కాలక్రమేణా పరికర సాంకేతికత మెరుగుపడినప్పటికీ, LC ఆచరణలో సమస్యలు ఉంటాయి కాబట్టి, కొన్ని LC ట్రబుల్షూటింగ్ అంశాలు ఎప్పటికీ పాతబడవు. ఒక LC సిస్టమ్‌లో సమస్యలు తలెత్తి, పేలవమైన పీక్ షేప్‌కు దారితీయడానికి అనేక మార్గాలు ఉన్నాయి. పీక్ షేప్‌కు సంబంధించిన సమస్యలు తలెత్తినప్పుడు, ఈ ఫలితాలకు గల సాధ్యమయ్యే కారణాల యొక్క ఒక చిన్న జాబితా మన ట్రబుల్షూటింగ్ అనుభవాన్ని సులభతరం చేయడానికి సహాయపడుతుంది.
ఈ “LC ట్రబుల్షూటింగ్” కాలమ్ రాయడం మరియు ప్రతి నెలా అంశాల గురించి ఆలోచించడం సరదాగా ఉంది, ఎందుకంటే కొన్ని అంశాలు ఎప్పటికీ పాతబడవు. క్రోమాటోగ్రఫీ పరిశోధన రంగంలో కొన్ని అంశాలు లేదా ఆలోచనలు కొత్త మరియు మెరుగైన ఆలోచనల ద్వారా భర్తీ చేయబడినప్పుడు వాడుకలో లేకుండా పోతుండగా, ట్రబుల్షూటింగ్ రంగంలో, ఈ జర్నల్‌లో (అప్పటి LC జర్నల్) మొదటి ట్రబుల్షూటింగ్ వ్యాసం 1983లో ప్రచురించబడినప్పటి నుండి కొన్ని అంశాలు ఇప్పటికీ సంబంధితంగా ఉన్నాయి(1). గత కొన్ని సంవత్సరాలుగా, నేను లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ (LC)ని ప్రభావితం చేసే సమకాలీన పోకడలపై అనేక LC ట్రబుల్షూటింగ్ విభాగాలను కేంద్రీకరించాను (ఉదాహరణకు, రిటెన్షన్‌పై పీడనం యొక్క ప్రభావంపై మన అవగాహన యొక్క సాపేక్ష పోలిక [2] కొత్త పురోగతులు), LC ఫలితాలపై మన వ్యాఖ్యానం మరియు ఆధునిక LC పరికరాలతో ట్రబుల్షూట్ చేయడం ఎలా. ఈ నెల సంచికలో, నేను డిసెంబర్ 2021లో ప్రారంభమైన నా సిరీస్‌ను(3) కొనసాగిస్తున్నాను, ఇది LC ట్రబుల్షూటింగ్‌లోని కొన్ని “ప్రాణాపాయ” అంశాలపై దృష్టి పెట్టింది — మనం ఉపయోగిస్తున్న సిస్టమ్ వయస్సుతో సంబంధం లేకుండా, ఏ ట్రబుల్షూటర్‌కైనా గొప్పగా ఉపయోగపడే అంశాలు చాలా అవసరం. ప్రధాన అంశం ఈ శ్రేణిలోని ఈ భాగం, అనేక ప్రయోగశాలలలో వేలాడుతున్న LCGC యొక్క ప్రసిద్ధ “LC ట్రబుల్షూటింగ్ గైడ్” వాల్ చార్ట్ (4) కు చాలా సంబంధితమైనది. ఈ శ్రేణిలోని మూడవ భాగం కోసం, నేను పీక్ ఆకారం లేదా పీక్ లక్షణాలకు సంబంధించిన సమస్యలపై దృష్టి పెట్టాలని ఎంచుకున్నాను. నమ్మశక్యం కాని విధంగా, ఆ వాల్ చార్ట్ పేలవమైన పీక్ ఆకారానికి 44 విభిన్న సంభావ్య కారణాలను జాబితా చేస్తుంది! మనం ఈ సమస్యలన్నింటినీ ఒకే వ్యాసంలో వివరంగా పరిగణించలేము, కాబట్టి ఈ అంశంపై ఈ మొదటి భాగంలో, నేను తరచుగా చూసే వాటిలో కొన్నింటిపై దృష్టి పెడతాను. యువ మరియు వృద్ధ LC వినియోగదారులు ఈ ముఖ్యమైన అంశంపై కొన్ని సహాయకరమైన చిట్కాలు మరియు రిమైండర్‌లను కనుగొంటారని నేను ఆశిస్తున్నాను.
సమస్య పరిష్కార ప్రశ్నలకు "ఏదైనా సాధ్యమే" అని సమాధానం ఇవ్వడం నాకు తరచుగా అలవాటుగా మారింది. అర్థం చేసుకోవడానికి కష్టంగా ఉన్న పరిశీలనలను పరిగణనలోకి తీసుకున్నప్పుడు ఈ సమాధానం సులభంగా అనిపించవచ్చు, కానీ ఇది తరచుగా సరైనదని నేను భావిస్తాను. పేలవమైన పీక్ షేప్‌కు అనేక సంభావ్య కారణాలు ఉన్నందున, సమస్య ఏమిటో పరిగణించేటప్పుడు విశాల దృక్పథంతో ఉండటం ముఖ్యం. అలాగే, మన సమస్య పరిష్కార ప్రయత్నాలను ప్రారంభించడానికి, అత్యంత సాధారణమైన అవకాశాలపై దృష్టి సారిస్తూ, సంభావ్య కారణాలకు ప్రాధాన్యత ఇవ్వగలగడం కూడా ముఖ్యం. ఈ విషయం చాలా కీలకమైనది.
ఏదైనా ట్రబుల్షూటింగ్ ప్రక్రియలో ఒక కీలకమైన దశ — కానీ నేను తక్కువగా అంచనా వేస్తున్నానని భావించేది — పరిష్కరించాల్సిన సమస్య ఒకటి ఉందని గుర్తించడం. సమస్య ఉందని గుర్తించడం అంటే తరచుగా, టూల్‌కు ఏమి జరుగుతుందో మన అంచనాలకు భిన్నంగా ఉందని గుర్తించడం, ఈ అంచనాలు సిద్ధాంతం, అనుభావిక జ్ఞానం మరియు అనుభవం (5) ద్వారా రూపొందించబడతాయి. ఇక్కడ ప్రస్తావించబడిన "పీక్ ఆకారం" వాస్తవానికి పీక్ ఆకారాన్ని (సమరూప, అసమరూప, మృదువైన, మెత్తటి, లీడింగ్ ఎడ్జ్, టెయిలింగ్, మొదలైనవి) మాత్రమే కాకుండా, దాని వెడల్పును కూడా సూచిస్తుంది. వాస్తవ పీక్ ఆకారంపై మన అంచనాలు సరళమైనవి. సిద్ధాంతం (6) పాఠ్యపుస్తక అంచనాను బాగా సమర్థిస్తుంది, చాలా సందర్భాలలో, క్రోమాటోగ్రాఫిక్ పీక్‌లు సమరూపంగా ఉండాలి మరియు ఫిగర్ 1aలో చూపిన విధంగా గాస్సియన్ పంపిణీ ఆకారానికి అనుగుణంగా ఉండాలి. పీక్ వెడల్పుల నుండి మనం ఏమి ఆశిస్తామనేది మరింత సంక్లిష్టమైన విషయం, మరియు ఈ అంశాన్ని మనం భవిష్యత్ వ్యాసంలో చర్చిస్తాము. ఫిగర్ 1లోని ఇతర పీక్ ఆకారాలు గమనించగల కొన్ని ఇతర అవకాశాలను చూపుతాయి — మరో మాటలో చెప్పాలంటే, విషయాలు తప్పుగా జరిగే కొన్ని మార్గాలు. ఈ విడత యొక్క మిగిలిన భాగంలో, మనం గడుపుతాము ఈ రకాల ఆకారాలకు దారితీయగల కొన్ని నిర్దిష్ట పరిస్థితుల ఉదాహరణలను చర్చిద్దాం.
కొన్నిసార్లు క్రోమాటోగ్రామ్‌లో శిఖరాలు వెలువడవలసిన చోట అవి అస్సలు కనిపించవు. పైన ఉన్న వాల్ చార్ట్ ప్రకారం, ఒక శిఖరం కనిపించకపోవడం (నమూనాలో వాస్తవానికి లక్ష్య విశ్లేష్యం, శబ్దాన్ని అధిగమించి దానిని చూడటానికి డిటెక్టర్ ప్రతిస్పందన సరిపోయే గాఢతలో ఉందని భావిస్తే) సాధారణంగా ఏదైనా పరికర సమస్యకు లేదా తప్పు మొబైల్ ఫేజ్ పరిస్థితులకు (అసలు కనిపిస్తే) సంబంధించినదని సూచిస్తుంది. శిఖరాలు, సాధారణంగా చాలా "బలహీనంగా" ఉంటాయి. ఈ వర్గంలోని సంభావ్య సమస్యలు మరియు పరిష్కారాల సంక్షిప్త జాబితాను పట్టిక I లో చూడవచ్చు.
పైన చెప్పినట్లుగా, శిఖరం వెడల్పు ఎంత వరకు పెరిగినా దానిని పట్టించుకుని, సరిచేయడానికి ప్రయత్నించే ముందు సహించాలి అనేది ఒక సంక్లిష్టమైన అంశం, దీని గురించి నేను భవిష్యత్తులో రాబోయే ఒక వ్యాసంలో చర్చిస్తాను. నా అనుభవం ప్రకారం, శిఖరం గణనీయంగా వెడల్పుగా మారినప్పుడు, తరచుగా దాని ఆకారంలో కూడా గణనీయమైన మార్పు వస్తుంది, మరియు శిఖరం ముందు భాగం (ప్రీ-పీక్) లేదా విడిపోవడం (స్ప్లిటింగ్) కంటే శిఖరం తోకలా ఏర్పడటం (పీక్ టెయిలింగ్) సర్వసాధారణం. అయితే, సాధారణంగా సమరూపంగా ఉండే శిఖరాలు కూడా వెడల్పుగా మారతాయి, దీనికి కొన్ని విభిన్న కారణాలు ఉండవచ్చు:
ఈ సమస్యలలో ప్రతి ఒక్కటి ట్రబుల్షూటింగ్ LC యొక్క మునుపటి సంచికలలో వివరంగా చర్చించబడ్డాయి, మరియు ఈ అంశాలపై ఆసక్తి ఉన్న పాఠకులు ఈ సమస్యల యొక్క మూల కారణాలు మరియు సంభావ్య పరిష్కారాల గురించిన సమాచారం కోసం ఆ మునుపటి వ్యాసాలను చూడవచ్చు. మరిన్ని వివరాలు.
పీక్ టెయిలింగ్, పీక్ ఫ్రంటింగ్ మరియు స్ప్లిటింగ్ అన్నీ రసాయన లేదా భౌతిక దృగ్విషయాల వల్ల సంభవించవచ్చు, మరియు ఈ సమస్యలకు సంభావ్య పరిష్కారాల జాబితా, మనం రసాయన లేదా భౌతిక సమస్యతో వ్యవహరిస్తున్నామా అనే దానిపై ఆధారపడి విస్తృతంగా మారుతుంది. తరచుగా, ఒక క్రోమాటోగ్రామ్‌లోని విభిన్న శిఖరాలను పోల్చడం ద్వారా, దోషి ఏది అనే దాని గురించి మీరు ముఖ్యమైన ఆధారాలను కనుగొనవచ్చు. ఒక క్రోమాటోగ్రామ్‌లోని అన్ని శిఖరాలు ఒకే విధమైన ఆకృతులను ప్రదర్శిస్తే, కారణం చాలా మటుకు భౌతికమైనది కాదు. ఒకటి లేదా కొన్ని శిఖరాలు మాత్రమే ప్రభావితమై, మిగిలినవి బాగా కనిపిస్తే, కారణం చాలా మటుకు రసాయనమైనది.
పీక్ టెయిలింగ్ యొక్క రసాయన కారణాలు ఇక్కడ క్లుప్తంగా చర్చించడానికి చాలా సంక్లిష్టమైనవి. మరింత లోతైన చర్చ కోసం ఆసక్తిగల పాఠకుడు “LC ట్రబుల్షూటింగ్” యొక్క ఇటీవలి సంచికను చూడవచ్చు (10). అయితే, ప్రయత్నించడానికి ఒక సులభమైన విషయం ఏమిటంటే, ఇంజెక్ట్ చేయబడిన ఎనలైట్ యొక్క ద్రవ్యరాశిని తగ్గించి, పీక్ ఆకారం మెరుగుపడుతుందో లేదో చూడటం. అలా అయితే, సమస్య “మాస్ ఓవర్‌లోడ్” అని ఇది ఒక మంచి సూచన. ఈ సందర్భంలో, పద్ధతిని చిన్న ఎనలైట్ ద్రవ్యరాశులను ఇంజెక్ట్ చేయడానికి మాత్రమే పరిమితం చేయాలి, లేదా పెద్ద ద్రవ్యరాశులను ఇంజెక్ట్ చేసినప్పటికీ మంచి పీక్ ఆకారాలను పొందగలిగేలా క్రోమాటోగ్రాఫిక్ పరిస్థితులను మార్చాలి.
పీక్ టెయిలింగ్‌కు అనేక సంభావ్య భౌతిక కారణాలు కూడా ఉన్నాయి. ఈ అవకాశాలపై వివరణాత్మక చర్చపై ఆసక్తి ఉన్న పాఠకులు “LC ట్రబుల్షూటింగ్” (11) యొక్క మరొక ఇటీవలి సంచికను చూడవచ్చు. పీక్ టెయిలింగ్‌కు సర్వసాధారణమైన భౌతిక కారణాలలో ఒకటి ఇంజెక్టర్ మరియు డిటెక్టర్ మధ్య ఒక పాయింట్ వద్ద పేలవమైన కనెక్షన్ (12). కొన్ని వారాల క్రితం నా ల్యాబ్‌లో పొందిన ఒక తీవ్రమైన ఉదాహరణను చిత్రం 1dలో చూపబడింది. ఈ సందర్భంలో, మేము ఇంతకు ముందు ఉపయోగించని ఒక కొత్త ఇంజెక్షన్ వాల్వ్‌తో ఒక వ్యవస్థను నిర్మించాము మరియు స్టెయిన్‌లెస్ స్టీల్ కేశనాళికపై అచ్చు వేయబడిన ఫెర్రూల్‌తో ఒక చిన్న వాల్యూమ్ ఇంజెక్షన్ లూప్‌ను ఇన్‌స్టాల్ చేసాము. కొన్ని ప్రాథమిక ట్రబుల్షూటింగ్ ప్రయోగాల తర్వాత, ఇంజెక్షన్ వాల్వ్ స్టేటర్‌లోని పోర్ట్ లోతు మేము అలవాటుపడిన దానికంటే చాలా ఎక్కువగా ఉందని మేము గ్రహించాము, దీని ఫలితంగా పోర్ట్ దిగువన పెద్ద డెడ్ వాల్యూమ్ ఏర్పడింది. ఇంజెక్షన్ లూప్‌ను మరొక ట్యూబ్‌తో భర్తీ చేయడం ద్వారా ఈ సమస్యను సులభంగా పరిష్కరించవచ్చు, పోర్ట్ దిగువన ఉన్న డెడ్ వాల్యూమ్‌ను తొలగించడానికి మేము ఫెర్రూల్‌ను సరైన స్థానానికి సర్దుబాటు చేయవచ్చు.
పటం 1eలో చూపినటువంటి శిఖరాల ముందు భాగాలు భౌతిక లేదా రసాయన సమస్యల వల్ల కూడా ఏర్పడవచ్చు. ముందు అంచు ఏర్పడటానికి ఒక సాధారణ భౌతిక కారణం ఏమిటంటే, కాలమ్ యొక్క కణాల పొర సరిగ్గా ప్యాక్ చేయబడకపోవడం, లేదా కాలక్రమేణా కణాలు పునఃసంఘటితం కావడం. ఈ భౌతిక దృగ్విషయం వల్ల శిఖరం తోకలా మారినట్లే, దీనిని సరిచేయడానికి ఉత్తమ మార్గం కాలమ్‌ను మార్చి, ముందుకు సాగడమే. ప్రాథమికంగా, రసాయన మూలం ఉన్న ముందు అంచు శిఖర ఆకారాలు తరచుగా మనం "నాన్-లీనియర్" నిలుపుదల పరిస్థితులు అని పిలిచే వాటి నుండి ఉత్పన్నమవుతాయి. ఆదర్శ (లీనియర్) పరిస్థితులలో, స్థిర దశ ద్వారా నిలుపుదల చేయబడిన విశ్లేష్యక పరిమాణం (అందువల్ల, నిలుపుదల కారకం) కాలమ్‌లోని విశ్లేష్యక గాఢతకు సరళంగా సంబంధం కలిగి ఉంటుంది. క్రోమాటోగ్రాఫికల్‌గా, దీని అర్థం ఏమిటంటే, కాలమ్‌లోకి ఇంజెక్ట్ చేయబడిన విశ్లేష్యక ద్రవ్యరాశి పెరిగేకొద్దీ, శిఖరం పొడవుగా మారుతుంది, కానీ వెడల్పుగా మారదు. నిలుపుదల ప్రవర్తన నాన్-లీనియర్‌గా ఉన్నప్పుడు ఈ సంబంధం విచ్ఛిన్నమవుతుంది, మరియు ఎక్కువ ద్రవ్యరాశిని ఇంజెక్ట్ చేసినప్పుడు శిఖరాలు పొడవుగా మారడమే కాకుండా వెడల్పుగా కూడా మారతాయి. అదనంగా, నాన్-లీనియర్ ఆకారాలు క్రోమాటోగ్రాఫిక్ శిఖరాల ఆకారాన్ని నిర్ణయిస్తాయి, ఫలితంగా ముందు లేదా వెనుక అంచులు ఏర్పడతాయి. పీక్ టెయిలింగ్‌కు (10) కారణమయ్యే మాస్ ఓవర్‌లోడ్‌తో, ఇంజెక్ట్ చేయబడిన ఎనలైట్ మాస్‌ను తగ్గించడం ద్వారా నాన్‌లీనియర్ రిటెన్షన్ వల్ల కలిగే పీక్ లీడింగ్‌ను కూడా నిర్ధారించవచ్చు. పీక్ ఆకారం మెరుగుపడితే, లీడింగ్ ఎడ్జ్‌కు కారణమయ్యే ఇంజెక్షన్ నాణ్యతను మించకుండా పద్ధతిని సవరించాలి, లేదా ఈ ప్రవర్తనను తగ్గించడానికి క్రోమాటోగ్రాఫిక్ పరిస్థితులను మార్చాలి.
కొన్నిసార్లు మనం పటం 1fలో చూపిన విధంగా "విడిపోయిన" శిఖరంలా కనిపించేదాన్ని గమనిస్తాము. ఈ సమస్యను పరిష్కరించడంలో మొదటి దశ, శిఖరం ఆకారం పాక్షిక సహ-ఎల్యూషన్ (అంటే, రెండు విభిన్నమైన కానీ దగ్గరగా ఎల్యూట్ అయ్యే సమ్మేళనాల ఉనికి) వల్ల ఏర్పడిందా అని నిర్ధారించడం. ఒకవేళ నిజానికి రెండు వేర్వేరు విశ్లేష్యాలు దగ్గరగా ఎల్యూట్ అవుతుంటే, అప్పుడు వాటి రిజల్యూషన్‌ను మెరుగుపరచడం (ఉదాహరణకు, సెలెక్టివిటీ, రిటెన్షన్ లేదా ప్లేట్ కౌంట్‌ను పెంచడం ద్వారా) ముఖ్యం, మరియు కనిపించే "విడిపోయిన" శిఖరాలు భౌతిక పనితీరుకు సంబంధించినవి. దీనికి కాలమ్‌తో ఎటువంటి సంబంధం ఉండదు. తరచుగా, ఈ నిర్ణయానికి అత్యంత ముఖ్యమైన ఆధారం, క్రోమాటోగ్రామ్‌లోని అన్ని శిఖరాలు విడిపోయిన ఆకారాలను ప్రదర్శిస్తున్నాయా, లేదా ఒకటి లేదా రెండు మాత్రమేనా అనేది. ఒకవేళ ఒకటి లేదా రెండు మాత్రమే అయితే, అది బహుశా సహ-ఎల్యూషన్ సమస్య; ఒకవేళ అన్ని శిఖరాలు విడిపోయి ఉంటే, అది బహుశా భౌతిక సమస్య, చాలా మటుకు కాలమ్‌కు సంబంధించినది.
కాలమ్ యొక్క భౌతిక లక్షణాలకు సంబంధించిన స్ప్లిట్ పీక్స్ సాధారణంగా పాక్షికంగా నిరోధించబడిన ఇన్లెట్ లేదా అవుట్‌లెట్ ఫ్రిట్‌ల వల్ల లేదా కాలమ్‌లోని కణాల పునర్‌వ్యవస్థీకరణ వల్ల ఏర్పడతాయి, ఇది కాలమ్ ఛానల్ నిర్మాణం యొక్క కొన్ని ప్రాంతాలలో మొబైల్ ఫేజ్ వేగంగా ప్రవహించడానికి అనుమతిస్తుంది. ఇతర ప్రాంతాలలో (11). పాక్షికంగా మూసుకుపోయిన ఫ్రిట్‌ను కొన్నిసార్లు కాలమ్ ద్వారా ప్రవాహాన్ని రివర్స్ చేయడం ద్వారా క్లియర్ చేయవచ్చు; అయితే, నా అనుభవంలో, ఇది సాధారణంగా దీర్ఘకాలిక పరిష్కారం కంటే స్వల్పకాలిక పరిష్కారం. కాలమ్‌లో కణాలు తిరిగి కలిస్తే ఆధునిక కాలమ్‌లతో ఇది తరచుగా ప్రాణాంతకం. ఈ దశలో, కాలమ్‌ను మార్చి కొనసాగించడం ఉత్తమం.
నా సొంత ల్యాబ్‌లో ఇటీవల జరిగిన ఒక సంఘటనకు సంబంధించిన చిత్రం 1gలోని శిఖరం, సాధారణంగా సిగ్నల్ చాలా ఎక్కువగా ఉండి, ప్రతిస్పందన పరిధి యొక్క ఉన్నత స్థాయికి చేరుకుందని సూచిస్తుంది. ఆప్టికల్ అబ్సార్బెన్స్ డిటెక్టర్ల (ఈ సందర్భంలో UV-vis) విషయంలో, విశ్లేష్య గాఢత చాలా ఎక్కువగా ఉన్నప్పుడు, డిటెక్టర్ ఫ్లో సెల్ గుండా వెళ్ళే కాంతిలో ఎక్కువ భాగాన్ని విశ్లేష్య శోషించుకుంటుంది, దీనివల్ల గుర్తించడానికి చాలా తక్కువ కాంతి మిగిలి ఉంటుంది. ఈ పరిస్థితులలో, ఫోటోడిటెక్టర్ నుండి వచ్చే విద్యుత్ సిగ్నల్, చెల్లాచెదురైన కాంతి మరియు "డార్క్ కరెంట్" వంటి వివిధ శబ్ద మూలాల ద్వారా తీవ్రంగా ప్రభావితమవుతుంది. దీనివల్ల సిగ్నల్ చూడటానికి చాలా "అస్పష్టంగా" కనిపిస్తుంది మరియు విశ్లేష్య గాఢతపై ఆధారపడదు. ఇలా జరిగినప్పుడు, విశ్లేష్య ఇంజెక్షన్ పరిమాణాన్ని తగ్గించడం ద్వారా—అంటే ఇంజెక్షన్ పరిమాణాన్ని తగ్గించడం, నమూనాను పలుచన చేయడం లేదా రెండూ చేయడం ద్వారా—ఈ సమస్యను తరచుగా సులభంగా పరిష్కరించవచ్చు.
క్రోమాటోగ్రఫీ పాఠశాలలో, నమూనాలోని విశ్లేష్య గాఢతకు సూచికగా మేము డిటెక్టర్ సిగ్నల్‌ను (అంటే, క్రోమాటోగ్రామ్‌లోని y-అక్షం) ఉపయోగిస్తాము. కాబట్టి సున్నా కంటే తక్కువ సిగ్నల్‌తో క్రోమాటోగ్రామ్‌ను చూడటం వింతగా అనిపిస్తుంది, ఎందుకంటే దీని సరళమైన వివరణ ఏమిటంటే ఇది ప్రతికూల విశ్లేష్య గాఢతను సూచిస్తుంది – ఇది వాస్తవానికి భౌతికంగా సాధ్యం కాదు. నా అనుభవంలో, ఆప్టికల్ అబ్సార్బెన్స్ డిటెక్టర్లను (ఉదా, UV-vis) ఉపయోగించినప్పుడు ప్రతికూల శిఖరాలు చాలా తరచుగా గమనించబడతాయి.
ఈ సందర్భంలో, ఒక నెగటివ్ పీక్ అంటే, కాలమ్ నుండి వెలువడే అణువులు, ఆ పీక్‌కు ముందు మరియు తరువాత వెంటనే మొబైల్ ఫేజ్ కంటే తక్కువ కాంతిని గ్రహిస్తాయని అర్థం. ఉదాహరణకు, సాపేక్షంగా తక్కువ డిటెక్షన్ తరంగదైర్ఘ్యాలను (<230 nm) మరియు ఈ తరంగదైర్ఘ్యాల వద్ద ఎక్కువ కాంతిని గ్రహించే మొబైల్ ఫేజ్ సంకలితాలను ఉపయోగించినప్పుడు ఇది సంభవించవచ్చు. అటువంటి సంకలితాలు మెథనాల్ వంటి మొబైల్ ఫేజ్ ద్రావణి భాగాలు లేదా అసిటేట్ లేదా ఫార్మేట్ వంటి బఫర్ భాగాలు కావచ్చు. వాస్తవానికి, క్యాలిబ్రేషన్ కర్వ్‌ను సిద్ధం చేయడానికి మరియు ఖచ్చితమైన పరిమాణాత్మక సమాచారాన్ని పొందడానికి నెగటివ్ పీక్‌లను ఉపయోగించవచ్చు, కాబట్టి వాటిని నివారించడానికి ప్రాథమిక కారణం ఏదీ లేదు (ఈ పద్ధతిని కొన్నిసార్లు "పరోక్ష UV డిటెక్షన్" అని కూడా అంటారు) (13). అయితే, అబ్సార్బెన్స్ డిటెక్షన్ విషయంలో, మనం నెగటివ్ పీక్‌లను పూర్తిగా నివారించాలనుకుంటే, ఉత్తమ పరిష్కారం ఏమిటంటే, వేరొక డిటెక్షన్ తరంగదైర్ఘ్యాన్ని ఉపయోగించడం, తద్వారా ఎనలైట్ మొబైల్ ఫేజ్ కంటే ఎక్కువగా గ్రహిస్తుంది, లేదా మొబైల్ ఫేజ్ కూర్పును మార్చడం ద్వారా అవి ఎనలైట్‌ల కంటే తక్కువ కాంతిని గ్రహిస్తాయి.
నమూనాలోని విశ్లేష్యకం కాకుండా ఇతర భాగాలైన ద్రావణి మాతృక (సాల్వెంట్ మ్యాట్రిక్స్) యొక్క వక్రీభవన సూచిక, చలన దశ (మొబైల్ ఫేజ్) యొక్క వక్రీభవన సూచికకు భిన్నంగా ఉన్నప్పుడు, వక్రీభవన సూచిక (RI) గుర్తింపును ఉపయోగించినప్పుడు కూడా ప్రతికూల శిఖరాలు (నెగటివ్ పీక్స్) కనిపించవచ్చు. ఇది UV-విస్ గుర్తింపుతో కూడా జరుగుతుంది, కానీ ఈ ప్రభావం RI గుర్తింపుతో పోలిస్తే బలహీనపడుతుంది. ఈ రెండు సందర్భాలలో, నమూనా మాతృక యొక్క కూర్పును చలన దశ యొక్క కూర్పుతో మరింత దగ్గరగా సరిపోల్చడం ద్వారా ప్రతికూల శిఖరాలను తగ్గించవచ్చు.
LC ట్రబుల్షూటింగ్ యొక్క ప్రాథమిక అంశంపై మూడవ భాగంలో, గమనించిన పీక్ ఆకారం ఆశించిన లేదా సాధారణ పీక్ ఆకారం నుండి భిన్నంగా ఉండే పరిస్థితుల గురించి నేను చర్చించాను. అటువంటి సమస్యల యొక్క సమర్థవంతమైన ట్రబుల్షూటింగ్, ఆశించిన పీక్ ఆకారాల గురించిన జ్ఞానంతో మొదలవుతుంది (సిద్ధాంతం ఆధారంగా లేదా ఇప్పటికే ఉన్న పద్ధతులతో మునుపటి అనుభవం ఆధారంగా), తద్వారా ఈ అంచనాల నుండి వచ్చే విచలనాలు స్పష్టంగా కనిపిస్తాయి. పీక్ ఆకార సమస్యలకు అనేక విభిన్న సంభావ్య కారణాలు ఉన్నాయి (చాలా వెడల్పుగా ఉండటం, టెయిలింగ్, లీడింగ్ ఎడ్జ్, మొదలైనవి). ఈ భాగంలో, నేను తరచుగా చూసే కొన్ని కారణాలను వివరంగా చర్చిస్తాను. ఈ వివరాలు తెలుసుకోవడం ట్రబుల్షూటింగ్ ప్రారంభించడానికి ఒక మంచి మార్గాన్ని అందిస్తుంది, కానీ అన్ని అవకాశాలను పూర్తిగా వివరించదు. కారణాలు మరియు పరిష్కారాల యొక్క మరింత లోతైన జాబితాపై ఆసక్తి ఉన్న పాఠకులు LCGC “LC ట్రబుల్షూటింగ్ గైడ్” వాల్ చార్ట్‌ను చూడవచ్చు.
(4) LCGC “LC ట్రబుల్షూటింగ్ గైడ్” వాల్ చార్ట్.https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021).
(6) ఎ. ఫెలింగర్, క్రోమాటోగ్రఫీలో డేటా విశ్లేషణ మరియు సిగ్నల్ ప్రాసెసింగ్ (ఎల్సెవియర్, న్యూయార్క్, NY, 1998), పేజీలు 43-96.
(8) వహాబ్ MF, దాస్‌గుప్తా PK, కడ్జో AF మరియు ఆర్మ్‌స్ట్రాంగ్ DW, అనల్.చిమ్.జర్నల్.రెవ్. 907, 31–44 (2016).https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043.