တူရိယာနည်းပညာများ အချိန်နှင့်အမျှ တိုးတက်ပြောင်းလဲလာသော်လည်း LC အလေ့အကျင့်တွင် ပြဿနာများရှိနေသောကြောင့် အချို့သော LC ပြဿနာရှာဖွေဖြေရှင်းခြင်းဆိုင်ရာ အကြောင်းအရာများသည် ဘယ်တော့မှ ခေတ်မမီတော့ပါ။ LC စနစ်တွင် ပြဿနာများပေါ်ပေါက်လာပြီး အမြင့်ဆုံးအဆင့်သို့ မရောက်နိုင်သည့် နည်းလမ်းများစွာရှိပါသည်။ အမြင့်ဆုံးအဆင့်နှင့် ဆက်စပ်သော ပြဿနာများပေါ်ပေါက်လာသောအခါ၊ ဤရလဒ်များအတွက် ဖြစ်နိုင်ချေရှိသော အကြောင်းရင်းများ၏ အတိုချုပ်စာရင်းသည် ကျွန်ုပ်တို့၏ ပြဿနာရှာဖွေဖြေရှင်းခြင်းအတွေ့အကြုံကို ရိုးရှင်းစေရန် ကူညီပေးပါသည်။
ဒီ “LC ပြဿနာဖြေရှင်းခြင်း” ကော်လံကို ရေးသားပြီး လစဉ် အကြောင်းအရာတွေအကြောင်း စဉ်းစားရတာ ပျော်စရာကောင်းပါတယ်၊ ဘာလို့လဲဆိုတော့ အချို့သော အကြောင်းအရာတွေက ဘယ်တော့မှ ခေတ်မမီတော့လို့ပါ။ ခရိုမာတိုဂရပ်ဖီ သုတေသနနယ်ပယ်မှာ အချို့သော အကြောင်းအရာတွေ ဒါမှမဟုတ် အတွေးအခေါ်တွေဟာ အသစ်အဆန်းနဲ့ ပိုကောင်းတဲ့ အတွေးအခေါ်တွေနဲ့ အစားထိုးလိုက်တဲ့အခါ ခေတ်မမီတော့သလို ဖြစ်လာပါတယ်၊ ပြဿနာဖြေရှင်းခြင်းနယ်ပယ်မှာ၊ ပြဿနာဖြေရှင်းခြင်း နယ်ပယ်မှာ၊ ပြဿနာဖြေရှင်းခြင်း ဆောင်းပါးကို ဒီဂျာနယ် (အဲဒီအချိန်က LC ဂျာနယ်) မှာ ပထမဆုံး ဖော်ပြခဲ့ပြီးကတည်းက (1)။ လွန်ခဲ့တဲ့ နှစ်အနည်းငယ်အတွင်းမှာ၊ အရည်ခရိုမာတိုဂရပ်ဖီ (LC) ကို ထိခိုက်စေတဲ့ ခေတ်ပြိုင်ခေတ်ရေစီးကြောင်းတွေအပေါ် LC ပြဿနာဖြေရှင်းခြင်း အပိုင်းအတော်များများကို အာရုံစိုက်ခဲ့ပါတယ် (ဥပမာ၊ ထိန်းသိမ်းမှုအပေါ် ဖိအားရဲ့ အကျိုးသက်ရောက်မှုအပေါ် ကျွန်ုပ်တို့ရဲ့ နားလည်မှုကို နှိုင်းယှဉ်ခြင်း [2] တိုးတက်မှုအသစ်များ)၊ LC ရလဒ်တွေကို ကျွန်ုပ်တို့ရဲ့ အဓိပ္ပာယ်ဖွင့်ဆိုချက်နဲ့ ခေတ်မီ LC တူရိယာတွေနဲ့ ပြဿနာဖြေရှင်းနည်း။ ဒီလရဲ့ အပိုင်းမှာ၊ ၂၀၂၁ ခုနှစ် ဒီဇင်ဘာလမှာ စတင်ခဲ့တဲ့ ကျွန်တော့်ရဲ့ စီးရီး (3) ကို ဆက်လက်လုပ်ဆောင်နေပါတယ်၊ LC ပြဿနာဖြေရှင်းခြင်းရဲ့ “အသက်နဲ့ သေခြင်း” အကြောင်းအရာတွေကို အာရုံစိုက်ခဲ့ပါတယ် — ကျွန်ုပ်တို့အသုံးပြုနေတဲ့ စနစ်ရဲ့ အသက်အရွယ် မည်သို့ပင်ရှိစေကာမူ ပြဿနာဖြေရှင်းသူတိုင်းအတွက် ကောင်းမွန်တဲ့အရာတွေက မရှိမဖြစ်လိုအပ်ပါတယ်။ ဒီစီးရီးရဲ့ အဓိကအကြောင်းအရာဟာ LCGC ရဲ့ နာမည်ကြီး “LC” နဲ့ အလွန်သက်ဆိုင်ပါတယ်။ ပြဿနာဖြေရှင်းခြင်းလမ်းညွှန်” နံရံဇယား (4) ကို ဓာတ်ခွဲခန်းများစွာတွင် ချိတ်ဆွဲထားသည်။ ဤစီးရီး၏ တတိယအပိုင်းအတွက်၊ အထွတ်အထိပ်ပုံသဏ္ဍာန် သို့မဟုတ် အထွတ်အထိပ်ဝိသေသလက္ခဏာများနှင့် ဆက်စပ်သော ပြဿနာများကို အာရုံစိုက်ရန် ရွေးချယ်ခဲ့သည်။ အံ့သြစရာကောင်းတာက၊ နံရံဇယားတွင် အထွတ်အထိပ်ပုံသဏ္ဍာန် ညံ့ဖျင်းခြင်း၏ ဖြစ်နိုင်ခြေရှိသော အကြောင်းရင်း ၄၄ ခုကို ဖော်ပြထားသည်။ ဤပြဿနာအားလုံးကို ဆောင်းပါးတစ်ခုတည်းတွင် အသေးစိတ် မစဉ်းစားနိုင်သောကြောင့်၊ ဤခေါင်းစဉ်နှင့်ပတ်သက်သည့် ပထမဆုံးအပိုင်းတွင်၊ ကျွန်ုပ်အများဆုံးတွေ့ရသည့် အကြောင်းရင်းအချို့ကို အာရုံစိုက်ပါမည်။ LC အသုံးပြုသူငယ်များနှင့် အသက်ကြီးသူများသည် ဤအရေးကြီးသောခေါင်းစဉ်နှင့်ပတ်သက်၍ အသုံးဝင်သော အကြံပြုချက်များနှင့် သတိပေးချက်အချို့ကို ရှာတွေ့နိုင်လိမ့်မည်ဟု မျှော်လင့်ပါသည်။
ပြဿနာရှာဖွေဖြေရှင်းခြင်းဆိုင်ရာ မေးခွန်းများကို "ဘာမဆိုဖြစ်နိုင်တယ်" ဟူသော စကားလုံးဖြင့် ပိုမိုဖြေဆိုလာမိပါသည်။ အဓိပ္ပာယ်ဖွင့်ဆိုရန်ခက်ခဲသော လေ့လာတွေ့ရှိချက်များကို ထည့်သွင်းစဉ်းစားသောအခါ ဤတုံ့ပြန်မှုသည် လွယ်ကူပုံရသော်လည်း ကျွန်ုပ်အနေဖြင့် မကြာခဏ သင့်လျော်သည်ဟု တွေ့ရှိပါသည်။ အမြင့်ဆုံးအဆင့် ညံ့ဖျင်းခြင်း၏ ဖြစ်နိုင်ခြေရှိသော အကြောင်းရင်းများစွာဖြင့် ပြဿနာဘာဖြစ်နိုင်သည်ကို စဉ်းစားသောအခါတွင် ပွင့်လင်းသောစိတ်ထားရှိရန်နှင့် ပြဿနာရှာဖွေဖြေရှင်းခြင်းလုပ်ငန်းများကို စတင်ရန် ဖြစ်နိုင်ခြေရှိသော အကြောင်းရင်းများကို ဦးစားပေးနိုင်ရန်၊ အဖြစ်အများဆုံးဖြစ်နိုင်ခြေများကို အာရုံစိုက်နိုင်ရန်၊ ဤအချက်သည် အလွန်အရေးကြီးပါသည်။
ပြဿနာရှာဖွေဖြေရှင်းခြင်းလေ့ကျင့်ခန်းတိုင်းတွင် အဓိကခြေလှမ်းတစ်ခု — သို့သော် ကျွန်တော်ထင်မြင်ယူဆချက်တစ်ခုမှာ — ဖြေရှင်းရန်လိုအပ်သော ပြဿနာတစ်ခုရှိကြောင်း အသိအမှတ်ပြုခြင်းဖြစ်သည်။ ပြဿနာတစ်ခုရှိကြောင်း အသိအမှတ်ပြုခြင်းဆိုသည်မှာ ကိရိယာတွင်ဖြစ်ပျက်သောအရာသည် သီအိုရီ၊ အတွေ့အကြုံဗဟုသုတနှင့် အတွေ့အကြုံများဖြင့် ပုံဖော်ထားသော ကျွန်ုပ်တို့၏ မျှော်လင့်ချက်များနှင့် ကွဲပြားကြောင်း အသိအမှတ်ပြုခြင်းဖြစ်သည် (5)။ ဤနေရာတွင် ရည်ညွှန်းထားသော “ထိပ်ပုံသဏ္ဍာန်” သည် ထိပ်၏ပုံသဏ္ဍာန် (ညီမျှသော၊ မညီမျှသော၊ ချောမွေ့သော၊ ပွယောင်းယောင်း၊ ဦးဆောင်အနား၊ အမြီးပိုင်း၊ စသည်) ကိုသာမက အကျယ်ကိုပါ ရည်ညွှန်းသည်။ တကယ့်ထိပ်ပုံသဏ္ဍာန်အတွက် ကျွန်ုပ်တို့၏ မျှော်လင့်ချက်များသည် ရိုးရှင်းပါသည်။ သီအိုရီ (6) သည် ပုံ 1a တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း chromatographic ထိပ်များသည် အများစုကိစ္စများတွင် ညီမျှပြီး Gaussian ဖြန့်ဖြူးမှု၏ပုံသဏ္ဍာန်နှင့် ကိုက်ညီရမည်ဟူသော စာအုပ်မျှော်လင့်ချက်ကို ကောင်းစွာထောက်ခံပါသည်။ ထိပ်အကျယ်များမှ ကျွန်ုပ်တို့မျှော်လင့်ထားသည်မှာ ပိုမိုရှုပ်ထွေးသောပြဿနာတစ်ခုဖြစ်ပြီး အနာဂတ်ဆောင်းပါးတွင် ဤခေါင်းစဉ်ကို ဆွေးနွေးပါမည်။ ပုံ 1 ရှိ အခြားထိပ်ပုံသဏ္ဍာန်များသည် လေ့လာတွေ့ရှိနိုင်သော အခြားဖြစ်နိုင်ခြေအချို့ကို ပြသထားသည် — တစ်နည်းအားဖြင့် အရာများ မှားယွင်းသွားနိုင်သည့် နည်းလမ်းအချို့ကို ပြသထားသည်။ ဤအပိုင်း၏ ကျန်အပိုင်းတွင်၊ ဖြစ်ပေါ်စေနိုင်သည့် အခြေအနေများ၏ သီးခြားဥပမာအချို့ကို ဆွေးနွေးရန် အချိန်ပေးပါမည်။ ဤပုံသဏ္ဍာန်အမျိုးအစားများသို့။
တစ်ခါတစ်ရံတွင် chromatogram တွင် ၎င်းတို့ကို eluted လုပ်ရန်မျှော်လင့်ထားသည့် peak များကို လုံးဝမတွေ့ရပါ။ အထက်ပါ wall chart သည် peak မရှိခြင်း (နမူနာတွင် detector ၏တုံ့ပြန်မှုသည် noise အထက်တွင်မြင်နိုင်လောက်အောင် လုံလောက်သော concentration တွင် target analyte ပါဝင်သည်ဟုယူဆပါက) သည် တူရိယာပြဿနာအချို့ သို့မဟုတ် မမှန်ကန်သော mobile phase အခြေအနေများနှင့် ဆက်စပ်နေလေ့ရှိသည် (လုံးဝတွေ့ရှိရပါက)။ peak များသည် များသောအားဖြင့် "အားနည်းလွန်းသည်"။ ဤအမျိုးအစားတွင် ဖြစ်နိုင်ချေရှိသော ပြဿနာများနှင့် ဖြေရှင်းချက်များစာရင်းတိုကို ဇယား I တွင် တွေ့ရှိနိုင်ပါသည်။
အထက်တွင်ဖော်ပြခဲ့သည့်အတိုင်း၊ အာရုံစိုက်ပြီး ပြုပြင်ရန်ကြိုးစားခြင်းမပြုမီ မည်မျှအထွတ်အထိပ်ကျယ်ပြန့်ခြင်းကို သည်းခံသင့်သည်ဆိုသည့်မေးခွန်းသည် အနာဂတ်ဆောင်းပါးတွင် ဆွေးနွေးမည့် ရှုပ်ထွေးသောအကြောင်းအရာတစ်ခုဖြစ်သည်။ ကျွန်ုပ်၏အတွေ့အကြုံအရ အထွတ်အထိပ်ကျယ်ပြန့်ခြင်းသည် အထွတ်အထိပ်ပုံသဏ္ဍာန်တွင် သိသာထင်ရှားသောပြောင်းလဲမှုနှင့်အတူ မကြာခဏလိုက်ပါလာလေ့ရှိပြီး အထွတ်အထိပ်မတိုင်မီ သို့မဟုတ် ကွဲထွက်ခြင်းထက် အထွတ်အထိပ်အမြီးပိုင်းသည် ပိုမိုအဖြစ်များသည်။ သို့သော်၊ အမည်ခံအားဖြင့် ညီမျှသော အထွတ်အထိပ်များသည်လည်း ကျယ်ပြန့်လာပြီး ၎င်းသည် မတူညီသောအကြောင်းရင်းအနည်းငယ်ကြောင့် ဖြစ်နိုင်သည်။
ဤပြဿနာတစ်ခုစီကို Troubleshooting LC ၏ ယခင်ထုတ်ဝေမှုများတွင် အသေးစိတ်ဆွေးနွေးခဲ့ပြီးဖြစ်ပြီး၊ ဤအကြောင်းအရာများကို စိတ်ဝင်စားသော စာဖတ်သူများသည် ဤပြဿနာများ၏ မူလအကြောင်းရင်းများနှင့် အလားအလာရှိသော ဖြေရှင်းနည်းများအကြောင်း အချက်အလက်များအတွက် ယခင်ဆောင်းပါးများကို ရည်ညွှန်းနိုင်ပါသည်။ အသေးစိတ်အချက်အလက်များ။
အထွတ်အထိပ်အမြီးပိုင်းခြင်း၊ အထွတ်အထိပ်ရှေ့တန်းခြင်းနှင့် ကွဲထွက်ခြင်းတို့သည် ဓာတုဗေဒ သို့မဟုတ် ရုပ်ပိုင်းဆိုင်ရာဖြစ်စဉ်များကြောင့် ဖြစ်ပွားနိုင်ပြီး ဤပြဿနာများအတွက် အလားအလာရှိသော ဖြေရှင်းချက်များစာရင်းသည် ဓာတုဗေဒ သို့မဟုတ် ရုပ်ပိုင်းဆိုင်ရာပြဿနာကို ကိုင်တွယ်ဖြေရှင်းနေမှုပေါ် မူတည်၍ ကွဲပြားပါသည်။ မကြာခဏဆိုသလို၊ ခရိုမာတိုဂရမ်ရှိ မတူညီသော အထွတ်အထိပ်များကို နှိုင်းယှဉ်ခြင်းဖြင့်၊ မည်သည့်အရာသည် တရားခံဖြစ်သည်ဆိုသည့် အရေးကြီးသော သဲလွန်စများကို သင်ရှာဖွေနိုင်ပါသည်။ ခရိုမာတိုဂရမ်ရှိ အထွတ်အထိပ်အားလုံးသည် အလားတူပုံသဏ္ဌာန်များပြသပါက၊ အကြောင်းရင်းမှာ ရုပ်ပိုင်းဆိုင်ရာမဟုတ်ရန် အများစုဖြစ်နိုင်သည်။ အထွတ်အထိပ်တစ်ခု သို့မဟုတ် အနည်းငယ်သာ ထိခိုက်သော်လည်း ကျန်အရာများသည် ကောင်းမွန်နေပါက၊ အကြောင်းရင်းမှာ ဓာတုဗေဒဖြစ်ရန် အများစုဖြစ်နိုင်သည်။
peak tailing ရဲ့ ဓာတုဗေဒဆိုင်ရာ အကြောင်းရင်းတွေက ဒီမှာ အကျဉ်းချုပ် ဆွေးနွေးဖို့ ရှုပ်ထွေးလွန်းပါတယ်။ စိတ်ဝင်စားတဲ့ စာဖတ်သူအနေနဲ့ ပိုမိုနက်ရှိုင်းတဲ့ ဆွေးနွေးမှုအတွက် “LC Troubleshooting” ရဲ့ မကြာသေးမီက ထုတ်ဝေမှုကို ရည်ညွှန်းထားပါတယ် (10)။ ဒါပေမယ့်၊ စမ်းသပ်ကြည့်ဖို့ လွယ်ကူတဲ့ အရာတစ်ခုကတော့ ထိုးသွင်းလိုက်တဲ့ analyte ရဲ့ mass ကို လျှော့ချပြီး peak shape တိုးတက်ကောင်းမွန်လာမှု ရှိ၊ မရှိ ကြည့်ရှုဖို့ပါပဲ။ အဲဒီလိုဆိုရင်၊ ဒါက ပြဿနာက “mass overload” ဖြစ်တယ်ဆိုတဲ့ ကောင်းမွန်တဲ့ သဲလွန်စတစ်ခုပါပဲ။ ဒီကိစ္စမှာ၊ နည်းလမ်းကို analyte mass အသေးစားတွေကို ထိုးသွင်းဖို့အတွက်ပဲ ကန့်သတ်ထားရမယ်၊ ဒါမှမဟုတ် mass အကြီးကြီးတွေ ထိုးသွင်းထားတဲ့တိုင် ကောင်းမွန်တဲ့ peak shape တွေ ရရှိနိုင်စေဖို့ chromatographic အခြေအနေတွေကို ပြောင်းလဲရပါမယ်။
peak tailing အတွက် ဖြစ်နိုင်ချေရှိသော ရုပ်ပိုင်းဆိုင်ရာ အကြောင်းရင်းများစွာလည်း ရှိပါသည်။ ဖြစ်နိုင်ခြေများကို အသေးစိတ်ဆွေးနွေးရန် စိတ်ဝင်စားသော စာဖတ်သူများသည် “LC Troubleshooting” (11) ၏ မကြာသေးမီကထုတ်ဝေခဲ့သော အခြားစာစောင်ကို ရည်ညွှန်းထားပါသည်။ peak tailing ၏ အဖြစ်များသော ရုပ်ပိုင်းဆိုင်ရာ အကြောင်းရင်းများထဲမှ တစ်ခုမှာ injector နှင့် detector (12) အကြားရှိ အချက်တစ်ခုတွင် ချိတ်ဆက်မှု ညံ့ဖျင်းခြင်း ဖြစ်သည်။ အစွန်းရောက် ဥပမာတစ်ခုကို ရက်သတ္တပတ်အနည်းငယ်က ကျွန်ုပ်၏ဓာတ်ခွဲခန်းတွင် ရရှိခဲ့သော Figure 1d တွင် ပြသထားသည်။ ဤကိစ္စတွင်၊ ကျွန်ုပ်တို့သည် ယခင်က အသုံးမပြုဖူးသော injection valve အသစ်ဖြင့် စနစ်တစ်ခုကို တည်ဆောက်ခဲ့ပြီး stainless steel capillary ပေါ်တွင် ပုံသွင်းထားသော ferrule ပါသည့် injection loop အသေးတစ်ခုကို တပ်ဆင်ခဲ့သည်။ ကနဦး ပြဿနာရှာဖွေမှု စမ်းသပ်မှုအချို့အပြီးတွင် injection valve stator ရှိ port depth သည် ကျွန်ုပ်တို့ အသုံးပြုနေကျထက် များစွာပိုနက်ပြီး port ၏အောက်ခြေတွင် dead volume ကြီးမားစွာ ဖြစ်ပေါ်စေကြောင်း ကျွန်ုပ်တို့ သဘောပေါက်ခဲ့သည်။ ဤပြဿနာကို injection loop ကို အခြားပြွန်တစ်ခုဖြင့် အစားထိုးခြင်းဖြင့် အလွယ်တကူ ဖြေရှင်းနိုင်ပြီး port ၏အောက်ခြေရှိ dead volume ကို ဖယ်ရှားရန် ferrule ကို သင့်လျော်သော အနေအထားသို့ ချိန်ညှိနိုင်ပါသည်။
ပုံ ၁e တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း ထိပ်မျက်နှာစာများသည် ရုပ်ပိုင်းဆိုင်ရာ သို့မဟုတ် ဓာတုဗေဒဆိုင်ရာပြဿနာများကြောင့်လည်း ဖြစ်ပွားနိုင်သည်။ ဦးဆောင်အနား၏ အဖြစ်များသော ရုပ်ပိုင်းဆိုင်ရာအကြောင်းရင်းတစ်ခုမှာ ကော်လံ၏ အမှုန်အိပ်ရာကို ကောင်းစွာထုပ်ပိုးမထားခြင်း သို့မဟုတ် အမှုန်များသည် အချိန်နှင့်အမျှ ပြန်လည်စီစဉ်ထားခြင်း ဖြစ်သည်။ ဤရုပ်ပိုင်းဆိုင်ရာဖြစ်စဉ်ကြောင့် ဖြစ်ပေါ်လာသော ထိပ်အမြီးကဲ့သို့ပင်၊ ၎င်းကိုပြုပြင်ရန် အကောင်းဆုံးနည်းလမ်းမှာ ကော်လံကိုအစားထိုးပြီး ဆက်လက်လုပ်ဆောင်ရန်ဖြစ်သည်။ အခြေခံအားဖြင့်၊ ဓာတုဗေဒဆိုင်ရာ မူလအစရှိသော ဦးဆောင်အနား ထိပ်ပုံသဏ္ဍာန်များသည် ကျွန်ုပ်တို့ "non-linear" ထိန်းသိမ်းမှုအခြေအနေများဟုခေါ်သည့်အရာမှ မကြာခဏပေါ်ပေါက်လာလေ့ရှိသည်။ စံပြ (linear) အခြေအနေများအောက်တွင်၊ stationary phase မှ ထိန်းသိမ်းထားသော analyte ပမာဏ (ထို့ကြောင့်၊ ထိန်းသိမ်းမှုအချက်) သည် ကော်လံရှိ analyte ၏အာရုံစူးစိုက်မှုနှင့် linearly ဆက်စပ်နေသည်။ ခရိုမာတိုဂရပ်ဖစ်အရ၊ ဆိုလိုသည်မှာ analyte ၏ဒြပ်ထုသည် ကော်လံထဲသို့ ထိုးသွင်းလိုက်သည်နှင့်အမျှ ထိပ်သည် ပိုမြင့်လာသော်လည်း ပိုကျယ်မလာပါ။ ထိန်းသိမ်းမှုအပြုအမူသည် non-linear ဖြစ်သောအခါ ဤဆက်ဆံရေးသည် ပျက်သွားပြီး ထိပ်များသည် ပိုမြင့်လာရုံသာမက ဒြပ်ထုပိုမိုထိုးသွင်းလိုက်သည်နှင့်အမျှ ပိုကျယ်လာပါသည်။ ထို့အပြင်၊ nonlinear ပုံသဏ္ဍာန်များသည် chromatographic ထိပ်များ၏ပုံသဏ္ဍာန်ကို ဆုံးဖြတ်ပေးပြီး ဦးဆောင် သို့မဟုတ် နောက်ပြန်အနားများကို ဖြစ်ပေါ်စေသည်။ ထိပ်အမြီးကိုဖြစ်စေသော mass overload နှင့်တူသည် (10)၊ nonlinear retention ကြောင့်ဖြစ်ပေါ်လာသော peak leading ကို ထိုးသွင်းထားသော analyte mass ကို လျှော့ချခြင်းဖြင့်လည်း ရောဂါရှာဖွေနိုင်ပါသည်။ peak ပုံသဏ္ဍာန် တိုးတက်ကောင်းမွန်လာပါက leading edge ကို ဖြစ်စေသော injection quality ကို မကျော်လွန်စေရန် နည်းလမ်းကို ပြုပြင်ရမည်၊ သို့မဟုတ် ဤအပြုအမူကို လျှော့ချရန် chromatographic အခြေအနေများကို ပြောင်းလဲရမည်။
တစ်ခါတစ်ရံတွင် ကျွန်ုပ်တို့သည် ပုံ ၁f တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း “ကွဲထွက်နေသော” ထိပ်ဖျားဟုထင်ရသည့်အရာကို တွေ့ရှိရသည်။ ဤပြဿနာကိုဖြေရှင်းရန် ပထမခြေလှမ်းမှာ ထိပ်ဖျားပုံသဏ္ဍာန်သည် တစ်စိတ်တစ်ပိုင်း ပူးတွဲအလွှာလိုက် ပေါင်းစပ်ခြင်းကြောင့်လား (ဆိုလိုသည်မှာ ကွဲပြားသော်လည်း နီးကပ်စွာ အရည်ပျော်နေသော ဒြပ်ပေါင်းနှစ်ခု ရှိနေခြင်း) ကြောင့်လားဆိုသည်ကို ဆုံးဖြတ်ရန်ဖြစ်သည်။ အကယ်၍ အမှန်တကယ်တွင် နီးကပ်စွာ အရည်ပျော်နေသော ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှု နှစ်ခုရှိပါက၊ ၎င်းတို့၏ ကြည်လင်ပြတ်သားမှုကို မြှင့်တင်ရန်ကိစ္စဖြစ်သည် (ဥပမာ၊ ရွေးချယ်မှု၊ ထိန်းသိမ်းမှု သို့မဟုတ် ပြားအရေအတွက်ကို တိုးမြှင့်ခြင်းဖြင့်)၊ နှင့် “ကွဲထွက်နေသော” ထိပ်ဖျားများသည် ရုပ်ပိုင်းဆိုင်ရာနှင့် ဆက်စပ်နေသည်။ စွမ်းဆောင်ရည်သည် ကော်လံကိုယ်တိုင်နှင့် ဘာမှမဆိုင်ပါ။ မကြာခဏဆိုသလို၊ ဤဆုံးဖြတ်ချက်အတွက် အရေးကြီးဆုံးသဲလွန်စမှာ chromatogram ရှိ ထိပ်ဖျားအားလုံးသည် ကွဲထွက်နေသောပုံသဏ္ဍာန်များ ပြသခြင်း သို့မဟုတ် တစ်ခု သို့မဟုတ် နှစ်ခုသာ ပြသခြင်း ရှိ၊ မရှိဖြစ်သည်။ ၎င်းသည် တစ်ခု သို့မဟုတ် နှစ်ခုသာဖြစ်ပါက၊ ပူးတွဲအလွှာလိုက် ပြဿနာဖြစ်နိုင်သည်။ ထိပ်ဖျားအားလုံး ကွဲထွက်နေပါက၊ ၎င်းသည် ရုပ်ပိုင်းဆိုင်ရာပြဿနာဖြစ်နိုင်ပြီး ကော်လံကိုယ်တိုင်နှင့် ဆက်စပ်နေဖွယ်ရှိသည်။
ကော်လံ၏ ရုပ်ပိုင်းဆိုင်ရာဂုဏ်သတ္တိများနှင့် ဆက်စပ်နေသော ကွဲထွက်နေသော အထွတ်အထိပ်များသည် များသောအားဖြင့် တစ်စိတ်တစ်ပိုင်းပိတ်ဆို့ထားသော အဝင် သို့မဟုတ် အထွက် frits များ သို့မဟုတ် ကော်လံရှိ အမှုန်များ ပြန်လည်စီစဉ်ခြင်းကြောင့်ဖြစ်ပြီး၊ ကော်လံချန်နယ်ဖွဲ့စည်းခြင်း၏ အချို့သောနေရာများတွင် မိုဘိုင်းအဆင့်သည် မိုဘိုင်းအဆင့်ထက် ပိုမိုမြန်ဆန်စွာ စီးဆင်းစေသည်။ အခြားဒေသများ (11) တွင်။ တစ်စိတ်တစ်ပိုင်းပိတ်ဆို့နေသော frit ကို ကော်လံမှတစ်ဆင့် စီးဆင်းမှုကို ပြောင်းပြန်လှန်ခြင်းဖြင့် တစ်ခါတစ်ရံတွင် ရှင်းလင်းနိုင်သည်။ သို့သော်၊ ကျွန်ုပ်၏အတွေ့အကြုံအရ၊ ၎င်းသည် ရေရှည်ဖြေရှင်းချက်ထက် ရေတိုဖြေရှင်းချက်တစ်ခုဖြစ်သည်။ ၎င်းသည် ခေတ်သစ်ကော်လံများတွင် အမှုန်များ ကော်လံအတွင်း ပြန်လည်ပေါင်းစပ်ပါက အသက်အန္တရာယ်ရှိတတ်သည်။ ဤအချက်တွင်၊ ကော်လံကို အစားထိုးပြီး ဆက်လုပ်ခြင်းသည် အကောင်းဆုံးဖြစ်သည်။
ပုံ 1g ရှိ အထွတ်အထိပ်သည် ကျွန်ုပ်၏ကိုယ်ပိုင်ဓာတ်ခွဲခန်းတွင် မကြာသေးမီက ဖြစ်ရပ်တစ်ခုမှလည်းဖြစ်ပြီး၊ ပုံမှန်အားဖြင့် အချက်ပြမှုသည် အလွန်မြင့်မားသောကြောင့် တုံ့ပြန်မှုအပိုင်းအခြား၏ အမြင့်ဆုံးအဆင့်သို့ ရောက်ရှိနေပြီဟု ညွှန်ပြသည်။ optical absorbance detectors (ဤကိစ္စတွင် UV-vis) အတွက်၊ analyte ပါဝင်မှု အလွန်မြင့်မားသောအခါ၊ analyte သည် detector flow cell မှတစ်ဆင့် ဖြတ်သန်းသွားသော အလင်းအများစုကို စုပ်ယူပြီး အလင်းအနည်းငယ်သာ ရှာဖွေတွေ့ရှိနိုင်သည်။ ဤအခြေအနေများအောက်တွင်၊ photodetector မှ လျှပ်စစ်အချက်ပြမှုသည် လမ်းကြောင်းလွဲသောအလင်းနှင့် “မှောင်မိုက်လျှပ်စီးကြောင်း” ကဲ့သို့သော ဆူညံသံရင်းမြစ်အမျိုးမျိုး၏ လွှမ်းမိုးမှုကို ပြင်းထန်စွာခံရပြီး အချက်ပြမှုသည် အလွန် “မှုန်ဝါး” သောပုံပန်းသဏ္ဌာန်ဖြစ်စေပြီး analyte ပါဝင်မှုနှင့် မသက်ဆိုင်ပါ။ ဤသို့ဖြစ်ပျက်သောအခါ၊ analyte ၏ ထိုးသွင်းပမာဏကို လျှော့ချခြင်းဖြင့်—ထိုးသွင်းပမာဏကို လျှော့ချခြင်း၊ နမူနာကို ရောစပ်ခြင်း သို့မဟုတ် နှစ်မျိုးလုံးဖြင့် ပြဿနာကို အလွယ်တကူ ဖြေရှင်းနိုင်သည်။
ခရိုမာတိုဂရပ်ဖီကျောင်းမှာ၊ ကျွန်တော်တို့က နမူနာထဲက ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုပြင်းအားရဲ့ အညွှန်းကိန်းအဖြစ် detector signal (ဆိုလိုသည်မှာ ခရိုမာတိုဂရမ်ရှိ y-ဝင်ရိုး) ကို အသုံးပြုပါတယ်။ ဒါကြောင့် သုညအောက် signal ရှိတဲ့ ခရိုမာတိုဂရမ်ကို မြင်ရတာ ထူးဆန်းပါတယ်၊ ရိုးရှင်းတဲ့ အဓိပ္ပာယ်ဖွင့်ဆိုချက်ကတော့ ဒါက အနုတ်လက္ခဏာ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုပြင်းအားကို ညွှန်ပြနေတာပါ - ဒါက ရုပ်ပိုင်းဆိုင်ရာအရ မဖြစ်နိုင်ဘူးဆိုတာ သေချာပါတယ်။ ကျွန်တော့်အတွေ့အကြုံအရ၊ optical absorbance detector တွေ (ဥပမာ UV-vis) ကို အသုံးပြုတဲ့အခါ အနုတ်လက္ခဏာ peak တွေကို အများဆုံးတွေ့ရလေ့ရှိပါတယ်။
ဤကိစ္စတွင်၊ အနုတ်လက္ခဏာအထွတ်အထိပ်ဆိုသည်မှာ ကော်လံမှ ထွက်ပေါ်လာသော မော်လီကျူးများသည် အထွတ်အထိပ်မတိုင်မီနှင့် ပြီးနောက်တွင် မိုဘိုင်းအဆင့်ထက် အလင်းနည်းစွာ စုပ်ယူသည်ဟု ရိုးရိုးရှင်းရှင်း ဆိုလိုသည်။ ဥပမာအားဖြင့်၊ ၎င်းသည် နှိုင်းယှဉ်ရလျှင် နိမ့်သော ထောက်လှမ်းလှိုင်းအလျားများ (<230 nm) နှင့် ဤလှိုင်းအလျားများတွင် အလင်းအများစုကို စုပ်ယူသော မိုဘိုင်းအဆင့် ဖြည့်စွက်ပစ္စည်းများကို အသုံးပြုသည့်အခါတွင် ဖြစ်ပွားနိုင်သည်။ ထိုကဲ့သို့သော ဖြည့်စွက်ပစ္စည်းများသည် မီသနော သို့မဟုတ် အက်စီတိတ် သို့မဟုတ် ဖော်မတ်ကဲ့သို့သော buffer အစိတ်အပိုင်းများ ဖြစ်နိုင်သည်။ ချိန်ညှိမျဉ်းကွေးတစ်ခု ပြင်ဆင်ရန်နှင့် တိကျသော ပမာဏဆိုင်ရာ အချက်အလက်များကို ရရှိရန် အနုတ်လက္ခဏာအထွတ်အထိပ်များကို အမှန်တကယ် အသုံးပြုနိုင်သည်၊ ထို့ကြောင့် ၎င်းတို့ကို ရှောင်ရှားရန် အခြေခံအကြောင်းပြချက် မရှိကြောင်း (ဤနည်းလမ်းကို တစ်ခါတစ်ရံ “သွယ်ဝိုက် UV ထောက်လှမ်းခြင်း” ဟု ရည်ညွှန်းသည်) (13)။ သို့သော်၊ အနုတ်လက္ခဏာအထွတ်အထိပ်များကို လုံးဝရှောင်ရှားလိုပါက၊ absorbance ထောက်လှမ်းမှုကိစ္စတွင်၊ အကောင်းဆုံးဖြေရှင်းချက်မှာ analyte သည် မိုဘိုင်းအဆင့်ထက် ပိုမိုစုပ်ယူစေရန် သို့မဟုတ် မိုဘိုင်းအဆင့်၏ ဖွဲ့စည်းမှုကို ပြောင်းလဲရန် မတူညီသော ထောက်လှမ်းလှိုင်းအလျားကို အသုံးပြုရန်ဖြစ်ပြီး ၎င်းတို့သည် analytes များထက် အလင်းနည်းစွာ စုပ်ယူကြသည်။
နမူနာတွင် analyte မဟုတ်သော အခြားအစိတ်အပိုင်းများ၏ refractive index (RI) ထောက်လှမ်းမှုကို အသုံးပြုသည့်အခါ solvent matrix ကဲ့သို့သော အစိတ်အပိုင်းများ၏ refractive index သည် mobile phase ၏ refractive index နှင့် မတူညီသည့်အခါ negative peaks များ ပေါ်လာနိုင်သည်။ ၎င်းသည် UV-vis ထောက်လှမ်းမှုတွင်လည်း ဖြစ်ပေါ်သော်လည်း ဤအကျိုးသက်ရောက်မှုသည် RI ထောက်လှမ်းမှုနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက လျော့ပါးသွားတတ်သည်။ နှစ်ခုစလုံးတွင်၊ sample matrix ၏ ဖွဲ့စည်းမှုနှင့် mobile phase ၏ ဖွဲ့စည်းမှုကို ပိုမိုနီးကပ်စွာ ကိုက်ညီစေခြင်းဖြင့် negative peaks များကို လျှော့ချနိုင်သည်။
LC ပြဿနာရှာဖွေဖြေရှင်းခြင်း၏ အခြေခံအကြောင်းအရာနှင့်ပတ်သက်သည့် အပိုင်းသုံးတွင်၊ တွေ့ရှိထားသော ထိပ်ပုံသဏ္ဍာန်သည် မျှော်မှန်းထားသော သို့မဟုတ် ပုံမှန် ထိပ်ပုံသဏ္ဍာန်နှင့် ကွဲပြားသည့် အခြေအနေများကို ကျွန်ုပ်ဆွေးနွေးခဲ့ပါသည်။ ထိုကဲ့သို့သော ပြဿနာများကို ထိရောက်စွာ ဖြေရှင်းခြင်းသည် မျှော်မှန်းထားသော ထိပ်ပုံသဏ္ဍာန်များ (သီအိုရီ သို့မဟုတ် ရှိပြီးသားနည်းလမ်းများနှင့် ယခင်အတွေ့အကြုံအပေါ် အခြေခံ၍) သိရှိခြင်းဖြင့် စတင်သောကြောင့် ဤမျှော်လင့်ချက်များမှ သွေဖည်မှုများသည် ထင်ရှားပါသည်။ ထိပ်ပုံသဏ္ဍာန်ပြဿနာများတွင် ဖြစ်နိုင်ခြေရှိသော အကြောင်းရင်းများစွာ (အလွန်ကျယ်ခြင်း၊ အမြီးပိုင်း၊ ရှေ့စွန်း၊ စသည်) ရှိပါသည်။ ဤအပိုင်းတွင်၊ ကျွန်ုပ်အများဆုံးတွေ့ရသည့် အကြောင်းရင်းအချို့ကို အသေးစိတ်ဆွေးနွေးပါမည်။ ဤအသေးစိတ်အချက်အလက်များကို သိရှိခြင်းသည် ပြဿနာရှာဖွေဖြေရှင်းရန် စတင်ရန် ကောင်းမွန်သောနေရာတစ်ခု ပေးစွမ်းသော်လည်း ဖြစ်နိုင်ခြေအားလုံးကို မဖမ်းယူနိုင်ပါ။ အကြောင်းရင်းများနှင့် ဖြေရှင်းချက်များစာရင်းကို ပိုမိုနက်ရှိုင်းစွာ စိတ်ဝင်စားသော စာဖတ်သူများသည် LCGC “LC ပြဿနာရှာဖွေဖြေရှင်းရေးလမ်းညွှန်” နံရံဇယားကို ရည်ညွှန်းနိုင်ပါသည်။
(4) LCGC “LC ပြဿနာဖြေရှင်းခြင်းလမ်းညွှန်” နံရံဇယား။ https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (၂၀၂၁)။
(6) A. Felinger, Data Analysis and Signal Processing in Chromatography (Elsevier, New York, NY, 1998), pp. 43-96.
(8) Wahab MF, Dasgupta PK, Kadjo AF နှင့် Armstrong DW, Anal.Chim.Journal.Rev. 907, 31–44 (2016).https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043.