หัวข้อการแก้ไขปัญหา LC บางหัวข้อไม่มีวันล้าสมัย เนื่องจากยังคงมีปัญหาเกิดขึ้นในการใช้งาน LC แม้ว่าเทคโนโลยีเครื่องมือจะพัฒนาขึ้นตามกาลเวลา มีหลายวิธีที่อาจทำให้เกิดปัญหาในระบบ LC และส่งผลให้รูปร่างของพีคไม่ดี เมื่อเกิดปัญหาเกี่ยวกับรูปร่างของพีค รายการสาเหตุที่เป็นไปได้สั้นๆ สำหรับผลลัพธ์เหล่านี้จะช่วยให้เราแก้ไขปัญหาได้ง่ายขึ้น
การเขียนคอลัมน์ “การแก้ไขปัญหา LC” นี้เป็นเรื่องสนุก และการได้คิดถึงหัวข้อต่างๆ ในแต่ละเดือนก็เป็นเรื่องดี เพราะบางหัวข้อก็ไม่เคยตกยุค ในขณะที่ในสาขาการวิจัยโครมาโทกราฟี หัวข้อหรือแนวคิดบางอย่างอาจล้าสมัยไปเมื่อถูกแทนที่ด้วยแนวคิดใหม่ที่ดีกว่า แต่ในสาขาการแก้ไขปัญหา นับตั้งแต่บทความแก้ไขปัญหาฉบับแรกปรากฏในวารสารนี้ (LC Journal ในขณะนั้น) บางหัวข้อก็ยังคงมีความเกี่ยวข้องอยู่) ในปี 1983 (1) ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา ฉันได้เน้นส่วนการแก้ไขปัญหา LC หลายส่วนไปที่แนวโน้มร่วมสมัยที่มีผลต่อโครมาโทกราฟีของเหลว (LC) (ตัวอย่างเช่น การเปรียบเทียบความเข้าใจของเราเกี่ยวกับผลกระทบของความดันต่อการกักเก็บ [2] ความก้าวหน้าใหม่ๆ) การตีความผลลัพธ์ LC ของเรา และวิธีการแก้ไขปัญหาด้วยเครื่องมือ LC ที่ทันสมัย ​​ในบทความประจำเดือนนี้ ฉันจะสานต่อชุดบทความ (3) ที่เริ่มต้นในเดือนธันวาคม 2021 ซึ่งเน้นไปที่หัวข้อ “ความเป็นความตาย” ของการแก้ไขปัญหา LC — องค์ประกอบที่ยอดเยี่ยมสำหรับผู้แก้ไขปัญหาทุกคนนั้นมีความสำคัญ ไม่ว่าระบบที่เราใช้จะมีอายุเท่าใดก็ตาม หัวข้อหลักของชุดนี้มีความเกี่ยวข้องอย่างมาก จากแผนภูมิ “LC Troubleshooting Guide” ที่มีชื่อเสียงของ LCGC (4) ที่แขวนอยู่ในห้องปฏิบัติการหลายแห่ง สำหรับส่วนที่สามของชุดบทความนี้ ผมเลือกที่จะเน้นไปที่ปัญหาที่เกี่ยวข้องกับรูปร่างของพีคหรือลักษณะของพีค ที่น่าทึ่งคือ แผนภูมิบนผนังระบุสาเหตุที่เป็นไปได้ถึง 44 ประการที่ทำให้รูปร่างของพีคไม่ดี! เราไม่สามารถพิจารณาปัญหาทั้งหมดเหล่านี้โดยละเอียดในบทความเดียวได้ ดังนั้นในบทความแรกนี้ ผมจะเน้นไปที่บางปัญหาที่ผมเห็นบ่อยที่สุด ผมหวังว่าผู้ใช้ LC ทั้งรุ่นใหม่และรุ่นเก่าจะพบเคล็ดลับและข้อเตือนใจที่เป็นประโยชน์ในหัวข้อสำคัญนี้
ผมพบว่าตัวเองตอบคำถามเกี่ยวกับการแก้ไขปัญหาด้วยคำว่า “อะไรก็เป็นไปได้” มากขึ้นเรื่อยๆ คำตอบนี้อาจดูง่ายเมื่อพิจารณาถึงสิ่งที่สังเกตได้ยาก แต่ผมพบว่ามันเหมาะสมในหลายๆ ครั้ง เนื่องจากมีสาเหตุมากมายที่ทำให้รูปทรงของพีคไม่ดี จึงเป็นสิ่งสำคัญที่จะต้องเปิดใจกว้างเมื่อพิจารณาว่าปัญหาอาจเป็นอะไร และสามารถจัดลำดับความสำคัญของสาเหตุที่เป็นไปได้เพื่อเริ่มต้นการแก้ไขปัญหา โดยมุ่งเน้นไปที่ความเป็นไปได้ที่พบบ่อยที่สุด จุดนี้สำคัญมาก
ขั้นตอนสำคัญในการแก้ไขปัญหาใดๆ — แต่ผมคิดว่าขั้นตอนนี้ถูกมองข้ามไป — คือการตระหนักว่ามีปัญหาที่ต้องแก้ไข การตระหนักว่ามีปัญหามักหมายถึงการตระหนักว่าสิ่งที่เกิดขึ้นกับเครื่องมือนั้นแตกต่างจากความคาดหวังของเรา ซึ่งถูกกำหนดโดยทฤษฎี ความรู้เชิงประจักษ์ และประสบการณ์ (5) “รูปร่างยอด” ที่กล่าวถึงในที่นี้ไม่ได้หมายถึงเฉพาะรูปร่างของยอด (สมมาตร ไม่สมมาตร เรียบ ฟู ขอบนำ หาง ฯลฯ) แต่ยังรวมถึงความกว้างด้วย ความคาดหวังของเราเกี่ยวกับรูปร่างยอดที่แท้จริงนั้นเรียบง่าย ทฤษฎี (6) สนับสนุนความคาดหวังในตำราเรียนว่าในกรณีส่วนใหญ่ ยอดโครมาโทกราฟีควรสมมาตรและสอดคล้องกับรูปร่างของการกระจายแบบเกาส์เซียน ดังแสดงในรูปที่ 1a สิ่งที่เราคาดหวังจากความกว้างของยอดเป็นประเด็นที่ซับซ้อนกว่า และเราจะกล่าวถึงหัวข้อนี้ในบทความต่อไป รูปร่างยอดอื่นๆ ในรูปที่ 1 แสดงให้เห็นถึงความเป็นไปได้อื่นๆ ที่สามารถสังเกตได้ — กล่าวอีกนัยหนึ่งคือ บางวิธีที่สิ่งต่างๆ อาจผิดพลาดได้ ในส่วนที่เหลือของบทความนี้ เราจะใช้เวลาพูดคุยเกี่ยวกับตัวอย่างเฉพาะของสถานการณ์ที่อาจนำไปสู่รูปทรงประเภทต่างๆ เหล่านี้
บางครั้งอาจไม่พบพีคใดๆ เลยในโครมาโทแกรมในตำแหน่งที่คาดว่าจะมีการปรากฏของพีค แผนภูมิบนผนังด้านบนแสดงให้เห็นว่า การไม่พบพีค (โดยสมมติว่าตัวอย่างมีสารวิเคราะห์เป้าหมายในความเข้มข้นที่ควรทำให้การตอบสนองของเครื่องตรวจจับเพียงพอที่จะมองเห็นพีคเหนือสัญญาณรบกวน) มักเกี่ยวข้องกับปัญหาของเครื่องมือหรือสภาวะของเฟสเคลื่อนที่ที่ไม่ถูกต้อง (หากพบพีคเลย) พีคมักจะ "อ่อนเกินไป" ตารางที่ 1 แสดงรายการปัญหาและวิธีแก้ไขที่เป็นไปได้ในหมวดหมู่นี้
ดังที่กล่าวมาข้างต้น คำถามที่ว่าควรยอมรับการขยายตัวของยอดพีคมากน้อยเพียงใดก่อนที่จะให้ความสนใจและพยายามแก้ไขนั้นเป็นหัวข้อที่ซับซ้อน ซึ่งผมจะกล่าวถึงในบทความต่อไป ประสบการณ์ของผมคือ การขยายตัวของยอดพีคอย่างมีนัยสำคัญมักจะมาพร้อมกับการเปลี่ยนแปลงรูปร่างของยอดพีคอย่างมีนัยสำคัญ และการเกิดหางของยอดพีคนั้นพบได้บ่อยกว่าการเกิดยอดพีคก่อนหน้าหรือการแยกตัว อย่างไรก็ตาม ยอดพีคที่สมมาตรโดยทั่วไปก็อาจขยายตัวได้เช่นกัน ซึ่งอาจเกิดจากสาเหตุหลายประการ:
ประเด็นเหล่านี้ได้รับการกล่าวถึงอย่างละเอียดในฉบับก่อนหน้าของ Troubleshooting LC แล้ว และผู้อ่านที่สนใจในหัวข้อเหล่านี้สามารถอ้างอิงถึงบทความก่อนหน้าเหล่านั้นเพื่อหาข้อมูลเกี่ยวกับสาเหตุที่แท้จริงและแนวทางแก้ไขที่เป็นไปได้สำหรับปัญหาเหล่านี้ รายละเอียดเพิ่มเติม
การเกิดหางพีค การเกิดหน้าพีค และการแยกตัวของพีค อาจเกิดจากปรากฏการณ์ทางเคมีหรือทางกายภาพ และรายการของวิธีแก้ปัญหาที่เป็นไปได้จะแตกต่างกันไปอย่างมาก ขึ้นอยู่กับว่าเรากำลังเผชิญกับปัญหาทางเคมีหรือทางกายภาพ บ่อยครั้ง การเปรียบเทียบพีคต่างๆ ในโครมาโทแกรม จะช่วยให้คุณพบเบาะแสสำคัญเกี่ยวกับสาเหตุของปัญหา หากพีคทั้งหมดในโครมาโทแกรมมีรูปร่างคล้ายกัน สาเหตุส่วนใหญ่ไม่น่าจะเกิดจากปัจจัยทางกายภาพ หากมีเพียงพีคเดียวหรือสองสามพีคที่ได้รับผลกระทบ แต่ส่วนที่เหลือดูปกติ สาเหตุส่วนใหญ่น่าจะเกิดจากปฏิกิริยาทางเคมี
สาเหตุทางเคมีของการเกิดหางพีคมีความซับซ้อนเกินกว่าจะอธิบายโดยย่อในที่นี้ ผู้อ่านที่สนใจสามารถดูรายละเอียดเพิ่มเติมได้ใน “LC Troubleshooting” ฉบับล่าสุด (10) อย่างไรก็ตาม วิธีง่ายๆ ที่ควรลองคือลดมวลของสารวิเคราะห์ที่ฉีดเข้าไปและดูว่ารูปร่างของพีคดีขึ้นหรือไม่ ถ้าดีขึ้น แสดงว่าปัญหาคือ “มวลมากเกินไป” ในกรณีนี้ วิธีการจะต้องจำกัดให้ฉีดสารวิเคราะห์ที่มีมวลน้อย หรือต้องเปลี่ยนเงื่อนไขทางโครมาโทกราฟีเพื่อให้ได้รูปร่างพีคที่ดีแม้จะฉีดสารวิเคราะห์ที่มีมวลมากขึ้นก็ตาม
นอกจากนี้ยังมีสาเหตุทางกายภาพหลายประการที่อาจทำให้เกิดการลากหางของพีค ผู้อ่านที่สนใจการอภิปรายโดยละเอียดเกี่ยวกับความเป็นไปได้ต่างๆ สามารถดูได้จาก “LC Troubleshooting” ฉบับล่าสุด (11) หนึ่งในสาเหตุทางกายภาพที่พบบ่อยที่สุดของการลากหางของพีคคือการเชื่อมต่อที่ไม่ดี ณ จุดระหว่างหัวฉีดและตัวตรวจจับ (12) ตัวอย่างที่รุนแรงแสดงในรูปที่ 1d ซึ่งได้จากการทดลองในห้องปฏิบัติการของฉันเมื่อไม่กี่สัปดาห์ก่อน ในกรณีนี้ เราสร้างระบบที่มีวาล์วฉีดแบบใหม่ที่เราไม่เคยใช้มาก่อน และติดตั้งลูปฉีดปริมาตรเล็กที่มีเฟอร์รูลที่หล่อขึ้นบนท่อแคปิลลารีสแตนเลส หลังจากการทดลองแก้ไขปัญหาเบื้องต้น เราพบว่าความลึกของพอร์ตในสเตเตอร์ของวาล์วฉีดนั้นลึกกว่าที่เราเคยใช้มาก ส่งผลให้มีปริมาตรตายตัวขนาดใหญ่ที่ด้านล่างของพอร์ต ปัญหานี้สามารถแก้ไขได้ง่ายโดยการเปลี่ยนลูปฉีดด้วยท่ออื่น เราสามารถปรับเฟอร์รูลไปยังตำแหน่งที่เหมาะสมเพื่อกำจัดปริมาตรตายตัวที่ด้านล่างของพอร์ตได้
ลักษณะยอดพีคที่ยื่นออกมาดังแสดงในรูปที่ 1e อาจเกิดจากปัญหาทางกายภาพหรือทางเคมีก็ได้ สาเหตุทางกายภาพที่พบบ่อยของการเกิดยอดพีคที่ยื่นออกมาคือ การจัดเรียงอนุภาคในคอลัมน์ไม่แน่น หรืออนุภาคมีการจัดเรียงตัวใหม่เมื่อเวลาผ่านไป เช่นเดียวกับการเกิดยอดพีคที่ลากยาวเนื่องจากปรากฏการณ์ทางกายภาพนี้ วิธีที่ดีที่สุดในการแก้ไขคือการเปลี่ยนคอลัมน์และทำการวิเคราะห์ต่อไป โดยพื้นฐานแล้ว รูปทรงยอดพีคที่ยื่นออกมาซึ่งมีต้นกำเนิดทางเคมี มักเกิดจากสิ่งที่เรียกว่าสภาวะการกักเก็บแบบ "ไม่เป็นเชิงเส้น" ภายใต้สภาวะที่เหมาะสม (เชิงเส้น) ปริมาณของสารวิเคราะห์ที่ถูกกักเก็บโดยเฟสคงที่ (ดังนั้น ปัจจัยการกักเก็บ) จะมีความสัมพันธ์เชิงเส้นกับความเข้มข้นของสารวิเคราะห์ในคอลัมน์ ในทางโครมาโทกราฟี หมายความว่าเมื่อมวลของสารวิเคราะห์ที่ฉีดเข้าไปในคอลัมน์เพิ่มขึ้น ยอดพีคจะสูงขึ้น แต่ไม่กว้างขึ้น ความสัมพันธ์นี้จะถูกทำลายเมื่อพฤติกรรมการกักเก็บไม่เป็นเชิงเส้น และยอดพีคจะไม่เพียงแต่สูงขึ้นเท่านั้น แต่ยังกว้างขึ้นด้วยเมื่อฉีดมวลมากขึ้น นอกจากนี้ รูปทรงที่ไม่เป็นเชิงเส้นยังกำหนดรูปทรงของยอดพีคในโครมาโทกราฟี ส่งผลให้เกิดการยื่นออกมาหรือลากยาว เช่นเดียวกับการโอเวอร์โหลดมวลที่ทำให้เกิดการลากหางของพีค (10) การนำหน้าของพีคที่เกิดจากการกักเก็บที่ไม่เป็นเชิงเส้นยังสามารถวินิจฉัยได้โดยการลดมวลของสารวิเคราะห์ที่ฉีดเข้าไป หากรูปร่างของพีคดีขึ้น จะต้องปรับเปลี่ยนวิธีการเพื่อไม่ให้เกินคุณภาพการฉีดที่ทำให้เกิดขอบนำหน้า หรือต้องเปลี่ยนเงื่อนไขโครมาโทกราฟีเพื่อลดพฤติกรรมนี้ให้น้อยที่สุด
บางครั้งเราสังเกตเห็นสิ่งที่ดูเหมือนจะเป็นยอดพีคที่ "แยกออก" ดังแสดงในรูปที่ 1f ขั้นตอนแรกในการแก้ปัญหานี้คือการพิจารณาว่ารูปร่างของยอดพีคเกิดจากการร่วมชะล้างบางส่วนหรือไม่ (เช่น การมีสารประกอบสองชนิดที่แตกต่างกันแต่ชะล้างออกมาใกล้กัน) หากมีสารวิเคราะห์สองชนิดที่แตกต่างกันชะล้างออกมาใกล้กันจริง ๆ ก็เป็นเรื่องของการปรับปรุงความละเอียด (ตัวอย่างเช่น โดยการเพิ่มความเลือกสรร การกักเก็บ หรือจำนวนเพลท) และยอดพีคที่ "แยกออก" ที่ปรากฏนั้นเกี่ยวข้องกับประสิทธิภาพทางกายภาพ ประสิทธิภาพไม่เกี่ยวข้องกับคอลัมน์เอง บ่อยครั้งเบาะแสที่สำคัญที่สุดในการตัดสินใจนี้คือว่ายอดพีคทั้งหมดในโครมาโตแกรมแสดงรูปร่างที่แยกออกหรือไม่ หรือเพียงหนึ่งหรือสองยอด หากมีเพียงหนึ่งหรือสองยอด อาจเป็นปัญหาการร่วมชะล้าง หากยอดพีคทั้งหมดแยกออก อาจเป็นปัญหาทางกายภาพ ซึ่งส่วนใหญ่เกี่ยวข้องกับคอลัมน์เอง
ยอดพีคที่แยกออกซึ่งเกี่ยวข้องกับคุณสมบัติทางกายภาพของคอลัมน์เอง มักเกิดจากฟริตทางเข้าหรือทางออกที่อุดตันบางส่วน หรือการจัดเรียงตัวใหม่ของอนุภาคในคอลัมน์ ทำให้เฟสเคลื่อนที่ไหลเร็วกว่าเฟสเคลื่อนที่ในบริเวณบางส่วนของการก่อตัวของช่องคอลัมน์ในบริเวณอื่นๆ (11) บางครั้งฟริตที่อุดตันบางส่วนสามารถแก้ไขได้โดยการกลับทิศทางการไหลผ่านคอลัมน์ อย่างไรก็ตาม จากประสบการณ์ของฉัน วิธีนี้มักเป็นวิธีแก้ปัญหาในระยะสั้นมากกว่าระยะยาว ซึ่งมักเป็นอันตรายถึงชีวิตกับคอลัมน์สมัยใหม่หากอนุภาครวมตัวกันใหม่ภายในคอลัมน์ ณ จุดนี้ ทางที่ดีที่สุดคือควรเปลี่ยนคอลัมน์และดำเนินการต่อ
จุดสูงสุดในรูปที่ 1g ซึ่งมาจากกรณีล่าสุดในห้องปฏิบัติการของผมเอง มักบ่งชี้ว่าสัญญาณสูงมากจนถึงขีดจำกัดสูงสุดของช่วงการตอบสนอง สำหรับเครื่องตรวจจับการดูดกลืนแสง (UV-vis ในกรณีนี้) เมื่อความเข้มข้นของสารวิเคราะห์สูงมาก สารวิเคราะห์จะดูดกลืนแสงส่วนใหญ่ที่ผ่านเซลล์การไหลของเครื่องตรวจจับ ทำให้เหลือแสงน้อยมากที่จะตรวจจับได้ ภายใต้สภาวะเหล่านี้ สัญญาณไฟฟ้าจากโฟโตดีเทคเตอร์จะได้รับอิทธิพลอย่างมากจากแหล่งกำเนิดสัญญาณรบกวนต่างๆ เช่น แสงกระจัดกระจายและ "กระแสไฟฟ้ามืด" ทำให้สัญญาณดู "ไม่ชัด" และไม่ขึ้นอยู่กับความเข้มข้นของสารวิเคราะห์ เมื่อเกิดเหตุการณ์เช่นนี้ ปัญหามักจะแก้ไขได้ง่ายโดยการลดปริมาณการฉีดสารวิเคราะห์—ลดปริมาณการฉีด เจือจางตัวอย่าง หรือทั้งสองอย่าง
ในการเรียนวิชาโครมาโทกราฟี เราใช้สัญญาณจากตัวตรวจจับ (เช่น แกน y ในโครมาโทแกรม) เป็นตัวบ่งชี้ความเข้มข้นของสารวิเคราะห์ในตัวอย่าง ดังนั้นจึงดูแปลกที่เห็นโครมาโทแกรมที่มีสัญญาณต่ำกว่าศูนย์ เพราะการตีความอย่างง่ายคือแสดงว่าความเข้มข้นของสารวิเคราะห์เป็นลบ ซึ่งแน่นอนว่าเป็นไปไม่ได้ในทางกายภาพ จากประสบการณ์ของผม พีคที่เป็นลบมักพบเห็นได้บ่อยที่สุดเมื่อใช้ตัวตรวจจับการดูดกลืนแสง (เช่น UV-vis)
ในกรณีนี้ ยอดลบหมายความว่าโมเลกุลที่แยกตัวออกจากคอลัมน์ดูดซับแสงน้อยกว่าเฟสเคลื่อนที่ทันทีก่อนและหลังยอด ซึ่งอาจเกิดขึ้นได้ เช่น เมื่อใช้ความยาวคลื่นการตรวจจับที่ค่อนข้างต่ำ (<230 นาโนเมตร) และสารเติมแต่งเฟสเคลื่อนที่ที่ดูดซับแสงส่วนใหญ่ที่ความยาวคลื่นเหล่านี้ สารเติมแต่งดังกล่าวอาจเป็นส่วนประกอบของตัวทำละลายเฟสเคลื่อนที่ เช่น เมทานอล หรือส่วนประกอบของบัฟเฟอร์ เช่น อะซิเตตหรือฟอร์เมต อันที่จริงแล้ว เราสามารถใช้ยอดลบเพื่อเตรียมเส้นโค้งการสอบเทียบและรับข้อมูลเชิงปริมาณที่แม่นยำได้ ดังนั้นจึงไม่มีเหตุผลพื้นฐานที่จะหลีกเลี่ยงยอดลบโดยสิ้นเชิง (วิธีนี้บางครั้งเรียกว่า “การตรวจจับ UV ทางอ้อม”) (13) อย่างไรก็ตาม หากเราต้องการหลีกเลี่ยงยอดลบโดยสิ้นเชิง ในกรณีของการตรวจจับการดูดกลืนแสง วิธีที่ดีที่สุดคือการใช้ความยาวคลื่นการตรวจจับที่แตกต่างกันเพื่อให้สารวิเคราะห์ดูดซับแสงได้มากกว่าเฟสเคลื่อนที่ หรือเปลี่ยนองค์ประกอบของเฟสเคลื่อนที่เพื่อให้ดูดซับแสงน้อยกว่าสารวิเคราะห์
อาจเกิดพีคลบขึ้นได้เมื่อใช้การตรวจวัดดัชนีหักเห (RI) ในกรณีที่ดัชนีหักเหของส่วนประกอบอื่นๆ นอกเหนือจากสารที่ต้องการวิเคราะห์ในตัวอย่าง เช่น ตัวทำละลาย มีค่าแตกต่างจากดัชนีหักเหของเฟสเคลื่อนที่ ปรากฏการณ์นี้ยังเกิดขึ้นกับการตรวจวัดด้วย UV-vis ด้วย แต่ผลกระทบนี้มักจะลดลงเมื่อเทียบกับการตรวจวัดด้วย RI ในทั้งสองกรณี สามารถลดพีคลบได้โดยการทำให้องค์ประกอบของตัวอย่างมีความใกล้เคียงกับองค์ประกอบของเฟสเคลื่อนที่มากขึ้น
ในบทที่สามเกี่ยวกับหัวข้อพื้นฐานของการแก้ไขปัญหา LC ผมได้กล่าวถึงสถานการณ์ที่รูปร่างของยอดพีคที่สังเกตได้แตกต่างจากรูปร่างของยอดพีคที่คาดหวังหรือปกติ การแก้ไขปัญหาอย่างมีประสิทธิภาพเริ่มต้นด้วยความรู้เกี่ยวกับรูปร่างของยอดพีคที่คาดหวัง (โดยอิงจากทฤษฎีหรือประสบการณ์ก่อนหน้านี้กับวิธีการที่มีอยู่) เพื่อให้ความเบี่ยงเบนจากความคาดหวังเหล่านี้ชัดเจน ปัญหาเกี่ยวกับรูปร่างของยอดพีคมีสาเหตุที่เป็นไปได้หลายประการ (กว้างเกินไป มีหางยาว มีขอบนำ ฯลฯ) ในบทนี้ ผมจะกล่าวถึงรายละเอียดเกี่ยวกับสาเหตุที่ผมพบเห็นบ่อยที่สุด การรู้รายละเอียดเหล่านี้เป็นจุดเริ่มต้นที่ดีในการแก้ไขปัญหา แต่ไม่ได้ครอบคลุมความเป็นไปได้ทั้งหมด ผู้อ่านที่สนใจรายการสาเหตุและวิธีแก้ปัญหาที่ละเอียดมากขึ้นสามารถดูได้จากแผนภูมิ “คู่มือการแก้ไขปัญหา LC” ของ LCGC
(4) แผนภูมิผนัง “LC Troubleshooting Guide” ของ LCGC https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021)
(6) A. Felinger, การวิเคราะห์ข้อมูลและการประมวลผลสัญญาณในโครมาโทกราฟี (Elsevier, นิวยอร์ก, NY, 1998), หน้า 43-96
(8) Wahab MF, Dasgupta PK, Kadjo AF และ Armstrong DW, Anal.Chim.Journal.Rev. 907, 31–44 (2016).https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043