Ụfọdụ isiokwu nsogbu LC anaghị adịte aka, ebe ọ bụ na enwere nsogbu na omume LC, ọbụlagodi na teknụzụ ngwaọrụ na-akawanye mma ka oge na-aga. E nwere ọtụtụ ụzọ nsogbu nwere ike isi pụta na sistemụ LC ma mechaa nwee ọdịdị kachasị elu. Mgbe nsogbu metụtara ọdịdị elu bilitere, obere ndepụta nke ihe nwere ike ịkpata nsonaazụ ndị a na-enyere aka mee ka ahụmịhe nsogbu anyị dị mfe.
Ọ dị m ezigbo mma ide kọlụm "LC Troubleshooting" a ma na-eche echiche gbasara isiokwu kwa ọnwa, n'ihi na ụfọdụ isiokwu anaghị apụ apụ n'ụdị. Mgbe anyị nọ n'ọhịa nke chromatography, ụfọdụ isiokwu ma ọ bụ echiche na-aghọ ihe ochie ka echiche ọhụrụ na nke ka mma na-anọchi ha, n'ọhịa nke nsogbu, ebe ọ bụ na isiokwu nchọpụta nsogbu mbụ pụtara na akwụkwọ akụkọ a (LC Journal n'oge ahụ) ebe ụfọdụ isiokwu ka dị mkpa) na 1983(1). N'ime afọ ole na ole gara aga, elekwasịla m anya na ọtụtụ ngalaba Nchọpụta Nsogbu LC na usoro ọgbara ọhụrụ na-emetụta mmiri mmiri chromatography (LC) (dịka ọmụmaatụ, ntụnyere nke nghọta anyị banyere mmetụta nke nrụgide na njigide [2] Ọganihu Ọhụrụ) Nkọwa anyị nke nsonaazụ LC na otu esi edozi nsogbu na ngwa LC ọgbara ọhụrụ. Na nkebi nke ọnwa a, m na-aga n'ihu na usoro m (3), nke malitere na Disemba 2021, nke lekwasịrị anya na ụfọdụ isiokwu "ndụ na ọnwụ" nke nsogbu LC - ihe ndị dị mma maka onye na-enye nsogbu ọ bụla dị mkpa, n'agbanyeghị afọ nke sistemụ anyị na-eji. Isi isiokwu nke usoro a dị oke mkpa na LCGC ama ama. Chaatị mgbidi "Ntuziaka Nchọpụta Nsogbu LC" (4) nke dị n'ọtụtụ ụlọ nyocha. Maka akụkụ nke atọ nke usoro a, ahọpụtara m ilekwasị anya na nsogbu ndị metụtara ọdịdị elu ma ọ bụ njirimara elu. N'ụzọ dị ịtụnanya, eserese mgbidi depụtara ihe dị iche iche 44 nwere ike ịkpata ọdịdị elu adịghị mma! Anyị enweghị ike ịtụle nsogbu ndị a niile nke ọma n'otu isiokwu, yabụ na nkeji mbụ a na isiokwu ahụ, m ga-elekwasị anya na ụfọdụ n'ime ndị m na-ahụkarị. Enwere m olileanya na ndị ọrụ LC na-eto eto na ndị agadi ga-achọta ụfọdụ ndụmọdụ na ihe ncheta bara uru na isiokwu dị mkpa a.
Ana m achọta onwe m ka m na-aza ajụjụ ndị na-egosi nsogbu site n'iji "ihe ọ bụla kwere omume". Azịza a nwere ike iyi ihe dị mfe mgbe a na-atụle ihe ndị siri ike ịkọwa, mana achọpụtara m na ọ na-adabara m mgbe niile. N'ihi ọtụtụ ihe nwere ike ịkpata ọdịdị elu adịghị mma, ọ dị mkpa ka anyị lekwasị anya n'ihe nsogbu ahụ nwere ike ịbụ, nakwa ka anyị nwee ike ibu ụzọ lekwasị anya n'ihe ndị nwere ike ịkpata nsogbu anyị iji malite ọrụ anyị na-eme iji dozie nsogbu ahụ, na-elekwasị anya n'ihe ndị a na-ahụkarị, isi ihe a dị oke mkpa.
Nzọụkwụ dị mkpa n'ime mmega nsogbu ọ bụla - mana nke m chere na a naghị atụle nke ọma - bụ ịghọta na enwere nsogbu nke a ga-edozi. Ịghọta na enwere nsogbu na-apụtakarị ịghọta na ihe na-eme ngwa ahụ dị iche na atụmanya anyị, nke ozizi, ihe ọmụma ihe atụ, na ahụmịhe na-akpụzi (5). "Ụdị elu" a na-ezo aka na ya ebe a na-ezo aka ọ bụghị naanị na ọdịdị nke elu (symmetrical, asymmetrical, ire ụtọ, fluffy, leading end, tailing, wdg), kamakwa na obosara. Atụmanya anyị maka ọdịdị elu dị mfe. Ozizi (6) na-akwado atụmanya akwụkwọ na, n'ọtụtụ oge, elu chromatographic kwesịrị ịdị nhata ma kwekọọ na ọdịdị nke nkesa Gaussian, dịka egosiri na Foto 1a. Ihe anyị na-atụ anya na obosara elu bụ okwu dị mgbagwoju anya karị, anyị ga-atụlekwa isiokwu a n'isiokwu n'ọdịnihu. Ụdị elu ndị ọzọ dị na Foto 1 na-egosi ụfọdụ ohere ndị ọzọ enwere ike ịhụ - n'ikwu ya n'ụzọ ọzọ, ụfọdụ n'ime ụzọ ihe nwere ike isi ghara ịdị mma. Na nke fọdụrụ na nkeji a, anyị ga-etinye oge na-atụle ụfọdụ ihe atụ kpọmkwem nke ọnọdụ ndị ahụ nwere ike ibute ụdị ọdịdị ndị a.
Mgbe ụfọdụ, a naghị ahụ oke elu ma ọlị na chromatogram ebe a na-atụ anya na a ga-ewepụ ha. Chaatị mgbidi dị n'elu na-egosi na enweghị oke elu (ọ bụrụ na ihe nlele ahụ nwere ihe nyocha ebumnuche n'ihe gbasara mkpokọta nke kwesịrị ime ka nzaghachi nchọpụta zuru oke iji hụ ya n'elu mkpọtụ) na-abụkarị ihe metụtara nsogbu ngwaọrụ ma ọ bụ ọnọdụ nkebi mkpanaka na-ezighi ezi (ọ bụrụ na a hụ ya ma ọlị). oke elu, nke na-abụkarị "adịghị ike"). Enwere ike ịchọta obere ndepụta nke nsogbu na ngwọta nwere ike ime na ngalaba a na Tebụl I.
Dịka ekwuru n'elu, ajụjụ nke etu e kwesịrị isi nabata oke ịgbasa tupu i lebara anya ma gbalịa idozi ya bụ isiokwu dị mgbagwoju anya m ga-atụle n'isiokwu n'ọdịnihu. Ahụmịhe m bụ na nnukwu ịgbasa oke na-esokarị mgbanwe dị ukwuu na ọdịdị elu, oke ịgbasa oke na-abụkarị ihe a na-ahụkarị karịa tupu oke ma ọ bụ nkewa. Agbanyeghị, a na-agbasakwa oke elu ndị a na-akpọ symmetrical, nke nwere ike ịkpata site na ihe ole na ole dị iche iche:
A tụlere nke ọ bụla n'ime nsogbu ndị a nke ọma na mbipụta ndị gara aga nke Nchọpụta Nsogbu LC, ndị na-agụ akwụkwọ nwere mmasị na isiokwu ndị a nwere ike ịga na akụkọ ndị gara aga maka ozi gbasara ihe kpatara ya na ihe ngwọta nwere ike isi nye nsogbu ndị a. Nkọwa ndị ọzọ.
Oke ọdụ, oke ihu, na nkewa nwere ike ịbụ ihe sitere na ihe ndị dị na kemịkalụ ma ọ bụ nke anụ ahụ, ndepụta nke ihe ngwọta nwere ike inye nsogbu ndị a dịgasị iche iche, dabere ma anyị na-emeso nsogbu kemịkalụ ma ọ bụ nke anụ ahụ. Ọtụtụ mgbe, site n'ịtụnyere oke dị iche iche na chromatogram, ị nwere ike ịchọta ihe akaebe dị mkpa gbasara nke kpatara ya. Ọ bụrụ na elu niile dị na chromatogram gosipụtara ụdị yiri nke ahụ, ihe kpatara ya nwere ike ọ bụghị nke anụ ahụ. Ọ bụrụ na naanị otu ma ọ bụ ole na ole elu emetụtara, mana ndị ọzọ dị mma, ihe kpatara ya nwere ike ịbụ kemịkalụ.
Ihe ndị na-akpata oke tailing dị oke mgbagwoju anya nke na a gaghị atụle ya n'oge a. Onye na-agụ akwụkwọ nwere mmasị na-aga na mbipụta ọhụrụ nke "Nchọpụta Nsogbu LC" maka mkparịta ụka miri emi (10). Agbanyeghị, ihe dị mfe ịnwa bụ ibelata oke nke onye nyocha a gbara ọgwụ ma hụ ma ọdịdị elu ahụ ọ ka mma. Ọ bụrụ otu a, mgbe ahụ nke a bụ ezigbo ihe na-egosi na nsogbu ahụ bụ "oke ibu". N'okwu a, a ga-ejedebe usoro ahụ naanị n'ịgba obere oke analyte, ma ọ bụ a ga-agbanwe ọnọdụ chromatographic ka e wee nwee ike nweta ọdịdị elu dị mma ọbụlagodi na a gbara nnukwu oke.
E nwekwara ọtụtụ ihe nwere ike ime ka ọ bụrụ na ọ na-aga n'ihu. Ndị na-agụ akwụkwọ nwere mmasị na mkparịta ụka zuru ezu banyere ihe ndị nwere ike ime ka ọ ga-ekwe omume na mbipụta ọzọ nke "Nchọpụta Nsogbu LC" (11) n'oge na-adịbeghị anya. Otu n'ime ihe ndị na-akpatakarị ọ na-aga n'ihu bụ njikọ na-adịghị mma n'ebe dị n'etiti ọ na-aga n'ihu na ihe nchọpụta (12). E gosiri ihe atụ dị oke njọ na Foto 1d, nke enwetara na ụlọ nyocha m izu ole na ole gara aga. N'okwu a, anyị wuru sistemụ nwere valvụ ọ na-aga n'ihu nke anyị na-ejighịbu, ma tinye obere oghere ọ na-aga n'ihu na ferrule nke kpụrụ n'elu capillary ígwè anaghị agba nchara. Mgbe anyị mechara ụfọdụ nnwale nsogbu mbụ, anyị ghọtara na omimi ọdụ ụgbọ mmiri dị na stator valvụ ọ na-aga n'ihu dị omimi karịa ka anyị na-emebu, nke na-ebute nnukwu olu nwụrụ anwụ na ala ọdụ ụgbọ mmiri ahụ. A na-edozi nsogbu a ngwa ngwa site na iji tube ọzọ dochie oghere ọ na-aga n'ihu, anyị nwere ike ịgbanwe ferrule ahụ ka ọ bụrụ ọnọdụ kwesịrị ekwesị iji wepụ olu nwụrụ anwụ na ala ọdụ ụgbọ mmiri ahụ.
Nsogbu anụ ahụ ma ọ bụ kemịkalụ nwekwara ike ịkpata ya. Ihe na-akpatakarị akụkụ elu nke kọlụm ahụ bụ na ihe ndị ahụ ejupụtaghị nke ọma, ma ọ bụ na ihe ndị ahụ agbanweela ka oge na-aga. Dịka ọ dị na ọdụ elu nke ihe a na-ahụ anya kpatara, ụzọ kachasị mma isi dozie nke a bụ ịgbanwe kọlụm ahụ ma nọgide na-aga. N'ụzọ bụ isi, ụdị elu elu nke nwere isi kemịkalụ na-esikarị na ihe anyị na-akpọ ọnọdụ njide "na-abụghị ahịrị". N'okpuru ọnọdụ dị mma (ahịrị), ọnụọgụ nke analyte nke oge na-anọpụ iche (ya mere, ihe njide) na-ejikọta n'ahịrị na mkpokọta nke analyte na kọlụm ahụ. N'ụzọ Chromatographic, nke a pụtara na ka oke nke analyte a gbanyere n'ime kọlụm ahụ na-abawanye, elu ahụ na-adị elu, mana ọ bụghị obosara. Mmekọrịta a na-agbaji mgbe omume njide abụghị ahịrị, elu ahụ anaghịkwa adị ogologo kamakwa ọ na-abawanye ka a na-agba ọtụtụ oke. Na mgbakwunye, ọdịdị na-abụghị ahịrị na-ekpebi ọdịdị nke elu chromatographic, na-ebute nsọtụ ndu ma ọ bụ na-esochi. Dịka ọ dị na oke ibu nke na-akpata ọdụ elu (10), elu Enwere ike ịchọpụta ihe na-akpata ihe ndị na-abụghị ahịrị site na ibelata oke ihe nyocha a gbara ọgwụ. Ọ bụrụ na ọdịdị elu ahụ ka mma, a ga-agbanwerịrị usoro ahụ ka ọ ghara ịgafe ogo ọgwụ nke na-akpata nsọtụ isi, ma ọ bụ a ga-agbanwe ọnọdụ chromatographic iji belata omume a.
Mgbe ụfọdụ, anyị na-ahụ ihe yiri ka ọ bụ elu "kewara", dịka egosiri na Foto 1f. Nzọụkwụ mbụ n'ịdozi nsogbu a bụ ịchọpụta ma ọdịdị elu ahụ ọ bụ n'ihi akụkụ nke njikọta akụkụ (ya bụ, ọnụnọ nke ihe abụọ dị iche mana nke na-agbasa nke ọma). Ọ bụrụ na e nwere n'ezie ihe nyocha abụọ dị iche iche na-agbasa nke ọma, mgbe ahụ ọ bụ okwu imeziwanye mkpebi ha (dịka ọmụmaatụ, site n'ịbawanye nhọrọ, njigide, ma ọ bụ ọnụ ọgụgụ efere), na elu "kewara" doro anya metụtara arụmọrụ anụ ahụ enweghị ihe jikọrọ ya na kọlụm ahụ n'onwe ya. Ọtụtụ mgbe, ihe kacha mkpa na mkpebi a bụ ma elu niile dị na chromatogram na-egosipụta ọdịdị kewara, ma ọ bụ naanị otu ma ọ bụ abụọ. Ọ bụrụ na ọ bụ naanị otu ma ọ bụ abụọ, ọ nwere ike ịbụ okwu co-elution; ọ bụrụ na e kewara elu niile, ọ nwere ike ịbụ nsogbu anụ ahụ, nke nwere ike metụtara kọlụm ahụ n'onwe ya.
Oke gbawara agbawa metụtara ihe ndị dị na kọlụm ahụ n'onwe ya na-abụkarị n'ihi mkpọchi nke akụkụ ma ọ bụ frits mpụga, ma ọ bụ nhazigharị nke ihe ndị dị na kọlụm ahụ, na-enye ohere ka usoro mkpanaka na-asọ ọsọ ọsọ karịa usoro mkpanaka n'akụkụ ụfọdụ nke nhazi ọwa kọlụm. na mpaghara ndị ọzọ (11). Enwere ike iwepụ frit nke kpọchiri akpọchi mgbe ụfọdụ site na ịtụgharị mmiri ahụ site na kọlụm ahụ; agbanyeghị, na ahụmịhe m, nke a na-abụkarị ihe ngwọta dị mkpirikpi kama ogologo oge. Nke a na-abụkarị ihe na-egbu egbu na kọlụm ọgbara ọhụrụ ma ọ bụrụ na ihe ndị ahụ ejikọtaghachi n'ime kọlụm ahụ. N'oge a, ọ kacha mma ịgbanwe kọlụm ahụ wee gaa n'ihu.
Oke kachasị elu na Foto 1g, nke sitere na ihe atụ ọhụrụ na ụlọ nyocha nke m, na-egosikarị na mgbaàmà ahụ dị elu nke na o ruru njedebe dị elu nke oke nzaghachi. Maka ihe nchọpụta nnabata anya (UV-vis na nke a), mgbe ntinye analyte dị elu nke ukwuu, analyte na-amịkọrọ ọtụtụ ìhè na-agafe na sel mmiri nchọpụta, na-ahapụ obere ìhè ka achọpụta. N'okpuru ọnọdụ ndị a, akara eletriki sitere na fotodetector na-enwe mmetụta dị ukwuu site na isi iyi dị iche iche nke mkpọtụ, dị ka ìhè gbagọrọ agbagọ na "ọkụ gbara ọchịchịrị", na-eme ka mgbaàmà ahụ "dị nkọ" n'ọdịdị ma na-adabereghị na ntinye analyte. Mgbe nke a mere, enwere ike idozi nsogbu ahụ ngwa ngwa site na ibelata olu ntinye nke analyte - ibelata olu ntinye, ịgbasa ihe nlele ahụ, ma ọ bụ ha abụọ.
N'ụlọ akwụkwọ chromatography, anyị na-eji akara nchọpụta (ya bụ, axis y dị na chromatogram) dị ka ihe ngosi nke ntinye aka nyocha na ihe nlele ahụ. Ya mere, ọ dị ka ihe ijuanya ịhụ chromatogram nwere akara dị n'okpuru efu, ebe nkọwa dị mfe bụ na nke a na-egosi ntinye aka nyocha na-adịghị mma - nke n'ezie agaghị ekwe omume n'anụ ahụ. Na ahụmịhe m, a na-ahụkarị oke elu na-adịghị mma mgbe ejiri ihe nchọpụta nnabata anya (dịka ọmụmaatụ, UV-vis).
N'okwu a, oke adịghị mma pụtara na mkpụrụ ndụ ihe nketa ndị na-esi na kọlụm apụta na-amịkọrọ obere ìhè karịa nkebi mkpanaka n'onwe ya ozugbo tupu na mgbe oke ahụ gasịrị. Nke a nwere ike ime, dịka ọmụmaatụ, mgbe ejiri obere ogologo nchọpụta (<230 nm) na ihe mgbakwunye usoro mkpanaka nke na-amịkọrọ ọtụtụ ìhè na ogologo ogologo ndị a. Ihe mgbakwunye ndị dị otú ahụ nwere ike ịbụ ihe mgbaze usoro mkpanaka dịka methanol ma ọ bụ ihe nchekwa dị ka acetate ma ọ bụ formate. Mmadụ nwere ike iji oke adịghị mma kwadebe usoro nhazi ma nweta ozi ziri ezi, yabụ enweghị isi ihe kpatara ya iji zere ha n'otu n'otu (a na-akpọ usoro a mgbe ụfọdụ "nchọpụta UV na-apụtaghị ìhè") (13). Agbanyeghị, ọ bụrụ na anyị chọrọ izere oke adịghị mma kpamkpam, n'ihe gbasara nchọpụta absorbance, ihe ngwọta kacha mma bụ iji ogologo oge nchọpụta dị iche ka onye nyocha ahụ wee na-amịkọrọ ihe karịrị nkebi mkpanaka, ma ọ bụ gbanwee ihe mejupụtara nke usoro mkpanaka ka Ha wee na-amịkọrọ obere ìhè karịa ndị nyocha.
Oke adịghị mma nwekwara ike ịpụta mgbe ejiri nchọpụta refractive index (RI) chọpụta mgbe ntinye refractive nke ihe ndị ọzọ na-abụghị nyocha dị na sample ahụ, dị ka matrix solvent, dị iche na ntinye refractive nke usoro mkpanaka. Nke a na-emekwa na nchọpụta UV-vis, mana mmetụta a na-ebelata ma e jiri ya tụnyere nchọpụta RI. N'ọnọdụ abụọ a, enwere ike ibelata oke adịghị mma site na ijikọta nhazi nke matrix sample na nke usoro mkpanaka.
N'akụkụ nke atọ gbasara isi okwu nke nsogbu nsogbu LC, atụlere m ọnọdụ ebe ọdịdị elu a hụrụ dị iche na ọdịdị elu a tụrụ anya ya ma ọ bụ nke nkịtị. Nchọpụta nsogbu dị irè nke nsogbu ndị dị otú ahụ na-amalite site na ihe ọmụma nke ọdịdị elu a tụrụ anya ya (dabere na tiori ma ọ bụ ahụmịhe gara aga na ụzọ ndị dị adị), yabụ ọdịiche sitere na atụmanya ndị a doro anya. Nsogbu ọdịdị elu nwere ọtụtụ ihe nwere ike ịkpata ya (obosara, ọdụ, ọnụ ụzọ na-eduga, wdg). Na nkebi a, m na-akọwa n'ụzọ zuru ezu ụfọdụ ihe kpatara m na-ahụkarị. Ịmara nkọwa ndị a na-enye ezigbo ebe ịmalite nchọpụta nsogbu, mana ọ naghị ejide ihe niile enwere ike ime. Ndị na-agụ akwụkwọ nwere mmasị na ndepụta miri emi nke ihe kpatara ya na ngwọta nwere ike ileba anya na eserese mgbidi LCGC "Ntuziaka Nchọpụta Nsogbu LC".
(4) Chaatị mgbidi nke LCGC "Ntuziaka Nchọpụta Nsogbu LC". https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021).
(6) A. Felinger, Nyocha Data na Nhazi Mgbaàmà na Chromatography (Elsevier, New York, NY, 1998), pp. 43-96.
(8) Wahab MF, Dasgupta PK, Kadjo AF na Armstrong DW, Anal.Chim.Journal.Rev. 907, 31–44 (2016).https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043.