Ορισμένα θέματα αντιμετώπισης προβλημάτων LC δεν είναι ποτέ ξεπερασμένα, καθώς υπάρχουν προβλήματα στην πρακτική της LC, ακόμη και καθώς η τεχνολογία των οργάνων βελτιώνεται με την πάροδο του χρόνου. Υπάρχουν πολλοί τρόποι με τους οποίους μπορούν να προκύψουν προβλήματα σε ένα σύστημα LC και να καταλήξουν σε κακό σχήμα κορυφής. Όταν προκύπτουν προβλήματα που σχετίζονται με το σχήμα κορυφής, μια σύντομη λίστα πιθανών αιτιών για αυτά τα αποτελέσματα βοηθά στην απλοποίηση της εμπειρίας αντιμετώπισης προβλημάτων.
Ήταν διασκεδαστικό να γράφω αυτή τη στήλη «Αντιμετώπιση προβλημάτων LC» και να σκέφτομαι θέματα κάθε μήνα, επειδή ορισμένα θέματα δεν φεύγουν ποτέ από τη μόδα. Ενώ στον τομέα της έρευνας για τη χρωματογραφία, ορισμένα θέματα ή ιδέες καθίστανται ξεπερασμένα καθώς αντικαθίστανται από νεότερες και καλύτερες ιδέες, στον τομέα της αντιμετώπισης προβλημάτων, από τότε που εμφανίστηκε το πρώτο άρθρο αντιμετώπισης προβλημάτων σε αυτό το περιοδικό (το LC Journal εκείνη την εποχή) καθώς ορισμένα θέματα εξακολουθούν να είναι σχετικά) το 1983(1). Τα τελευταία χρόνια, έχω επικεντρώσει αρκετές ενότητες αντιμετώπισης προβλημάτων LC στις σύγχρονες τάσεις που επηρεάζουν την υγρή χρωματογραφία (LC) (για παράδειγμα, η σχετική σύγκριση της κατανόησής μας για την επίδραση της πίεσης στην κατακράτηση [2] Νέες εξελίξεις) Η ερμηνεία μας των αποτελεσμάτων LC και ο τρόπος αντιμετώπισης προβλημάτων με σύγχρονα όργανα LC. Στο τεύχος αυτού του μήνα, συνεχίζω τη σειρά μου (3), η οποία ξεκίνησε τον Δεκέμβριο του 2021, η οποία επικεντρώθηκε σε ορισμένα από τα θέματα «ζωής και θανάτου» της αντιμετώπισης προβλημάτων LC — στοιχεία που είναι εξαιρετικά για κάθε εργαλείο αντιμετώπισης προβλημάτων είναι απαραίτητα, ανεξάρτητα από την ηλικία του συστήματος που χρησιμοποιούμε. Το βασικό θέμα αυτής της σειράς είναι ιδιαίτερα σχετικό με τον διάσημο τοίχο «Οδηγός αντιμετώπισης προβλημάτων LC» του LCGC. διάγραμμα (4) που κρέμεται σε πολλά εργαστήρια. Για το τρίτο μέρος αυτής της σειράς, επέλεξα να επικεντρωθώ σε ζητήματα που σχετίζονται με το σχήμα ή τα χαρακτηριστικά της κορυφής. Απίστευτα, το διάγραμμα τοίχου απαριθμεί 44 διαφορετικές πιθανές αιτίες κακού σχήματος κορυφής! Δεν μπορούμε να εξετάσουμε όλα αυτά τα ζητήματα λεπτομερώς σε ένα άρθρο, οπότε σε αυτό το πρώτο μέρος του θέματος, θα επικεντρωθώ σε μερικά από αυτά που βλέπω πιο συχνά. Ελπίζω οι νέοι και οι μεγαλύτεροι χρήστες LC να βρουν μερικές χρήσιμες συμβουλές και υπενθυμίσεις σχετικά με αυτό το σημαντικό θέμα.
Διαπιστώνω ότι απαντώ όλο και περισσότερο σε ερωτήσεις αντιμετώπισης προβλημάτων με τη φράση «όλα είναι πιθανά». Αυτή η απάντηση μπορεί να φαίνεται εύκολη όταν εξετάζουμε παρατηρήσεις που είναι δύσκολο να ερμηνευθούν, αλλά τη βρίσκω συχνά κατάλληλη. Με πολλές πιθανές αιτίες για το κακό σχήμα κορυφής, είναι σημαντικό να έχουμε ανοιχτό μυαλό όταν εξετάζουμε ποιο μπορεί να είναι το πρόβλημα και να μπορούμε να ιεραρχούμε τις πιθανές αιτίες για να ξεκινήσουμε τις προσπάθειές μας για την αντιμετώπιση προβλημάτων, εστιάζοντας στις πιο συνηθισμένες πιθανότητες. Αυτό το σημείο είναι πολύ σημαντικό.
Ένα βασικό βήμα σε κάθε άσκηση αντιμετώπισης προβλημάτων — αλλά ένα που θεωρώ υποτιμημένο — είναι η αναγνώριση ότι υπάρχει ένα πρόβλημα που πρέπει να λυθεί. Η αναγνώριση ότι υπάρχει ένα πρόβλημα συχνά σημαίνει ότι αναγνωρίζουμε ότι αυτό που συμβαίνει στο εργαλείο είναι διαφορετικό από τις προσδοκίες μας, οι οποίες διαμορφώνονται από τη θεωρία, την εμπειρική γνώση και την εμπειρία (5). Το «σχήμα κορυφής» που αναφέρεται εδώ στην πραγματικότητα αναφέρεται όχι μόνο στο σχήμα της κορυφής (συμμετρικό, ασύμμετρο, λείο, αφράτο, με πρόσθια άκρη, με ουρά κ.λπ.), αλλά και στο πλάτος. Οι προσδοκίες μας για το πραγματικό σχήμα κορυφής είναι απλές. Η θεωρία (6) υποστηρίζει καλά την προσδοκία του εγχειριδίου ότι, στις περισσότερες περιπτώσεις, οι χρωματογραφικές κορυφές πρέπει να είναι συμμετρικές και να συμμορφώνονται με το σχήμα μιας Γκαουσιανής κατανομής, όπως φαίνεται στο Σχήμα 1α. Αυτό που περιμένουμε από τα πλάτη κορυφών είναι ένα πιο περίπλοκο ζήτημα και θα συζητήσουμε αυτό το θέμα σε ένα μελλοντικό άρθρο. Τα άλλα σχήματα κορυφών στο Σχήμα 1 δείχνουν μερικές από τις άλλες πιθανότητες που θα μπορούσαν να παρατηρηθούν — με άλλα λόγια, μερικούς από τους τρόπους με τους οποίους τα πράγματα θα μπορούσαν να πάνε στραβά. Στο υπόλοιπο αυτού του κεφαλαίου, θα αφιερώσουμε χρόνο συζητώντας ορισμένα συγκεκριμένα παραδείγματα καταστάσεων που μπορούν να οδηγήσουν σε αυτούς τους τύπους σχήματος.
Μερικές φορές οι κορυφές δεν παρατηρούνται καθόλου στο χρωματογράφημα όπου αναμένεται να εκλουστούν. Το παραπάνω διάγραμμα τοίχου υποδεικνύει ότι η απουσία κορυφής (υποθέτοντας ότι το δείγμα περιέχει στην πραγματικότητα τον αναλύτη-στόχο σε συγκέντρωση που θα πρέπει να κάνει την απόκριση του ανιχνευτή επαρκή για να τον δει πάνω από τον θόρυβο) συνήθως σχετίζεται με κάποιο πρόβλημα του οργάνου ή με λανθασμένες συνθήκες κινητής φάσης (εάν παρατηρηθούν καθόλου). Οι κορυφές, συνήθως πολύ «ασθενείς»). Μια σύντομη λίστα πιθανών προβλημάτων και λύσεων σε αυτήν την κατηγορία μπορεί να βρεθεί στον Πίνακα Ι.
Όπως αναφέρθηκε παραπάνω, το ερώτημα του πόσο θα πρέπει να ανεχθεί η διεύρυνση των κορυφών πριν δοθεί προσοχή και επιχειρηθεί η διόρθωσή της είναι ένα πολύπλοκο θέμα που θα συζητήσω σε ένα μελλοντικό άρθρο. Η εμπειρία μου είναι ότι η σημαντική διεύρυνση των κορυφών συχνά συνοδεύεται από μια σημαντική αλλαγή στο σχήμα της κορυφής και η ουρά των κορυφών είναι πιο συχνή από την προ-κορυφή ή τη διάσπαση. Ωστόσο, οι ονομαστικά συμμετρικές κορυφές διευρύνονται επίσης, κάτι που μπορεί να προκληθεί από μερικούς διαφορετικούς λόγους:
Κάθε ένα από αυτά τα ζητήματα έχει συζητηθεί λεπτομερώς σε προηγούμενα τεύχη του Troubleshooting LC και οι αναγνώστες που ενδιαφέρονται για αυτά τα θέματα μπορούν να ανατρέξουν σε αυτά τα προηγούμενα άρθρα για πληροφορίες σχετικά με τις βασικές αιτίες και τις πιθανές λύσεις σε αυτά τα προβλήματα. Περισσότερες λεπτομέρειες.
Η εμφάνιση κορυφών (peak tailing), η εμφάνιση κορυφών στο μέτωπο (peak front) και η διάσπαση μπορούν να προκληθούν από χημικά ή φυσικά φαινόμενα και η λίστα πιθανών λύσεων σε αυτά τα προβλήματα ποικίλλει σημαντικά, ανάλογα με το αν έχουμε να κάνουμε με χημικό ή φυσικό πρόβλημα. Συχνά, συγκρίνοντας τις διαφορετικές κορυφές σε ένα χρωματογράφημα, μπορείτε να βρείτε σημαντικές ενδείξεις σχετικά με το ποια είναι η υπαίτια. Εάν όλες οι κορυφές σε ένα χρωματογράφημα εμφανίζουν παρόμοια σχήματα, η αιτία πιθανότατα δεν είναι φυσική. Εάν επηρεάζονται μόνο μία ή λίγες κορυφές, αλλά οι υπόλοιπες φαίνονται καλές, η αιτία πιθανότατα είναι χημική.
Οι χημικές αιτίες της ουράς κορυφών είναι πολύ περίπλοκες για να συζητηθούν εν συντομία εδώ. Ο ενδιαφερόμενος αναγνώστης παραπέμπεται στο πρόσφατο τεύχος του "LC Troubleshooting" για μια πιο εις βάθος συζήτηση (10). Ωστόσο, κάτι εύκολο που μπορείτε να δοκιμάσετε είναι να μειώσετε τη μάζα του εγχυόμενου αναλύτη και να δείτε εάν βελτιώνεται το σχήμα της κορυφής. Εάν ναι, τότε αυτό είναι μια καλή ένδειξη ότι το πρόβλημα είναι η "υπερφόρτωση μάζας". Σε αυτήν την περίπτωση, η μέθοδος πρέπει να περιορίζεται στην έγχυση μικρών μαζών αναλυτή ή οι χρωματογραφικές συνθήκες πρέπει να αλλάξουν έτσι ώστε να μπορούν να ληφθούν καλά σχήματα κορυφών ακόμη και με εγχυόμενες μεγαλύτερες μάζες.
Υπάρχουν επίσης πολλοί πιθανοί φυσικοί λόγοι για την εμφάνιση αιχμής. Οι αναγνώστες που ενδιαφέρονται για μια λεπτομερή συζήτηση των πιθανοτήτων παραπέμπονται σε ένα άλλο πρόσφατο τεύχος του "LC Troubleshooting" (11). Μία από τις πιο συνηθισμένες φυσικές αιτίες εμφάνισης αιχμής είναι η κακή σύνδεση σε ένα σημείο μεταξύ του εγχυτήρα και του ανιχνευτή (12). Ένα ακραίο παράδειγμα φαίνεται στο Σχήμα 1δ, που ελήφθη στο εργαστήριό μου πριν από μερικές εβδομάδες. Σε αυτήν την περίπτωση, κατασκευάσαμε ένα σύστημα με μια νέα βαλβίδα έγχυσης που δεν είχαμε χρησιμοποιήσει πριν και εγκαταστήσαμε έναν βρόχο έγχυσης μικρού όγκου με ένα δαχτυλίδι που είχε χυτευτεί σε ένα τριχοειδές από ανοξείδωτο χάλυβα. Μετά από μερικά αρχικά πειράματα αντιμετώπισης προβλημάτων, συνειδητοποιήσαμε ότι το βάθος της θύρας στον στάτορα της βαλβίδας έγχυσης ήταν πολύ βαθύτερο από ό,τι είχαμε συνηθίσει, με αποτέλεσμα έναν μεγάλο νεκρό όγκο στο κάτω μέρος της θύρας. Αυτό το πρόβλημα λύνεται εύκολα αντικαθιστώντας τον βρόχο έγχυσης με έναν άλλο σωλήνα, μπορούμε να ρυθμίσουμε το δαχτυλίδι στη σωστή θέση για να εξαλείψουμε τον νεκρό όγκο στο κάτω μέρος της θύρας.
Τα μέτωπα κορυφών όπως αυτά που φαίνονται στο Σχήμα 1ε μπορούν επίσης να προκληθούν από φυσικά ή χημικά προβλήματα. Μια κοινή φυσική αιτία της αιχμής πρόσθιας ακμής είναι ότι η κλίνη σωματιδίων της στήλης δεν είναι καλά συσκευασμένη ή ότι τα σωματίδια έχουν αναδιοργανωθεί με την πάροδο του χρόνου. Όπως και με την ουρά κορυφής που προκαλείται από αυτό το φυσικό φαινόμενο, ο καλύτερος τρόπος για να διορθωθεί αυτό είναι να αντικατασταθεί η στήλη και να συνεχιστεί. Βασικά, τα σχήματα κορυφών αιχμής με χημική προέλευση συχνά προκύπτουν από αυτό που ονομάζουμε «μη γραμμικές» συνθήκες συγκράτησης. Υπό ιδανικές (γραμμικές) συνθήκες, η ποσότητα του αναλύτη που συγκρατείται από τη στατική φάση (επομένως, ο συντελεστής συγκράτησης) σχετίζεται γραμμικά με τη συγκέντρωση του αναλύτη στη στήλη. Χρωματογραφικά, αυτό σημαίνει ότι καθώς η μάζα του αναλύτη που εγχέεται στη στήλη αυξάνεται, η κορυφή γίνεται ψηλότερη, αλλά όχι ευρύτερη. Αυτή η σχέση διακόπτεται όταν η συμπεριφορά συγκράτησης είναι μη γραμμική και οι κορυφές όχι μόνο γίνονται ψηλότερες αλλά και ευρύτερες καθώς εγχέεται περισσότερη μάζα. Επιπλέον, τα μη γραμμικά σχήματα καθορίζουν το σχήμα των χρωματογραφικών κορυφών, με αποτέλεσμα τις αιχμές πρόσθιας ή πίσω ακμής. Όπως και με την υπερφόρτωση μάζας που προκαλεί ουρά κορυφής (10), η προπορευόμενη κορυφή που προκαλείται από μη γραμμική κατακράτηση μπορεί επίσης να διαγνωστεί μειώνοντας την εγχυόμενη μάζα του αναλύτη. Εάν βελτιωθεί το σχήμα της κορυφής, η μέθοδος πρέπει να τροποποιηθεί ώστε να μην υπερβαίνει την ποιότητα έγχυσης που προκαλεί την προπορευόμενη ακμή ή οι χρωματογραφικές συνθήκες πρέπει να αλλάξουν για να ελαχιστοποιηθεί αυτή η συμπεριφορά.
Μερικές φορές παρατηρούμε αυτό που φαίνεται να είναι μια «διαχωρισμένη» κορυφή, όπως φαίνεται στο Σχήμα 1στ. Το πρώτο βήμα για την επίλυση αυτού του προβλήματος είναι να προσδιοριστεί εάν το σχήμα της κορυφής οφείλεται σε μερική συνέκλουση (δηλαδή, την παρουσία δύο διακριτών αλλά στενά εκλουόμενων ενώσεων). Εάν υπάρχουν στην πραγματικότητα δύο διαφορετικοί αναλυτές που εκλούονται κοντά ο ένας στον άλλον, τότε πρόκειται για βελτίωση της διακριτικής τους ικανότητας (για παράδειγμα, αυξάνοντας την επιλεκτικότητα, την κατακράτηση ή τον αριθμό πλακών) και οι φαινομενικές «διαχωρισμένες» κορυφές σχετίζονται με τη φυσική. Η απόδοση δεν έχει καμία σχέση με την ίδια τη στήλη. Συχνά, η πιο σημαντική ένδειξη για αυτήν την απόφαση είναι εάν όλες οι κορυφές στο χρωματογράφημα εμφανίζουν διαχωριζόμενα σχήματα ή μόνο μία ή δύο. Εάν είναι μόνο μία ή δύο, πιθανότατα πρόκειται για ζήτημα συνέκλουσης. Εάν όλες οι κορυφές είναι διαχωρισμένες, πιθανότατα πρόκειται για φυσικό πρόβλημα, πιθανότατα σχετικό με την ίδια τη στήλη.
Οι διαιρεμένες κορυφές που σχετίζονται με τις φυσικές ιδιότητες της ίδιας της στήλης οφείλονται συνήθως σε μερικώς φραγμένες υαλοκαθαρίσεις εισόδου ή εξόδου ή σε αναδιοργάνωση σωματιδίων στη στήλη, επιτρέποντας στην κινητή φάση να ρέει ταχύτερα από την κινητή φάση σε ορισμένες περιοχές του σχηματισμού καναλιού της στήλης σε άλλες περιοχές (11). Η μερικώς φραγμένη υαλοκαθαρίσωση μπορεί μερικές φορές να καθαριστεί αντιστρέφοντας τη ροή μέσω της στήλης. Ωστόσο, από την εμπειρία μου, αυτή είναι συνήθως μια βραχυπρόθεσμη παρά μια μακροπρόθεσμη λύση. Αυτό είναι συχνά μοιραίο με τις σύγχρονες στήλες εάν τα σωματίδια ανασυνδυαστούν μέσα στη στήλη. Σε αυτό το σημείο, είναι καλύτερο να αντικαταστήσετε τη στήλη και να συνεχίσετε.
Η κορυφή στο Σχήμα 1g, επίσης από μια πρόσφατη περίπτωση στο δικό μου εργαστήριο, συνήθως υποδεικνύει ότι το σήμα είναι τόσο υψηλό που έχει φτάσει στο υψηλότερο άκρο του εύρους απόκρισης. Για τους οπτικούς ανιχνευτές απορρόφησης (UV-vis σε αυτήν την περίπτωση), όταν η συγκέντρωση του αναλύτη είναι πολύ υψηλή, ο αναλύτης απορροφά το μεγαλύτερο μέρος του φωτός που διέρχεται από το κελί ροής του ανιχνευτή, αφήνοντας πολύ λίγο φως να ανιχνευθεί. Υπό αυτές τις συνθήκες, το ηλεκτρικό σήμα από τον φωτοανιχνευτή επηρεάζεται σε μεγάλο βαθμό από διάφορες πηγές θορύβου, όπως το σκεδαζόμενο φως και το "σκοτεινό ρεύμα", καθιστώντας το σήμα πολύ "θολό" στην εμφάνιση και ανεξάρτητο από τη συγκέντρωση του αναλύτη. Όταν συμβαίνει αυτό, το πρόβλημα μπορεί συχνά να λυθεί εύκολα μειώνοντας τον όγκο έγχυσης του αναλύτη - μειώνοντας τον όγκο έγχυσης, αραιώνοντας το δείγμα ή και τα δύο.
Στη σχολή χρωματογραφίας, χρησιμοποιούμε το σήμα του ανιχνευτή (δηλαδή, τον άξονα y στο χρωματογράφημα) ως δείκτη της συγκέντρωσης του αναλύτη στο δείγμα. Επομένως, φαίνεται περίεργο να βλέπουμε ένα χρωματογράφημα με σήμα κάτω από το μηδέν, καθώς η απλή ερμηνεία είναι ότι αυτό υποδεικνύει αρνητική συγκέντρωση αναλύτη - κάτι που φυσικά δεν είναι φυσικά εφικτό. Από την εμπειρία μου, οι αρνητικές κορυφές παρατηρούνται συχνότερα όταν χρησιμοποιούνται οπτικοί ανιχνευτές απορρόφησης (π.χ., UV-vis).
Σε αυτήν την περίπτωση, μια αρνητική κορυφή σημαίνει απλώς ότι τα μόρια που εκλούονται από τη στήλη απορροφούν λιγότερο φως από την ίδια την κινητή φάση αμέσως πριν και μετά την κορυφή. Αυτό μπορεί να συμβεί, για παράδειγμα, όταν χρησιμοποιούνται σχετικά χαμηλά μήκη κύματος ανίχνευσης (<230 nm) και πρόσθετα κινητής φάσης που απορροφούν το μεγαλύτερο μέρος του φωτός σε αυτά τα μήκη κύματος. Τέτοια πρόσθετα μπορεί να είναι συστατικά διαλύτη κινητής φάσης όπως μεθανόλη ή συστατικά ρυθμιστικού διαλύματος όπως οξικό ή μυρμηκικό άλας. Κάποιος μπορεί στην πραγματικότητα να χρησιμοποιήσει αρνητικές κορυφές για να προετοιμάσει μια καμπύλη βαθμονόμησης και να λάβει ακριβείς ποσοτικές πληροφορίες, επομένως δεν υπάρχει κανένας θεμελιώδης λόγος να τις αποφύγει καθαυτές (αυτή η μέθοδος αναφέρεται μερικές φορές ως «έμμεση ανίχνευση UV») (13). Ωστόσο, εάν θέλουμε πραγματικά να αποφύγουμε εντελώς τις αρνητικές κορυφές, στην περίπτωση της ανίχνευσης απορρόφησης, η καλύτερη λύση είναι να χρησιμοποιήσουμε διαφορετικό μήκος κύματος ανίχνευσης, έτσι ώστε ο αναλύτης να απορροφά περισσότερο από την κινητή φάση ή να αλλάξουμε τη σύνθεση της κινητής φάσης έτσι ώστε να απορροφούν λιγότερο φως από τους αναλύτες.
Αρνητικές κορυφές μπορούν επίσης να εμφανιστούν κατά τη χρήση ανίχνευσης δείκτη διάθλασης (RI) όταν ο δείκτης διάθλασης συστατικών εκτός από την αναλυόμενη ουσία στο δείγμα, όπως η μήτρα διαλύτη, είναι διαφορετικός από τον δείκτη διάθλασης της κινητής φάσης. Αυτό συμβαίνει επίσης με την ανίχνευση UV-vis, αλλά αυτό το φαινόμενο τείνει να εξασθενεί σε σχέση με την ανίχνευση RI. Και στις δύο περιπτώσεις, οι αρνητικές κορυφές μπορούν να ελαχιστοποιηθούν με την καλύτερη αντιστοίχιση της σύνθεσης της μήτρας του δείγματος με αυτή της κινητής φάσης.
Στο τρίτο μέρος, σχετικά με το βασικό θέμα της αντιμετώπισης προβλημάτων LC, συζήτησα καταστάσεις στις οποίες το παρατηρούμενο σχήμα κορυφής διαφέρει από το αναμενόμενο ή κανονικό σχήμα κορυφής. Η αποτελεσματική αντιμετώπιση τέτοιων προβλημάτων ξεκινά με τη γνώση των αναμενόμενων σχημάτων κορυφής (με βάση τη θεωρία ή την προηγούμενη εμπειρία με τις υπάρχουσες μεθόδους), επομένως οι αποκλίσεις από αυτές τις προσδοκίες είναι προφανείς. Τα προβλήματα σχήματος κορυφής έχουν πολλές διαφορετικές πιθανές αιτίες (πολύ μεγάλο πλάτος, ουρά, αιχμή κ.λπ.). Σε αυτό το μέρος, συζητώ λεπτομερώς μερικούς από τους λόγους που βλέπω πιο συχνά. Η γνώση αυτών των λεπτομερειών παρέχει ένα καλό σημείο για να ξεκινήσετε την αντιμετώπιση προβλημάτων, αλλά δεν καλύπτει όλες τις πιθανότητες. Οι αναγνώστες που ενδιαφέρονται για μια πιο εμπεριστατωμένη λίστα αιτιών και λύσεων μπορούν να ανατρέξουν στον πίνακα "Οδηγός αντιμετώπισης προβλημάτων LC" του LCGC.
(4) Πίνακας τοίχου «Οδηγός αντιμετώπισης προβλημάτων LC» του LCGC. https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021).
(6) A. Felinger, Ανάλυση Δεδομένων και Επεξεργασία Σήματος στη Χρωματογραφία (Elsevier, Νέα Υόρκη, Νέα Υόρκη, 1998), σελ. 43-96.
(8) Wahab MF, Dasgupta PK, Kadjo AF και Armstrong DW, Anal.Chim.Journal.Rev. 907, 31–44 (2016).https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043.