Akizisyon eleman nitritif ak distribisyon entegre ensèk manje ak karakteristik istwa lavi. Pou konpanse pou defisyans nan eleman nitritif espesifik nan diferan etap lavi, ensèk yo ka jwenn eleman nitritif sa yo atravè manje siplemantè, pou egzanp, lè yo manje sou sekresyon vètebre nan yon pwosesis ke yo rekonèt kòm flak dlo.arabiensis ajitasyon sou pipi bèf pou akizisyon eleman nitritif amelyore karakteristik istwa lavi yo.
Asire w ke li an sekirite. Arabiensis te atire odè fre, 24 èdtan, 72 èdtan, ak 168 èdtan pipi bèf fin vye granmoun, ak lame-chèche ak san manje (48 èdtan apre-san repa) fi yo te mezire nan yon olfaktomèt Y-tib, epi yo te itilize analiz elèktrofizik ansent ak analiz elèktrophysiological. idantifye konpoze bioaktif nan pipi bèf nan tout kat klas laj yo. Yo te evalye melanj sentetik nan konpoze bioaktif nan Y-tib ak esè jaden. Pou mennen ankèt sou pipi bèf ak prensipal ki gen nitwojèn ure li yo kòm yon rejim siplemantè potansyèl pou vektè malarya, yo te mezire paramèt manje ak karakteristik istwa lavi yo. yo te evalye pou siviv, vòl atache, ak repwodiksyon.
Chèche san lame a ak nouriti.Nan laboratwa ak etid jaden, Arab yo te atire odè natirèl ak sentetik nan pipi bèf fre ak ki gen laj. Fi ansent te endiferan nan repons pipi bèf nan sit frai. , oswa repwodiksyon.
Anopheles arabinis akizisyon ak distribisyon pipi bèf pou amelyore karakteristik istwa lavi. Manje siplemantè nan pipi bèf afekte kapasite vektè dirèkteman nan ogmante siviv chak jou ak dansite vektè, ak endirèkteman pa chanje aktivite vòl epi yo ta dwe Se poutèt sa dwe konsidere nan pwochen modèl.
Akizisyon ak distribisyon eleman nitritif entegre ensèk manje ak karakteristik istwa lavi [1, 2, 3]. Ensèk yo kapab chwazi ak jwenn manje ak fè manje konpansatwa ki baze sou disponiblite manje ak kondisyon nitritif [1, 3]. Distribisyon eleman nitritif yo depann de pwosesis istwa lavi a epi yo ka mennen nan kondisyon diferan pou kalite rejim alimantè ak kantite nan diferan etap lavi nan ensèk yo, nan diferan ensèk yo ka jwenn konpansasyon nan defisyans nitritif sa yo. siplemantè manje, tankou sou labou, ekskreman divès kalite ak sekresyon nan vètebre, ak charon, yon pwosesis ke yo rekonèt kòm flak dlo [2].Malgre yon varyete de espès papiyon ak papiyon yo dekri prensipalman, twou awozaj tou rive nan lòt lòd ensèk, ak atraksyon ak manje sou kalite resous sa yo ka gen efè enpòtan sou sante ak lòt karakteristik lavi [2,6] . nopheles gambiae sensu lato (sl) parèt kòm yon adilt 'malnouri' [8], kidonk awozaj ka jwe yon wòl enpòtan nan karakteristik istwa lavi li yo, men konpòtman sa a te neglije jiska prezan. Itilizasyon ajitasyon kòm yon mwayen pou ogmante konsomasyon eleman nitritif nan machin enpòtan sa a merite atansyon paske sa ka gen konsekans epidemyolojik enpòtan.
Konsomasyon nitwojèn nan moustik granmoun fi Anopheles limite akòz rezèv kalori ki ba yo te pote soti nan etap lav la ak itilizasyon rezèvwa nan repa san [9].Female Ann.gambiae sl tipikman konpanse pou sa a pa siplemantè ak manje san siplemantè [10, 11], kidonk mete plis moun nan risk pou yo trape maladi a prevantif ak pi gwo itilizasyon prevansyon. siplemantè manje nan ekskreta vertebrate jwenn konpoze nitwojèn ki amelyore adaptasyon ak manyablite vòl, jan yo demontre pa lòt ensèk [2].Nan sans sa a, atraksyon nan fò ak distenk nan youn nan espès yo frè ak sè ki nan An.The Gambian sl espès konplèks, Anopheles arabinis, fre ak ki gen laj pipi bèf [12,13,14] se li te ye nan preferans li yo se li te ye. e ak ak manje sou bèf.Pipi bèf se yon resous ki rich nan konpoze nitwojèn, ak ure kontablite pou 50-95% nan total nitwojèn nan pipi fre [15, 16].Ak pipi bèf laj, mikwo-òganis itilize resous sa yo pou diminye konpleksite nan konpoze nitwojèn nan lespas 24 èdtan [15]. nan ki pwodui konpoze toksik moustik) boujonnen [15], ki ka fi Ann.arabiensis preferansyèlman atire pipi ki gen laj 24 èdtan oswa mwens [13, 14].
Nan etid sa a, yo te chèche lame ak san manje Ans.Pandan premye sik gonadotropin li yo, arabiensis te evalye pou akizisyon de konpoze nitwojèn, ki gen ladan ure, pa melanje pipi.Apre sa, yo te fè yon seri eksperyans pou evalye ki jan moustik fi yo asiyen resous nitritif potansyèl sa a pou amelyore siviv, repwodiksyon ak repwodiksyon fre ak manje fre. Pou detèmine si sa yo te bay endikasyon serye pou lame ak san manje An.Nan rechèch yo pou resous nitrisyonèl potansyèl sa a, arabiensis te dekouvri korelasyon chimik dèyè atire diferans yo obsève. Melanj odè sentetik nan konpoze òganik temèt (VOCs) idantifye nan pipi 24 èdtan ki gen laj yo te plis evalye anba kondisyon jaden, pwolonje rezilta yo nan kondisyon laboratwa diferan yo te jwenn nan kondisyon laboratwa diferan.Atraksyon moustik.Rezilta yo jwenn konfime ke An.arabiensis achte ak distribye konpoze nitwojèn yo jwenn nan pipi vètebre pou enfliyanse karakteristik istwa lavi yo. Yo diskite rezilta sa yo nan kontèks konsekans epidemyolojik potansyèl yo ak fason yo ka itilize pou siveyans vektè ak kontwòl.
Anopheles arabicans (Dongola souch) yo te kenbe nan 25 ± 2 °C, 65 ± 5% RH ak yon 12:12 h limyè: sik fènwa.Larv yo te elve nan plato plastik (20 cm × 18 cm × 7 cm) plen ak dlo distile epi yo te manje Tetramin® ® manje pwason yo te kolekte (Pa gen 3 ml DErke manje, M. lato Hertila, Åstorp, SE) ak Lè sa a, transfere nan kaj Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science, Taichung, Taiwan) pou pèmèt granmoun aparisyon. Adilt yo te bay yon solisyon sikwoz 10% ad libitum jiskaske 4 jou apre aparisyon (dpe), nan ki pwen yo te ofri lame-ap chèche dlo a, anvan yo te distile eksperyans nan fim yo anvan yo te distile eksperyans yo anvan yo te distile nan dlo a. jan sa dekri anba a.Fi yo te itilize pou eksperyans tib vòl yo te mouri grangou pou sèlman 4-6 èdtan ak dlo ad libitum.Pou prepare moustik souse san pou bioassays ki vin apre, yo te bay 4 fi dpe ak san mouton defibrotic (Håtunalab, Bro, SE) lè l sèvi avèk yon sistèm manje manbràn (Hemotek Discovery Workshops, Accrington yo te transfere dirèkteman nan UK). pi ba a, oswa 10% sikwoz ad libitum pou 3 jou anvan eksperyans yo dekri anba a.Dènye fi yo te itilize pou bioessais tib vòl ak transfere nan laboratwa a, ak Lè sa a, te gen dlo distile ad libitum pou 4-6 èdtan anvan eksperyans la.
Yo te itilize tès manje pou quantifier konsomasyon pipi ak ure nan granmoun fanm An.Arab.Femèl k ap chèche ak san manje yo te bay yon rejim alimantè ki gen 1% dilye pipi bèf fre ak ki gen laj, divès konsantrasyon ure, ak de kontwòl (10% sikwoz ak dlo) pou 48 èdtan. 1; Sigma-Aldrich, Stockholm, SE) te ajoute nan rejim alimantè a ak apwovizyone nan yon matris 4 × 4 nan 250 µl tib mikrosantrifij (Axygen Scientific, Union City, CA, US; Figi 1A) Ranpli nan kwen an (~ 300 µl). an dyamèt ak 6 cm nan wotè; Semadeni, Ostermundigen, CH; Figi 1A) nan fènwa konplè nan 25 ± 2 cm °C ak 65 ± 5% imidite relatif.Esperyans sa yo te repete 5 a 10 fwa.Apre ekspoze nan rejim alimantè, moustik yo te mete nan -20 °C jiskaske plis analiz.
Chèche pipi bèf ak ure absòbe pa lame a ak fanm ki tete san Anopheles arabianus.Nan jijman manje (A), moustik fi yo te bay yon rejim alimantè ki gen ladan pipi bèf fre ak ki gen laj, divès konsantrasyon nan ure, sikwoz (10%), ak dlo distile (H2O). -seeking fi absòbe pipi bèf 72 èdtan mwens pase 168 èdtan pipi bèf (B).Mwayèn kontni an total nitwojèn (± devyasyon estanda) nan pipi reprezante nan inset la.Host-seeching (D, F) ak san-souse (E, G) fi pran ure nan yon dòz ki depann de dòz volim (yo yon fason diferan nan E chak fason) (yo yon sèl diferan lèt diferan nan yon fason diferan nan E E). ANOVA lè l sèvi avèk analiz post hoc Tukey a, p < 0.05).Ba erè reprezante erè estanda nan mwayèn (BE).
Pou lage manje ki absòbe, moustik yo te plase endividyèlman nan tib mikrosantrifij 1.5 ml ki gen 230 µl dlo distile epi yo te deranje tisi a lè l sèvi avèk yon pilon jetab ak motè san fil (VWR International, Lund, SE), ki te swiv pa santrifijasyon nan 10 krpm pou 10 µl pou 10 min. gma-Aldrich) ak absorpsyon (λ620) te detèmine lè l sèvi avèk yon lektè microplate ki baze sou espektrofotomèt (SPECTROStar® Nano, BMG Labtech, Ortenberg, DE) nm).Altènativman, moustik yo te piye nan 1 ml dlo distile, 900 µl nan ki te transfere nan yon analiz kuvèt 1000 μl, λ600 μl, λ600 μl. ista, SE).Pou kantite konsomasyon dyetetik, yo te prepare yon koub estanda pa dilusyon seri pou bay 0.2 µl a 2.4 µl nan 1 mg ml-1 xylene cyanide.Apre sa, yo te itilize dansite optik nan konsantrasyon lank li te ye pou detèmine kantite manje chak moustik vale.
Done volim yo te analize lè l sèvi avèk analiz yon sèl-fason nan divèjans (ANOVA) ki te swiv pa konparezon post hoc pairwise Tukey a (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc., Cary, NC, US, 1989-2007).Analiz regresyon lineyè dekri konsomasyon ure ki depann de konsantrasyon ak repons konpare ant hôtes-san-sanm ak pakèt vyolans. 0 pou Mac, GraphPad Software, San Diego, CA, US).
Apeprè 20 µl echantiyon pipi ki soti nan chak gwoup laj yo te mare sou Chromosorb® W/AW (10 mg 80/100 may, Sigma Aldrich) epi yo te ankapsule nan kapsil fèblan (8 mm × 5 mm). Kapsil yo te mete nan chanm ki degaje konbisyon nan yon analizeur CHNS/O (Flash 2000, 2000, 2000, 2000). rine dapre pwotokòl manifakti a. Yo te mezire total nitwojèn (g N l-1) ki baze sou konsantrasyon ure yo konnen yo te itilize kòm yon estanda.
Pou evalye efè rejim alimantè a sou siviv fi k ap chèche lame ak souse san, moustik yo te mete endividyèlman nan gwo plat Petri (12 cm an dyamèt ak 6 cm nan wotè; Semadeni) ak yon twou may kouvri nan kouvèti a (3 cm an dyamèt) ak Pou vantilasyon ak rezèv manje. , ak de kontwòl, 10% sikwoz ak dlo.Chak rejim alimantè yo te pipete sou yon tanpon dantè (DAB Dental AB, Upplands Väsby, SE) antre nan yon sereng 5 ml (Thermo Fisher Scientific, Gothenburg, SE), plonje a retire, epi yo mete sou tèt yon plat Petri (figi 1 la a. yo te konte de fwa pa jou, pandan y ap moustik ki mouri yo te jete jiskaske dènye moustik la te mouri (n = 40 pou chak tretman).Te siviv moustik ki te manje sou divès alimantasyon yo te analize estatistikman lè l sèvi avèk koub siviv Kaplan-Meyer ak tès log-rank pou konpare konparezon distribisyon siviv ant rejim (IBM SPSS Statis.004.0).
Yon moulen moustik koutim vole ki baze sou Attisano et al.[17], ki fèt ak 5 mm epesè panno Acrylic klè (10 cm lajè x 10 cm long x 10 cm segondè) san panno devan ak dèyè (figi 3: tèt).Yon asanble pivote ak yon tib vètikal ki fèt ak yon kolòn gaz chromatografi (0.25 mm mm L) ak yon pè ensèk nesesite nan fen 5 cm. um leman 9 cm apa.Yon tib orizontal ki fèt ak menm materyèl la (6.5 cm L) koupe tib vètikal la an bisèk pou fòme yon bra atache ak yon bra ki te pote yon ti moso papye aliminyòm kòm yon siyal entèwonp limyè.
Fanm ki mouri grangou 24 èdtan yo te bay rejim alimantè ki anwo a pou 30 minit anvan kontrent. Moustik fi ki te plen manje yo te Lè sa a, endividyèlman anestezi sou glas pou 2-3 minit epi yo tache ak broch ensèk ak sire (Joel Svenssons Vaxfabrik AB, Munka Ljungby, SE) ak Lè sa a, te mare nan tib yo orizontal. -konstwi done logger, Lè sa a, estoke ak parèt lè l sèvi avèk lojisyèl PC-Lab 2000™ (v4.01; Velleman, Gavere, BE). Yo te mete moulen vòl la nan yon chanm klimatik reglemante (12 h:12 h, limyè: nwa, 25 ± 2 °C, 65 ± 5% RH).
Pou vizyalize modèl aktivite vòl la, yo te kalkile distans total vwayaj la (m) ak kantite total aktivite vòl youn apre lòt pou chak èdtan sou yon peryòd 24 èdtan. nan jij yo kalkile an enkreman 10 minit.
Pou evalye efè rejim alimantè a sou pèfòmans repwodiktif An.arabiensis, yo te transfere sis fi (4 dpe) dirèkteman nan kaj Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm) apre yo fin kolekte san epi yo te bay rejim eksperimantal la pou 48 èdtan jan sa dekri pi wo a. 24 èdtan.Repete chak rejim dyetetik 20-50 fwa. Ze yo te konte epi anrejistre pou chak kaj eksperimantal. Sou-echantiyon ze yo te itilize pou evalye gwosè mwayèn ak varyasyon longè ze endividyèl yo (n ≥ 200 pou chak rejim) lè l sèvi avèk yon mikwoskòp Dialux-20 (DM1000; 2;Leica Microsystems Ltd., DE).Ze ki rete yo te kenbe nan yon chanm klimatik kontwole nan kondisyon estanda elvaj pou 24 èdtan, epi yo te mezire yon sou-echantiyon nan lav premye etap ki fèk parèt (n ≥ 200 pou chak rejim) jan sa dekri pi wo a. JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Headspace temèt soti nan fre (1 èdtan apre pran echantiyon), 24 èdtan, 72 èdtan ak 168 èdtan pipi ki gen laj yo te kolekte nan echantiyon yo te kolekte nan bèt Zebu, ras Arsi. Pou konvenyans, echantiyon pipi yo te kolekte byen bonè nan maten an pandan y ap bèf yo te toujou nan etab la. (Toppits Cofresco, Frischhalteprodukte GmbH ak Co, Minden, DE) nan 3 l polyamid ak kouvèti Nan tanbou plastik klori vinil.Headspace temèt soti nan chak echantiyon pipi bovins yo te kolekte swa dirèkteman (fre) oswa apre spirasyon nan tanperati chanm pou 24 h, 72 h ak 168 h, sa vle di chak echantiyon gwoup laj te reprezante chak gwoup pipi.
Pou koleksyon temèt temèt, yo te itilize yon sistèm bouk fèmen pou sikile yon kouran gaz filtre kabòn aktive (100 ml min-1) atravè yon sak polyamid nan kolòn adsorption la pou 2.5 èdtan lè l sèvi avèk yon ponp vakyòm dyafram (KNF Neuberger, Freiburg, DE). x 3 mm id) ki gen 35 mg nan Porapak Q (50/80 may; Waters Associates, Milford, MA, US) ant ploge lenn mouton an vè. Anvan w itilize, kolòn nan te lanse ak 1 ml n-hexane redistilled (Merck, Darmstadt, DE) ak 1 ml pentan (99.0% sòlvan pi bon kalite Sigma0d GC yo te adsorbed GC). μl nan pentan.Koleksyon Headspace yo te pisin ak Lè sa a, estoke nan -20 ° C jiskaske yo itilize pou plis analiz.
Yo te analize repons konpòtman an nan ekstrè temèt An.Headspace ki te ranmase nan pipi fre, 24-h, 72-h, ak 168h ki gen laj, pou yo te analize ekstrè temèt ki soti nan moustik Arabidopsis lè l sèvi avèk yon olfaktomèt tib an vè dwat [18]. ].Yon olfaktomèt vè tib (80 cm × 9.5 cm id) te eklere ak 3 ± 1 lx nan limyè wouj ki soti nan pi wo a.Chabon filtre ak imidite koule lè (25 ± 2 °C, 65 ± 2% imidite relatif) te pase bioassay la nan 30 cm s-1.Air se te pase nan yon seri inifòm ekran an asye pur. dispansè tampon (4 cm × 1 cm; L: D; DAB Dental AB), sispann nan yon bobin 5 cm sou fen van an nan olfaktomètr la, ak chanjman stimulateur chak 5 minit. Pou analiz, 10 μl nan chak ekstrè headspace, dilye 1:10, yo te itilize kòm yon estimilis. kalòj 2-3 èdtan anvan yo kòmanse eksperyans la.Kalòj la lage yo te mete sou bò van an nan olfactometer la, ak moustik yo te pèmèt yo aklimate pou 1 minit, ak Lè sa a, valv la papiyon nan kalòj la te louvri yo lage. Yo te analize atraksyon nan tretman oswa kontwòl kòm pwopòsyon an nan moustik ki te antre an kontak ak 5 minit nan sous kontwòl temèt nan temèt 3 fwa yo te repwodui. epi pou evite efè nenpòt yon sèl jou, yo te teste menm kantite tretman ak kontwòl sou chak jou eksperimantal. Chèche repons ki soti nan Ans lame ak san nouri. Yo te analize seri arab kont headspace lè l sèvi avèk regression lojistik nominal ki te swiv pa konparezon par pou rapò enpè (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Repons anjandre an. Yo te analize ekstrè espas ki soti nan pipi bèf fre ak ki gen laj nan kaj Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science). Tas plastik (30 mL; Nolato Hertila) plen ak 20 mL dlo distile bay substra a frajman epi yo te mete yo nan kwen opoze a ak 24 cm ajisteman apa. nan chak ekstrè headspace nan yon dilution 1:10. Yo te itilize yon kantite egal pentan pou ajiste gode kontwòl la. Yo te chanje gode tretman ak kontwòl ant chak eksperyans pou kontwole efè pozisyon yo. Yo te lage dis femèl san manje nan kalòj eksperimantal nan ZT 9-11 epi yo te konte ze nan tas 24 èdtan apre 24 èdtan pou kalkile tretman an. kantite ze ki mete nan gode kontwòl la)/(kantite total ze ki mete). Chak tretman te repete 8 fwa.
Gaz chromatografik ak elèktron antèn modèl deteksyon (GC-EAD) analiz de fi An.arabiensis te fèt jan sa te dekri anvan [20].Brèfman, yo te separe ekstrè fre headspace temèt lè l sèvi avèk yon Agilent Technologies 6890 GC (Santa Clara, CA, US) ekipe ak yon kolòn HP-5 (30 m × 0.25 mm epesè, Agilent teknoloji 0.25 mm epesè, fim Agilent).ak aje pipi.Idwojèn te itilize kòm faz mobil ak yon mwayèn lineyè flux de 45 cm s-1.Chak echantiyon (2 μl) te sou fòm piki pou 30 segond nan mòd splitless ak yon tanperati inlet de 225 °C.The tanperati fou GC te pwograme soti nan 35 °C (3 minit kenbe) pou 300 °C nan 1000 °C min) nan 1000 °C nan. Splitter, 4 psi nan nitwojèn te ajoute ak fann 1:1 nan yon Gerstel 3D/2 ki ba volim mouri kwa (Gerstel, Mülheim, DE) ant detektè a ionizasyon flanm dife ak EAD la. Kapilè efluan GC a pou EAD te pase nan yon liy transfè Gerstel ODP-2, ki swiv tanperati fou a GC, kote li te melanje 5 °C ak kabòn, kote li te melanje 5 °C, 10 cm. lè midified (1.5 l min-1). Yo te mete antèn la 0.5 cm soti nan priz tib la. Chak moustik endividyèl te reprezante yon replike, epi pou moustik k ap chèche lame, yo te fè omwen twa kopi sou echantiyon pipi nan chak laj.
Idantifikasyon konpoze bioaktif nan koleksyon headspace nan pipi fre ak ki gen laj bèf lè l sèvi avèk yon konbine GC ak espektwomèt mas (GC-MS; 6890 GC ak 5975 MS; Agilent Technologies) pou jwenn repons antèn nan analiz GC-EAD, opere nan mòd ionizasyon enpak elèktron nan 70 eV. 25 mm dyamèt enteryè, 0.25 μm epesè fim) lè l sèvi avèk elyòm kòm faz mobil lan ak yon to mwayèn lineyè koule nan 35 cm s-1.Yon echantiyon 2 μl te sou fòm piki lè l sèvi avèk menm anviwònman yo injektè ak tanperati fou tankou pou analiz la GC-EAD. konpoze dentifye yo te konfime pa enjekte estanda natif natal (Fichiye adisyonèl 1: Tablo S2) .Pou quantification, acetate heptyl (10 ng, 99.8% pite chimik, Aldrich) te sou fòm piki kòm yon estanda ekstèn.
Evalye efikasite yon melanj odè sentetik ki fòme ak konpoze bioaktif ki idantifye nan pipi fre ak ki gen laj pou atire Ans.arabiensis kap chèche lame ak souse san, lè l sèvi avèk menm olfaktomèt ak pwotokòl ki pi wo a. Melanj sentetik imite konpozisyon ak pwopòsyon konpoze nan ekstrè temèt temèt nan espas melanje fre, 248, 24, 24, 24, 24, 24, 24, 24, 24, 24, 24, 25 ou pipi ki gen laj (Figi 5D-G; Fichye adisyonèl 1: Tablo S2). Pou analiz, sèvi ak 10 μl nan yon dilution 1:100 nan melanj lan konplètman sentetik, ak yon pousantaj lage jeneral ki varye ant apeprè 140-2400 ng h-1, pou evalye plus nan lame ak san-souse tès la se melanj reaktif, ki fè melanj reaktif nan melanj la, ki fè yon melanj reaktif. konpoze sèl nan melanj konplè a yo retire. Chèche repons nan Ans lame ak san manje. Yo te analize melanj Arab vs sentetik ak soustraktif lè l sèvi avèk regression lojistik nominal ki te swiv pa konparezon par pou rapò enpè (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Pou evalye si pipi bèf ta ka sèvi kòm yon siy abita lame pou moustik malarya, yo te ranmase pipi bèf fre ak ki aje, jan sa dekri pi wo a, ak dlo yo te mete nan bokit may 3 l (100 ml) epi mete yo nan pyèj Garnier lame.(BG-HDT vèsyon; BioGents, Regensburg, DE). Dis pyèj mete 50 m apa nan savann, 400 m de kominote vilaj (Silay, peyi Letiopi, 5°53´24´´N, 37°29´24´´E) epi pa gen okenn bèt, sou teren elvaj pèmanan ak vilaj yo. vire chak swa pou yon total de senk nwit. Nimewo moustik yo te kaptire nan pyèj appâts ak pipi ki gen laj diferan yo te konpare lè l sèvi avèk regresyon lojistik ak yon distribisyon binomyal beta (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Nan yon vilaj endemi malarya toupre vil Maki, rejyon Oromia, peyi Letiopi (8° 11′ 08″ N, 38° 81′ 70″ E; Figi 6A). Etid la te fèt ant mitan mwa Out ak mitan mwa septanm anvan flite rezidyèl andedan kay la anyèl la, ansanm ak yon long sezon lapli nan vilaj yo te lokalize sou 50. chwazi pou etid la (Fig. 6A).Kritè yo te itilize pou chwazi kay yo se te: pa gen okenn bèt pèmèt nan kay la, pa gen okenn pou kwit manje andedan kay la (desine bwa dife oswa chabon) yo te pèmèt (omwen pandan peryòd esè a), ak kay ki gen yon maksimòm de moun ki rete, dòmi nan uninsecticides.anba moustik trete a. Apwobasyon etik te akòde pa Komisyon Konsèy la Revizyon Etik Rechèch Enstitisyonèl (IRB/022/2016) nan Fakilte Syans Natirèl (CNS-IRB), Addis Abeba University, an akò ak direktiv yo etabli pa Deklarasyon Asosyasyon Medikal Mondyal la nan èlenki.Konsantman soti nan chak chèf fanmi an te jwenn ak ekstansyon anplwaye nan distri a ak tout asistans nan distri a te jwenn ekstansyon nan pwosesis la nan distri a te andòde. 'kebele'). Nivo eksperimantal la. Konsepsyon eksperimantal la te swiv yon konsepsyon kare Latin 2 × 2, kote melanj sentetik ak kontwòl yo te plase nan kay pè nan premye nwit la ak echanje ant kay nan pwochen lannwit eksperimantal la. Pwosesis sa a te repete dis fwa. Anplis de sa, pou estime aktivite moustik nan kay chwazi yo, pyèj CDC yo te mete nan kouri nan senk jou konsekitif nan mitan lannwit lan nan menm tan an konsekitif nan mitan lannwit lan.
Yon melanj sentetik ki gen sis konpoze byaktif te fonn nan heptan (97.0% sòlvan GC klas, Sigma Aldrich) ak lage nan 140 ng H-1 lè l sèvi avèk yon koton mèch distribitè [20]. CDC) limyè pèlen (John W. Hock Konpayi, Gainesville, FL, US; Figi 6A) .Pwoch yo te pandye 0.8-1 m anwo tè a, tou pre pye a nan kabann lan, ak yon volontè dòmi anba yon moustik ki pa trete ak SEMNILICET] analiz reyaksyon chèn ymerase (PCR) pou idantifye espès yo te idantifye morfolojikman kòm A. gambiae Sl. Manm konplèks la [23]. Nan etid jaden an, yo te analize pyèj pèlen nan kay pè lè l sèvi avèk yon modèl lojistik nominal, kote atraksyon te varyab depandan ak tretman (sentetik melanj VS kontwòl) te efè a fiks (JMP.0. SAS Institute Inc.).Isit la, nou rapòte χ2 ak p-valè yo nan tès la rapò chans.
Evalye si li an sekirite.arabiensis te kapab jwenn pipi, sous prensipal nitwojèn li yo, ure, pa manje dirèk, nan lespas 48 èdtan apre administrasyon an pou 4 jou apre (dpe) lame-chèche ak san manje esè manje fi (Fig. 1A). 0001 ak F (5,299) = 56.00, p <0.0001, respektivman, Fig. 1B, C).Anplis de sa, fi k ap chèche lame te manje mwens nan pipi nan 72 èdtan konpare ak pipi nan 168 èdtan (figi 1B). ed nan tout lòt konsantrasyon ak dlo, pandan y ap endistenabl soti nan 10% sikwoz (F (10,813) = 15.72, p <0.0001; Figi 1D).Sa a te nan Kontrèman ak repons lan nan san manje fanm, ki tipikman absòbe siyifikativman plis rejim ki gen ure pase dlo, kwake (1870% mwens = 5.0001) 5, p < 0.0001; Figi 1).1E).Anplis de sa, lè yo konpare ant de eta fizyolojik yo, fi flebotomize yo absòbe plis ure pase fi k ap chèche lame nan konsantrasyon ki pi ba yo, ak fi sa yo absòbe kantite menm jan an nan ure nan konsantrasyon ki pi wo (F (1,953) = 70, 802, p < 78.Fig. 1F, G).Pandan ke konsomasyon nan yon rejim alimantè ki gen ure parèt yo gen valè pi bon (Fig. 1D, E), fi nan tou de eta fizyolojik yo te kapab modile kantite ure absòbe sou tout seri konsantrasyon ure nan yon mòd log-lineyè (Fig. 1F, G).). Menm jan an tou, moustik yo parèt kontwole absorption nitwojèn yo lè yo kontwole kantite pipi absòbe, kòm kantite nitwojèn nan pipi reflete nan kantite lajan an absòbe (Figi 1B, C ak B ensèk).
Pou evalye efè pipi ak ure sou siviv moustik kap chèche lame ak souse san, fi yo te manje pipi nan tout kat laj (fre, 24 èdtan, 72 èdtan, ak 168 èdtan apre depozisyon) ak yon seri konsantrasyon ure, osi byen ke dlo distile ak 10% sikwoz te sèvi kòm yon analiz siviv siyifikatif. nan fi k ap chèche lame (pipi: χ2 = 108.5, df = 5, p <0.0001; ure: χ2 = 122.8, df = 5, p <0.0001; Fig. 2B, C) ak fanm ki bay san (pipi: χ2 = 122.8, df = 90.000; 2 = 137.9, df = 5, p <0.0001; Figi 2D, E).Nan tout eksperyans, fi yo te manje yon rejim pipi, ure, ak dlo te siyifikativman pi ba pousantaj siviv konpare ak fi yo te manje yon rejim sikwoz (Figi 2B-E). 0.016) ki gen pi ba pwobabilite pou siviv (Fig. 2B). Anplis de sa, fi k ap chèche lame yo te manje 135 mM ure siviv pi lontan pase kontwòl dlo (p <0.04) (Fig.2C).Konpare ak dlo, fanm ki te manje ak pipi fre ak pipi 24 èdtan te siviv pi lontan (p = 0.001 ak p = 0.012, respektivman; Figi 2D), pandan ke fanm yo te manje ak pipi 72 èdtan siviv pi lontan pase sa yo ki te manje Fi kout pipi fre ak 24 èdtan ki gen laj pipi (p = 0.0D10.10.0. ht yo te manje 135 mM ure, fi ki te manje san te siviv pi lontan pase tout lòt konsantrasyon ure ak dlo (p <0.013; Figi 2E).
Siviv fi lame ak souse san Anopheles arabinis manje sou pipi bèf ak ure.Nan bioassay la (A), moustik fi yo te bay yon rejim alimantè ki gen ladan pipi bèf fre ak ki gen laj, divès konsantrasyon nan ure, sikwoz (10%) ak dlo distile (H2O). fi yo manje ak pipi (B, D) ak ure (C, E), ak kontwòl, sikwoz ak dlo, yo mouri
Distans total ak kantite jij yo detèmine nan tès moulen vòl la sou yon peryòd 24 èdtan diferan ant moustik kap chèche lame a ak moustik ki te souse san, ki te montre mwens aktivite vòl an jeneral (figi 3). Moustik ki gen laj 68 èdtan ki te manje ak pipi te montre diferan modèl vòl epi yo te prensipalman lajounen. Moustik fi ki te bay sikwoz oswa pipi 72 èdtan te montre aktivite pandan peryòd 24 èdtan an, pandan ke fi ki te bay dlo yo te pi aktif pandan peryòd mitan an. ur ki gen laj pipi te fè eksperyans yon bès fiks nan aktivite sou 24 èdtan (Figi 3).
Pèfòmans vòl nan chasè-ap chèche san-souse fi Anopheles arabinis manje sou pipi bèf ak ure.Nan tès la moulen vòl, moustik fi te manje ak pipi bèf fre ak ki gen laj, divès konsantrasyon nan ure, sikwoz (10%), ak dlo distile (H2O) yo te mare nan orizontal, libreman wotasyon bra (pou òf-)-absan (pou total de bra ()-absous-)-abrase. distans ak kantite vòl pou chak èdtan pou chak rejim sou yon peryòd 24 èdtan yo te anrejistre (fè nwa: gri; limyè: blan). Yo montre distans mwayèn ak kantite mwayèn bout adwat graf aktivite sirkadyèn yo. Ba erè reprezante erè estanda nan mwayèn. Analiz estatistik gade tèks.
An jeneral, aktivite vòl an jeneral nan fi k ap chèche lame te swiv yon modèl ki sanble ak distans vòl sou yon peryòd 24 èdtan. Distans vòl vle di te siyifikativman afekte pa rejim alimantè enjere (F (5, 138) = 28.27, p < 0.0001), ak fi k ap chèche lame enjere 72 èdtan nan pipi (100). Crose-fed moustik vole pi lontan pase fre (p = 0.022) ak 24-h ki gen laj pipi (p = 0.022)-manje moustik.Kontrèman ak modèl aktivite vòl ki dekri pa rejim pipi a, ure-manje lame-chèche fi ekspoze aktivite vòl ki pèsistan sou yon 24-h fènwa aktivite pandan peryòd la 24-h, fig. -seeking fi te manje ure siyifikativman ogmante mwayen distans vòl depann sou konsantrasyon an absòbe (F (5, 138) = 1310.91, p <0.0001).Host-chèche fi manje nenpòt konsantrasyon nan ure vole pi lontan pase fi manje swa dlo oswa sikwoz (p <0.03).
Aktivite vòl an jeneral nan moustik ki te souse san yo te estab ak soutni sou 24 èdtan atravè tout rejim, ak aktivite pipi ogmante pandan dezyèm mwatye nan peryòd nwa a pou fi yo manje ak dlo osi byen ke nan fi yo manje fre ak 24 èdtan fin vye granmoun (imaj 3). pa t '(F (5, 138) = 1.36, p = 0.24) .ak lòt pipi ak rejim alimantè kontwòl (fre, p = 0.0091; 72 èdtan, p = 0.0022; 168 èdtan, p = 0.001; sikwoz, p = 0.0017; p = 0.0017; dH).
Efè pipi ak ure manje sou paramèt repwodiktif yo te evalye nan bioessais ponn ze (Figi 4A) epi yo te envestige dapre kantite ze chak fi, gwosè ze, ak premye lav ki fèk kale. Kantite ze ki te poze. Fig. 4B).Fi yo te manje yon pipi 24 èdtan, repa san te ponn siyifikativman plis ze pase fi yo te manje lòt rejim pipi epi yo te menm jan ak sa yo ki te manje sikwoz (Fig. 4B). Menm jan an tou, gwosè ze yo te mete pa fi ki te manje pipi varye selon rejim alimantè (F (5, 209), 0, 0, 1, 1, 1, 1, 1, 1 sukwoz-manje fi ponn ze siyifikativman pi gwo pase fi dlo-manje, pandan y ap ze yo nan fi yo manje ak 168 h nan pipi yo te siyifikativman pi piti (figi. 4C).Anplis de sa, rejim pipi siyifikativman afekte gwosè lav (F (5, 187) = 7.86, p < 0.00000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000 Fi ki gen 72 èdtan ki te manje ak pipi pase nan ze ki te mete nan lav ze. Fi ki te manje ak dlo ak 168 èdtan ki te manje ak pipi (Figi 4D).
Pèfòmans repwodiksyon fi Anopheles arabinis manje sou pipi bèf ak ure. Moustik fi ki te manje san yo te manje alimantasyon ki fòme ak pipi bèf fre ak ki gen laj, divès konsantrasyon nan ure, sikwoz (10%), ak dlo distile (H2O) pou 48 èdtan anvan yo mete nan byoessai ak jwenn kantite ze ze (B, E48 ponn) (E48 èdtan) (E, E48) gwosè (F, E4). gwosè rvae (D, G) te siyifikativman afekte pa rejim alimantè a te bay (pipi bèf: BD; ure: EG).Mwayen pou chak paramèt mezire lè l sèvi avèk non lèt diferan yo te siyifikativman diferan youn ak lòt (yon-fason ANOVA lè l sèvi avèk analiz post hoc Tukey a; p <0.05). Ba erè reprezante erè estanda nan mwayèn nan
Kòm pi gwo eleman nitwojèn nan pipi, ure, lè yo bay fanm yo manje san yo kòm yon rejim alimantè, yo afekte paramèt repwodiktif yo nan tout etid yo. Kantite ze fi yo te bay ure, apre yon repa san, depann sou konsantrasyon ure (F(11, 360) = 4.69; p < 0.001 µM3 µM, konsantrasyon fi ant 0.001 µM 3 µM ak 1. ponn plis ze (Figi 4E).Fi ki te manje ak konsantrasyon ure 134 µM oswa pi wo ponn pi gwo ze pase fi ki te manje nan dlo (F(10, 4245) = 36.7; p <0.0001; Figi 4F), ak gwosè lav, byenke afekte pa konsantrasyon menm jan an nan ure (3.0001; 4245) = 3.0001; 0001) te plis varyab (figi 4G).
Atraksyon jeneral pou lame kap chèche bèf pipi headspace ekstrè temèt. Arabiensis la evalye nan olfactometer nan tib an vè (figi 5A) te siyifikativman afekte pa laj pipi (χ2 = 15.9, df = 4, p = 0.0032; Fig. 5B). lòt tretman (72 èdtan: p = 0.0060, 168 èdtan: p = 0.012, pentan: p = 0.00070), Eksepte pou sant la nan pipi fre (p = 0.13; Figi 5B).Malgre atraksyon an jeneral nan moustik ki te souse san yo pa t = 2 odè siyifikatif nan pipi diferan = 847. .067; Fig. 5C), fi sa yo te jwenn yo dwe siyifikativman pi atire ekstrè temèt headspace konpare ak 72 èdtan pipi ki gen laj konpare ak kontwòl (p = 0.0066; Figi 5C).
Repons konpòtman nan odè natirèl ak sentetik pipi bèf nan rechèch la pou lame ak san-manje Anopheles arabianus.Schematic nan olfaktomèt nan tib an vè (A).Atraksyon nan headspace ekstrè temèt soti nan pipi fre ak ki gen laj bèf nan òganize (B) ak san-souse (C) moustik. Yo montre pipi bèf ki gen laj 72 èdtan (F), ak 168 èdtan (G). Tras deteksyon antèn elektwonik (EAD) montre chanjman vòltaj an repons a konpoze bioaktif nan espas tèt la ki soti nan chromatograf gaz la epi detekte pa yon detektè ionizasyon flanm dife (FID). konpoze yo montre yo.Yon sèl asteris (*) endike yon repons ki konsistan ba-anplitid.Doub asterisk (**) endike repons ki pa repwodiktif.Jwenn lame a (H) ak souse san an (I). c analiz;p < 0.05).Ba erè reprezante erè estanda nan echèl la
Fi Ann.arabiensis, 72 h ak 120 h apre repa san, pandan frai, yo pa montre okenn preferans pou ekstrè temèt headspace soti nan pipi bèf fre ak ki gen laj konpare ak kontwòl pentan (χ2 = 3.07, p> 0.05; Fichye adisyonèl 1: Fig. S1).
Pou fi Ann.arabiensis, GC-EAD ak GC-MS analiz idantifye uit, sis, twa ak twa konpoze bioaktif (Figi 5D-G). Byenke diferans ki genyen nan kantite konpoze ki te pwovoke repons elektwofizyolojik yo te obsève, pi fò nan konpoze sa yo te prezan nan chak ekstrè temèt espas tèt yo kolekte nan pipi fre ak ki gen laj. kenbe yo te enkli nan analiz plis.
Pousantaj total lage temèt konpoze bioaktif nan koleksyon headspace la te ogmante soti nan 29 µg h-1 nan pipi fre a 242 µg h-1 nan 168 èdtan pipi ki gen laj, sitou akòz p-cresol ak m-formaldehyde Fenol ogmante osi byen ke fenol. lated ak diminisyon an obsève nan entansite siyal (abondans) nan chromatogram nan (Fig. 5D)-G panèl gòch) ak repons fizyolojik nan konpoze sa yo (Fig. 5D-G panèl dwat).
An jeneral, melanj sentetik la te gen yon rapò natirèl ki sanble nan konpoze byoaktif idantifye nan ekstrè temèt nan espas tèt pipi fre ak ki gen laj (figi 5D-G) epi li pa t parèt yo pwovoke yon apèl enpòtan nan rechèch la pou yon lame (χ2 = 8.15, df = 4, p = 0.083; Fig. 5H ) oswa san (fig. 5H ) oswa p. = 0.30; Fig. 5I).Sepandan, konparezon post hoc pairwise ant tretman yo te montre ke moustik kap chèche lame yo te siyifikativman atire melanj sentetik nan pipi 24-h ki gen laj konpare ak kontwòl pentan (p = 0.0086; Figi 5H).
Pou evalye wòl eleman endividyèl yo nan melanj sentetik pipi ki gen laj 24 èdtan, yo te evalye sis melanj soustraktif kont melanj konplè nan tès Y-tib la, kote yo te retire konpoze endividyèl yo.Pou moustik k ap chèche lame, soustraksyon konpoze endividyèl yo nan melanj konplè a te gen yon efè enpòtan sou repons konpòtman (χ62, 1, 2 = 1, 2 = 6, 1, 2, 1, 2, 1, 1, 2, 2, 2, 2, 2, 2, 2, 3, 2, 2, 2, 2, 2, 2, 2, 2, 2, 2, 2, 2, 2, 2 ou 2, 3 ou 2). : Figi S2A), tout melanj soustraktif yo te pi atiran pase Pi piti pase konplètman melanje.Okontrè, retire konpoze endividyèl nan melanj lan konplètman sentetik pa te afekte repons yo konpòtman nan moustik ki te souse san (χ2 = 11.38, df = 6, p = 0.077), ak eksepsyon de rezilta a nan konparezon a nan nivo pi ba a nan nivo 0. 22; Lòt Dosye 1: Figi S2B).
Nan yon vilaj malarya-endemic nan peyi Letiopi, efikasite nan yon melanj sentetik nan pipi bèf 24 èdtan nan atire moustik nan kondisyon jaden yo te evalye pou dis nwit (Fig. 6A).Yon total de 4,861 moustik yo te kaptire ak idantifye, nan ki 45.7% yo te Anthropus. 35.4% yo te Culex spp.(Fichye adisyonèl 1: Tablo S1).Anopheles arabinis se sèl manm nan konplèks espès An.Gambian idantifye pa analiz PCR.Nan mwayèn, 320 moustik yo te kaptire pou chak swa, pandan sa a pyèj ak appâts melanj sentetik te kenbe plis moustik pase pèlen pèt, χ196(pyèj) 0.0001) .Pyèj ki pa appâts yo te mete sou chak nan senk nwit kontwòl nan kòmansman an, nan mitan, ak nan fen jijman an.Similar kantite moustik yo te kaptire nan chak pè nan pyèj, ki endike pa gen okenn patipri ant kay (χ2 (0, 1665) = 9 × 10-13, p) ak etid la pa gen okenn peryòd de kontwòl popilasyon an decline. kitoes kenbe nan pyèj yo ki gen melanj sentetik la te ogmante siyifikativman: lame k ap chèche (χ2(0, 2107) = 138.7, p <0.0001), resan manje san (χ2(0, 650) = 32.2, p <0.0001) ak gwosès (0.0001) = 0.0001, χ2. ;Fichye adisyonèl 1: Tablo S1).Sa a reflete tou nan kantite total moustik yo te kaptire: lame k ap chèche > sise san > ansent > semi-ansent > gason.
Evalyasyon jaden efikasite nan yon melanj odè pipi 24 èdtan sentetik bèf. Esè jaden yo te fèt nan sid-santral peyi Letiopi (kat), toupre vil la nan Maki (insert), lè l sèvi avèk yon pèlen limyè Sant pou Kontwòl Maladi (CDC) (adwat) nan kay pè, ak yon konsepsyon kare Latin (ayerial-kaptire foto) ak yon konsepsyon kare laten (ayerial-attractive). nopheles arabesques (B), men se pa Anopheles farroes (C), nan yon fason diferan, yon efè fizyolojik eta-depandan. Anplis de sa, pyèj sa yo te kaptire siyifikativman ogmante kantite moustik Culex lame yo. (D) Konpare ak kontwòl. sou bò dwat la reprezante endèks seleksyon mwayèn nan pè pyèj kontwòl (louvri; N = 5).).Asterik yo endike nivo siyifikasyon estatistik (*p = 0.01 ak ***p <0.0001)
Twa espès yo te kaptire yon fason diferan nan pyèj ki gen melanj sentetik. Chèche lame (χ2 (1, 1345) = 71.7, p < 0.0001), manje san (χ2 (1, 517) = 16.7, p < 0.0001) ak gwosès (χ2 (1, 1345) = 6.0001) =, χ81. .arabiensis te kwense nan pèlen an lage melanj sentetik la (figi 6B), pandan ke kantite An pa t diferan.Pharoensis nan diferan eta fizyolojik yo te jwenn (figi 6C).Pou Culex, sèlman yon ogmantasyon siyifikatif nan kantite moustik k ap chèche lame yo te jwenn nan pyèj appâts ak melanj sentetik la (13 = 129). 4; Fig. 6D), konpare ak pyèj kontwòl.
Pyèj Garnier lame ki sitiye andeyò lame potansyèl ant sit elvaj ak kominote riral nan peyi Letiopi yo te itilize pou evalye si moustik malarya sèvi ak odè pipi bèf kòm yon siy abita lame. Nan absans siyal lame, chalè, ak avèk oswa san prezans nan odè pipi bèf, pa gen okenn moustik te kaptire (Fisye adisyonèl 1: Figi odè tanperati a, S3 nan prezans fi. zòtèy yo te atire ak kaptire, byenke an ti kantite, endepandan de laj pipi (χ2 (5, 25) = 2.29, p = 0.13; Lòt dosye 1: Figi S3).Okontrè, kontwòl dlo pa t 'kapte moustik malarya nan tanperati ki wo (Fichiye Adisyonèl 1: Figi S3).
Moustik malarya jwenn ak distribye konpoze ki gen nitwojèn atravè manje konpansatwa sou pipi bèf (sa vle di, flak dlo) pou amelyore karakteristik istwa lavi yo, menm jan ak lòt ensèk [2, 4, 24, 25, 26]. moustik lokalize resous sa a pa pran sant epi yo kapab kontwole absorption nan konpoze nitwojèn nan pipi, ki gen ladan ure, pi gwo eleman nitwojèn nan pipi [15, 16]. Tou depan de eta fizyolojik moustik fi a, eleman nitritif nan pipi yo resevwa lajan pou amelyore aktivite vòl la ak siviv nan siviv nan san moun ki byen viv ak siviv nan san an. pandan premye sik gonadotwòp la. Kidonk, melanje pipi jwe yon wòl nitrisyonèl enpòtan pou vektè malarya ki fèmen tankou granmoun ki mal nouri [8], paske li bay moustik fi yo kapasite pou jwenn konpoze nitwojèn enpòtan lè yo angaje yo nan manje ki ba risk. ka sib nan pwochen pwogram jesyon vektè.