միզանյութի նույն քանակությունը ավելի բարձր կոնցենտրացիաներում (F2, 1,075):Նկար 1F, G): Թեև միզանյութ պարունակող սննդակարգից ընդունումը, ըստ երևույթին, ունի օպտիմալ արժեքներ (նկ. 1D, E), երկու ֆիզիոլոգիական վիճակներում էլ կանայք կարողացել են փոփոխել միզանյութի կլանված քանակությունը միզանյութի կոնցենտրացիաների ողջ տիրույթում լոգ-գծային ձևով (նկ. 1F, G):Նմանապես, թվում է, որ մոծակները վերահսկում են իրենց ազոտի կլանումը` կարգավորելով ներծծվող մեզի քանակը, քանի որ մեզի մեջ ազոտի քանակը արտացոլվում է ներծծվող քանակի վրա (Նկար 1B, C և B ներդիրներ):
Մեզի և միզանյութի ազդեցությունը հյուրընկալող և արյուն ծծող մոծակների գոյատևման վրա գնահատելու համար կանանց կերակրեցին բոլոր չորս տարիքի մեզով (թարմ, 24 ժամ, 72 ժամ և 168 ժամ հետո նստվածքից հետո) և միզանյութի մի շարք կոնցենտրացիաներ, ինչպես նաև թորած ջուր և 10% սախարոզայի վերլուծություն: ողջ գոյատևումը հյուրընկալող որոնող կանանց մոտ (մեզ՝ χ2 = 108,5, df = 5, p < 0,0001; միզանյութ՝ χ2 = 122,8, df = 5, p < 0,0001; նկ. 2B, C) և արյունով սնվող էգերի մոտ (մեզ՝ 9.00, df = 9.0, df= χ2 = 9.0, df = 0 χ2 = 137,9, df = 5, p < 0,0001; Նկար 2D, E): Բոլոր փորձարկումներում մեզի, միզանյութով և ջրով սննդակարգով սնված էգերը զգալիորեն ավելի ցածր գոյատևման մակարդակ են ունեցել՝ համեմատած այն կանանց հետ, ովքեր սնվել են սախարոզայի սննդակարգով (Նկար 2B-E): հնացած մեզը (p = 0,016), որն ունի գոյատևման ամենացածր հավանականությունը (Նկար 2B): Ավելին, հյուրընկալող էգերը, ովքեր սնվել են 135 մՄ միզանյութով, ավելի երկար են գոյատևել, քան ջրային հսկիչները (p < 0,04) (նկ.2C): Ջրի համեմատ՝ թարմ մեզով և 24-ժամյա մեզով սնվող կանայք ավելի երկար են գոյատևել (p = 0.001 և p = 0.012, համապատասխանաբար; Նկար 2D), մինչդեռ 72-ժամյա մեզով սնվող կանայք ավելի երկար են գոյատևել, քան կանանց կարճ թարմ մեզի և 24 ժամվա ընթացքում սնվողները (համապատասխանաբար՝ p <0,0, p=0. Նկար 2D): Երբ սնվում էին 135 մՄ միզանյութով, արյունով սնված էգերը գոյատևում էին ավելի երկար, քան միզանյութի և ջրի բոլոր մյուս կոնցենտրացիաները (p <0.013; Նկար 2E):
Տանտիրոջ և արյուն ծծող էգ Anopheles arabinis-ի գոյատևումը, ով սնվում է կովի մեզով և միզանյութով: Կենսաբանության մեջ (A) էգ մոծակներին տրամադրվել է սննդակարգ, որը բաղկացած է թարմ և հնացած կովի մեզից, միզանյութի, սախարոզայի (10%) և թորած ջրի (H2O) տարբեր կոնցենտրացիաներից: 12 ժամ, մինչև բոլոր էգերը, որոնք սնվում են մեզով (B, D) և միզանյութով (C, E), և հսկիչ նյութերով, սախարոզայով և ջրով, մահանում են:
24 ժամվա ընթացքում թռչող գործարանի թեստում որոշված ​​պտույտների ընդհանուր հեռավորությունը և պտույտների քանակը տարբերվում է հյուրընկալող և արյուն ծծող մոծակների միջև, որոնք ընդհանուր առմամբ ցույց են տվել թռիչքի ավելի քիչ ակտիվություն (նկ. 3): 168-ժամյա տարիքի մոծակները, որոնք սնվում էին մեզով, ցուցադրում էին թռիչքի տարբեր օրինաչափություններ և հիմնականում ցերեկային էին: Էգ մոծակները, որոնք մատակարարում էին սախարոզա կամ 72-ժամյա մեզ, ակտիվություն էին ցուցաբերում ամբողջ 24 ժամվա ընթացքում, մինչդեռ ջուր մատակարարող էգերը ավելի ակտիվ էին միջին ժամանակահատվածում: 72-ժամյա մեզի ակտիվության կայուն անկում է գրանցվել 24 ժամվա ընթացքում (Նկար 3):
Որսորդ արյուն ծծող էգ Anopheles arabinis-ի թռիչքային կատարումը, որը սնվում է կովի մեզով և միզանյութով: Թռիչքաղաց թեստի ժամանակ թարմ և հնացած կովի մեզով սնված էգ մոծակները, տարբեր կոնցենտրացիաների միզանյութ, սախարոզա (10%) և թորած ջուր (H2O) կապված են եղել հորիզոնական, թեւերի հետ կապված (առանց արյունահեղության) (arotleek) աջ) իգական սեռի ներկայացուցիչները, յուրաքանչյուր դիետայի համար 24 ժամվա ընթացքում գրանցված են ժամում թռիչքների ընդհանուր հեռավորությունը և թռիչքների քանակը (մուգ՝ մոխրագույն, բաց՝ սպիտակ): Միջին հեռավորությունը և մենամարտերի միջին թիվը ցույց են տրված ցիրկադային գործունեության գրաֆիկի աջ կողմում: Սխալների գծերը ներկայացնում են միջինի ստանդարտ սխալը: Վիճակագրական վերլուծությունը տե՛ս տեքստը:
Ընդհանուր առմամբ, հյուրընկալող փնտրող էգերի թռիչքի ընդհանուր ակտիվությունը հետևել է 24 ժամվա ընթացքում թռիչքի հեռավորության օրինաչափությանը: Թռիչքի միջին հեռավորության վրա էականորեն ազդել է սննդակարգի ընդունումը (F(5, 138) = 28.27, p <0.0001), իսկ տանտեր փնտրող էգերը ընդունել են 72 ժամ ավելի երկար մեզի սննդակարգ (p. -սնված մոծակները թռչում էին ավելի երկար, քան թարմ (p = 0,022) և 24 ժամ տարիքի մեզը (p = 0,022) սնված մոծակներին: Ի տարբերություն մեզի սննդակարգով նկարագրված թռիչքային ակտիվության օրինաչափության, միզանյութով սնված հյուրընկալ փնտրող էգերը ցուցաբերեցին մշտական ​​թռիչքի ակտիվություն 24-րդ կես ժամվա ընթացքում: Միզանյութով սնվող հյուրընկալող էգերը զգալիորեն ավելացրել են թռիչքի միջին հեռավորությունը՝ կախված ներծծվող կոնցենտրացիայից (F(5, 138) = 1310.91, p <0.0001): Հյուրընկալող կանայք, ովքեր սնվել են միզանյութի ցանկացած կոնցենտրացիայով, ավելի երկար են թռչում, քան ջրով կամ սախարոզայով կերակրվող էգերը (p <0.03):
Արյուն ծծող մոծակների ընդհանուր թռիչքային ակտիվությունը կայուն էր և պահպանվում էր 24 ժամվա ընթացքում բոլոր սննդակարգերում, մութ շրջանի երկրորդ կեսին մեզի ակտիվության բարձրացմամբ ջրով սնվող, ինչպես նաև թարմ և 24 ժամվա էգերի մոտ (պատկեր 3): Մինչդեռ մեզի սննդակարգը զգալիորեն ազդել է թռիչքի միջին հեռավորության վրա՝ . դիետան չի եղել (F(5, 138) = 1,36, p = 0,24) .այլ մեզի և հսկողության դիետայի հետ (թարմ, p = 0,0091; 72 ժամ, p = 0,0022; 168 ժամ, p = 0,001; սախարոզա, p = 0,0017, p = dH2O, 3):
Վերարտադրողական պարամետրերի վրա մեզի և միզանյութի սնուցման ազդեցությունը գնահատվել է ձվադրման կենսափորձերում (Նկար 4Ա) և ուսումնասիրվել ըստ յուրաքանչյուր էգերի կողմից ածած ձվերի քանակի, ձվի չափի և նոր դուրս եկած առաջին սերնդի թրթուրների։ 8; Նկար 4B): Էգերը, ովքեր սնվել են 24-ժամյա մեզով, արյան կերակուրը զգալիորեն ավելի շատ ձու է ածել, քան այն կանայք, ովքեր սնվել են մեզի այլ դիետաներով և նման են սախարոզով սնվողներին (նկ. 4B): Նմանապես, մեզի կերակրվող էգերի ձվերի չափը տատանվում է ըստ սննդակարգի (F(5, 2.0 <109): ռինով և սախարոզայով սնվող էգերը զգալիորեն ավելի մեծ ձու են ածում, քան ջրով սնվող էգերը, մինչդեռ 168 ժամ էգ մեզով սնվող էգերի ձվերը զգալիորեն ավելի փոքր էին (նկ. 4C): Բացի այդ, մեզի սննդակարգը զգալիորեն ազդել է թրթուրների չափի վրա (F(5, 187) = 7.86, 200-ից ավելի մեծ, p <10-ից ավելի մեծ է), 4 և 72 ժամյա մեզով սնված էգեր, քան ձվերի թրթուրներից դրված ձվերից: Ջրով սնված և 168 ժամ միզած էգեր (Նկար 4D):
Կովի մեզով և միզանյութով սնվող էգ Anopheles arabinis-ի վերարտադրողական աշխատանքը: Արյունով սնված էգ մոծակներին կերակրել են թարմ և հնացած կովի մեզից, միզանյութի տարբեր կոնցենտրացիաներից, սախարոզից (10%) և թորած ջրից (H2O) սննդակարգերով 48 ժամ առաջ, նախքան ձվերը դնելը (4 ժամ բիովերլուծություն, Egg-ի չափսեր) ստանալը: (C, F) և թրթուրների չափերը (D, G) զգալիորեն ազդել են տրամադրվող սննդակարգից (կովի մեզը՝ BD; միզանյութը՝ EG): Տարբեր տառերի անուններով չափված յուրաքանչյուր պարամետրի միջինները զգալիորեն տարբերվում էին միմյանցից (միակողմանի ANOVA՝ օգտագործելով Tukey's post hoc վերլուծությունը; p <0.05): Սխալների գծերը ներկայացնում են ինձ ստանդարտ սխալ:
Որպես մեզի հիմնական ազոտային բաղադրիչ՝ միզանյութը, երբ տրվում է արյունով սնվող էգերին որպես սննդակարգ, էականորեն ազդում է վերարտադրողական պարամետրերի վրա բոլոր հետազոտություններում: Արյան կերակուրից հետո միզածածկ սնվող էգերի ձվերի քանակը կախված միզանյութի կոնցենտրացիայից (F(11, 360) = 4.69; 31 մկ կոնցենտրացիաների միջև՝ p < 0.0 մ. mM ավելի շատ ձու ածեց (Նկար 4E): Էգերը, որոնք սնվում են 134 մկՄ կամ ավելի միզանյութի կոնցենտրացիաներով, ավելի մեծ ձու են դնում, քան ջրով սնվող էգերը (F(10, 4245) = 36.7; p <0.0001; Նկար 4F) և թրթուրների չափսերը (3F0 խտությամբ, թեև 3F0-ի համանման կոնցենտրացիան) 9; p <0,0001) ավելի փոփոխական էր (նկ. 4G):
Ընդհանուր գրավչությունը դեպի հյուրընկալող տավարի մեզի գլխամասային տարածքի ցնդող էքստրակտները: Արաբիենսիսը, որը գնահատվել է ապակե խողովակի օլֆակտոմետրում (Նկար 5Ա) զգալիորեն ազդել է մեզի տարիքից (χ2 = 15.9, df = 4, p = 0.0032; Նկար 5B-ը ցույց է տվել, որ 2 ժամվա համեմատ ավելի բարձր աստիճանի գրավչություն է առաջացել): մնացած բոլոր բուժումները (72 ժամ՝ p = 0,0060, 168 ժամ՝ p = 0,012, պենտան՝ p = 0,00070), բացառությամբ թարմ մեզի հոտի (p = 0,13; Նկար 5B): Թեև արյունը ծծող մոծակների ընդհանուր գրավչությունը զգալի չափով տարբերվում էր արյունը ներծծող մոծակների մոտ 2, 7 դորը էականորեն տարբերվում էր մեզից: 0.067; Նկար 5C), պարզվել է, որ այս էգերը զգալիորեն ավելի գրավիչ են ցնդող էքստրակտների համար՝ համեմատած 72-ժամյա տարիքի մեզի հետ՝ համեմատած հսկիչների հետ (p = 0.0066; Նկար 5C):
Վարքագծային արձագանքները բնական և սինթետիկ կովի մեզի հոտերին հյուրընկալող և արյունով սնվող Anopheles arabianus-ի որոնման ժամանակ: Ապակե խողովակի օլֆակտոմետրի սխեման (A): Թարմ և հնացած կովի մեզի ցնդող էքստրակտների գրավումը հյուրընկալողին (B) և արյունը ծծող (C) մոծակների արդյունահանումը: Ցուցադրված են 24-ժամյա (E), 72-ժամյա (F) և 168-ժամյա (G) տարիքի կովի մեզը: Էլեկտրոնային ալեհավաքի հայտնաբերման (EAD) հետքերը ցույց են տալիս լարման փոփոխությունները՝ ի պատասխան գազային քրոմատոգրաֆից արտանետվող գլխուղեղի բիոակտիվ միացություններին և հայտնաբերվում են բոցի իոնացման վերափոխման ժամանակաչափով: Ցուցադրված են կենսաբանորեն ակտիվ միացությունների հատկությունները և արտազատման արագությունը (մկգ h-1): Մեկ աստղանիշը (*) ցույց է տալիս ցածր ամպլիտուդության կայուն արձագանքը: Կրկնակի աստղանիշները (**) ցույց են տալիս չվերարտադրվող պատասխանները: Գտեք հյուրընկալողին (H) և արյունը ծծող (I) An.arabiensis-ը ունի թարմ և տարիքային խառնուրդներ գրավելու տարբեր գրավչություններ: ed to տարբեր տառերի անունները զգալիորեն տարբերվում էին միմյանցից (միակողմանի ANOVA՝ օգտագործելով Tukey-ի հետհոկ վերլուծությունը;p <0.05): Սխալների գծերը ներկայացնում են սանդղակի ստանդարտ սխալը
Էգ Ann.arabiensis, արյան կերակուրից 72 և 120 ժամ հետո, ձվադրման ժամանակ, թարմ և հնացած կովի մեզի ցնդող էքստրակտների համար նախապատվություն չի տրվել՝ համեմատած պենտանի վերահսկողության հետ (χ2 = 3.07, p > 0.05; Լրացուցիչ ֆայլ 1. Նկ. S1):
Իգական Ann.arabiensis, GC-EAD և GC-MS վերլուծությունները հայտնաբերել են ութ, վեց, երեք և երեք բիոակտիվ միացություններ (Նկար 5D-G): Թեև նկատվել են էլեկտրաֆիզիոլոգիական արձագանքներ առաջացնող միացությունների քանակի տարբերություններ, այդ միացությունների մեծ մասը առկա է եղել յուրաքանչյուր գլխամասային տարածության մեջ: Շեմից բարձր ալեհավաքները ներառվել են հետագա վերլուծություններում:
Բիոակտիվ միացությունների ընդհանուր ցնդող արտազատման արագությունը գլխի տարածության հավաքածուում աճել է 29 μg h-1-ից թարմ մեզի մեջ մինչև 242 μg h-1 168-ժամյա տարիքի մեզի մեջ, հիմնականում պայմանավորված p-cresol և m-formaldehyde ֆենոլի աճով, ինչպես նաև ֆենոլով: տարիքը, որը փոխկապակցված է քրոմատոգրամում (նկ. 5D)-G ձախ վահանակում ազդանշանի ինտենսիվության (առատության) նկատվող նվազման և այդ միացությունների ֆիզիոլոգիական արձագանքների հետ (նկ. 5D-G աջ վահանակ):
Ընդհանուր առմամբ, սինթետիկ խառնուրդը ուներ բիոակտիվ միացությունների նմանատիպ բնական հարաբերակցություն `թարմ եւ տարեց մեզի գլխաշորերի անկայուն քաղվածքների մեջ (Նկար 5D-G) անկայուն բուռն: Հնարավոր է, որ հետմահու հետմահու հետմահու հետ կապված համեմատությունները բուժման միջեւ, որ հյուրընկալող մոծակները զգալիորեն գրավիչ են եղել 24-ժամյա ծովային սինթետիկ խառնուրդի համար `համեմատած Pentane Controls- ի հետ (էջ = 0.0086; Նկար 5h):
24 ժամ առաջացած մեզի սինթետիկ խառնուրդներում առանձին բաղադրիչների դերը գնահատելու համար Y-խողովակի վերլուծության ժամանակ գնահատվել են վեց սուբտրակտիվ խառնուրդներ ամբողջական խառնուրդների նկատմամբ, որոնցում առանձին միացություններ հեռացվել են: Հյուրընկալող մոծակների համար ամբողջական խառնուրդից առանձին միացությունների հանումը զգալի ազդեցություն է ունեցել վարքագծային արձագանքների վրա (χ2 = 19.6 հավելյալ ֆայլ = 0.6, հավելյալ ֆայլ = 2 = 19.6, p. Նկար S2A), բոլոր հանող խառնուրդներն ավելի գրավիչ էին, քան փոքրը, քան ամբողջությամբ խառը: Ի հակադրություն, առանձին միացությունների հեռացումը լիովին սինթետիկ խառնուրդից չի ազդել արյուն ծծող մոծակների վարքագծային արձագանքների վրա (χ2 = 11,38, df = 6, p = 0,077), բացառությամբ 0,077; Ֆայլ 1. Նկար S2B):
Եթովպիայի մալարիայի էնդեմիկ գյուղերից մեկում տասը գիշեր գնահատվել է կովի մեզի սինթետիկ խառնուրդի արդյունավետությունը դաշտային պայմաններում մոծակներին գրավելու համար (նկ. 6Ա): Ընդհանուր առմամբ բռնվել և նույնականացվել է 4861 մոծակ, որոնցից 45,7%-ը եղել են Anthropuss.9%: 35.4%-ը եղել է Culex spp. (Լրացուցիչ ֆայլ 1. Աղյուսակ S1): Anopheles arabinis-ը An.Gambian տեսակների համալիրի միակ անդամն է, որը բացահայտվել է PCR վերլուծության միջոցով: Միջին հաշվով, մեկ գիշերում բռնվել է 320 մոծակ, որի ընթացքում սինթետիկ խառնուրդի խայծերով թակարդները բռնել են սինթետիկ խառնուրդի խայծերով՝ ավելի շատ մոծակներ (3χ20, քան 300, քան 1 մոծակ): p < 0,0001) .Ոչ խայծ թակարդներ են դրվել փորձարկման սկզբում, միջին և վերջում հինգ հսկիչ գիշերներից յուրաքանչյուրում: Նմանատիպ թվով մոծակներ որսացել են յուրաքանչյուր զույգ թակարդում, ինչը ցույց չի տալիս տների միջև կողմնակալություն (χ2(0, 1665) = 9 × 5, 10-1 անկումով և ոչ. Սինթետիկ խառնուրդ պարունակող թակարդներում բռնված մոծակների թիվը զգալիորեն ավելացել է. հյուրընկալող փնտրող (χ2(0, 2107) = 138.7, p <0.0001), վերջերս արյունով սնվել (χ2(0, 650) = 32.2, p <0.0001) և հղիություն (χ2(0.2) =Լրացուցիչ ֆայլ 1. Աղյուսակ S1): Սա նաև արտացոլված է բռնված մոծակների ընդհանուր թվի մեջ. հյուրընկալող փնտրող > արյուն ծծող > հղի > կիսահղի > արու:
24-ժամյա սինթետիկ կովի մեզի հոտի խառնուրդի արդյունավետության դաշտային գնահատում: Դաշտային փորձարկումներն անցկացվել են հարավ-կենտրոնական Եթովպիայում (քարտեզ), Մակի քաղաքի մոտ (ներդիր)՝ օգտագործելով Հիվանդությունների վերահսկման կենտրոնի (CDC) լուսային թակարդը (աջից)՝ զուգակցված տներում՝ լատինական քառակուսի ձևավորումով (օդային լուսանկարչական պատկերով (օդային պատկերով) (օդային լուսանկարչական C): arabesques (B), բայց ոչ Anopheles farroes (C), այլ կերպ՝ ֆիզիոլոգիական վիճակից կախված էֆեկտ: Բացի այդ, այս թակարդները գրավեցին հյուրընկալող Culex մոծակների զգալիորեն ավելացված քանակ: ներկայացնում է ընտրության միջին ինդեքսը զույգ կառավարման թակարդներում (բաց; N = 5):Աստղանիշները ցույց են տալիս վիճակագրական նշանակության մակարդակները (*p = 0,01 և ***p < 0,0001)
Երեք տեսակները տարբեր կերպ են որսացել սինթետիկ խառնուրդներ պարունակող թակարդներում: Փնտրվում է հյուրընկալող (χ2(1, 1345) = 71.7, p <0.0001), արյունով կերակրում (χ2(1, 517) = 16.7, p < 0.0001) և հղիություն (χ2(1, 1, 1, 4) = 601: sis-ը թակարդում է հայտնվել սինթետիկ խառնուրդն ազատող թակարդում (նկ. 6B), մինչդեռ An-ի քանակությունը չի տարբերվում: Հայտնաբերվել է Pharoensis տարբեր ֆիզիոլոգիական վիճակներում (նկ. 6C): Culex-ի համար հյուրընկալողներ փնտրող մոծակների քանակի միայն զգալի աճ է հայտնաբերվել սինթետիկ խառնուրդով խայծված թակարդներում: ), համեմատած հսկիչ թակարդների հետ:
Եթովպիայի բազմացման վայրերի և գյուղական համայնքների միջև տեղակայված հյուրընկալող խայծերի թակարդները օգտագործվել են՝ գնահատելու համար, թե արդյոք մալարիայի մոծակները օգտագործում են կովի մեզի հոտը որպես հյուրընկալող միջավայրի ազդանշան: Հաղորդավարի նշանների, ջերմության և կովի մեզի հոտի առկայության դեպքում կամ առանց մոծակների, ոչ մի մոծակ չի հայտնաբերվել (Հավելյալ բարձր ջերմաստիճանի առկայություն, H Fig. Մալարիայի էգ մոծակները գրավվել և բռնվել են, թեև փոքր քանակությամբ, անկախ մեզի տարիքից (χ2(5, 25) = 2.29, p = 0.13; Լրացուցիչ ֆայլ 1. Նկար S3):
Մալարիայի մոծակները ձեռք են բերում և տարածում ազոտ պարունակող միացություններ կովի մեզով փոխհատուցվող կերակրման միջոցով (այսինքն՝ ջրափոսերը), որպեսզի ընդլայնեն կյանքի պատմության հատկությունները, ինչպես մյուս միջատներին [2, 4, 24, 25, 26]: Կովի մեզը մալարիայի համար վերականգնվող վերականգնվող ռեսուրս է, որը սերտորեն կապված է մալարիայի հետ: գյուղական տներ և ձվադրման վայրեր: Էգ մոծակները գտնում են այս ռեսուրսը հոտով և կարողանում են կարգավորել մեզի մեջ ազոտային միացությունների կլանումը, ներառյալ միզանյութը, որը մեզի հիմնական ազոտային բաղադրիչն է [15, 16]: Կախված էգ մոծակների ֆիզիոլոգիական վիճակից, սննդանյութերը, քանի որ մոծակներն ավելացնում են մեզի ակտիվությունը: Արյունով սնվող անհատների գոյատևման և վերարտադրողական առանձնահատկությունները առաջին գոնադոտրոպային ցիկլի ընթացքում: Հետևաբար, մեզի խառնումը կարևոր սննդային դեր է խաղում մալարիայի վեկտորների համար, որոնք փակ են թերսնված մեծահասակների պես [8], քանի որ այն էգ մոծակներին տալիս է կարևոր ազոտային միացություններ ձեռք բերելու կարողություն՝ ներգրավվելով ցածր ռիսկային սնուցման և ակնկալվող զգալի ազդեցությունների պատճառով: Ընդ որում, այս պահվածքը կարող է լինել վեկտորի կառավարման ապագա ծրագրերի թիրախը: