Akizisyon ak distribisyon eleman nitritif entegre fouraj ensèk yo ak karakteristik istwa lavi yo. Pou konpanse pou defisyans nan eleman nitritif espesifik nan diferan etap lavi yo, ensèk yo ka jwenn eleman nitritif sa yo atravè manje siplemantè, pa egzanp, lè yo manje sekresyon vètebre nan yon pwosesis yo rele flak dlo. Moustik Anopheles arabiani a sanble malnitri e, kidonk, li bezwen eleman nitritif pou tou de metabolis ak repwodiksyon. Objektif etid sa a se te pou evalye si ajitasyon An. arabiensis sou pipi bèf pou akizisyon eleman nitritif amelyore karakteristik istwa lavi yo.
Asire w ke li an sekirite. arabiensis te atire pa odè pipi bèf fre, ki te gen 24 èdtan, 72 èdtan, ak 168 èdtan, epi yo te mezire fi ki t ap chèche lame ak fi ki te manje san (48 èdtan apre repa san) nan yon olfaktomèt tib Y, epi yo te evalye fi ansent yo pou tès ponn. Apre sa, yo te itilize yon analiz chimik ak elektwofizyolojik konbine pou idantifye konpoze byoaktif nan pipi bèf nan tout kat klas laj yo. Yo te evalye melanj sentetik konpoze byoaktif nan tib Y ak esè sou teren. Pou envestige pipi bèf ak prensipal konpoze li ki gen nitwojèn, ure, kòm rejim siplemantè potansyèl pou vektè malarya, yo te mezire paramèt alimantè ak karakteristik istwa lavi. Yo te evalye pwopòsyon moustik fi yo ak kantite pipi bèf ak ure ki te absòbe. Apre yo te fin manje, yo te evalye fi yo pou siviv, vòl mare, ak repwodiksyon.
Chèche san ak nouriti lame a. Nan etid laboratwa ak sou teren, Arab yo te santi yo atire pa sant natirèl ak sentetik pipi bèf fre ak ki gen laj. Fi ansent yo te endiferan anvè repons pipi bèf nan sit ponn yo. Fi k ap chèche lame ak ki souse san yo absòbe pipi ak ure bèf aktivman epi yo asiyen resous sa yo dapre konpwomi istwa lavi yo kòm yon fonksyon eta fizyolojik pou vòl, siviv oswa repwodiksyon.
Akizisyon ak distribisyon pipi bèf Anopheles arabinis pou amelyore karakteristik istwa lavi. Siplemantè manje pipi bèf afekte kapasite vektè a dirèkteman lè li ogmante siviv chak jou ak dansite vektè, epi endirèkteman lè li modifye aktivite vòl e pakonsekan yo ta dwe konsidere li nan modèl nan lavni.
Akizisyon ak distribisyon eleman nitritif yo entegre fouraj ensèk yo ak karakteristik istwa lavi yo [1,2,3]. Ensèk yo kapab chwazi epi jwenn manje epi fè manje konpansatwa ki baze sou disponiblite manje ak bezwen eleman nitritif yo [1, 3]. Distribisyon eleman nitritif yo depann de pwosesis istwa lavi a epi li ka mennen nan diferan bezwen pou kalite ak kantite rejim alimantè nan diferan etap lavi ensèk yo [1, 2]. Pou konpanse pou defisyans nan eleman nitritif espesifik, ensèk yo ka jwenn eleman nitritif sa yo atravè manje siplemantè, tankou sou labou, divès kalite eskreman ak sekresyon vètebre, ak kadav, yon pwosesis ke yo rekonèt kòm flak dlo [2]. Malgre ke yo dekri yon varyete espès papiyon ak mit prensipalman, twou dlo rive tou nan lòt lòd ensèk, epi atraksyon ak manje sou kalite resous sa yo ka gen efè siyifikatif sou sante ak lòt karakteristik istwa lavi [2, 4, 5, 6], 7]. Moustik malarya Anopheles gambiae sensu lato (sl) parèt kòm yon adilt 'malnouri' [8], kidonk awozaj ka jwe yon wòl enpòtan nan karakteristik istwa lavi li, men konpòtman sa a te tèlman... Yo te neglije l byen lwen. Itilizasyon ajitasyon kòm yon mwayen pou ogmante konsomasyon eleman nitritif nan veyikil enpòtan sa a merite atansyon paske sa ka gen konsekans epidemyolojik enpòtan.
Konsomasyon azòt nan moustik Anopheles fi granmoun limite akòz rezèv kalori ki ba yo pote soti nan etap lav la ak itilizasyon san ki pa efikas [9]. Ann.gambiae sl fi tipikman konpanse pou sa a lè yo konplete ak repa san siplemantè [10, 11], kidonk mete plis moun an risk pou yo pran maladi a epi mete moustik nan yon pi gwo risk predasyon. Altènativman, moustik yo ka itilize manje siplemantè nan eskreman vètebre pou jwenn konpoze azòt ki amelyore adaptasyon ak manevrabilite vòl, jan lòt ensèk demontre sa [2]. Nan sans sa a, atraksyon fò ak distenk youn nan espès frè ak sè yo nan An. Konplèks espès Gambian sl la, Anopheles arabinis, pipi bèf fre ak ki gen laj [12,13,14], se enteresan. Anopheles arabinis se opòtinis nan preferans lame li epi li konnen pou asosye ak manje bèf. Pipi bèf se yon resous ki rich nan konpoze azòt, ak ure ki reprezante 50-95% nan azòt total nan pipi fre [15, 16].Tank pipi bèf la ap vyeyi, mikwo-òganis yo itilize resous sa yo pou diminye konpleksite konpoze nitwojèn yo nan 24 èdtan [15]. Avèk ogmantasyon rapid nan amonyak, ki asosye avèk yon bès nan nitwojèn òganik, mikwo-òganis alkalofil (anpil ladan yo pwodui konpoze toksik pou moustik) pwospere [15], ki ka Ann.arabiensis fi a pi atire pa pipi ki gen 24 èdtan oswa mwens [13, 14].
Nan etid sa a, yo te chèche An ki te lame a ak An ki te manje san. Pandan premye sik gonadotropin li a, yo te evalye arabiensis pou akizisyon konpoze nitwojèn, tankou ure, lè yo melanje pipi. Apre sa, yo te fè yon seri eksperyans pou evalye kijan moustik fi yo itilize resous eleman nitritif potansyèl sa a pou amelyore siviv, repwodiksyon ak plis fouraj. Finalman, yo te evalye odè pipi bèf fre ak pipi bèf ki te gen laj pou detèmine si sa yo te bay endikasyon serye pou An ki te lame a ak An ki te manje san. Nan rechèch yo pou resous nitrisyonèl potansyèl sa a, arabiensis te dekouvri korelasyon chimik dèyè atraksyon diferans ki te obsève a. Yo te evalye plis melanj odè sentetik konpoze òganik temèt (VOC) idantifye nan pipi ki te gen laj 24 èdtan nan kondisyon teren, pou pwolonje rezilta yo te jwenn nan kondisyon laboratwa epi demontre efè odè pipi bèf sou diferan eta fizyolojik. Atraksyon moustik. Rezilta yo jwenn yo konfime ke An. arabiensis akeri epi distribye konpoze nitwojèn yo jwenn nan pipi vètebre pou enfliyanse karakteristik istwa lavi yo. Yo diskite rezilta sa yo nan kontèks konsekans epidemyolojik potansyèl yo ak kijan yo ka itilize pou siveyans ak kontwòl vektè.
Yo te kenbe Anopheles arabicans (souch Dongola) nan 25 ± 2 °C, 65 ± 5% RH ak yon sik limyè:fènwa 12:12 èdtan. Yo te elve lav yo nan plato plastik (20 cm × 18 cm × 7 cm) plen ak dlo distile epi yo te ba yo manje pwason Tetramin® (Tetra Werke, Melle, DE). Yo te kolekte krizalid yo nan tas 30 ml (Nolato Hertila, Åstorp, SE) epi answit yo te transfere yo nan kaj Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science, Taichung, Taiwan) pou pèmèt adilt yo parèt. Yo te bay adilt yo yon solisyon sikwoz 10% ad libitum jiska 4 jou apre aparisyon (dpe), nan pwen sa a yo te ofri fi ki t ap chèche lame manje imedyatman anvan eksperyans lan, oswa yo te kite yo grangou pandan tout lannwit lan ak dlo distile anvan eksperyans lan, jan sa dekri anba a. Fi yo te itilize pou eksperyans tib vòl yo te grangou pandan sèlman 4-6 jou. èdtan ak dlo ad libitum. Pou prepare moustik ki souse san pou byotès ki vin apre yo, yo te bay 4 fi dpe san mouton defibrotik (Håtunalab, Bro, SE) lè l sèvi avèk yon sistèm manje manbràn (Hemotek Discovery Workshops, Accrington, UK). Apre sa, yo te transfere fi ki te byen konjeste yo nan kaj endividyèl epi yo te ba yo manje dirèkteman, jan sa dekri anba a, oubyen 10% sikwoz ad libitum pandan 3 jou anvan eksperyans ki dekri anba a. Yo te itilize fi ki sot pase yo pou byotès tib vòl epi yo te transfere yo nan laboratwa a, epi answit yo te ba yo dlo distile ad libitum pandan 4-6 èdtan anvan eksperyans lan.
Yo te itilize tès alimantasyon pou mezire konsomasyon pipi ak ure nan fi An.Arab adilt. Fi ki t ap chèche lame ak fi ki te manje san te resevwa yon rejim alimantè ki gen 1% pipi bèf fre ak granmoun dilye, divès konsantrasyon ure, ak de kontwòl (10% sikwoz ak dlo) pandan 48 èdtan. Anplis de sa, yo te ajoute koloran manje (1 mg ml-1 ksilen siyanid FF; CAS 2650-17-1; Sigma-Aldrich, Stockholm, SE) nan rejim alimantè a epi yo te founi li nan yon matris 4 × 4 nan tib mikrosantrifij 250 µl (Axygen Scientific, Union City, CA, US; Figi 1A). Ranpli jis nan kwen an (~300 µl). Pou evite konpetisyon ant moustik yo ak efè potansyèl koulè lank lan, mete 10 moustik nan yon gwo plat Petri (12 cm an dyamèt ak 6 cm an wotè; Semadeni, Ostermundigen, CH; Figi 1A) nan fènwa total a 25 ± 2 cm °C ak 65 ± 5% imidite relatif. Yo te repete eksperyans sa yo 5 a 10 fwa. Apre yo te fin ekspoze moustik yo nan rejim alimantè a, yo te mete yo nan -20 °C jiskaske yo te fè plis analiz.
Chèche pipi ak ure bovin ki absòbe pa lame a ak fi Anopheles arabianus ki souse san an. Nan esè alimantè a (A), moustik fi yo te bay yon rejim alimantè ki gen ladan pipi bèf fre ak pipi bèf ki gen laj, divès konsantrasyon ure, sikwoz (10%), ak dlo distile (H2O). Fi ki t ap chèche lame (B) ak fi ki te manje ak san (C) te absòbe plis sikwoz pase nenpòt lòt rejim alimantè yo te teste. Remake byen ke fi ki t ap chèche lame yo te absòbe pipi bèf 72 èdtan mwens pase pipi bèf 168 èdtan (B). Kontni total azòt mwayèn (± devyasyon estanda) nan pipi a reprezante nan insert la. Fi ki t ap chèche lame (D, F) ak fi ki souse san (E, G) yo absòbe ure nan yon fason ki depann de dòz la. Volim mwayèn yo respire (D, E) ak non lèt diferan te siyifikativman diferan youn ak lòt (ANOVA yon sèl chemen lè l sèvi avèk analiz post hoc Tukey a; p < 0.05). Ba erè yo reprezante erè estanda mwayèn nan (BE). Liy tire dwat la reprezante liy regresyon log-lineyè a. (F, G)
Pou libere manje ki te absòbe a, yo te mete moustik yo endividyèlman nan tib mikwosantrifij 1.5 ml ki gen 230 µl dlo distile epi yo te kraze tisi a lè l sèvi avèk yon pilon jetab ak yon motè san fil (VWR International, Lund, SE), epi santrifije yo a 10 krpm pandan 10 min. Yo te transfere sipènatant la (200 µl) nan yon mikwoplak 96 pi (Sigma-Aldrich) epi yo te detèmine absòbans (λ620) lè l sèvi avèk yon lektè mikwoplak ki baze sou espektrofotomèt (SPECTROStar® Nano, BMG Labtech, Ortenberg, DE) nm). Altènativman, yo te moulen moustik yo nan 1 ml dlo distile, epi yo te transfere 900 µl ladan l nan yon kivèt pou analiz espektrofotometrik (λ 620 nm; UV 1800, Shimadzu, Kista, SE). Pou mezire konsomasyon dyetetik la, yo te prepare yon koub estanda pa dilisyon seri pou bay 0.2 µl a 2.4 µl nan 1 mg ml-1 ksilèn siyanid. Apre sa, yo te itilize dansite optik konsantrasyon koloran yo te konnen pou detèmine kantite manje chak moustik te vale.
Yo te analize done volim yo lè l sèvi avèk analiz varyans yon sèl chemen (ANOVA) ki te swiv pa konparezon pè post hoc Tukey a (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc., Cary, NC, US, 1989–2007). Analiz regresyon lineyè yo te dekri konsomasyon ure ki depann de konsantrasyon an epi yo te konpare repons ant moustik k ap chèche lame ak moustik k ap souse san (GraphPad Prism v8.0.0 pou Mac, GraphPad Software, San Diego, CA, US).
Yo te mare apeprè 20 µl echantiyon pipi nan chak gwoup laj sou Chromosorb® W/AW (10 mg 80/100 mesh, Sigma Aldrich) epi yo te mete yo nan kapsil fèblan (8 mm × 5 mm). Yo te mete kapsil yo nan chanm konbisyon yon analizè CHNS/O (Flash 2000, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, US) pou detèmine kontni azòt nan pipi fre ak pipi ki gen laj dapre pwotokòl manifakti a. Yo te mezire azòt total (g N l-1) dapre konsantrasyon ure ke yo te itilize kòm yon estanda.
Pou evalye efè rejim alimantè a sou siviv moustik fi k ap chèche lame ak k ap souse san, yo te mete moustik endividyèlman nan gwo bwat Petri (12 cm an dyamèt ak 6 cm an wotè; Semadeni) ak yon twou kouvri ak may nan kouvèti a (3 cm an dyamèt) pou vantilasyon ak ekipman pou manje. Yo te bay rejim alimantè yo dirèkteman apre 4 dpe epi yo te gen ladan 1% pipi bèf fre ak granmoun dilye, kat konsantrasyon ure, ak de kontwòl, 10% sikwoz ak dlo. Yo te pipete chak rejim alimantè sou yon tanpon dantè (DAB Dental AB, Upplands Väsby, SE) mete nan yon sereng 5 ml (Thermo Fisher Scientific, Gothenburg, SE), yo te retire piston an, epi yo te mete l sou tèt yon bwat Petri (figi 1).1A). Chanje rejim alimantè ou chak jou. Kenbe laboratwa a jan sa dekri pi wo a. Yo te konte moustik ki siviv yo de fwa pa jou, pandan y ap jete moustik mouri yo jiskaske dènye moustik la te mouri (n = 40 pa tretman). Yo te analize siviv moustik ki te manje divès rejim alimantè yo estatistikman lè l sèvi avèk koub siviv Kaplan-Meyer. ak tès log-rank pou konpare distribisyon siviv ant rejim alimantè yo (IBM SPSS Statistics 24.0.0.0).
Yon moulen moustik ki vole koutim ki baze sou Attisano et al.[17], fèt ak panno akrilik transparan 5 mm epesè (10 cm lajè x 10 cm longè x 10 cm wotè) san panno devan ak dèyè (Fig. 3: anlè). Yon asanblaj pivot ak yon tib vètikal ki fèt ak yon kolòn kromatografi gaz (0.25 mm id; 7.5 cm L) ak bout kole sou yon zegwi ensèk ki sispann ant yon pè leman neyodim 9 cm apa. Yon tib orizontal ki fèt ak menm materyèl la (6.5 cm L) te koupe tib vètikal la an de pou fòme yon bra mare ak yon bra ki te pote yon ti moso papye aliminyòm kòm yon siyal pou entèwonp limyè.
Yo te bay moustik fi ki te mouri grangou pandan 24 èdtan yo rejim alimantè ki anwo a pandan 30 minit anvan yo te mete yo nan kontwòl. Apre sa, yo te anestezye moustik fi ki te fin manje nèt yo chak youn sou glas pandan 2-3 minit epi yo te tache yo ak zegwi ensèk ak sir myèl (Joel Svenssons Vaxfabrik AB, Munka Ljungby, SE) epi answit mare yo nan bra tib orizontal yo. Moulen volan. Yo te anrejistre wotasyon pa vòl pa yon anrejistreman done ki fèt espesyalman, answit yo te estoke epi montre yo lè l sèvi avèk lojisyèl PC-Lab 2000™ (v4.01; Velleman, Gavere, BE). Yo te mete moulen volan an nan yon chanm ki gen yon klima reglemante (12 èdtan:12 èdtan, limyè: fènwa, 25 ± 2 °C, 65 ± 5% RH).
Pou vizyalize modèl aktivite vòl la, yo te kalkile distans total ki te vole a (m) ak kantite total aktivite vòl konsekitif pa èdtan sou yon peryòd 24 èdtan. Anplis de sa, yo te konpare distans mwayèn ke chak fi te vole atravè tretman yo epi yo te analize yo lè l sèvi avèk ANOVA yon sèl chemen ak analiz post hoc Tukey a (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.), kote distans mwayèn te konsidere kòm yon varyab depandan, alòske tretman an se yon faktè endepandan. Anplis de sa, yo kalkile kantite mwayèn wonn yo an ogmantasyon 10 minit.
Pou evalye efè rejim alimantè a sou pèfòmans repwodiktif An.arabiensis, yo te transfere sis femèl (4 dpe) dirèkteman nan kaj Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm) apre yo te fin kolekte san epi answit yo te bay rejim eksperimantal la pandan 48 èdtan jan sa dekri pi wo a. Apre sa, yo te retire rejim alimantè yo epi yo te bay tas ponn (30 ml; Nolato Hertila) plen ak 20 ml dlo distile nan twazyèm jou a pandan 48 èdtan, chanje chak 24 èdtan. Repete chak rejim alimantè 20-50 fwa. Yo te konte epi anrejistre ze yo pou chak kaj eksperimantal. Yo te itilize sou-echantiyon ze pou evalye gwosè mwayèn ak varyasyon longè ze endividyèl yo (n ≥ 200 pa rejim) lè l sèvi avèk yon mikwoskòp Dialux-20 (DM1000; Ernst Leitz Wetzlar, Wetzlar, DE) ekipe ak yon Kamera Leica (DFC) 320 R2; Leica Microsystems Ltd., DE). Yo te kenbe rès ze yo nan yon chanm ki gen klima kontwole anba kondisyon elvaj estanda pandan 24 èdtan, epi yo te mezire yon sou-echantiyon lav premye etap ki fèk parèt (n ≥ 200 pa rejim), jan sa dekri pi wo a. Yo te konpare kantite ze ak gwosè ze ak lav ant tretman yo epi yo te itilize ANOVA yon sèl chemen ak analiz post hoc Tukey a (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Yo te kolekte volatil ki soti nan pipi fre (1 èdtan apre echantiyonaj la), pipi ki gen laj 24 èdtan, 72 èdtan ak 168 èdtan nan echantiyon yo te kolekte nan men bèf Zebu, ras Arsi. Pou plis konvenyans, yo te kolekte echantiyon pipi byen bonè nan maten pandan bèf yo te toujou nan etab la. Yo te kolekte echantiyon pipi nan men 10 moun epi yo te transfere 100-200 ml nan chak echantiyon nan sache boulanjri poliamid endividyèl (Toppits Cofresco, Frischhalteprodukte GmbH and Co., Minden, DE) nan 3 l poliamid ak kouvèti nan tanbou plastik klori vinil. Yo te kolekte volatil ki soti nan chak echantiyon pipi bovin swa dirèkteman (fre) oswa apre matirite nan tanperati chanm pandan 24 èdtan, 72 èdtan ak 168 èdtan, sa vle di chak echantiyon pipi te reprezantan chak gwoup laj.
Pou koleksyon volatil nan espas tèt la, yo te itilize yon sistèm bouk fèmen pou sikile yon kouran gaz filtre ak chabon aktive (100 ml min-1) atravè yon sak poliamid pou ale nan kolòn adsorption an pandan 2.5 èdtan lè l sèvi avèk yon ponp vakyòm dyafram (KNF Neuberger, Freiburg, DE). Kòm yon kontwòl, yo te fè koleksyon nan espas tèt la nan yon sak poliamid vid. Kolòn adsorption an te fèt ak tib Teflon (5.5 cm x 3 mm id) ki gen 35 mg Porapak Q (50/80 may; Waters Associates, Milford, MA, US) ant bouchon lenn vè. Anvan yo te itilize li, yo te rense kolòn nan ak 1 ml n-hexane redistile (Merck, Darmstadt, DE) ak 1 ml pentan (99.0% sòlvan pi bon kalite GC, Sigma Aldrich). Volatil adsorbe yo te elimine ak 400 μl pentan. Yo te rasanble koleksyon espas tèt yo epi yo te estoke yo a -20°C jiskaske yo te itilize yo pou plis analiz.
Repons konpòtman moustik An ki ap chèche lame ak ki manje san. Ekstrè volatil Headspace yo te kolekte nan pipi fre, ki te gen laj 24 èdtan, 72 èdtan, ak 168 èdtan pou ekstrè volatil ki soti nan moustik Arabidopsis lè l sèvi avèk yon olfaktomèt tib an vè dwat [18]. Eksperyans yo te fèt pandan ZT 13-15, peryòd pik aktivite An pou chèche kay. Arab [19]. Yon olfaktomèt tib an vè (80 cm × 9.5 cm id) te limen ak 3 ± 1 lx limyè wouj ki soti anwo. Koule lè filtre ak chabon ak imidifikasyon (25 ± 2 °C, 65 ± 2% imidite relatif) te pase byotès la a 30 cm s-1. Lè a pase nan yon seri ekran may asye pur, sa ki kreye yon koule laminè ak yon estrikti panach inifòm. Dispensè tampon dantè (4 cm × 1 cm; L:D; DAB Dental AB), ki pandye nan yon bobin 5 cm sou bout ki bay sou van an. olfaktomèt, ak chanjman estimilatè chak 5 minit. Pou analiz la, yo te itilize 10 μl nan chak ekstrè headspace, dilye 1:10, kòm yon estimilis. Yo te itilize yon kantite egal pentan kòm yon kontwòl. Yo te mete moustik endividyèl k ap chèche lame oswa k ap souse san nan kaj lage endividyèl 2-3 èdtan anvan kòmansman eksperyans lan. Yo te mete kaj lage a sou bò van olfaktomèt la, epi yo te kite moustik yo aklimate pandan 1 minit, epi answit yo te louvri valv papiyon kaj la pou lage. Yo te analize atraksyon pou tretman oswa kontwòl kòm pwopòsyon moustik ki te antre an kontak ak sous la nan lespas 5 minit apre lage. Yo te replike chak ekstrè volatil headspace ak kontwòl omwen 30 fwa, epi pou evite efè nenpòt jou, yo te teste menm kantite tretman ak kontwòl nan chak jou eksperimantal. Repons rechèch nan men lame ak moun ki te manje san. Repons arab kont ansanm headspace yo te analize lè l sèvi avèk regresyon lojistik nominal ki te swiv pa konparezon pè pou rapò enpè (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Repons ponn An. Yo te analize ekstrè espas tèt ki soti nan pipi bèf fre ak granmoun nan kaj Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science). Gode plastik (30 mL; Nolato Hertila) plen ak 20 mL dlo distile te bay substra ponn lan epi yo te mete yo nan kwen opoze kaj la, 24 cm apa. Yo te ajiste gode tretman yo ak 10 μl nan chak ekstrè espas tèt nan yon dilisyon 1:10. Yo te itilize yon kantite pentan egal pou ajiste gode kontwòl la. Yo te chanje gode tretman ak gode kontwòl ant chak eksperyans pou kontwole efè pozisyon yo. Yo te lage dis fi ki te manje san nan kaj eksperimantal nan ZT 9-11 epi yo te konte ze nan gode yo 24 èdtan apre. Fòmil pou kalkile endèks ponn lan se: (kantite ze ki ponn nan gode tretman an – kantite ze ki ponn nan gode kontwòl la)/(kantite total ze ki ponn). Yo te repete chak tretman 8 fwa.
Yo te fè analiz kwomatografi gaz ak deteksyon modèl antèn elektwonik (GC-EAD) sou An.arabiensis femèl jan yo te dekri deja [20]. An brèf, yo te separe ekstrè volatil ki soti nan espas tèt fre yo lè l sèvi avèk yon Agilent Technologies 6890 GC (Santa Clara, CA, US) ekipe ak yon kolòn HP-5 (30 m × 0.25 mm id, 0.25 μm epesè fim, Agilent Technologies). ak pipi ki ap vyeyi. Yo te itilize idwojèn kòm faz mobil lan ak yon to koule lineyè mwayèn 45 cm s-1. Yo te enjekte chak echantiyon (2 μl) pandan 30 segonn nan mòd san divizyon ak yon tanperati antre 225 °C. Yo te pwograme tanperati fou GC a soti nan 35 °C (3 minit kenbe) a 300 °C (10 minit kenbe) a 10 °C min-1. Nan separateur efluan GC a, yo te ajoute 4 psi nitwojèn epi yo te divize 1:1 nan yon kwaze volim mò Gerstel 3D/2 (Gerstel, Mülheim, DE) ant detektè iyonizasyon flanm dife a ak EAD la. Yo te pase kapilè efluan GC pou EAD a nan yon liy transfè Gerstel ODP-2, ki swiv tanperati fou GC a plis 5 °C, nan yon tib an vè (10 cm × 8 mm), kote yo te melanje l ak lè imidifye filtre ak kabòn (1.5 l min−1). Yo te mete antèn nan 0.5 cm soti nan sòti tib la. Chak moustik endividyèl te konte pou yon repetisyon, epi pou moustik k ap chèche lame, yo te fè omwen twa repetisyon sou echantiyon pipi nan chak laj.
Idantifikasyon konpoze byoaktif nan koleksyon pipi bèf fre ak ki gen laj nan espas tèt la lè l sèvi avèk yon GC ak yon espektwomèt mas konbine (GC-MS; 6890 GC ak 5975 MS; Agilent Technologies) pou jwenn repons antenn nan analiz GC-EAD, k ap opere nan mòd ionizasyon enpak elektwon nan 70 eV. GC a te ekipe ak yon kolòn kapilè silica fusionné HP-5MS kouvri ak UI (60 m × 0.25 mm dyamèt enteryè, 0.25 μm epesè fim) lè l sèvi avèk elyòm kòm faz mobil lan ak yon to koule lineyè mwayèn 35 cm s-1. Yo te enjekte yon echantiyon 2 μl lè l sèvi avèk menm paramèt enjektè ak tanperati fou a tankou pou analiz GC-EAD la. Yo te idantifye konpoze yo ki baze sou tan retansyon yo (endis Kovát) ak espektwo mas yo konpare ak bibliyotèk koutim lan ak bibliyotèk NIST14 la (Agilent). Yo te konfime konpoze idantifye yo lè yo te enjekte estanda otantik (Fichye Siplemantè 1: Tablo S2). Pou kantifikasyon, yo te itilize asetat eptil (10 ng, pite chimik 99.8%, Aldrich) te enjekte kòm yon estanda ekstèn.
Evalye efikasite yon melanj odè sentetik ki gen konpoze bioaktif idantifye nan pipi fre ak pipi ki gen laj pou atire Ans.arabiensis ki ap chèche lame ak ki souse san, lè l sèvi avèk menm olfaktomèt ak pwotokòl ki anwo a. Melanj sentetik yo te imite konpozisyon ak pwopòsyon konpoze yo nan ekstrè volatil melanje nan espas tèt pipi fre, pipi ki gen laj 24 èdtan, 48 èdtan, 72 èdtan, ak 168 èdtan (Figi 5D-G; Fichye Siplemantè 1: Tablo S2). Pou analiz, sèvi ak 10 μl nan yon dilisyon 1:100 nan melanj totalman sentetik la, ak yon to liberasyon jeneral ki varye ant apeprè 140-2400 ng h-1, pou evalye atire moustik lame ak moustik ki souse san. Apre sa, tès la fèt sou melanj konplè, nan ki melanj soustraktif konpoze endividyèl nan melanj konplè a yo retire. Repons rechèch nan men moustik lame ak moustik ki manje san. Melanj Arab vs sentetik ak soustraktif yo te analize lè l sèvi avèk regresyon lojistik nominal ki te swiv pa konparezon pè pou enpè. rapò (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Pou evalye si pipi bèf te kapab sèvi kòm yon siyal abita pou moustik malarya yo, yo te mete pipi bèf fre ak pipi bèf ki gen laj, kolekte jan sa dekri pi wo a, ak dlo nan bokit 3 lit ki gen may (100 ml) epi yo te mete yo nan pyèj pou lapèch. (Vèsyon BG-HDT; BioGents, Regensburg, DE). Yo te mete dis pyèj a 50 m youn ak lòt nan patiraj, 400 m de kominote vilaj la (Silay, Etyopi, 5°53´24´´N, 37°29´24´´E) san bèf, sou tè repwodiksyon pèmanan ak nan vilaj yo. Yo te chofe senk pyèj pou simile prezans yon lame, pandan ke yo te kite senk pyèj san chofe. Yo chanje chak kote tretman chak swa pou yon total senk nwit. Yo te konpare kantite moustik yo te pran nan pyèj ki te gen pipi ki gen diferan laj yo lè l sèvi avèk regresyon lojistik ak yon distribisyon binomyal beta (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Nan yon vilaj kote malarya andemik toupre vil Maki, rejyon Oromia, Etyopi (8° 11′ 08″ N, 38° 81′ 70″ E; Figi 6A). Etid la te fèt ant mitan mwa Out ak mitan mwa Septanm anvan flite rezidyèl anyèl andedan kay la, ansanm ak yon long sezon lapli. Senk pè kay (20-50 m apa) ki sitiye nan limit vilaj la te chwazi pou etid la (Fig. 6A). Kritè yo te itilize pou chwazi kay yo se te: pa gen bèt ki te otorize nan kay la, pa gen okenn fason pou kwit manje andedan kay la (tire bwa dife oswa chabon) ki te otorize (omwen pandan peryòd esè a), ak kay ki gen yon maksimòm de moun, k ap dòmi nan kay ki pa gen ensektisid. anba moustikè trete a. Komisyon Revizyon Etik Rechèch Enstitisyonèl (IRB/022/2016) nan Fakilte Syans Natirèl (CNS-IRB), Inivèsite Addis Abeba te akòde apwobasyon etik la, an akò ak direktiv Deklarasyon Asosyasyon Medikal Mondyal Èlsinki a. Yo te jwenn konsantman chak chèf fanmi avèk asistans anplwaye ekstansyon sante yo. Administrasyon lokal yo nan nivo distri a ak pawas la ('kebele') andose tout pwosesis la. Desen eksperimantal la te swiv yon konsepsyon kare laten 2 × 2, kote melanj sentetik ak kontwòl yo te asiyen nan pè kay nan premye nuit lan epi yo te chanje ant kay nan pwochen nuit eksperimantal la. Yo te repete pwosesis sa a dis fwa. Anplis de sa, pou estime aktivite moustik nan kay yo chwazi, yo te mete pyèj CDC yo pou yo fonksyone senk nuit youn apre lòt nan kòmansman, mitan ak fen esè teren an nan menm lè a nan jounen an.
Yo te fonn yon melanj sentetik ki gen sis konpoze bioaktif nan eptàn (97.0% sòlvan klas GC, Sigma Aldrich) epi yo te lage l nan 140 ng h-1 lè l sèvi avèk yon dispansè mèch koton [20]. Dispensè mèch la te pèmèt tout konpoze yo lage nan pwopòsyon konstan pandan tout eksperyans 12 èdtan an. Yo te itilize eptàn kòm kontwòl. Yo te sispann ti boutèy la akote pwen antre pyèj limyè Sant pou Kontwòl ak Prevansyon Maladi (CDC) (John W. Hock Company, Gainesville, FL, US; Figi 6A). Yo te pandye pyèj yo 0.8 - 1 m anlè tè a, toupre pye kabann nan, epi yon volontè te dòmi anba yon moustikè san tretman epi yo te opere l ant 18:00 ak 06:30. Yo te tcheke moustik yo te kaptire pa sèks ak estati fizyolojik (pa manje, manje, semi-ansent, ak ansent [21]) apre sa lè l sèvi avèk analiz reyaksyon chèn polimeraz (PCR) pou idantifye espès yo idantifye mòfolojikman kòm A. gambiae sl. Manm konplèks la [23]. Nan Nan etid teren an, yo te analize pyèj kay pè yo avèk yon modèl lojistik nominal, kote atraksyon te varyab depandan an epi tretman (melanj sentetik vs kontwòl) te efè fiks la (JMP® 14.0.0. SAS Institute Inc.). La a, nou rapòte valè χ2 ak p yo ki soti nan tès rapò pwobabilite a.
Evalye si li an sekirite. arabiensis te kapab jwenn pipi, prensipal sous azòt li, ure, atravè manje dirèk, nan lespas 48 èdtan apre administrasyon pandan 4 jou apre (dpe) esè manje fi k ap chèche lame ak fi k ap manje ak san (Fig. 1A). Tou de fi k ap chèche lame ak fi k ap souse san yo te absòbe siyifikativman plis sikwoz pase nenpòt lòt rejim alimantè oswa dlo (F(5,426) = 20.15, p < 0.0001 ak F(5,299) = 56.00, p < 0.0001, respektivman; Fig. 1B,C). Anplis de sa, fi k ap chèche lame te manje mwens nan pipi a 72 èdtan konpare ak pipi a 168 èdtan (Fig. 1B). Lè yo te ofri yo yon rejim alimantè ki gen ure, fi k ap chèche lame yo te absòbe yon kantite ure siyifikativman pi gwo a 2.69 mM konpare ak tout lòt konsantrasyon ak dlo, pandan ke li pa t ka distenge ak 10% sikwoz. (F(10,813) = 15.72, p < 0.0001; Figi 1D). Sa a te an kontras ak repons fi ki te manje san, ki tipikman absòbe siyifikativman plis rejim ki gen ure pase dlo, byenke siyifikativman mwens pase 10% sikwoz (F(10,557) = 78.35, p < 0.0001; Figi 1).1E). Anplis de sa, lè yo konpare ant de eta fizyolojik yo, fi ki te flebotomize yo te absòbe plis ure pase fi ki t ap chèche lame nan pi ba konsantrasyon yo, epi fi sa yo te absòbe kantite ure menm jan an nan pi gwo konsantrasyon yo (F(1,953) = 78.82, p < 0.0001; Fig. 1F, G). Pandan ke konsomasyon ki soti nan yon rejim ki gen ure te sanble gen valè optimal (Fig. 1D,E), fi nan tou de eta fizyolojik yo te kapab module kantite ure ki absòbe sou tout seri konsantrasyon ure yo nan yon fason log-lineyè (Fig. 1F,G). ).Menm jan an tou, moustik yo sanble kontwole absòpsyon azòt yo lè yo reglemante kantite pipi ki absòbe a, paske kantite azòt ki nan pipi a reflete nan kantite ki absòbe a (Figi 1B, C ak B ankadreman).
Pou evalye efè pipi ak ure sou siviv moustik k ap chèche lame ak moustik k ap souse san, yo te bay fi yo pipi tout kat laj yo (fre, 24 èdtan, 72 èdtan, ak 168 èdtan apre depo) epi yo te bay yon seri konsantrasyon ure, ansanm ak dlo distile ak 10% sikwoz kòm kontwòl (Figi 2A). Analiz siviv sa a te montre ke rejim alimantè a te gen yon efè siyifikatif sou siviv jeneral nan fi k ap chèche lame (pipi: χ2 = 108.5, df = 5, p < 0.0001; ure: χ2 = 122.8, df = 5, p < 0.0001; Fig. 2B, C) ak fi ki te manje san (pipi: χ2 = 93.0, df = 5, p < 0.0001; ure: χ2 = 137.9, df = 5, p < 0.0001; Figi 2D,E).Nan tout eksperyans yo, fi ki te resevwa yon rejim alimantè ki gen pipi, ure, ak dlo te gen yon to siviv ki pi ba anpil konpare ak fi ki te resevwa yon rejim sikwoz (Figi 2B-E). Fi ki t ap chèche yon òt epi ki te resevwa pipi fre ak pipi rasi te montre diferan to siviv, sa yo ki te resevwa pipi rasi 72 èdtan (p = 0.016) te gen pi ba pwobabilite siviv (Fig. 2B).Anplis de sa, fi ki t ap chèche yon òt epi ki te resevwa 135 mM ure te siviv pi lontan pase gwoup kontwòl dlo a (p < 0.04) (Fig. 2C).Konpare ak dlo, fi ki te resevwa pipi fre ak pipi 24 èdtan te siviv pi lontan (p = 0.001 ak p = 0.012, respektivman; Figi 2D), alòske fi ki te resevwa pipi 72 èdtan te siviv pi lontan pase sa yo ki te resevwa pipi fre kout fi ak pipi ki gen laj 24 èdtan (p < 0.0001 ak p = 0.013, respektivman; Figi 2D).Lè yo te resevwa 135 mM ure Avèk ure, fi ki te manje san yo te siviv pi lontan pase tout lòt konsantrasyon ure ak dlo (p < 0.013; Figi 2E).
Siviv moustik fi Anopheles arabinis ki souse san epi ki manje pipi bèf ak ure. Nan byotès la (A), yo te bay moustik fi yo yon rejim alimantè ki gen ladan pipi bèf fre ak pipi bèf ki gen laj, divès konsantrasyon ure, sikwoz (10%) ak dlo distile (H2O). Yo te anrejistre siviv moustik k ap chèche lame (B, C) ak moustik k ap souse san (D, E) chak 12 èdtan jiskaske tout fi yo te manje pipi (B, D) ak ure (C, E), epi kontwòl yo, sikwoz ak dlo, mouri.
Distans total ak kantite wonn yo detèmine nan tès moulen vòl la sou yon peryòd 24 èdtan te diferan ant moustik k ap chèche lame ak moustik k ap souse san, ki te montre mwens aktivite vòl an jeneral (Fig. 3). Moustik k ap chèche lame ki te bay pipi fre ak pipi ki gen laj oswa sikwoz ak dlo te montre modèl vòl diferan (Fig. 3), ak fi yo ki te manje pipi fre ki te pi aktif nan douvanjou, alòske sa yo ki te manje pipi ki gen 24 ak 168 èdtan. Moustik ki te manje pipi te montre diferan modèl vòl epi yo te prensipalman lajounen. Moustik fi ki te bay sikwoz oswa pipi 72 èdtan te montre aktivite pandan tout peryòd 24 èdtan an, alòske fi ki te bay dlo te pi aktif pandan mitan peryòd la. Moustik ki te manje sikwoz te montre pi wo nivo aktivite ta nan mitan lannwit ak byen bonè nan maten, alòske sa yo ki te vale pipi ki gen 72 èdtan te fè eksperyans yon diminisyon konstan nan aktivite sou 24 èdtan (Figi 3).
Pèfòmans vòl moustik femèl Anopheles arabinis k ap chèche chasè epi k ap souse san, k ap manje pipi bèf ak ure. Nan tès moulen vòl la, moustik femèl yo te manje pipi bèf fre ak pipi bèf ki gen laj, divès konsantrasyon ure, sikwoz (10%), ak dlo distile (H2O) yo te mare nan bra orizontal ki t ap vire lib (anwo). Pou femèl k ap chèche òt (agoch) ak femèl k ap souse san (adwat), yo te anrejistre distans total ak kantite vòl pa èdtan pou chak rejim alimantè sou yon peryòd 24 èdtan (nwa: gri; klè: blan). Distans mwayèn ak kantite mwayèn peryòd yo montre adwat graf aktivite sirkadien an. Ba erè yo reprezante erè estanda mwayèn nan. Analiz estatistik gade tèks la.
An jeneral, aktivite vòl jeneral fi ki t ap chèche yon òt te swiv yon modèl ki sanble ak distans vòl la sou yon peryòd 24 èdtan. Distans vòl mwayèn nan te afekte anpil pa rejim alimantè yo te vale a (F(5, 138) = 28.27, p < 0.0001), epi fi ki t ap chèche yon òt ki te vale 72 èdtan pipi te vole distans ki pi long konpare ak tout lòt rejim yo (p < 0.0001), epi moustik ki te manje sikwoz te vole pi lontan pase moustik ki te manje fre (p = 0.022) ak moustik ki te manje pipi ki te gen 24 èdtan (p = 0.022). Kontrèman ak modèl aktivite vòl ki dekri pa rejim pipi a, fi ki t ap chèche yon òt ki te manje ure te montre yon aktivite vòl pèsistan sou yon peryòd 24 èdtan, ki te rive nan pik li pandan dezyèm mwatye faz fènwa a (Fig. 3). Malgre ke modèl aktivite yo te sanble, fi ki t ap chèche yon òt ki te manje ure te ogmante distans vòl mwayèn nan anpil selon konsantrasyon absòbe a (F(5, 138) = 1310.91, p < 0.0001). Fi ki t ap chèche yon òt epi ki te resevwa nenpòt konsantrasyon ure te vole pi lontan pase fi ki te resevwa swa dlo oswa sikwoz (p < 0.03).
An jeneral, aktivite vòl moustik ki souse san yo te estab epi li te dire pandan 24 èdtan nan tout rejim alimantè yo, ak yon ogmantasyon nan aktivite pipi pandan dezyèm mwatye peryòd fènwa a pou fi ki te manje dlo, osi byen ke pou fi ki te manje dlo fre ak sa ki te gen 24 èdtan (imaj 3). Pandan ke rejim pipi a te afekte distans vòl mwayèn nan fi ki te manje san anpil (F(5, 138) = 4.83, p = 0.0004), rejim ure a pa t fè sa (F(5, 138) = 1.36, p = 0.24) avèk lòt pipi ak rejim kontwòl (fre, p = 0.0091; 72 èdtan, p = 0.0022; 168 èdtan, p = 0.001; sikwoz, p = 0.0017; dH2O, p = 0.036).
Yo te evalye efè manje pipi ak ure sou paramèt repwodiktif yo nan byotès ponn ze (Figi 4A) epi yo te envestige yo dapre kantite ze chak femèl te ponn, gwosè ze a, ak lav ki fèk kale nan premye etap la. Kantite ze yo te ponn. Femèl Arab ki te manje ak pipi te varye selon rejim alimantè yo (F(5,222) = 4.38, p = 0.0008; Fig. 4B). Femèl ki te manje ak yon repa pipi 24 èdtan ak san te ponn siyifikativman plis ze pase femèl ki te manje lòt rejim pipi epi yo te sanble ak sa yo ki te manje sikwoz (Fig. 4B). Menm jan an tou, gwosè ze femèl ki te manje ak pipi te ponn yo te varye selon rejim alimantè yo (F(5, 209) = 12.85, p < 0.0001), ak femèl ki te manje ak pipi 24 èdtan ak sikwoz te ponn ze siyifikativman pi gwo pase femèl ki te manje ak dlo, alòske ze femèl ki te manje ak pipi 168 èdtan te siyifikativman pi piti (Fig. 4C). Anplis de sa, rejim pipi a te afekte gwosè lav yo anpil (F(5, 187) = 7.86, p < 0.0001), ak lav ki pi gwo anpil ki soti nan ze ki te ponn pa fi ki te manje ak pipi ki gen 24 ak 72 èdtan pase nan ze ki te ponn pa lav ki te manje ak ze. Fi ki te manje ak dlo ak fi ki te manje ak pipi ki gen 168 èdtan (Figi 4D).
Pèfòmans repwodiktif moustik fi Anopheles arabinis k ap manje pipi bèf ak ure. Moustik fi ki te manje san yo te manje yon rejim alimantè ki gen ladan pipi bèf fre ak pipi bèf ki gen laj, divès konsantrasyon ure, sikwoz (10%), ak dlo distile (H2O) pandan 48 èdtan anvan yo mete yo nan byotèsaj epi jwenn substrats pou ponn ze pandan 48 èdtan (A). Kantite ze (B, E), gwosè ze (C, F) ak gwosè lav (D, G) te afekte anpil pa rejim alimantè yo te bay la (pipi bèf: BD; ure: EG). Mwayèn pou chak paramèt ki mezire lè l sèvi avèk diferan non lèt te siyifikativman diferan youn ak lòt (ANOVA yon sèl chemen lè l sèvi avèk analiz post hoc Tukey a; p < 0.05). Ba erè yo reprezante erè estanda mwayèn nan.
Kòm prensipal konpozan nitwojèn nan pipi a, lè yo bay li kòm yon rejim alimantè bay fi ki te manje san, li te afekte paramèt repwodiktif yo anpil nan tout etid yo. Kantite ze fi ki te manje ure te ponn apre yon repa san, selon konsantrasyon ure a (F(11, 360) = 4.69; p < 0.0001), fi ki te manje konsantrasyon ure ant 134 µM ak 1.34 mM te ponn plis ze (Figi 4E). Fi ki te manje konsantrasyon ure 134 µM oswa plis te ponn ze ki pi gwo pase fi ki te manje dlo (F(10, 4245) = 36.7; p < 0.0001; Figi 4F), epi gwosè lav yo, byenke yo te afekte pa konsantrasyon ure menm jan an nan manman yo (F(10, 3305) = 37.9; p < 0.0001) te pi varyab (Fig. 4G).
Atraksyon jeneral pou ekstrè volatil nan espas tèt pipi bovin ki ap chèche lame. Arabiensis ki te evalye nan olfaktomèt tib an vè a (Fig. 5A) te afekte anpil pa laj pipi a (χ2 = 15.9, df = 4, p = 0.0032; Fig. 5B). Analiz post hoc te montre ke odè pipi rasi a 24 èdtan te lakòz nivo atraksyon siyifikativman pi wo konpare ak tout lòt tretman yo (72 èdtan: p = 0.0060, 168 èdtan: p = 0.012, pentan: p = 0.00070), eksepte pou odè pipi fre a (p = 0.13; Figi 5B). Malgre ke atraksyon jeneral moustik ki souse san an pou odè pipi a pa te siyifikativman diferan (χ2 = 8.78, df = 4, p = 0.067; Fig. 5C), yo te jwenn ke fi sa yo te siyifikativman pi atiran pou ekstrè volatil nan espas tèt konpare ak pipi ki te gen laj 72 èdtan konpare ak gwoup kontwòl la (p = 0.0066; Figi 5C).
Repons konpòtmantal a odè pipi bèf natirèl ak sentetik nan rechèch Anopheles arabianus, yon bèt ki manje san. Dyagram olfaktomèt tib an vè a (A). Atraksyon ekstrè volatil nan espas tèt la ki soti nan pipi bèf fre ak ki gen laj sou moustik lame a (B) ak moustik ki souse san (C). Jwenn reyaksyon tantaki Lord An. Ekstrè espas tèt la ki izole nan pipi bèf fre (D), 24 èdtan (E), 72 èdtan (F), ak 168 èdtan (G) ki gen laj yo montre. Tras deteksyon antèn elektwon (EAD) yo montre chanjman vòltaj an repons a konpoze byoaktif nan espas tèt la ki soti nan kwomatograf gaz la epi ki detekte pa yon detektè iyonizasyon flanm dife (FID). Ba echèl la reprezante anplitid repons lan (mV) kont tan retansyon (s). Pwopriyete yo ak to liberasyon (µg h-1) konpoze byolojikman aktif yo montre. Yon sèl asterisk (*) endike yon repons konsistan ki gen ba anplitid. Doub asterisk (**) endike repons ki pa ka repwodui. Jwenn lame a (H) ak An.arabiensis ki souse san (I) gen diferan apèl pou melanj sentetik odè pipi bèf fre ak pipi bèf ki gen laj. Pwopòsyon mwayèn moustik ki te atire pa diferan non lèt yo te siyifikativman diferan youn ak lòt (ANOVA yon sèl chemen lè l sèvi avèk analiz post hoc Tukey a; p < 0.05). Ba erè yo reprezante erè estanda echèl la.
Ann.arabiensis femèl, 72 èdtan ak 120 èdtan apre repa san, pandan ponn, pa gen okenn preferans ki te montre pou ekstrè volatil nan espas tèt ki soti nan pipi bèf fre ak ki gen laj konpare ak kontwòl pentan (χ2 = 3.07, p > 0.05; Fichye adisyonèl 1: Fig. S1).
Pou Ann.arabiensis fi a, analiz GC-EAD ak GC-MS yo te idantifye uit, sis, twa ak twa konpoze bioaktif (Figi 5D-G). Malgre ke yo te obsève diferans nan kantite konpoze ki te pwovoke repons elektwofizyolojik, pifò nan konpoze sa yo te prezan nan chak ekstrè temèt headspace ki te kolekte nan pipi fre ak pipi ki gen laj. Se poutèt sa, pou chak ekstrè, se sèlman konpoze ki te pwodui yon repons fizyolojik nan antèn fi yo ki pi wo pase papòt la yo te enkli nan analiz ki vin apre yo.
To total liberasyon volatil konpoze bioaktif yo nan koleksyon headspace la ogmante soti nan 29 µg h-1 nan pipi fre pou rive nan 242 µg h-1 nan pipi ki gen laj 168 èdtan, sitou akòz ogmantasyon p-krezòl ak m-fòmaldeyid nan fenòl ansanm ak fenòl. Okontrè, to liberasyon lòt konpoze yo, tankou 2-sikloheksèn-1-on ak dekanal, diminye avèk ogmantasyon laj pipi a, ki te korele avèk diminisyon entansite siyal (abondans) ki te obsève nan kwomatogram nan (Fig. 5D)-G panèl gòch) ak repons fizyolojik a konpoze sa yo (Fig. 5D-G panèl dwat).
An jeneral, melanj sentetik la te gen yon rapò natirèl menm jan an nan konpoze bioaktif idantifye nan ekstrè temèt nan espas tèt pipi fre ak pipi ki gen laj (Fig. 5D-G) epi li pa t sanble pwovoke yon apèl siyifikatif nan rechèch pou yon lame (χ2 = 8.15, df = 4, p = 0.083; Fig. 5H) oswa moustik ki souse san (χ2 = 4.91, df = 4, p = 0.30; Fig. 5I). Sepandan, konparezon post hoc ant tretman yo te montre ke moustik ki t ap chèche lame yo te siyifikativman atiran pou melanj sentetik pipi ki gen laj 24 èdtan an konpare ak kontwòl pentan yo (p = 0.0086; Figi 5H).
Pou evalye wòl konpozan endividyèl yo nan melanj sentetik pipi ki gen laj 24 èdtan, yo te evalye sis melanj soustraktif kont melanj konplè nan tès tib Y a, kote yo te retire konpoze endividyèl yo. Pou moustik k ap chèche lame, soustraksyon konpoze endividyèl yo nan melanj konplè a te gen yon efè siyifikatif sou repons konpòtman yo (χ2 = 19.63, df = 6, p = 0.0032; Fichye adisyonèl 1: Figi S2A), tout melanj soustraktif yo te pi atiran pase melanj konplè a. Okontrè, retire konpoze endividyèl yo nan melanj totalman sentetik la pa t afekte repons konpòtman moustik ki souse san yo (χ2 = 11.38, df = 6, p = 0.077), eksepte dekanal, ki te lakòz nivo ki pi ba konpare ak melanj konplè a Atraksyon (p = 0.022; Fichye adisyonèl 1: Figi S2B).
Nan yon vilaj ki andemik palyaz nan peyi Etyopi, yo te evalye efikasite yon melanj sentetik pipi bèf 24 èdtan pou atire moustik nan kondisyon teren pandan dis nwit (Fig. 6A). Yo te kaptire epi idantifye yon total 4,861 moustik, pami yo 45.7% se te Anthropus.gambiae sl, 18.9% se te Anopheles pharoensis epi 35.4% se te Culex spp. (Fichye adisyonèl 1: Tablo S1). Anopheles arabinis se sèl manm konplèks espès An.Gambian ki idantifye pa analiz PCR. An mwayèn, yo te kaptire 320 moustik pa nwit, pandan tan sa a pyèj ak apè melanj sentetik te kaptire plis moustik pase pyèj pè san melanj (χ2(0, 3196) = 170.0, p < 0.0001). Yo te mete pyèj san apè nan chak nan senk nwit kontwòl yo nan kòmansman, mitan ak fen esè a. Yo te kaptire menm kantite moustik nan chak pè pyèj yo, sa ki endike pa gen okenn patipri ant kay yo (χ2(0, 1665) = 9 × 10-13, p > 0.05) epi pa gen okenn bès nan popilasyon an pandan peryòd etid la. Konpare ak pyèj kontwòl yo, kantite moustik yo te pran nan pyèj ki gen melanj sentetik la te ogmante anpil: moustik k ap chèche lame (χ2(0, 2107) = 138.7, p < 0.0001), moustik ki te bwè san dènyèman (χ2(0, 650) = 32.2, p < 0.0001) ak moustik gwosès (χ2(0, 228) = 6.27, p = 0.0123; Fichye adisyonèl 1: Tablo S1). Sa reflete tou nan kantite total moustik yo te pran: moustik k ap chèche lame > moustik k ap souse san > moustik ansent > moustik semi-ansent > moustik gason.
Evalyasyon sou teren efikasite yon melanj odè pipi bèf sentetik ki dire 24 èdtan. Yo te fè esè sou teren nan sid-santral Etyopi (kat jeyografik), toupre vil Maki (antre), lè l sèvi avèk yon pyèj limyè Sant pou Kontwòl ak Prevansyon Maladi (CDC) (adwat) nan pè kay, ak yon konsepsyon kare laten (imaj ayeryen) (A). Fotopyèj CDC sentetik ki gen apè odè atire epi kaptire arabesk Anopheles fi (B), men pa Anopheles farroes (C), nan yon fason diferan, yon efè fizyolojik ki depann de eta a. Anplis de sa, pyèj sa yo te kaptire yon kantite moustik Culex ki anpil ogmante. (D) Konpare ak kontwòl la. Ba ki sou bò gòch la reprezante endèks seleksyon mwayèn moustik yo te pran nan pè pyèj apè odè (vèt) ak pyèj kontwòl (ouvè) (N = 10), pandan ke ba ki sou bò dwat la reprezante endèks seleksyon mwayèn nan pè pyèj kontwòl (ouvè; N = 5). Asterisk yo endike nivo siyifikasyon estatistik (*p = 0.01 ak ***p < 0.0001)
Yo te kaptire twa espès yo yon fason diferan nan pyèj ki gen melanj sentetik. Pandan y ap chèche yon lame (χ2(1, 1345) = 71.7, p < 0.0001), lè y ap manje san (χ2(1, 517) = 16.7, p < 0.0001) ak lè y ap ansent (χ2(1, 180) = 6.11, p = 0.0134), yo te pran yon moustik .arabiensis nan pyèj la ki te lage melanj sentetik la (Fig. 6B), alòske kantite An pa t diferan. Yo te jwenn moustik Pharoensis nan diferan eta fizyolojik (Fig. 6C). Pou Culex, se sèlman yon ogmantasyon siyifikatif nan kantite moustik k ap chèche lame yo te jwenn nan pyèj ki te gen melanj sentetik la ladan yo (χ2(1,1319) = 12.6, p = 0.0004; Fig. 6D), konpare ak pyèj kontwòl yo.
Yo te itilize pyèj pou moustik malarya ki te sitiye deyò zòn kote moustik yo te ka lame ant sit repwodiksyon yo ak kominote riral yo nan peyi Etyopi pou evalye si moustik malarya yo itilize odè pipi bèf kòm yon siy abita pou lame a. Nan absans siy pou lame a, chalè, avèk oswa san prezans odè pipi bèf, yo pa t kaptire okenn moustik (Fichye adisyonèl 1: Figi S3). Sepandan, nan prezans tanperati ki wo ak odè pipi bèf, yo te atire epi kaptire moustik malarya fi yo, byenke an ti kantite, endepandan de laj pipi a (χ2(5, 25) = 2.29, p = 0.13; Fichye adisyonèl 1: Figi S3). Okontrè, gwoup kontwòl dlo yo pa t kaptire moustik malarya nan tanperati ki wo (Fichye adisyonèl 1: Figi S3).
Moustik malarya yo jwenn epi distribye konpoze ki gen azòt lè yo manje pipi bèf (sa vle di, flak dlo) pou amelyore karakteristik istwa lavi yo, menm jan ak lòt ensèk [2, 4, 24, 25, 26]. Pipi bèf se yon resous renouvlab ki fasil pou jwenn epi ki asosye ak kote vektè malarya yo repoze, tankou etab bèf ak vejetasyon wo toupre kay riral yo ak kote yo ponn. Moustik fi yo lokalize resous sa a grasa sant epi yo kapab kontwole absòpsyon konpoze azòt nan pipi a, tankou ure, prensipal eleman azòt nan pipi a [15, 16]. Tou depan de eta fizyolojik moustik fi a, eleman nitritif ki nan pipi a yo plase pou amelyore aktivite vòl ak siviv moustik fi k ap chèche lame, osi byen ke siviv ak karakteristik repwodiktif moun ki manje san pandan premye sik gonadotropik la. Se poutèt sa, melanj pipi a jwe yon wòl nitrisyonèl enpòtan pou vektè malarya ki fèmen tankou granmoun ki malnouri [8], paske li bay moustik fi yo kapasite pou jwenn konpoze azòt enpòtan lè yo angaje yo nan manje ki pa gen anpil risk. Dekouvèt sa a gen konsekans epidemyolojik enpòtan, paske fi yo ogmante... esperans lavi, aktivite ak pwodiksyon repwodiktif, tout bagay sa yo afekte kapasite vektè a. Anplis de sa, konpòtman sa a ka sib pwogram jesyon vektè nan lavni.