Oziq moddalarni olish va taqsimlash hasharotlarning ozuqa qidirish va hayot tarixi xususiyatlarini birlashtiradi. Hayotning turli bosqichlarida ma'lum ozuqa moddalarining yetishmasligini qoplash uchun hasharotlar bu ozuqa moddalarini qo'shimcha oziqlantirish orqali, masalan, ko'lmaklar deb nomlanuvchi jarayonda umurtqali hayvonlar sekretsiyasi bilan oziqlanish orqali olishlari mumkin. Anopheles arabiani chivinlari yetarlicha ovqatlanmagan ko'rinadi va shuning uchun ham metabolizm, ham ko'payish uchun ozuqa moddalariga muhtoj. Ushbu tadqiqotning maqsadi An. arabiensisni ozuqa moddalarini olish uchun sigir siydigida aralashtirib yuborish hayot tarixi xususiyatlarini yaxshilaydimi yoki yo'qligini baholash edi.
Xavfsizligiga ishonch hosil qiling. arabiensis yangi, 24 soatlik, 72 soatlik va 168 soatlik sigir siydigining hidiga jalb qilindi va mezbon izlovchi va qon bilan oziqlangan (qon bilan oziqlanganidan keyin 48 soat) urg'ochi hayvonlar Y-naychali olfaktometrda o'lchandi va homilador urg'ochi hayvonlar yumurtlama testi uchun baholandi. Keyin barcha to'rt yosh guruhida sigir siydigidagi bioaktiv birikmalarni aniqlash uchun kimyoviy va elektrofiziologik tahlil qo'llanildi. Bioaktiv birikmalarning sintetik aralashmalari Y-naycha va dala sinovlarida baholandi. Sigir siydigi va uning asosiy azot o'z ichiga olgan karbamid birikmasini bezgak vektorlari uchun potentsial qo'shimcha parhez sifatida o'rganish uchun oziqlantirish parametrlari va hayot tarixi xususiyatlari o'lchandi. Urg'ochi chivinlarning nisbati va so'rilgan sigir siydigi va karbamid miqdori baholandi. Oziqlantirishdan so'ng, urg'ochi hayvonlarning omon qolish, bog'langan parvoz va ko'payish darajasi baholandi.
Xostning qoni va ozuqasini qidiring. Laboratoriya va dala tadqiqotlarida arablar yangi va qarigan sigir siydigining tabiiy va sintetik hidiga jalb qilindi. Homilador urg'ochilar urchitish joylarida sigir siydigining reaksiyalariga befarq edilar. Xost izlovchi va qon so'ruvchi urg'ochilar sigir siydigi va karbamidni faol ravishda o'zlashtiradilar va bu resurslarni parvoz, omon qolish yoki ko'payish uchun fiziologik holatning funktsiyasi sifatida hayot tarixi murosalariga muvofiq taqsimlaydilar.
Anopheles arabinis hayot tarixi xususiyatlarini yaxshilash uchun sigir siydigini olish va tarqatish. Sigir siydigini qo'shimcha oziqlantirish vektor sig'imiga bevosita ta'sir qiladi, bu esa kunlik omon qolish va vektor zichligini oshiradi va bilvosita parvoz faolligini o'zgartiradi va shuning uchun kelajakdagi modellarda ko'rib chiqilishi kerak.
Oziq moddalarni olish va taqsimlash hasharotlarning ozuqa qidirish va hayot tarixi xususiyatlarini birlashtiradi [1,2,3]. Hasharotlar oziq-ovqatni tanlash va sotib olish hamda oziq-ovqat mavjudligi va ozuqa moddalariga bo'lgan ehtiyojga qarab kompensatsion oziqlantirishni amalga oshirishga qodir [1, 3]. Oziq moddalarning taqsimlanishi hayot tarixi jarayoniga bog'liq va hasharotlarning turli hayot bosqichlarida parhez sifati va miqdori uchun turli talablarga olib kelishi mumkin [1, 2]. Muayyan ozuqa moddalarining yetishmasligini qoplash uchun hasharotlar bu ozuqa moddalarini qo'shimcha oziqlantirish orqali, masalan, loy, umurtqali hayvonlarning turli axlatlari va sekretsiyasi va ko'lmaklar deb nomlanuvchi o'lik go'sht orqali olishlari mumkin [2]. Kapalak va kuya turlarining xilma-xilligi asosan tasvirlangan bo'lsa-da, sug'orish joylari boshqa hasharotlar turkumlarida ham uchraydi va bu turdagi resurslarga jalb qilish va ular bilan oziqlanish sog'liq va hayot tarixining boshqa xususiyatlariga sezilarli ta'sir ko'rsatishi mumkin [2, 4, 5, 6], 7]. Bezgak chivinlari Anopheles gambiae sensu lato (sl) "to'yib ovqatlanmagan" kattalar sifatida paydo bo'ladi [8], shuning uchun sug'orish uning hayot tarixi xususiyatlarida muhim rol o'ynashi mumkin, ammo bu xatti-harakatlar hozirgacha e'tibordan chetda qolgan. Ushbu muhim vositada ozuqa moddalarini iste'mol qilishni ko'paytirish vositasi sifatida qo'zg'alishdan foydalanish e'tiborga loyiqdir, chunki bu muhim epidemiologik oqibatlarga olib kelishi mumkin.
Voyaga yetgan urg'ochi Anopheles chivinlarida azot iste'moli lichinka bosqichidan olib kelingan past kaloriya zaxiralari va qon unidan samarasiz foydalanish tufayli cheklangan [9]. Urg'ochi Ann.gambiae sl odatda buni qo'shimcha qon uni bilan to'ldirish orqali qoplaydi [10, 11], shu bilan ko'proq odamlarni kasallikka chalinish xavfiga qo'yadi va chivinlarni yirtqichlik xavfini oshiradi. Shu bilan bir qatorda, chivinlar boshqa hasharotlar tomonidan ko'rsatilganidek [2], moslashish va parvoz manevrini kuchaytiradigan azotli birikmalarni olish uchun umurtqali hayvonlar najasini qo'shimcha oziqlantirishdan foydalanishlari mumkin. Shu nuqtai nazardan, An. Gambiyalik sl turlari kompleksi, yangi va qarigan sigir siydigi Anopheles arabinis [12,13,14] ichidagi birodar turlardan birining kuchli va aniq jozibasi qiziq. Anopheles arabinis o'zining xo'jayin afzalliklarida imkoniyatchi va qoramol bilan bog'lanishi va oziqlanishi bilan mashhur. Sigir siydigi azotli birikmalarga boy resurs bo'lib, karbamid yangi siydikdagi umumiy azotning 50-95% ni tashkil qiladi [15, 16]. Sigir siydigi qarishi bilan mikroorganizmlar bu resurslardan 24 soat ichida azotli birikmalarning murakkabligini kamaytirish uchun foydalanadilar [15]. Organik azotning pasayishi bilan bog'liq ammiakning tez ko'payishi bilan alkalofil mikroorganizmlar (ularning ko'pchiligi chivinlar uchun zaharli birikmalar hosil qiladi) rivojlanadi [15], bu Ann.arabiensis urg'ochi 24 soat yoki undan kamroq yoshdagi siydikka afzalroq jalb qilinishi mumkin [13, 14].
Ushbu tadqiqotda mezbon va qon bilan oziqlangan Ans qidirildi. Birinchi gonadotropin sikli davomida arabiensis siydikni aralashtirish orqali azotli birikmalarni, jumladan, karbamidni olish uchun baholandi. Keyin, urg'ochi chivinlarning bu potentsial ozuqaviy resursni omon qolish, ko'payish va keyingi ozuqa qidirish uchun qanday taqsimlashini baholash uchun bir qator tajribalar o'tkazildi. Nihoyat, yangi va qarigan sigir siydigining hidi, bularning mezbon va qon bilan oziqlangan An uchun ishonchli ko'rsatmalar berishini aniqlash uchun baholandi. Ushbu potentsial ozuqaviy resursni qidirishda arabiensis kuzatilgan differentsial jozibadorlik ortidagi kimyoviy korrelyatsiyalarni aniqladi. 24 soatlik qarigan siydikda aniqlangan uchuvchan organik birikmalarning (VOC) sintetik hidli aralashmalari dala sharoitida qo'shimcha baholandi, laboratoriya sharoitida olingan natijalarni kengaytirdi va sigir siydigi hidining turli fiziologik holatlarga ta'sirini ko'rsatdi. Chivinlarni jalb qilish. Olingan natijalar An. arabiensisning hayot tarixi xususiyatlariga ta'sir qilish uchun umurtqali hayvonlar siydigida topilgan azotli birikmalarni olishi va tarqatishini tasdiqlaydi. Ushbu natijalar potentsial epidemiologik oqibatlar va ulardan vektorlarni kuzatish va nazorat qilish uchun qanday foydalanish mumkinligi kontekstida muhokama qilinadi.
Anopheles arabicans (Dongola shtammi) 25 ± 2 °C, 65 ± 5% nisbiy namlik va 12:12 soatlik yorug'lik: qorong'ulik siklida saqlandi. Lichinkalar distillangan suv bilan to'ldirilgan plastik patnislarda (20 sm × 18 sm × 7 sm) o'stirildi va Tetramin® baliq ozuqasi (Tetra Werke, Melle, DE) bilan oziqlantirildi. Qo'g'irchoqlar 30 ml stakanlarda (Nolato Hertila, Åstorp, SE) to'plandi va keyin katta yoshli baliqlarning chiqishi uchun Bugdorm qafaslariga (30 sm × 30 sm × 30 sm; MegaView Science, Taichung, Tayvan) o'tkazildi. Katta yoshli baliqlarga chiqishdan 4 kun o'tgach (dpe) 10% saxaroza eritmasi ad libitum berildi, bu vaqtda xo'jayin izlayotgan urg'ochi baliqlarga tajribadan oldin darhol parhez berildi yoki quyida tavsiflanganidek, tajribadan oldin distillangan suv bilan tun bo'yi och qoldirildi. Parvoz naychasi tajribalari uchun ishlatilgan urg'ochi baliqlar atigi 4-6 kun davomida och qoldirildi. soatlab suv bilan, ad libitum bilan. Keyingi biotahlillar uchun qon so'ruvchi chivinlarni tayyorlash uchun 4 dpe urg'ochilariga membrana oziqlantirish tizimi (Hemotek Discovery Workshops, Accrington, Buyuk Britaniya) yordamida defibrotik qo'y qoni (Håtunalab, Bro, SE) berildi. Keyin to'liq tiqilib qolgan urg'ochi hayvonlar alohida qafaslarga o'tkazildi va quyida tavsiflanganidek, to'g'ridan-to'g'ri ovqatlanish yoki quyida tavsiflangan tajribalardan 3 kun oldin 10% saxaroza ad libitum bilan ta'minlandi. Ikkinchi urg'ochi hayvonlar parvoz naychasi biotahlillari uchun ishlatildi va laboratoriyaga o'tkazildi, so'ngra tajribadan 4-6 soat oldin ad libitum distillangan suv bilan ta'minlandi.
Voyaga yetgan An.Arab urg'ochilarida siydik va karbamid iste'molini aniqlash uchun oziqlantirish tahlillari qo'llanildi. Xo'jayin izlovchi va qon bilan oziqlangan urg'ochilarga 48 soat davomida 1% suyultirilgan yangi va qarigan sigir siydigi, turli konsentratsiyadagi karbamid va ikkita nazorat guruhi (10% saxaroza va suv) bo'lgan parhez berildi. Bundan tashqari, parhezga oziq-ovqat bo'yog'i (1 mg ml-1 ksilol siyanid FF; CAS 2650-17-1; Sigma-Aldrich, Stokgolm, SE) qo'shildi va 250 µl mikrotsentrifuga naychalarida 4 × 4 matritsada yetkazib berildi (Axygen Scientific, Union City, CA, US; 1A-rasm). Chetga qadar to'ldiring (~300 µl). Chivinlar o'rtasidagi raqobat va bo'yoq rangining potentsial ta'sirining oldini olish uchun 10 ta chivinni katta Petri idishiga (diametri 12 sm va balandligi 6 sm; Semadeni, Ostermundigen, CH; 1A-rasm) 25 ± 2 sm °C va 65 ± haroratda to'liq qorong'ilikka joylashtiring. 5% nisbiy namlik. Bu tajribalar 5 dan 10 martagacha takrorlandi. Ovqatlanishdan so'ng, chivinlar keyingi tahlillar o'tkazilgunga qadar -20 °C ga joylashtirildi.
Xo'jayin va qon so'ruvchi urg'ochi Anopheles arabianus tomonidan so'rilgan sigir siydigi va karbamidni qidiring. Oziqlantirish sinovida (A) urg'ochi chivinlarga yangi va qarigan sigir siydigi, turli konsentratsiyadagi karbamid, saxaroza (10%) va distillangan suv (H2O) dan iborat parhez berildi. Xo'jayin izlovchi (B) va qon bilan oziqlangan (C) urg'ochilari sinovdan o'tgan boshqa parhezlarga qaraganda ko'proq saxaroza so'rishdi. E'tibor bering, xo'jayin izlovchi urg'ochilari 72 soatlik sigir siydigini 168 soatlik sigir siydigidan (B) kamroq so'rishdi. Siydikning o'rtacha umumiy azot miqdori (± standart og'ish) qo'shimchada ko'rsatilgan. Xo'jayin izlovchi (D, F) va qon so'ruvchi (E, G) urg'ochilari karbamidni dozaga bog'liq holda qabul qiladilar. Turli harf nomlari bilan o'rtacha nafas olish hajmlari (D, E) bir-biridan sezilarli darajada farq qildi (Tukeyning post hoc tahlilidan foydalangan holda bir tomonlama ANOVA; p < 0.05). Xato satrlari o'rtacha qiymatning standart xatosini (BE) ifodalaydi. To'g'ri chiziq log-chiziqli regressiya chizig'ini (F, G) ifodalaydi.
So'rilgan oziq-ovqatni chiqarish uchun chivinlar alohida-alohida 230 µl distillangan suv solingan 1,5 ml mikrosantrifuga naychalariga joylashtirildi va to'qima bir martalik pestle va simsiz motor (VWR International, Lund, SE) yordamida parchalandi, so'ngra 10 daqiqa davomida 10 kr/m tezlikda santrifuga qilindi. Supernatant (200 µl) 96 quduqli mikroplastinkaga (Sigma-Aldrich) o'tkazildi va yutilish (λ620) spektrofotometrga asoslangan mikroplastinka o'quvchi (SPECTROStar® Nano, BMG Labtech, Ortenberg, DE) nm yordamida aniqlandi. Shu bilan bir qatorda, chivinlar 1 ml distillangan suvda maydalandi, shundan 900 µl spektrofotometrik tahlil uchun kyuvetkaga o'tkazildi (λ 620 nm; UV 1800, Shimadzu, Kista, SE). Oziq-ovqat iste'molini miqdoriy aniqlash uchun 0,2 µl dan 2,4 gacha bo'lgan ketma-ket suyultirish orqali standart egri chiziq tayyorlandi. 1 mg ml-1 ksilol siyanidning µl. Keyin, har bir chivin yutgan ovqat miqdorini aniqlash uchun ma'lum bo'yoq konsentratsiyalarining optik zichligi ishlatilgan.
Hajm ma'lumotlari bir tomonlama dispersiya tahlili (ANOVA) yordamida tahlil qilindi, so'ngra Tukeyning post hoc juftlik taqqoslashlari (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc., Cary, NC, US, 1989–2007) qo'llanildi. Chiziqli regressiya tahlillari konsentratsiyaga bog'liq karbamid iste'molini tavsifladi va xo'jayin izlovchi va qon so'ruvchi chivinlar o'rtasidagi javoblarni taqqosladi (GraphPad Prism v8.0.0 for Mac, GraphPad Software, San Diego, CA, US).
Har bir yosh guruhidan taxminan 20 µl siydik namunalari Chromosorb® W/AW (10 mg 80/100 mesh, Sigma Aldrich) ga bog'langan va qalay kapsulalarga (8 mm × 5 mm) joylashtirilgan. Ishlab chiqaruvchining protokoliga muvofiq yangi va eski siydikdagi azot miqdorini aniqlash uchun kapsulalar CHNS/O analizatorining (Flash 2000, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, AQSh) yonish kamerasiga kiritildi. Umumiy azot (g N l-1) standart sifatida ishlatilgan ma'lum karbamid konsentratsiyalari asosida aniqlandi.
Parhezning uy egasi izlovchi va qon so'ruvchi urg'ochilarning omon qolishiga ta'sirini baholash uchun chivinlar alohida-alohida katta Petri idishlariga (diametri 12 sm va balandligi 6 sm; Semadeni) joylashtirildi, qopqog'ida to'r bilan qoplangan teshik (diametri 3 sm) shamollatish va oziq-ovqat bilan ta'minlash uchun. Parhezlar 4 dpe dan keyin darhol berildi va 1% suyultirilgan yangi va qarigan sigir siydigi, to'rtta konsentratsiyali karbamid va ikkita nazorat guruhi, 10% saxaroza va suvdan iborat edi. Har bir parhez 5 ml shpritsga (Thermo Fisher Scientific, Gothenburg, SE) kiritilgan tish tamponiga (DAB Dental AB, Upplands Väsby, SE) pipetka bilan quyildi, piston olib tashlandi va Petri idishining ustiga qo'yildi (1-rasm).1A). Parhezingizni har kuni o'zgartiring. Laboratoriyani yuqorida tavsiflanganidek saqlang. Omon qolgan chivinlar kuniga ikki marta sanaldi, o'lik chivinlar esa oxirgi chivin o'lguncha tashlandi (har bir davolash uchun n = 40). Turli parhezlar bilan oziqlangan chivinlarning omon qolishi statistik jihatdan tahlil qilindi. Parhezlar orasidagi omon qolish taqsimotini taqqoslash uchun Kaplan-Meyer omon qolish egri chiziqlari va log-rank testlari (IBM SPSS Statistics 24.0.0.0).
Attisano va boshqalarga asoslangan maxsus chivin uchuvchi tegirmon [17], old va orqa panellarsiz 5 mm qalinlikdagi tiniq akril panellardan (kengligi 10 sm x uzunligi 10 sm x balandligi 10 sm) tayyorlangan (3-rasm: yuqori qismi). Gaz xromatografiyasi ustunidan (0,25 mm id; 7,5 sm L) yasalgan vertikal naychali aylanma yig'ma, uchlari bir-biridan 9 sm masofada joylashgan juft neodim magnitlari orasiga osilgan hasharot ignasiga yopishtirilgan. Xuddi shu materialdan (6,5 sm L) yasalgan gorizontal naycha vertikal naychani ikkiga bo'lib, bog'langan qo'l va yorug'likni uzuvchi signal sifatida kichik alyuminiy folga bo'lagini ko'taradigan qo'l hosil qildi.
24 soat davomida och qolgan urg'ochi chivinlarga cheklashdan oldin 30 daqiqa davomida yuqoridagi parhez berildi. To'liq ovqatlangan urg'ochi chivinlar keyin muz ustida 2-3 daqiqa davomida alohida-alohida behushlik qilindi va asalari mumi bilan hasharotlar ignalariga biriktirildi (Joel Svenssons Vaxfabrik AB, Munka Ljungby, SE) va keyin gorizontal naychalarning qo'llariga bog'landi. Uchish tegirmoni. Har bir parvoz uchun aylanishlar maxsus tayyorlangan ma'lumotlarni qayd etuvchi tomonidan qayd etildi, so'ngra PC-Lab 2000™ dasturi (v4.01; Velleman, Gavere, BE) yordamida saqlandi va namoyish etildi. Uchish tegirmoni iqlimga moslashtirilgan xonaga joylashtirildi (12 soat:12 soat, yorug'lik: qorong'i, 25 ± 2 °C, 65 ± 5% nisbiy namlik).
Parvoz faolligi naqshini tasavvur qilish uchun 24 soatlik davrda soatiga umumiy uchib o'tilgan masofa (m) va ketma-ket parvoz faolliklarining umumiy soni hisoblab chiqildi. Bundan tashqari, individual urg'ochilarning o'rtacha uchib o'tgan masofalari turli xil muolajalar bo'yicha taqqoslandi va bir tomonlama ANOVA va Tukeyning post hoc tahlili (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.) yordamida tahlil qilindi, bu yerda o'rtacha masofa bog'liq o'zgaruvchi, muolaja esa mustaqil omil hisoblandi. Bundan tashqari, o'rtacha raundlar soni 10 daqiqalik oraliqlarda hisoblanadi.
An.arabiensisning reproduktiv faoliyatiga parhezning ta'sirini baholash uchun oltita urg'ochi (4 dpe) qon olingandan so'ng to'g'ridan-to'g'ri Bugdorm qafaslariga (30 sm × 30 sm × 30 sm) o'tkazildi va keyin yuqorida tavsiflanganidek 48 soat davomida eksperimental parhez bilan ta'minlandi. Keyin parhezlar olib tashlandi va uchinchi kuni 20 ml distillangan suv bilan to'ldirilgan yumurtlama stakanlari (30 ml; Nolato Hertila) 48 soat davomida, har 24 soatda almashtirib turildi. Har bir parhez rejimini 20-50 marta takrorlang. Har bir eksperimental qafas uchun tuxumlar sanab chiqildi va qayd etildi. Leica kamerasi (DFC) 320 R2 bilan jihozlangan Dialux-20 mikroskopi (DM1000; Ernst Leitz Wetzlar, Wetzlar, DE) yordamida individual tuxumlarning o'rtacha kattaligi va uzunligi o'zgarishini (har bir parhez uchun n ≥ 200) baholash uchun tuxumlarning kichik namunalari ishlatildi; Leica Microsystems Ltd., DE). Qolgan tuxumlar standart parvarish sharoitida 24 soat davomida iqlim nazorati ostida xonada saqlandi va yuqorida tavsiflanganidek, yaqinda paydo bo'lgan 1-bosqich lichinkalarining namunasi (har bir parhez uchun n ≥ 200) o'lchandi. Tuxumlar soni va tuxum hamda lichinkalarning kattaligi davolash usullari o'rtasida va bir tomonlama ANOVA va Tukeyning post hoc tahlili (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.) yordamida taqqoslandi.
Zebu qoramollari va Arsi irqlaridan olingan namunalardan yangi (namuna olishdan 1 soat o'tgach), 24 soat, 72 soat va 168 soatlik siydikdan olingan uchuvchan moddalar to'plandi. Qulaylik uchun siydik namunalari erta tongda, sigirlar hali ham omborda bo'lganida to'plandi. Siydik namunalari 10 kishidan olindi va har bir namunadan 100-200 ml alohida poliamid pishirish paketlariga (Toppits Cofresco, Frischhalteprodukte GmbH and Co., Minden, DE) vinilxloridli plastik bochkalarda qopqoqli 3 l poliamidda o'tkazildi. Har bir sigir siydik namunasidan olingan uchuvchan moddalar to'g'ridan-to'g'ri (yangi) yoki xona haroratida 24 soat, 72 soat va 168 soat davomida pishganidan keyin to'plandi, ya'ni har bir siydik namunasi har bir yosh guruhini ifodalaydi.
Bosh fazoviy uchuvchan moddalarni yig'ish uchun yopiq halqali tizim yordamida faollashtirilgan uglerod bilan filtrlangan gaz oqimi (100 ml min-1) poliamid paket orqali adsorbsiya ustuniga 2,5 soat davomida diafragma vakuum pompasi (KNF Neuberger, Freiburg, DE) yordamida aylantirildi. Nazorat sifatida bosh fazoviy moddalarni yig'ish bo'sh poliamid paketidan amalga oshirildi. Adsorbsiya ustuni shisha jun tiqinlari orasida 35 mg Porapak Q (50/80 mesh; Waters Associates, Milford, MA, AQSh) bo'lgan Teflon naychasidan (5,5 sm x 3 mm id) tayyorlangan. Ishlatishdan oldin ustun 1 ml qayta distillangan n-geksan (Merck, Darmstadt, DE) va 1 ml pentan (99,0% sof erituvchi GC darajasi, Sigma Aldrich) bilan yuvildi. Adsorbsiyalangan uchuvchan moddalar 400 mkl pentan bilan elyut qilindi. Bosh fazoviy to'plamlar birlashtirildi va keyin keyingi tahlil uchun ishlatilgunga qadar -20°C da saqlandi.
Xost izlovchi va qon iste'mol qiluvchi An. Yangi, 24 soatlik, 72 soatlik va 168 soatlik siydikdan to'plangan Headspace uchuvchan ekstraktlari to'g'ri shisha naychali olfaktometr yordamida Arabidopsis chivinlaridan uchuvchan ekstraktlar uchun tahlil qilindi [18]. Tajribalar ZT 13-15 davrida, Anning uy izlash faoliyatining eng yuqori davrida o'tkazildi. Arab [19]. Shisha naychali olfaktometr (80 sm × 9,5 sm id) yuqoridan 3 ± 1 lx qizil yorug'lik bilan yoritildi. Ko'mir filtrlangan va namlangan havo oqimi (25 ± 2 °C, 65 ± 2% nisbiy namlik) biotahlildan 30 sm s-1 tezlikda o'tdi. Havo zanglamaydigan po'latdan yasalgan to'rli ekranlar qatoridan o'tkazilib, laminar oqim va bir xil tukli tuzilish hosil qiladi. Tish tampon dispenseri (4 sm × 1 sm; L:D; DAB Dental AB), 5 sm spiraldan osilgan. olfaktometrning shamolga qaragan tomoni, stimulyator har 5 daqiqada almashtiriladi. Tahlil qilish uchun har bir bosh maydoni ekstraktidan 10 mkl, 1:10 nisbatda suyultirilgan holda, stimulyator sifatida ishlatilgan. Teng miqdordagi pentan nazorat sifatida ishlatilgan. Alohida mezbon izlovchi yoki qon so'ruvchi chivinlar tajriba boshlanishidan 2-3 soat oldin alohida qo'yib yuborish kataklariga joylashtirildi. Qo'yib yuborish katagi olfaktometrning shamolga qaragan tomoniga joylashtirildi va chivinlarga 1 daqiqa davomida moslashishga ruxsat berildi, so'ngra qafasning kapalak klapani qo'yib yuborish uchun ochildi. Davolash yoki nazoratga jalb qilish qo'yib yuborilgandan keyin 5 daqiqa ichida manba bilan aloqa qilgan chivinlarning nisbati sifatida tahlil qilindi. Har bir bosh maydoni uchuvchan ekstrakti va nazorat kamida 30 marta takrorlandi va bir kunning ta'siridan qochish uchun har bir tajriba kunida bir xil miqdordagi davolash va nazorat sinovlari o'tkazildi. Xost va qon bilan oziqlanganlardan javoblarni so'rang. Javob. Arabcha va bosh maydoni to'plamlari nominal logistik regressiya yordamida tahlil qilindi, so'ngra toq nisbatlar uchun juftlik bo'yicha taqqoslashlar o'tkazildi. (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Anning urchitish reaksiyasi. Yangi va qarigan sigir siydigidan olingan bosh bo'shlig'i ekstraktlari Bugdorm qafaslarida (30 sm × 30 sm × 30 sm; MegaView Science) tahlil qilindi. 20 ml distillangan suv bilan to'ldirilgan plastik stakanlar (30 ml; Nolato Hertila) urchitish substratini ta'minladi va qafasning qarama-qarshi burchaklariga, bir-biridan 24 sm masofada joylashtirildi. Davolash stakanlari har bir bosh bo'shlig'i ekstraktidan 10 mkl bilan 1:10 suyultirishda sozlandi. Nazorat stakanini sozlash uchun teng miqdorda pentan ishlatildi. Pozitsiya effektlarini nazorat qilish uchun har bir tajriba o'rtasida davolash va nazorat stakanlari almashtirildi. ZT 9-11 da tajriba kataklariga o'nta qon bilan oziqlangan urg'ochi qo'yildi va 24 soatdan keyin stakanlardagi tuxumlar sanab chiqildi. Urchitish indeksini hisoblash formulasi quyidagicha: (davolash stakaniga qo'yilgan tuxum soni - nazorat stakaniga qo'yilgan tuxum soni)/(qo'yilgan tuxumlarning umumiy soni). Har bir davolash 8 marta takrorlandi.
Urg'ochi An.arabiensisning gaz xromatografik va elektron antenna naqshini aniqlash (GC-EAD) tahlili avval tasvirlanganidek [20] amalga oshirildi. Qisqacha aytganda, yangi bosh bo'shlig'i uchuvchan ekstraktlari HP-5 ustuni (30 m × 0,25 mm id, 0,25 mkm plyonka qalinligi, Agilent Technologies) bilan jihozlangan Agilent Technologies 6890 GC (Santa Clara, CA, AQSH) yordamida ajratildi. va qarish siydigi. Vodorod o'rtacha chiziqli oqim tezligi 45 sm s-1 bo'lgan mobil faza sifatida ishlatilgan. Har bir namuna (2 μl) kirish harorati 225 °C bo'lgan holda 30 soniya davomida bo'linmas rejimda yuborildi. GC pechining harorati 35 °C (3 daqiqa ushlab turish) dan 300 °C (10 daqiqa ushlab turish) gacha 10 °C min-1 da dasturlashtirilgan. GC chiqindi suv ajratgichida 4 psi azot qo'shildi va Gerstel 3D/2 past o'lik hajmli kesishmada (Gerstel, Mülheim, DE) alanga ionizatsiya detektori va EAD o'rtasida 1:1 nisbatda bo'lindi. EAD uchun GC chiqindi kapillyar GC pechining harorati + 5 °C ni kuzatuvchi Gerstel ODP-2 uzatish liniyasi orqali shisha naychaga (10 sm × 8 mm) o'tkazildi va u yerda uglerod filtrlangan, namlangan havo (1,5 l min−1) bilan aralashtirildi. Antenna joylashtirildi Naychaning chiqish joyidan 0,5 sm masofada. Har bir chivin bitta replikatsiyani tashkil etdi va xo'jayin izlovchi chivinlar uchun har bir yoshdagi siydik namunalarida kamida uchta replikatsiya amalga oshirildi.
Yangi va qarigan sigir siydigining bosh bo'shlig'idagi bioaktiv birikmalarni GC-EAD tahlilida antenna javoblarini olish uchun kombinatsiyalangan GC va mass-spektrometr (GC-MS; 6890 GC va 5975 MS; Agilent Technologies) yordamida aniqlash, 70 eV da elektron zarba ionizatsiyasi rejimida ishlaydi. GC o'rtacha chiziqli oqim tezligi 35 sm s-1 bo'lgan geliyni mobil faza sifatida ishlatib, HP-5MS UI bilan qoplangan eritilgan kremniy kapillyar ustuni (60 m × 0,25 mm ichki diametri, 0,25 mkm plyonka qalinligi) bilan jihozlangan. 2 mkl namuna GC-EAD tahlili uchun bo'lgani kabi bir xil injektor sozlamalari va pech harorati yordamida yuborildi. Birikmalar ularning saqlanish vaqti (Kovát indeksi) va maxsus kutubxona va NIST14 kutubxonasi (Agilent) bilan taqqoslangan massa spektrlari asosida aniqlandi. Aniqlangan birikmalar haqiqiy standartlarni kiritish orqali tasdiqlandi (Qo'shimcha fayl 1: S2 jadvali). Miqdoriy aniqlash uchun geptil asetat (10 ng, 99,8% kimyoviy tozalik, Aldrich) tashqi standart sifatida kiritildi.
Yuqoridagi kabi olfaktometr va protokoldan foydalanib, yangi va qarigan siydikda aniqlangan bioaktiv birikmalardan tashkil topgan sintetik hid aralashmasining samaradorligini baholash. Yuqoridagi kabi olfaktometr va protokoldan foydalanib. Sintetik aralashmalar yangi, 24 soatlik, 48 soatlik, 72 soatlik va 168 soatlik qarigan siydikning aralash bosh bo'shlig'idagi uchuvchan ekstraktlaridagi birikmalarning tarkibi va nisbatlarini taqlid qildi (5D-G-rasm; Qo'shimcha fayl 1: S2-jadval). Tahlil qilish uchun, umumiy ajralib chiqish tezligi taxminan 140-2400 ng h-1 gacha bo'lgan to'liq sintetik aralashmaning 1:100 suyultirilgan eritmasidan 10 mkl dan foydalaning, bunda to'liq aralashmaning bitta birikmalarining subtektiv aralashmalari olib tashlanadi. Xo'jayin va qon bilan oziqlanganlardan javoblarni so'rang. Javob: Arab va sintetik va subtektiv aralashmalar nominal logistik regressiya va keyin juftlik bo'yicha taqqoslash yordamida tahlil qilindi. toq nisbatlar (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Sigir siydigi bezgak chivinlari uchun yashash joyi belgisi bo'lib xizmat qilishi mumkinligini baholash uchun yuqorida tavsiflanganidek yig'ilgan yangi va qari sigir siydigi va suv 3 litrli chelaklarga (100 ml) joylashtirildi va mezbon o'lja tuzoqlariga joylashtirildi. (BG-HDT versiyasi; BioGents, Regensburg, DE). O'nta tuzoq yaylovda, qishloq jamoasidan (Silay, Efiopiya, 5°53´24´´N, 37°29´24´´E) 400 m masofada, qoramolsiz, doimiy ko'payish joylari va qishloqlarda bir-biridan 50 m masofada joylashtirildi. Xo'jayinning mavjudligini simulyatsiya qilish uchun beshta tuzoq isitildi, beshta tuzoq esa isitilmasdan qoldirildi. Har bir ishlov berish joyi har kecha jami besh kecha davomida aylantiriladi. Turli yoshdagi siydik bilan o'lja qilingan tuzoqlarda ushlangan chivinlar soni beta binomial taqsimot bilan logistik regressiya yordamida taqqoslandi (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Efiopiyaning Oromiya viloyati, Maki shahri yaqinidagi bezgak keng tarqalgan qishloqda (8° 11′ 08″ N, 38° 81′ 70″ E; 6A-rasm). Tadqiqot avgust oyining o'rtalaridan sentyabr oyining o'rtalarigacha, yillik yopiq qoldiqlarga qarshi purkashdan oldin, uzoq muddatli yomg'irli mavsum bilan birga o'tkazildi. Tadqiqot uchun qishloq chetida joylashgan besh juft uy (20–50 m masofada) tanlab olindi (6A-rasm). Uylarni tanlashda qo'llanilgan mezonlar quyidagilar edi: uyga hayvonlar kirishiga ruxsat berilmadi, uyda ovqat pishirishga (o'tin yoki ko'mir bilan) ruxsat berilmadi (hech bo'lmaganda sinov davrida) va ko'pi bilan ikki kishilik aholisi bo'lgan, insektitsidlarga qarshi vositalar bilan uxlaydigan uylar. Davolangan chivin to'ri ostida. Addis-Abeba universiteti Tabiiy fanlar fakulteti (CNS-IRB) Institutsional tadqiqotlar etikasi bo'yicha ko'rib chiqish kengashi (IRB/022/2016) tomonidan Jahon tibbiyot assotsiatsiyasining Xelsinki deklaratsiyasida belgilangan ko'rsatmalarga muvofiq axloqiy tasdiq berildi. Har bir oila boshlig'ining roziligi sog'liqni saqlash bo'yicha mutaxassislar yordamida olindi. Butun jarayon tuman va okrug ('kebele') darajasidagi mahalliy ma'muriyatlar tomonidan tasdiqlanadi. Eksperimental dizayn 2 × 2 Lotin kvadrat dizayniga amal qildi, unda sintetik aralashmalar va boshqaruv elementlari birinchi kechada juftlashgan uylarga tayinlandi va keyingi eksperimental kechada uylar o'rtasida almashtirildi. Bu jarayon o'n marta takrorlandi. Bundan tashqari, tanlangan uylarda chivin faolligini baholash uchun CDC tuzoqlari dala sinovining boshida, o'rtasida va oxirida kunning bir vaqtning o'zida ketma-ket besh kecha ishlashi uchun o'rnatildi.
Oltita bioaktiv birikmani o'z ichiga olgan sintetik aralashma geptanda (97,0% erituvchi GC darajasi, Sigma Aldrich) eritildi va paxta fitilli dispenser yordamida 140 ng h-1 da chiqarildi [20]. Fitilli dispenser barcha birikmalarning 12 soatlik tajriba davomida doimiy nisbatda chiqarilishiga imkon berdi. Geptan nazorat sifatida ishlatilgan. Flakon Kasalliklarni nazorat qilish va oldini olish markazlari (CDC) yorug'lik tuzog'ining kirish nuqtasi yonida osilgan (John W. Hock Company, Geynsvill, FL, AQSh; 6A-rasm). Tuzoqlar yerdan 0,8-1 m balandlikda, to'shakning etagiga yaqin joyda osilgan va ko'ngilli ishlov berilmagan chivin to'ri ostida uxlagan va soat 18:00 dan 06:30 gacha operatsiya qilingan. Jinsi va fiziologik holati bo'yicha ushlangan chivinlar (ovqatlanmagan, oziqlangan, yarim homilador va homilador [21]) keyinchalik polimeraza zanjiri reaksiyasi (PCR) tahlili yordamida morfologik jihatdan A. gambiae sl sifatida aniqlangan turni aniqlash uchun tekshirildi. Kompleks a'zolari [23]. Dala tadqiqotida juftlashgan uylarning tuzoqqa tutilishi nominal logistik moslik modeli yordamida tahlil qilindi, bu yerda tortishish bog'liq o'zgaruvchi va ishlov berish (sintetik aralashma va nazorat) o'zgarmas effekt edi (JMP® 14.0.0. SAS Institute Inc.). Bu yerda biz ehtimollik nisbati testidan olingan χ2 va p-qiymatlarini taqdim etamiz.
Xavfsizligini baholang. arabiensis siydikni, uning asosiy azot manbai bo'lgan karbamidni (dpe) xo'jayin izlovchi va qon bilan oziqlanadigan urg'ochilarni oziqlantirish sinovlaridan keyin 4 kun davomida to'g'ridan-to'g'ri oziqlantirish orqali olishga muvaffaq bo'ldi (1A-rasm). Xo'jayin izlovchi va qon so'ruvchi urg'ochi hayvonlar boshqa har qanday parhez yoki suvga qaraganda ancha ko'p saxaroza so'rishdi (F(5,426) = 20.15, p < 0.0001 va F(5,299) = 56.00, p < 0.0001 mos ravishda; 1B,C-rasm). Bundan tashqari, xo'jayin izlovchi urg'ochi hayvonlar 72 soat ichida siydikda 168 soatdagi siydikka nisbatan kamroq ovqat yedilar (1B-rasm). Karbamid o'z ichiga olgan parhez taklif qilinganda, xo'jayin izlovchi urg'ochi hayvonlar 2.69 mM da boshqa barcha konsentratsiyalar va suvga nisbatan ancha ko'p miqdorda karbamid so'rishdi, shu bilan birga 10% saxarozadan farq qilib bo'lmaydi (F(10,813) = 15.72, p < 0.0001; 1D-rasm). Bu qon bilan oziqlanadigan urg'ochilarning javobidan farqli o'laroq edi, ular odatda suvga qaraganda ancha ko'p karbamid o'z ichiga olgan parhezlarni o'zlashtirgan, garchi 10% saxarozadan ancha kam bo'lsa ham (F(10,557) = 78.35, p < 0.0001; 1-rasm).1E). Bundan tashqari, ikkita fiziologik holatni taqqoslaganda, flebotomizatsiya qilingan urg'ochilar eng past konsentratsiyalarda xo'jayin izlovchi urg'ochilarga qaraganda ko'proq karbamidni o'zlashtirgan va bu urg'ochilar yuqori konsentratsiyalarda shunga o'xshash miqdordagi karbamidni o'zlashtirgan (F(1,953)= 78.82, p < 0.0001; 1F-rasm, G). Karbamid o'z ichiga olgan parhezdan iste'mol qilish optimal qiymatlarga ega bo'lib tuyulgan bo'lsa-da (1D, E-rasm), ikkala fiziologik holatdagi urg'ochilar ham karbamid konsentratsiyasining butun diapazonida so'rilgan karbamid miqdorini log-chiziqli tarzda modulyatsiya qila olishgan (1F, G-rasm). Xuddi shunday, chivinlar siydikdagi azot miqdori so'rilgan miqdorga ta'sir qilgani uchun, siydikning so'rilish miqdorini tartibga solish orqali azotni yutishini nazorat qiladigan ko'rinadi (1B, C va B-rasmlar).
Siydik va karbamidning uy egasi izlovchi va qon so'ruvchi chivinlarning omon qolishiga ta'sirini baholash uchun urg'ochilarga to'rt yoshdagi siydik (yangi, cho'ktirilgandan keyin 24 soat, 72 soat va 168 soat) va turli xil karbamid konsentratsiyalari, shuningdek, distillangan suv va 10% saxaroza nazorat sifatida xizmat qilgan (2A-rasm). Ushbu omon qolish tahlili shuni ko'rsatdiki, parhez uy egasi izlovchi urg'ochilarda (siydik: χ2 = 108.5, df = 5, p < 0.0001; karbamid: χ2 = 122.8, df = 5, p < 0.0001; 2B, C-rasm) va qon bilan oziqlangan urg'ochilarda (siydik: χ2 = 93.0, df = 5, p < 0.0001; karbamid: χ2 = 137.9, df = 5, p < 0.0001; 2D, E-rasm) umumiy omon qolishga sezilarli ta'sir ko'rsatdi. Hammasida Tajribalarda siydik, karbamid va suv bilan oziqlangan urg'ochilar saxaroza bilan oziqlangan urg'ochilarga nisbatan ancha past omon qolish ko'rsatkichlariga ega bo'lishdi (2B-E-rasm). Yangi va eskirgan siydik bilan oziqlangan mezbon izlovchi urg'ochilar turli xil omon qolish ko'rsatkichlarini ko'rsatdilar, 72 soatlik eskirgan siydik bilan oziqlanganlar (p = 0,016) eng past omon qolish ehtimoliga ega edilar (2B-rasm). Bundan tashqari, 135 mM karbamid bilan oziqlangan mezbon izlovchi urg'ochilar suv nazorat guruhiga qaraganda uzoqroq umr ko'rishdi (p < 0,04) (2C-rasm). Suv bilan taqqoslaganda, yangi siydik va 24 soatlik siydik bilan oziqlangan ayollar uzoqroq umr ko'rishdi (mos ravishda p = 0,001 va p = 0,012; 2D-rasm), 72 soatlik siydik bilan oziqlangan ayollar esa qisqa yangi siydik va 24 soatlik eskirgan siydik bilan oziqlangan urg'ochilarga qaraganda uzoqroq umr ko'rishdi (mos ravishda p < 0,0001 va p = 0,013; 2D-rasm). 135 mM karbamid bilan oziqlanganda, qon bilan oziqlangan urg'ochilar karbamid va suvning boshqa barcha konsentratsiyalariga qaraganda uzoqroq umr ko'rishdi (p <0,013; 2E-rasm).
Sigir siydigi va karbamid bilan oziqlanadigan xo'jayin va qon so'ruvchi urg'ochi Anopheles arabinis chivinlarining omon qolishi. Biotahlilda (A) urg'ochi chivinlarga yangi va qarigan sigir siydigi, turli konsentratsiyadagi karbamid, saxaroza (10%) va distillangan suv (H2O) dan iborat parhez berildi. Xo'jayin izlovchi (B, C) va qon so'ruvchi (D, E) chivinlarning omon qolishi siydik (B, D) va karbamid (C, E) bilan oziqlanadigan barcha urg'ochi chivinlar, nazorat guruhi esa saxaroza va suv bilan oziqlanguncha har 12 soatda qayd etildi.
24 soatlik davrda parvoz tegirmoni sinovida aniqlangan umumiy masofa va o'qlar soni mezbon izlovchi va qon so'ruvchi chivinlar o'rtasida farq qildi, ular umuman kamroq parvoz faolligini ko'rsatdi (3-rasm). Yangi va qarigan siydik yoki saxaroza va suv bilan ta'minlagan mezbon izlovchi chivinlar turli xil parvoz naqshlarini ko'rsatdi (3-rasm), yangi siydik bilan oziqlanadigan urg'ochilar tong otganda faolroq bo'lishdi, 24 va 168 soatlik qari chivinlar esa siydik bilan oziqlanadiganlar turli xil parvoz naqshlarini namoyish etishdi va asosan kunduzgi hayot kechirishdi. Saxaroza yoki 72 soatlik siydik bilan ta'minlagan urg'ochilar 24 soatlik davr davomida faollik ko'rsatishdi, suv bilan ta'minlagan urg'ochilar esa o'rta davrda faolroq bo'lishdi. Saxaroza bilan oziqlangan chivinlar kechqurun va erta tongda eng yuqori faollikni ko'rsatdi, 72 soatlik qari siydikni iste'mol qilganlar esa 24 soat davomida faollikning barqaror pasayishini kuzatdilar (3-rasm).
Ovchi-qidiruvchi qon so'ruvchi urg'ochi Anopheles arabinisning sigir siydigi va karbamid bilan oziqlanadigan parvoz ko'rsatkichlari. Parvoz tegirmoni sinovida yangi va qarigan sigir siydigi, turli konsentratsiyadagi karbamid, saxaroza (10%) va distillangan suv (H2O) bilan oziqlangan urg'ochi chivinlar gorizontal, erkin aylanadigan qo'llarga (yuqorida) bog'langan. Xo'jayin-qidiruvchi (chapda) va qon so'ruvchi (o'ngda) urg'ochi chivinlar uchun 24 soatlik davr davomida har bir parhez uchun soatiga umumiy masofa va parvozlar soni qayd etilgan (to'q: kulrang; och: oq). O'rtacha masofa va o'rtacha hujumlar soni sirkadiyalik faollik grafigining o'ng tomonida ko'rsatilgan. Xato satrlari o'rtacha qiymatning standart xatosini ifodalaydi. Statistik tahlil matnga qarang.
Umuman olganda, mezbon izlovchi urg'ochilarning umumiy parvoz faolligi 24 soatlik davrda parvoz masofasiga o'xshash naqshga amal qildi. O'rtacha parvoz masofasiga iste'mol qilingan parhez sezilarli darajada ta'sir ko'rsatdi (F(5, 138) = 28.27, p < 0.0001) va 72 soat siydik iste'mol qilgan mezbon izlovchi urg'ochi urg'ochilar boshqa barcha parhezlarga nisbatan ancha uzoq masofalarga uchishdi (p < 0.0001) va saxaroza bilan oziqlangan chivinlar yangi (p = 0.022) va 24 soatlik siydik (p = 0.022) bilan oziqlangan chivinlarga qaraganda uzoqroq uchishdi. Siydik bilan oziqlangan parhez bilan tasvirlangan parvoz faolligi naqshidan farqli o'laroq, karbamid bilan oziqlangan mezbon izlovchi urg'ochilar 24 soatlik davrda doimiy parvoz faolligini namoyish etdilar, qorong'u fazaning ikkinchi yarmida eng yuqori cho'qqiga chiqdilar (3-rasm). Faoliyat naqshlari o'xshash bo'lsa-da, karbamid bilan oziqlangan mezbon izlovchi urg'ochilar so'rilgan konsentratsiyaga qarab o'rtacha parvoz masofasini sezilarli darajada oshirdilar (F(5, 138) = 1310.91, p < 0.0001). Har qanday konsentratsiyada karbamid bilan oziqlangan mezbon izlovchi urg'ochilar suv yoki saxaroza bilan oziqlangan urg'ochilarga qaraganda uzoqroq uchdi (p <0.03).
Qon so'ruvchi chivinlarning umumiy parvoz faolligi barcha parhezlarda 24 soat davomida barqaror va saqlanib qolgan, qorong'u davrning ikkinchi yarmida suv bilan oziqlangan urg'ochilarda ham, yangi va 24 soatlik yoshda oziqlangan urg'ochilarda ham siydik faolligi oshgan (3-rasm). Siydik bilan oziqlangan dieta qon bilan oziqlangan urg'ochilarda o'rtacha parvoz masofasiga sezilarli darajada ta'sir ko'rsatgan bo'lsa-da (F(5, 138) = 4.83, p = 0.0004), karbamid bilan oziqlangan dieta esa bunday ta'sir ko'rsatmagan (F(5, 138) = 1.36, p = 0.24). Boshqa siydik va nazorat parhezi bilan (yangi, p = 0.0091; 72 soat, p = 0.0022; 168 soat, p = 0.001; saxaroza, p = 0.0017; dH2O, p = 0.036).
Siydik va karbamid bilan oziqlanishning reproduktiv parametrlarga ta'siri tuxum qo'yuvchi biotahlillarda baholandi (4A-rasm) va har bir urg'ochi qo'ygan tuxum soni, tuxum hajmi va yangi chiqqan birinchi yoshdagi lichinkalarga qarab o'rganildi. Tuxum qo'yilgan tuxumlar soni. Siydik bilan oziqlangan arab urg'ochilari ratsionga qarab o'zgargan (F(5,222) = 4.38, p = 0.0008; 4B-rasm). 24 soatlik siydik, qon bilan oziqlangan urg'ochilar boshqa siydik bilan oziqlangan urg'ochilarga qaraganda ancha ko'p tuxum qo'ygan va saxaroza bilan oziqlanganlarga o'xshash bo'lgan (4B-rasm). Xuddi shunday, siydik bilan oziqlangan urg'ochilar qo'ygan tuxumlarning hajmi ratsionga qarab o'zgargan (F(5, 209) = 12.85, p < 0.0001), 24 soatlik siydik va saxaroza bilan oziqlangan urg'ochilar suv bilan oziqlangan urg'ochilarga qaraganda ancha katta tuxum qo'ygan, 168 soatlik siydik bilan oziqlangan urg'ochilarning tuxumlari esa ancha kichikroq bo'lgan (4C-rasm). Bundan tashqari, siydik bilan oziqlanish lichinka hajmiga sezilarli darajada ta'sir ko'rsatgan (F(5, 187) = 7.86, p < 0.0001), 24 va 72 soatlik siydik bilan oziqlangan urg'ochilar qo'ygan tuxumlardan tuxum lichinkalaridan qo'yilgan tuxumlarga qaraganda ancha katta lichinkalar chiqadi. Suv bilan oziqlangan va 168 soatlik siydik bilan oziqlangan urg'ochilar (4D-rasm).
Sigir siydigi va karbamid bilan oziqlanadigan urg'ochi Anopheles arabinis chivinlarining reproduktiv ko'rsatkichlari. Qon bilan oziqlanadigan urg'ochi chivinlar biotahlillarga joylashtirish va tuxum qo'yadigan substratlarni olishdan oldin 48 soat davomida yangi va qarigan sigir siydigi, turli konsentratsiyadagi karbamid, saxaroza (10%) va distillangan suv (H2O) dan iborat parhezlar bilan oziqlantirildi (A). Tuxum soni (B, E), tuxum hajmi (C, F) va lichinkalar hajmi (D, G) taqdim etilgan parhezga sezilarli darajada ta'sir ko'rsatdi (sigir siydigi: BD; karbamid: EG). Turli harf nomlari yordamida o'lchangan har bir parametr uchun o'rtacha ko'rsatkichlar bir-biridan sezilarli darajada farq qildi (Tukeyning post hoc tahlilidan foydalangan holda bir tomonlama ANOVA; p < 0.05). Xato satrlari o'rtacha qiymatning standart xatosini ifodalaydi.
Siydikning asosiy azotli komponenti bo'lgan karbamid, qon bilan oziqlanadigan urg'ochilarga parhez sifatida berilganda, barcha tadqiqotlarda reproduktiv parametrlarga sezilarli darajada ta'sir ko'rsatdi. Qon bilan oziqlangan urg'ochilar tomonidan qo'yilgan tuxum soni, karbamid konsentratsiyasiga qarab (F(11, 360) = 4.69; p < 0.0001), 134 µM va 1.34 mM orasida karbamid konsentratsiyasi bilan oziqlangan urg'ochilar ko'proq tuxum qo'yishdi (4E-rasm). 134 µM yoki undan yuqori karbamid konsentratsiyasi bilan oziqlangan urg'ochilar suv bilan oziqlangan urg'ochilarga qaraganda kattaroq tuxum qo'yishdi (F(10, 4245) = 36.7; p < 0.0001; 4F-rasm) va lichinka hajmi, garchi onalarda karbamidning o'xshash konsentratsiyasi ta'sir qilsa ham (F(10, 3305) = 37.9; p < 0.0001), ko'proq o'zgaruvchan edi (4G-rasm).
Xost izlovchi sigir siydigining bosh bo'shlig'i uchuvchan ekstraktlariga umumiy jalb qilish. Shisha naychali olfaktometrda baholangan arabiensis (5A-rasm) siydik yoshiga sezilarli darajada ta'sir ko'rsatdi (χ2 = 15.9, df = 4, p = 0.0032; 5B-rasm). Post-hoc tahlili shuni ko'rsatdiki, 24 soat ichida eskirgan siydik hidi boshqa barcha davolash usullariga nisbatan ancha yuqori jozibadorlik darajasiga olib keldi (72 soat: p = 0.0060, 168 soat: p = 0.012, pentan: p = 0.00070), yangi siydik hididan tashqari (p = 0.13; 5B-rasm). Qon so'ruvchi chivinlarning siydik hidiga umumiy jalb qilinishi sezilarli darajada farq qilmasa ham (χ2 = 8.78, df = 4, p = 0.067; 5C-rasm), bu urg'ochi chivinlar 72 soatlik yoshdagi siydikka nisbatan bosh bo'shlig'i uchuvchan ekstraktlariga ancha jozibador ekanligi aniqlandi. boshqaruv elementlari (p = 0,0066; 5C-rasm).
Xost va qon bilan oziqlanadigan Anopheles arabianusni qidirishda tabiiy va sintetik sigir siydigi hidlariga xulq-atvor reaksiyalari. Shisha naychali olfaktometrning sxemasi (A). Yangi va qarigan sigir siydigidan olingan bosh bo'shlig'i uchuvchan ekstraktlarining xost (B) va qon so'ruvchi (C) chivinlarga tortilishi. Lord An ning cho'ntagi reaksiyasini toping. Yangi (D), 24 soatlik (E), 72 soatlik (F) va 168 soatlik (G) qarigan sigir siydigidan ajratilgan bosh bo'shlig'i ekstraktlari ko'rsatilgan. Elektron antennani aniqlash (EAD) izlari gaz xromatografidan ajratib olingan va olov ionizatsiyasi detektori (FID) tomonidan aniqlangan bosh bo'shlig'idagi bioaktiv birikmalarga javoban kuchlanish o'zgarishini ko'rsatadi. Masshtab chizig'i javob amplitudasini (mV) ushlab turish vaqtiga (s) nisbatan ifodalaydi. Biologik faol birikmalarning xususiyatlari va ajralib chiqish tezligi (µg h-1) ko'rsatilgan. Bitta yulduzcha (*) izchil past amplitudali javobni bildiradi. Ikkita yulduzcha (**) ishlab chiqarilmaydigan javoblarni bildiradi. Toping Xo'jayin (H) va qon so'ruvchi (I) An.arabiensis yangi va qarigan sigir siydigi hidlarining sintetik aralashmalariga turlicha murojaat qiladi. Turli harf nomlariga jalb qilingan chivinlarning o'rtacha nisbati bir-biridan sezilarli darajada farq qildi (Tukeyning post hoc tahlilidan foydalangan holda bir tomonlama ANOVA; p < 0,05). Xato satrlari shkalaning standart xatosini ifodalaydi.
Urg'ochi Ann.arabiensis, qon unidan 72 soat va 120 soat o'tgach, urchitish paytida, pentan nazorat guruhiga nisbatan yangi va qari sigir siydigidan olingan bosh bo'shlig'i uchuvchan ekstraktlariga ustunlik berilmagan (χ2 = 3.07, p > 0.05; Qo'shimcha fayl 1: S1-rasm).
Urg'ochi Ann.arabiensis uchun GC-EAD va GC-MS tahlillari sakkiz, olti, uch va uchta bioaktiv birikmalarni aniqladi (5D-G-rasm). Elektrofiziologik javoblarni keltirib chiqaradigan birikmalar sonidagi farqlar kuzatilgan bo'lsa-da, bu birikmalarning aksariyati yangi va eski siydikdan to'plangan har bir bosh bo'shlig'idagi uchuvchan ekstraktda mavjud edi. Shuning uchun, har bir ekstrakt uchun faqat chegaradan yuqori bo'lgan urg'ochi antennalardan fiziologik javob hosil qilgan birikmalar keyingi tahlillarga kiritildi.
Bosh bo'shlig'i to'plamidagi bioaktiv birikmalarning umumiy uchuvchan ajralib chiqish tezligi yangi siydikdagi 29 µg h-1 dan 168 soatlik saqlangan siydikda 242 µg h-1 gacha oshdi, bu asosan p-krezol va m-formaldegid, fenol va fenol miqdorining oshishi bilan bog'liq. Aksincha, 2-siklogeksen-1-on va dekanal kabi boshqa birikmalarning ajralib chiqish tezligi siydik yoshi oshishi bilan pasaydi, bu esa xromatogrammada signal intensivligining (ko'pligi) kuzatilgan pasayishi (5D-rasm) -G chap panel) va bu birikmalarga fiziologik javoblar bilan bog'liq (5D-G o'ng panel).
Umuman olganda, sintetik aralashma yangi va eski siydik boshlari bo'shliqlarining uchuvchan ekstraktlarida aniqlangan bioaktiv birikmalarning o'xshash tabiiy nisbatiga ega edi (5D-G-rasm) va xo'jayinni qidirishda (χ2 = 8.15, df = 4, p = 0.083; 5H-rasm) yoki qon so'ruvchi chivinlarni (χ2 = 4.91, df = 4, p = 0.30; 5I-rasm) sezilarli darajada jozibadorlikni keltirib chiqarmagan ko'rinadi. Biroq, davolash usullari o'rtasidagi post hoc juftlik taqqoslashlari shuni ko'rsatdiki, xo'jayinni qidiradigan chivinlar pentan nazorati bilan solishtirganda 24 soatlik eski siydikning sintetik aralashmasiga sezilarli darajada jozibador edi (p = 0.0086; 5H-rasm).
24 soatlik siydikning sintetik aralashmalaridagi individual komponentlarning rolini baholash uchun Y-naycha tahlilida oltita subtraktiv aralashma to'liq aralashmalarga nisbatan baholandi, bunda individual birikmalar olib tashlandi. Xost izlovchi chivinlar uchun to'liq aralashmadan individual birikmalarni olib tashlash xulq-atvor reaksiyalariga sezilarli ta'sir ko'rsatdi (χ2 = 19.63, df = 6, p = 0.0032; Qo'shimcha fayl 1: S2A-rasm), barcha subtraktiv aralashmalar to'liq aralashganidan kichikroq aralashmalarga qaraganda jozibadorroq edi. Aksincha, to'liq sintetik aralashmadan individual birikmalarni olib tashlash qon so'ruvchi chivinlarning xulq-atvor reaksiyalariga ta'sir qilmadi (χ2 = 11.38, df = 6, p = 0.077), dekanal bundan mustasno, bu to'liq aralashmaning jalb qilinishiga nisbatan pastroq darajaga olib keldi (p = 0.022; Qo'shimcha fayl 1: S2B-rasm).
Efiopiyadagi bezgak keng tarqalgan qishloqda dala sharoitida chivinlarni jalb qilishda 24 soatlik sigir siydigining sintetik aralashmasining samaradorligi o'n kecha davomida baholandi (6A-rasm). Jami 4861 ta chivin ushlandi va aniqlandi, ulardan 45,7% Anthropus.gambiae sl, 18,9% Anopheles pharoensis va 35,4% Culex spp. (Qo'shimcha fayl 1: S1-jadval). Anopheles arabinis PZR tahlili orqali aniqlangan An.Gambiya turlar kompleksining yagona a'zosi hisoblanadi. O'rtacha bir kechada 320 ta chivin ushlandi, bu vaqt ichida sintetik aralashma o'ljalari bo'lgan vaqt tuzoqlari aralashmasiz juft tuzoqlarga qaraganda ko'proq chivinlarni ushladi (χ2(0, 3196) = 170,0, p < 0,0001). Sinov boshida, o'rtasida va oxirida beshta nazorat kechasining har biriga o'lja bo'lmagan tuzoqlar qo'yildi. Shunga o'xshash raqamlar. Har bir juft tuzoqda chivinlar ushlandi, bu uylar o'rtasida hech qanday tarafkashlik yo'qligini ko'rsatadi (χ2(0, 1665) = 9 × 10-13, p > 0.05) va tadqiqot davrida populyatsiya kamaymagan. Nazorat tuzoqlari bilan taqqoslaganda, sintetik aralashmani o'z ichiga olgan tuzoqlarda ushlangan chivinlar soni sezilarli darajada oshdi: xo'jayin izlash (χ2(0, 2107) = 138.7, p < 0.0001), yaqinda qon bilan oziqlanish (χ2(0, 650) = 32.2, p < 0.0001) va homiladorlik (χ2(0, 228) = 6.27, p = 0.0123; Qo'shimcha fayl 1: S1 jadvali). Bu shuningdek, ushlangan chivinlarning umumiy sonida ham aks etadi: xo'jayin izlash > qon so'ruvchi > homilador > yarim homilador > erkak.
24 soatlik sintetik sigir siydigi hid aralashmasining samaradorligini dala baholash. Dala sinovlari Efiopiyaning janubi-markaziy qismida (xarita), Maki shahri yaqinida (qo'shish), Kasalliklarni nazorat qilish markazlari (CDC) yorug'lik tuzog'idan (o'ngda) juft uylarda, lotin kvadrat dizayni bilan (havodan olingan tasvir) (A) foydalanib o'tkazildi. Sintetik hid bilan o'lja qilingan CDC fototuzoqlari urg'ochi Anopheles arabesques (B) ni o'ziga tortadi va ushlaydi, lekin Anopheles farroes (C) ni emas, balki boshqa usulda, fiziologik holatga bog'liq ta'sir bilan. Bundan tashqari, bu tuzoqlar Culex chivinlarining sezilarli darajada ko'paygan sonini ushladi.(D) Nazorat bilan taqqoslaganda. Chapdagi chiziqlar hidli o'lja (yashil) va nazorat (ochiq) tuzoqlarida (N = 10) ushlangan chivinlarning o'rtacha tanlov indeksini, o'ngdagi chiziqlar esa nazorat tuzoqlari juftlarida (ochiq; N = 5) o'rtacha tanlov indeksini ifodalaydi. Yulduzchalar statistik ahamiyatlilik darajasini ko'rsatadi (*p = 0.01 va ***p < 0.0001)
Sintetik aralashmalarni o'z ichiga olgan tuzoqlarda uch tur turlicha ushlandi. Xo'jayinni qidirishda (χ2(1, 1345) = 71.7, p < 0.0001), qon bilan oziqlanishda (χ2(1, 517) = 16.7, p < 0.0001) va homiladorlikda (χ2(1, 180) = 6.11, p = 0.0134) .arabiensis tuzoqqa tushib, sintetik aralashmani chiqardi (6B-rasm), An miqdori esa farq qilmadi. Turli fiziologik holatlardagi Pharoensis topildi (6C-rasm). Culex uchun, nazorat tuzoqlariga nisbatan, xo'jayin izlayotgan chivinlar sonining sezilarli darajada oshishi aniqlandi (χ2(1,1319) = 12.6, p = 0.0004; 6D-rasm).
Efiopiyadagi ko'payish joylari va qishloq jamoalari o'rtasida potentsial egalaridan tashqarida joylashgan egasi o'lja tuzoqlari bezgak chivinlari sigir siydigi hidini egasi yashash joyi belgisi sifatida ishlatishini baholash uchun ishlatilgan. Xo'jayin belgilari bo'lmaganda, issiqlik va sigir siydigi hidi bo'lganda yoki bo'lmaganda, hech qanday chivin ushlanmadi (Qo'shimcha fayl 1: S3-rasm). Biroq, yuqori harorat va sigir siydigi hidi bo'lganda, urg'ochi bezgak chivinlari jalb qilindi va ushlandi, garchi siydik yoshidan qat'i nazar, oz sonli bo'lsa ham (χ2(5, 25) = 2.29, p = 0.13; Qo'shimcha fayl 1: S3-rasm). Aksincha, suv nazorati yuqori haroratlarda bezgak chivinlarini ushlamadi (Qo'shimcha fayl 1: S3-rasm).
Bezgak chivinlari boshqa hasharotlarga o'xshab hayot tarixi xususiyatlarini yaxshilash uchun sigir siydigi (ya'ni ko'lmaklar) bilan kompensatsion oziqlantirish orqali azot o'z ichiga olgan birikmalarni oladi va tarqatadi [2, 4, 24, 25, 26]. Sigir siydigi - bu bezgak vektorlari uchun dam olish joylari, masalan, sigirxonalar va qishloq uylari va urchish joylari yaqinidagi baland o'simliklar bilan chambarchas bog'liq bo'lgan osongina mavjud bo'lgan qayta tiklanadigan resurs. Urg'ochi chivinlar bu resursni hid orqali topadilar va siydikdagi azotli birikmalarning, jumladan, siydikdagi asosiy azotli komponent bo'lgan karbamidning so'rilishini tartibga solishga qodir [15, 16]. Urg'ochi chivinning fiziologik holatiga qarab, siydikdagi ozuqa moddalari mezbon izlovchi urg'ochi chivinlarning parvoz faolligini va omon qolishini, shuningdek, birinchi gonadotropik sikl davomida qon bilan oziqlanadigan shaxslarning omon qolish va reproduktiv xususiyatlarini oshirish uchun ajratiladi. Shuning uchun siydikni aralashtirish to'yib ovqatlanmaydigan kattalar kabi yopiq bezgak vektorlari uchun muhim ozuqaviy rol o'ynaydi [8], chunki u urg'ochi chivinlarga past xavfli oziqlantirish orqali muhim azotli birikmalarni olish qobiliyatini beradi. Bu topilma sezilarli epidemiologik oqibatlarga olib keladi, chunki urg'ochilari ko'payadi. ularning umr ko'rish davomiyligi, faolligi va reproduktiv mahsuldorligi, bularning barchasi vektor sig'imiga ta'sir qiladi. Bundan tashqari, bu xatti-harakatlar kelajakdagi vektorlarni boshqarish dasturlarining maqsadi bo'lishi mumkin.