Qee cov ncauj lus txog kev daws teeb meem LC yeej tsis tau hloov pauv ntau, vim muaj teeb meem hauv kev xyaum LC, txawm tias cov cuab yeej siv tshuab zoo dua qub dhau sijhawm. Muaj ntau txoj hauv kev uas cov teeb meem tuaj yeem tshwm sim hauv lub kaw lus LC thiab xaus rau qhov tsis zoo. Thaum muaj teeb meem cuam tshuam nrog qhov zoo li ntawm qhov siab tshaj plaws, daim ntawv teev luv luv ntawm cov laj thawj rau cov txiaj ntsig no pab ua kom yooj yim rau peb txoj kev daws teeb meem.
Nws lom zem sau kab lus "LC Troubleshooting" no thiab xav txog cov ncauj lus txhua hli, vim tias qee cov ncauj lus yeej tsis ploj mus. Thaum nyob hauv thaj chaw ntawm kev tshawb fawb chromatography qee cov ncauj lus lossis cov tswv yim dhau los ua qub dhau los vim lawv tau hloov los ntawm cov tswv yim tshiab thiab zoo dua, hauv thaj chaw ntawm kev daws teeb meem, txij li thawj tsab xov xwm daws teeb meem tau tshwm sim hauv phau ntawv xov xwm no (LC Journal thaum lub sijhawm) txij li qee cov ncauj lus tseem ceeb) hauv xyoo 1983 (1). Tau ob peb xyoos dhau los, kuv tau tsom mus rau ntau ntu LC Troubleshooting ntawm cov qauv niaj hnub no cuam tshuam rau cov kua chromatography (LC) (piv txwv li, kev sib piv ntawm peb txoj kev nkag siab txog qhov cuam tshuam ntawm kev nyuaj siab rau kev khaws cia [2] Kev nce qib tshiab) Peb txoj kev txhais lus ntawm LC cov txiaj ntsig thiab yuav ua li cas daws teeb meem nrog cov cuab yeej LC niaj hnub. Hauv lub hlis no, kuv txuas ntxiv kuv cov koob (3), uas pib thaum Lub Kaum Ob Hlis 2021, uas tsom mus rau qee cov ncauj lus "lub neej thiab kev tuag" ntawm LC troubleshooting - cov ntsiab lus uas zoo rau txhua tus neeg daws teeb meem yog qhov tseem ceeb, tsis hais lub hnub nyoog ntawm lub kaw lus uas peb siv. Lub ntsiab lus tseem ceeb ntawm cov koob no yog qhov tseem ceeb heev rau LCGC lub npe nrov "LC Daim ntawv qhia txog kev daws teeb meem ntawm phab ntsa (4) uas dai rau hauv ntau lub chaw soj nstuam. Rau ntu thib peb ntawm cov ntawv no, kuv xaiv los tsom mus rau cov teeb meem ntsig txog lub ncov lossis cov yam ntxwv ntawm lub ncov. Qhov xav tsis thoob, daim ntawv qhia txog phab ntsa teev 44 qhov ua rau lub ncov tsis zoo! Peb tsis tuaj yeem xav txog txhua yam teeb meem no kom meej hauv ib tsab xov xwm, yog li hauv thawj ntu ntawm cov ncauj lus no, kuv yuav tsom mus rau qee qhov uas kuv pom ntau zaus. Kuv vam tias cov neeg siv LC hluas thiab laus yuav pom qee cov lus qhia thiab cov lus ceeb toom pab tau txog cov ncauj lus tseem ceeb no.
Kuv pom kuv tus kheej teb cov lus nug txog kev daws teeb meem ntau zuj zus nrog "txhua yam ua tau". Cov lus teb no yuav zoo li yooj yim thaum xav txog cov kev soj ntsuam uas nyuaj rau txhais, tab sis kuv pom tias nws feem ntau tsim nyog. Nrog ntau yam ua rau lub ncov tsis zoo, nws yog ib qho tseem ceeb kom qhib siab thaum xav txog qhov teeb meem yuav yog dab tsi, thiab kom muaj peev xwm txiav txim siab qhov ua rau muaj peev xwm pib peb cov kev siv zog daws teeb meem, tsom mus rau cov feem ntau ua tau, qhov no yog qhov tseem ceeb heev.
Ib kauj ruam tseem ceeb hauv kev daws teeb meem - tab sis ib qho uas kuv xav tias tsis raug suav tias yog qhov tseem ceeb - yog kev lees paub tias muaj teeb meem uas yuav tsum tau daws. Kev lees paub tias muaj teeb meem feem ntau txhais tau tias kev lees paub tias qhov tshwm sim rau lub cuab yeej txawv ntawm peb qhov kev cia siab, uas yog tsim los ntawm kev xav, kev paub txog kev paub, thiab kev paub dhau los (5). Lub "peak shape" uas tau hais txog ntawm no tsis yog tsuas yog hais txog cov duab ntawm lub peak (symmetrical, asymmetrical, smooth, fluffy, leading edge, tailing, thiab lwm yam), tab sis kuj yog qhov dav. Peb qhov kev cia siab rau cov duab peak tiag tiag yog yooj yim. Kev xav (6) txhawb nqa qhov kev cia siab ntawm phau ntawv tias, feem ntau, cov peaks chromatographic yuav tsum symmetrical thiab ua raws li cov duab ntawm Gaussian distribution, raws li pom hauv Daim Duab 1a. Qhov peb xav tau los ntawm cov dav ntawm lub peak yog qhov teeb meem nyuaj dua, thiab peb yuav tham txog cov ncauj lus no hauv tsab xov xwm yav tom ntej. Lwm cov duab peak hauv Daim Duab 1 qhia txog qee qhov ua tau uas tuaj yeem pom - hauv lwm lo lus, qee txoj hauv kev uas tej yam yuav mus tsis raug. Hauv seem ntawm qhov kev teeb tsa no, peb yuav siv sijhawm los tham txog qee qhov piv txwv tshwj xeeb ntawm cov xwm txheej uas tuaj yeem ua rau rau cov hom duab no.
Qee zaum cov ncov tsis pom txhua qhov hauv chromatogram qhov twg lawv xav tias yuav raug eluted. Daim ntawv qhia phab ntsa saum toj no qhia tias qhov tsis muaj lub ncov (xav tias cov qauv muaj cov analyte lub hom phiaj ntawm qhov concentration uas yuav tsum ua rau lub detector teb txaus kom pom nws saum toj no lub suab nrov) feem ntau yog cuam tshuam nrog qee qhov teeb meem ntawm cov cuab yeej lossis cov xwm txheej tsis raug ntawm theem mobile (yog tias pom txhua). cov ncov, feem ntau "tsis muaj zog"). Daim ntawv teev luv luv ntawm cov teeb meem thiab cov kev daws teeb meem hauv pawg no tuaj yeem pom hauv Rooj I.
Raws li tau hais los saum toj no, lo lus nug txog qhov yuav tsum tau ua siab ntev npaum li cas ua ntej yuav tsum tau ua tib zoo mloog thiab sim kho nws yog ib qho teeb meem nyuaj uas kuv yuav tham txog hauv tsab xov xwm yav tom ntej. Kuv qhov kev paub yog tias qhov kev nthuav dav ntawm lub ncov loj feem ntau nrog rau kev hloov pauv tseem ceeb hauv cov duab ntawm lub ncov, thiab qhov kev poob ntawm lub ncov feem ntau tshwm sim ntau dua li ua ntej lub ncov lossis kev sib cais. Txawm li cas los xij, cov ncov uas tsis sib xws kuj tseem dav dua, uas tuaj yeem tshwm sim los ntawm ob peb qho laj thawj sib txawv:
Txhua yam teeb meem no tau tham txog kom meej hauv cov ntawv xov xwm dhau los ntawm Troubleshooting LC, thiab cov nyeem ntawv uas xav paub txog cov ncauj lus no tuaj yeem xa mus rau cov ntawv xov xwm dhau los no kom paub txog cov hauv paus chiv keeb thiab cov kev daws teeb meem rau cov teeb meem no. Xav paub ntxiv.
Qhov siab tshaj plaws ntawm cov peak tailing, qhov siab tshaj plaws ntawm cov peak fronting, thiab kev sib cais tuaj yeem yog los ntawm cov tshuaj lom neeg lossis lub cev, thiab daim ntawv teev cov kev daws teeb meem rau cov teeb meem no sib txawv ntau, nyob ntawm seb peb puas tab tom daws teeb meem tshuaj lom neeg lossis lub cev. Feem ntau, los ntawm kev sib piv cov peaks sib txawv hauv chromatogram, koj tuaj yeem nrhiav cov lus qhia tseem ceeb txog qhov twg yog tus ua rau muaj teeb meem. Yog tias txhua lub peaks hauv chromatogram muaj cov duab zoo sib xws, qhov ua rau feem ntau tsis yog lub cev. Yog tias tsuas yog ib lossis ob peb lub peaks raug cuam tshuam, tab sis lwm qhov zoo li zoo, qhov ua rau feem ntau yog tshuaj lom neeg.
Cov tshuaj lom neeg ua rau muaj qhov siab tshaj plaws nyuaj heev uas yuav tham luv luv ntawm no. Tus nyeem ntawv uas xav nyeem yuav tsum tau saib tsab ntawv "LC Troubleshooting" tshiab no kom paub ntau ntxiv (10). Txawm li cas los xij, ib qho yooj yim uas yuav tsum sim yog txo qhov hnyav ntawm cov analyte uas txhaj tshuaj thiab saib seb qhov zoo li cas ntawm qhov siab tshaj plaws puas zoo dua. Yog tias yog li ntawd, qhov no yog ib qho cim zoo uas qhia tias qhov teeb meem yog "qhov hnyav ntau dhau". Hauv qhov no, txoj kev no yuav tsum txwv rau kev txhaj cov analyte me me, lossis cov xwm txheej chromatographic yuav tsum tau hloov pauv kom cov duab zoo ntawm qhov siab tshaj plaws tuaj yeem tau txais txawm tias muaj cov hnyav loj dua uas txhaj tshuaj.
Tseem muaj ntau yam ua rau lub siab tshaj plaws nce siab. Cov neeg nyeem uas xav paub txog kev sib tham txog qhov ua tau no yuav tau saib lwm tsab xov xwm tshiab ntawm "LC Troubleshooting" (11). Ib qho ntawm cov ua rau lub siab tshaj plaws nce siab yog qhov kev sib txuas tsis zoo ntawm qhov chaw ntawm lub tshuab txhaj tshuaj thiab lub tshuab ntes (12). Ib qho piv txwv loj heev tau pom hauv Daim Duab 1d, tau txais hauv kuv lub chaw kuaj mob ob peb lub lis piam dhau los. Hauv qhov no, peb tau tsim ib lub kaw lus nrog lub qhov dej txhaj tshuaj tshiab uas peb tsis tau siv ua ntej, thiab tau teeb tsa lub voj txhaj tshuaj me me nrog lub ferrule uas tau pwm rau ntawm lub capillary hlau stainless. Tom qab qee qhov kev sim daws teeb meem thawj zaug, peb pom tias qhov tob ntawm lub qhov hauv lub stator ntawm lub qhov dej txhaj tshuaj tob dua li peb tau siv, ua rau muaj qhov loj ntawm qhov tuag ntawm qab ntawm lub qhov. Qhov teeb meem no yooj yim daws tau los ntawm kev hloov lub voj txhaj tshuaj nrog lwm lub raj, peb tuaj yeem kho lub ferrule mus rau qhov chaw kom raug kom tshem tawm qhov tuag ntawm qab ntawm lub qhov.
Cov pem hauv ntej zoo li cov uas tau qhia hauv Daim Duab 1e kuj tseem tuaj yeem tshwm sim los ntawm cov teeb meem lub cev lossis tshuaj lom neeg. Ib qho ua rau lub cev ntawm ntug pem hauv ntej yog tias lub txaj me me ntawm kem tsis tau ntim zoo, lossis cov khoom me me tau rov teeb tsa dua lub sijhawm. Ib yam li cov peak tailing los ntawm qhov xwm txheej no, txoj hauv kev zoo tshaj plaws los kho qhov no yog hloov kem thiab txuas ntxiv mus. Qhov tseem ceeb, cov duab ntawm ntug pem hauv ntej nrog keeb kwm tshuaj lom neeg feem ntau tshwm sim los ntawm qhov peb hu ua "tsis yog linear" retention conditions. Nyob rau hauv cov xwm txheej zoo tagnrho (linear), qhov ntau ntawm analyte khaws cia los ntawm theem ruaj khov (yog li ntawd, qhov khaws cia factor) yog linearly cuam tshuam rau qhov concentration ntawm analyte hauv kem. Chromatographically, qhov no txhais tau tias thaum qhov hnyav ntawm analyte txhaj rau hauv kem nce, lub peak ua siab dua, tab sis tsis dav dua. Kev sib raug zoo no raug tawg thaum tus cwj pwm khaws cia tsis yog linear, thiab cov peaks tsis yog tsuas yog siab dua tab sis kuj dav dua thaum ntau qhov hnyav raug txhaj. Tsis tas li ntawd, cov duab nonlinear txiav txim siab cov duab ntawm chromatographic peaks, ua rau cov ntug pem hauv ntej lossis tom qab. Ib yam li cov hnyav overload uas ua rau lub peak tailing (10), Qhov siab tshaj plaws uas tshwm sim los ntawm kev khaws cia tsis ncaj kuj tuaj yeem kuaj pom los ntawm kev txo qhov hnyav ntawm cov tshuaj analyte uas tau txhaj tshuaj. Yog tias cov duab ntawm qhov siab tshaj plaws zoo dua, yuav tsum hloov kho txoj kev kom tsis txhob tshaj qhov zoo ntawm kev txhaj tshuaj uas ua rau ntug kev ua ntej, lossis yuav tsum hloov cov xwm txheej chromatographic kom txo qhov kev coj cwj pwm no.
Qee zaum peb pom qhov zoo li yog lub ncov "faib", raws li qhia hauv Daim Duab 1f. Kauj ruam thawj zaug hauv kev daws qhov teeb meem no yog txiav txim siab seb lub ncov zoo li cas yog vim muaj kev sib koom ua ke (piv txwv li, muaj ob lub tshuaj sib txawv tab sis ze ze). Yog tias muaj ob lub tshuaj sib txawv uas sib koom ua ke, ces nws yog qhov teeb meem ntawm kev txhim kho lawv qhov kev daws teeb meem (piv txwv li, los ntawm kev nce kev xaiv, kev khaws cia, lossis suav phaj), thiab cov ncov "faib" pom tseeb yog cuam tshuam nrog lub cev. Kev ua tau zoo tsis muaj dab tsi ua rau lub kem nws tus kheej. Feem ntau, qhov tseem ceeb tshaj plaws rau qhov kev txiav txim siab no yog seb txhua lub ncov hauv chromatogram puas muaj cov duab faib, lossis tsuas yog ib lossis ob. Yog tias nws tsuas yog ib lossis ob, nws yuav yog qhov teeb meem sib koom ua ke; yog tias txhua lub ncov raug faib, nws yuav yog qhov teeb meem lub cev, feem ntau cuam tshuam nrog lub kem nws tus kheej.
Cov ncov sib cais uas cuam tshuam nrog cov khoom siv ntawm lub kem nws tus kheej feem ntau yog vim muaj qee qhov nkag lossis qhov tawm ntawm cov frits, lossis kev rov ua dua tshiab ntawm cov khoom me me hauv kem, uas ua rau theem txav mus los sai dua li theem txav mus los hauv qee thaj chaw ntawm cov channel tsim kem. hauv lwm thaj chaw (11). Qee zaum cov frit uas raug txhaws ib nrab tuaj yeem tshem tawm los ntawm kev thim rov qab cov dej ntws los ntawm kem; txawm li cas los xij, hauv kuv qhov kev paub, qhov no feem ntau yog lub sijhawm luv luv es tsis yog kev daws teeb meem ntev. Qhov no feem ntau ua rau tuag taus nrog cov kem niaj hnub yog tias cov khoom me me rov sib xyaw hauv kem. Ntawm lub sijhawm no, nws yog qhov zoo tshaj plaws los hloov kem thiab txuas ntxiv mus.
Qhov siab tshaj plaws hauv Daim Duab 1g, kuj yog los ntawm qhov xwm txheej tsis ntev los no hauv kuv lub chaw kuaj mob, feem ntau qhia tias lub teeb liab siab heev uas nws tau mus txog qhov kawg ntawm qhov teb. Rau cov khoom siv nqus dej pom kev (UV-vis hauv qhov no), thaum qhov concentration ntawm analyte siab heev, cov analyte nqus feem ntau ntawm lub teeb uas hla dhau lub cell ntws ntawm lub tshuab ntes, tawm me ntsis lub teeb kom pom. Hauv cov xwm txheej no, lub teeb liab hluav taws xob los ntawm lub photodetector raug cuam tshuam los ntawm ntau qhov chaw suab nrov, xws li lub teeb tsis pom kev thiab "tam sim no tsaus ntuj", ua rau lub teeb liab "fuzzy" heev thiab tsis nyob ntawm qhov concentration ntawm analyte. Thaum qhov no tshwm sim, qhov teeb meem feem ntau tuaj yeem daws tau yooj yim los ntawm kev txo qhov ntim ntawm cov analyte - txo qhov ntim ntawm cov tshuaj, diluting cov qauv, lossis ob qho tib si.
Hauv tsev kawm ntawv chromatography, peb siv lub teeb liab ntawm lub tshuab ntes (piv txwv li, y-axis hauv chromatogram) ua qhov qhia txog qhov concentration ntawm analyte hauv cov qauv. Yog li nws zoo li txawv txawv pom ib lub chromatogram nrog lub teeb liab qis dua xoom, vim tias qhov kev txhais lus yooj yim yog tias qhov no qhia txog qhov concentration ntawm analyte tsis zoo - uas yog qhov tseeb tsis ua tau. Hauv kuv qhov kev paub, cov ncov tsis zoo feem ntau pom thaum siv cov khoom siv ntes qhov muag pom (piv txwv li, UV-vis).
Hauv qhov no, lub ncov tsis zoo tsuas yog txhais tau tias cov molecules elutting los ntawm kem nqus lub teeb tsawg dua li theem mobile nws tus kheej ua ntej thiab tom qab lub ncov. Qhov no tuaj yeem tshwm sim, piv txwv li, thaum siv cov wavelengths nrhiav qis qis (<230 nm) thiab cov khoom ntxiv theem mobile uas nqus feem ntau ntawm lub teeb ntawm cov wavelengths no. Cov khoom ntxiv no tuaj yeem yog cov khoom siv solvent theem mobile xws li methanol lossis cov khoom buffer xws li acetate lossis formate. Ib tug tuaj yeem siv cov ncov tsis zoo los npaj cov kab calibration thiab tau txais cov ntaub ntawv kom raug, yog li tsis muaj laj thawj tseem ceeb kom zam lawv per se (txoj kev no qee zaum hu ua "indirect UV detection") (13). Txawm li cas los xij, yog tias peb xav zam cov ncov tsis zoo tag nrho, nyob rau hauv cov ntaub ntawv ntawm absorbance detection, qhov kev daws teeb meem zoo tshaj plaws yog siv cov wavelength nrhiav sib txawv kom cov analyte nqus ntau dua li theem mobile, lossis hloov cov khoom sib xyaw ntawm theem mobile kom lawv nqus lub teeb tsawg dua li analytes.
Cov ncov tsis zoo kuj tseem tuaj yeem tshwm sim thaum siv kev kuaj pom refractive index (RI) thaum cov refractive index ntawm cov khoom tsis yog analyte hauv cov qauv, xws li cov solvent matrix, txawv ntawm cov refractive index ntawm theem mobile. Qhov no kuj tshwm sim nrog kev kuaj pom UV-vis, tab sis cov nyhuv no feem ntau yuav raug txo qis piv rau kev kuaj pom RI. Hauv ob qho tib si, cov ncov tsis zoo tuaj yeem txo qis los ntawm kev sib phim ze dua ntawm cov khoom sib xyaw ntawm cov qauv matrix rau ntawm theem mobile.
Hauv ntu peb ntawm lub ntsiab lus tseem ceeb ntawm kev daws teeb meem LC, kuv tau tham txog cov xwm txheej uas lub ncov pom txawv ntawm lub ncov xav tau lossis lub ncov ib txwm muaj. Kev daws teeb meem zoo ntawm cov teeb meem no pib nrog kev paub txog cov duab ncov xav tau (raws li kev xav lossis kev paub dhau los nrog cov txheej txheem uas twb muaj lawm), yog li kev hloov pauv ntawm cov kev cia siab no yog qhov pom tseeb. Cov teeb meem ntawm lub ncov muaj ntau yam ua rau muaj peev xwm sib txawv (dav dhau, tailing, ntug ua ntej, thiab lwm yam). Hauv qhov kev teeb tsa no, kuv tham txog qee qhov laj thawj uas kuv pom ntau zaus. Kev paub cov ntsiab lus no muab qhov chaw zoo los pib daws teeb meem, tab sis tsis ntes txhua qhov ua tau. Cov neeg nyeem uas xav paub ntau ntxiv txog cov laj thawj thiab cov kev daws teeb meem tuaj yeem xa mus rau LCGC "LC Troubleshooting Guide" daim ntawv qhia phab ntsa.
(4) Daim duab qhia txog phab ntsa ntawm LCGC "LC Troubleshooting Guide". https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021).
(6) A. Felinger, Kev Tshawb Fawb Txog Cov Ntaub Ntawv thiab Kev Ua Haujlwm ntawm Cov Cim hauv Chromatography (Elsevier, New York, NY, 1998), nplooj ntawv 43-96.
(8) Wahab MF, Dasgupta PK, Kadjo AF thiab Armstrong DW, Anal.Chim.Journal.Rev. 907, 31–44 (2016).https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043.