Qaar ka mid ah mowduucyada xallinta dhibaatooyinka LC-ga waligood ma dhacaan, maadaama ay jiraan arrimo ku jira dhaqanka LC, xitaa marka tignoolajiyada qalabku ay horumarto waqti ka dib. Waxaa jira siyaabo badan oo ay dhibaatooyinku uga soo bixi karaan nidaamka LC-ga oo ay ugu dambayn ku dhammaadaan qaab liita. Marka ay soo baxaan arrimo la xiriira qaabka ugu sarreeya, liis gaaban oo ah sababaha suurtagalka ah ee natiijooyinkan ayaa ka caawiya fududeynta khibradeena xallinta dhibaatooyinka.
Aad bay u xiiso badnayd in la qoro tiirkan "Xalinta Dhibaatooyinka LC" iyo in laga fikiro mowduucyada bil kasta, sababtoo ah mowduucyada qaar waligood kama baxaan qaabka. Inta cilmi-baarista koromagrafiga lagu jiro, mowduucyo ama fikrado gaar ah ayaa noqda kuwo duugoobay maadaama ay beddelaan fikrado cusub oo ka wanaagsan, dhinaca xallinta dhibaatooyinka, tan iyo markii maqaalkii ugu horreeyay ee xallinta dhibaatooyinka uu ka soo muuqday joornaalkan (Joornaalka LC waqtigaas) maadaama mowduucyada qaar ay weli khuseeyaan) sanadkii 1983(1). Sannadihii la soo dhaafay, waxaan diiradda saaray qaybo badan oo ka mid ah Dhibaatooyinka LC oo ku saabsan isbeddellada casriga ah ee saameeya koromagrafiga dareeraha ah (LC) (tusaale ahaan, isbarbardhigga qaraabada ah ee fahamkeenna saameynta cadaadiska ee haynta [2] Horumarka Cusub) Fasiraaddayada natiijooyinka LC iyo sida loo xalliyo dhibaatooyinka qalabka casriga ah ee LC. Qaybtan bishaan, waxaan sii wadayaa taxanahayga (3), kaas oo bilaabmay Diseembar 2021, kaas oo diiradda saaray qaar ka mid ah mowduucyada "nolosha iyo dhimashada" ee xallinta dhibaatooyinka LC - walxaha aadka u fiican ee xallinta dhibaatooyinka waa lama huraan, iyadoon loo eegin da'da nidaamka aan isticmaaleyno. Mawduuca ugu muhiimsan ee taxanahan aad ayuu ugu habboon yahay LCGC-da caanka ah Shaxda derbiga ee "Tilmaamaha Xallinta Dhibaatooyinka LC" (4) oo ku dheggan shaybaarro badan. Qaybta saddexaad ee taxanahan, waxaan doortay inaan diiradda saaro arrimaha la xiriira qaabka ugu sarreeya ama astaamaha ugu sarreeya. Waxaa la yaab leh, jaantuska derbigu wuxuu taxayaa 44 sababood oo kala duwan oo keeni kara qaab liita! Dhammaan arrimahan si faahfaahsan ugama fiirsan karno hal maqaal, markaa qaybtan koowaad ee mawduuca, waxaan diiradda saari doonaa qaar ka mid ah kuwa aan inta badan arko. Waxaan rajeynayaa in dadka isticmaala LC ee da'da yar iyo kuwa da'da ah ay ka heli doonaan talooyin iyo xasuusin waxtar leh oo ku saabsan mowduucan muhiimka ah.
Waxaan is arkayaa anigoo si isa soo taraysa uga jawaabaya su'aalaha xallinta dhibaatooyinka anigoo leh "wax walba waa suurtagal". Jawaabtani waxay u ekaan kartaa mid fudud marka la tixgelinayo indha-indheynta ay adag tahay in la fasiro, laakiin waxaan inta badan u arkaa inay ku habboon tahay. Iyada oo ay jiraan sababo badan oo suurtagal ah oo keena qaab liita oo aan fiicnayn, waxaa muhiim ah in maskax furan la ilaaliyo marka la tixgelinayo waxa dhibaatadu noqon karto, iyo in la awoodo in la kala hormariyo sababaha suurtagalka ah si loo bilaabo dadaalladeenna xallinta dhibaatooyinka, iyadoo diiradda la saarayo fursadaha ugu badan, qodobkani aad ayuu muhiim u yahay.
Tallaabo muhiim ah oo ku saabsan layli kasta oo lagu xallinayo dhibaatooyinka - laakiin mid aan u maleynayo in la dhimay - waa in la aqoonsado in ay jirto dhibaato u baahan in la xalliyo. Aqoonsiga in ay jirto dhibaato badanaa waxay la macno tahay in la aqoonsado in waxa ku dhaca qalabka uu ka duwan yahay filashooyinkayaga, kuwaas oo lagu qaabeeyey aragti, aqoon khibrad leh, iyo waayo-aragnimo (5). "Qaabka ugu sarreeya" ee halkan lagu tilmaamay dhab ahaantii ma tilmaamayso oo keliya qaabka ugu sarreeya (siman, aan sinnayn, siman, jilicsan, gees hoggaamineed, dabada, iwm.), laakiin sidoo kale ballaca. Filashooyinkayaga qaabka ugu sarreeya ee dhabta ah waa kuwo fudud. Aragtida (6) si fiican ayay u taageertaa rajada buugga in, inta badan kiisaska, meelaha ugu sarreeya ee koromografigu ay noqdaan kuwo siman oo waafaqsan qaabka qaybinta Gaussian, sida lagu muujiyay Jaantuska 1a. Waxa aan ka fileyno ballaca ugu sarreeya waa arrin aad u adag, waxaanan ka wada hadli doonnaa mowduucan maqaal mustaqbalka ah. Qaababka kale ee ugu sarreeya ee Jaantuska 1 waxay muujinayaan qaar ka mid ah fursadaha kale ee la arki karo - si kale haddii loo dhigo, qaar ka mid ah siyaabaha ay wax u qaldami karaan. Inta ka hartay qaybtan, waxaan waqti ku qaadan doonnaa ka hadalka tusaalooyin gaar ah oo xaalado ah waxay keeni kartaa noocyadan qaabka ah.
Mararka qaarkood meelaha ugu sarreeya laguma arko haba yaraatee chromatogram-ka halkaas oo la filayo in laga saaro. Jaantuska derbiga ee kor ku xusan wuxuu tilmaamayaa in maqnaanshaha meel sare (iyadoo la tixgelinayo in muunaddu ay dhab ahaantii ka kooban tahay falanqeeye bartilmaameedka ah oo ku filan inuu ka dhigo jawaabta qalabka mid ku filan si uu uga muuqdo buuqa) badanaa waxay la xiriirtaa arrin qalab ama xaalado aan sax ahayn oo marxaladda moobiilka ah (haddii la arko gebi ahaanba). meelaha ugu sarreeya, badanaa aad u "daciif ah"). Liis gaaban oo ah dhibaatooyinka suurtagalka ah iyo xalalka qaybtan waxaa laga heli karaa Jadwalka I.
Sida kor ku xusan, su'aasha ah inta la aqbali karo ballaarinta ugu sarreysa ka hor inta aan la fiirin oo la isku dayo in la hagaajiyo waa mowduuc adag oo aan kaga hadli doono maqaal mustaqbalka. Waayo-aragnimadaydu waxay tahay in ballaarinta ugu sarreysa ee muhiimka ah ay badanaa la socoto isbeddel weyn oo ku yimaada qaabka ugu sarreeya, iyo dabada ugu sarreysa ayaa ka badan inta ka horreysa meesha ugu sarreysa ama kala-goynta. Si kastaba ha ahaatee, meelaha ugu sarreeya ee magac ahaan isku mid ah ayaa sidoo kale la ballaariyaa, taas oo ay sababi karaan dhowr sababood oo kala duwan:
Mid kasta oo ka mid ah arrimahan waxaa si faahfaahsan looga hadlay cadadyadii hore ee Xal u helidda Dhibaatooyinka LC, akhristayaasha xiisaynaya mowduucyadan waxay tixraaci karaan maqaalladan hore si ay u helaan macluumaad ku saabsan sababaha asaasiga ah iyo xalalka suurtagalka ah ee arrimahan. Faahfaahin dheeraad ah.
Dabada ugu sarreysa, wejiga ugu sarreeya, iyo kala-goysyada dhammaantood waxaa sababi kara ifafaale kiimiko ama jireed, liiska xalalka suurtagalka ah ee dhibaatooyinkanna si weyn ayuu u kala duwan yahay, iyadoo ku xiran haddii aan la tacaaleyno dhibaato kiimiko ama jireed. Badanaa, marka la barbar dhigo meelaha kala duwan ee chromatogram-ka, waxaad ka heli kartaa tilmaamo muhiim ah oo ku saabsan cidda sababta u ah. Haddii dhammaan meelaha ugu sarreeya ee chromatogram-ku ay muujiyaan qaabab isku mid ah, sababtu waxay u badan tahay inaysan ahayn mid jireed. Haddii hal ama dhowr meelood oo keliya ay saameyso, laakiin inta soo hartay ay u muuqdaan kuwo wanaagsan, sababtu waxay u badan tahay inay tahay kiimiko.
Sababaha kiimikada ee keena daadinta ugu sarreysa aad bay u adag tahay in si kooban looga hadlo halkan. Akhristaha xiisaha leh waxaa loo gudbiyay cadadkii dhawaan ee "Xalinta Dhibaatooyinka LC" si looga wada hadlo si qoto dheer (10). Si kastaba ha ahaatee, wax fudud in la isku dayo waa in la yareeyo cufka falanqeeyaha la duray oo la arko haddii qaabka ugu sarreeya uu soo hagaagayo. Haddii ay sidaas tahay, markaa tani waa tilmaan wanaagsan oo muujinaysa in dhibaatadu tahay "culus xad-dhaaf ah". Xaaladdan, habka waa in lagu koobo duritaanka tiro yar oo falanqeeye ah, ama xaaladaha koromatografiga waa in la beddelaa si qaababka ugu sarreeya ee wanaagsan loo helo xitaa iyadoo la duray tiro badan.
Waxaa sidoo kale jira sababo badan oo jireed oo suurtagal ah oo loogu talagalay daadinta ugu sarreysa. Akhristayaasha xiiseynaya dood faahfaahsan oo ku saabsan suurtagalnimada waxaa loo gudbinayaa cadad kale oo dhawaan la soo saaray oo ah "Xalinta Dhibaatooyinka LC" (11). Mid ka mid ah sababaha jireed ee ugu badan ee daadinta ugu sarreysa waa xiriir xumo meel u dhaxaysa duriyaha iyo qalabka wax lagu ogaado (12). Tusaale aad u daran ayaa lagu muujiyay Jaantuska 1d, oo laga helay shaybaarkayga dhowr toddobaad ka hor. Xaaladdan, waxaan dhisnay nidaam leh waal cusub oo duritaan ah oo aanan hore u isticmaalin, waxaanan ku rakibnay wareeg yar oo duritaan ah oo leh ferrule oo lagu sameeyay xidid bir ah oo aan miridh lahayn. Ka dib markii aan tijaabinay qaar ka mid ah tijaabooyinka xallinta dhibaatooyinka bilowga ah, waxaan ogaanay in qoto dheer ee dekedda ee stator-ka waalka duritaanka uu aad uga qoto dheer yahay sidii aan u baran jirnay, taasoo keentay in mug weyn oo dhintay uu ku yaal salka dekedda. Dhibaatadan si fudud ayaa loo xallin karaa iyadoo lagu beddelayo daadinta tuubo kale, waxaan ku hagaajin karnaa ferrule-ka booska saxda ah si loo tirtiro mugga dhintay ee hoose ee dekedda.
Jiidaha ugu sarreeya sida kuwa lagu muujiyay Jaantuska 1e waxaa sidoo kale sababi kara dhibaatooyin jireed ama kiimiko. Sabab jireed oo caadi ah oo ka dhalata geeska hormuudka ah ayaa ah in sariirta walxaha ee tiirka aan si fiican loo buuxin, ama in walxaha dib loo habeeyey waqti ka dib. Sida dabada ugu sarreysa ee ay keento ifafaalahan jireed, habka ugu wanaagsan ee lagu hagaajin karo tan waa in la beddelo tiirka oo la sii wado. Aasaas ahaan, qaababka ugu sarreeya ee geeska ee hormuudka ah oo leh asal kiimiko ayaa badanaa ka soo baxa waxa aan ugu yeerno xaaladaha haynta "aan tooska ahayn". Xaaladaha ku habboon (toosan), xaddiga falanqeeyaha ee lagu hayo wejiga taagan (sidaa darteed, qodobka haynta) wuxuu si toosan ula xiriiraa xoogga falanqeeyaha ee tiirka. Qaab-dhismeedka koromograafiga, tani waxay ka dhigan tahay in marka cufka falanqeeyaha lagu duro tiirka uu kordho, meesha ugu sarreysa ay noqoto mid dheer, laakiin aan ballaaranayn. Xiriirkani wuu jabaa marka dhaqanka haynta uusan ahayn mid toosan, meelaha ugu sarreeyana aysan ahayn oo keliya inay dheeraadaan laakiin sidoo kale ay ballaaran yihiin marka cuf badan la duro. Intaa waxaa dheer, qaababka aan tooska ahayn waxay go'aamiyaan qaabka meelaha ugu sarreeya ee koromograafiga, taasoo keenta geesaha hoggaaminaya ama kuwa gadaal ka socda. Sida culayska cufnaanta ee sababa dabada ugu sarreysa (10), meesha ugu sarreysa Hogaaminta ay keento haynta aan tooska ahayn ayaa sidoo kale lagu ogaan karaa iyadoo la dhimayo cufka falanqaynta ee la duray. Haddii qaabka ugu sarreeya uu soo hagaago, habka waa in wax laga beddelaa si uusan u dhaafin tayada duritaanka ee keenta geeska hore, ama xaaladaha koromografiga waa in la beddelaa si loo yareeyo dhaqankan.
Mararka qaar waxaan aragnaa waxa u muuqda meel sare oo "kala qaybsan", sida ku cad Jaantuska 1f. Tallaabada ugu horreysa ee lagu xallinayo dhibaatadan waa in la go'aamiyo in qaabka ugu sarreeya uu sabab u yahay isku-xidhka qayb ahaan (tusaale ahaan, joogitaanka laba isku-dhafan oo kala duwan laakiin si dhow u soo baxaya). Haddii ay jiraan laba falanqeeye oo kala duwan oo si dhow isugu soo baxaya, markaa waa arrin lagu hagaajinayo xallintooda (tusaale ahaan, iyadoo la kordhinayo xulashada, haynta, ama tirinta saxanka), meelaha ugu sarreeya ee "kala qaybsan" ee muuqdana waxay la xiriiraan Waxqabadka jireed wax xiriir ah lama lahan tiirka laftiisa. Badanaa, tilmaanta ugu muhiimsan ee go'aankan waa in dhammaan meelaha ugu sarreeya ee chromatogram-ku ay muujiyaan qaabab kala qaybsan, ama hal ama laba. Haddii ay tahay hal ama laba, waxay u badan tahay inay tahay arrin isku-dhafan; haddii dhammaan meelaha ugu sarreeya ay kala qaybsan yihiin, waxay u badan tahay inay tahay arrin jireed, oo u badan tahay inay la xiriirto tiirka laftiisa.
Meelaha ugu sarreeya ee la xiriira sifooyinka jireed ee tiirka laftiisa badanaa waxaa sabab u ah qayb ahaan xirmay gelitaanka ama kala-baxa, ama dib-u-habaynta walxaha ku jira tiirka, taasoo u oggolaanaysa wejiga guurguura inuu si ka dhakhso badan u socdo marka loo eego wejiga guurguura meelaha qaarkood ee sameynta kanaalka tiirka. gobollada kale (11). Kala-baxa qayb ahaan xiran mararka qaarkood waxaa lagu nadiifin karaa iyadoo la rogayo socodka tiirka; si kastaba ha ahaatee, waayo-aragnimadayda, tani badanaa waa xal muddo gaaban ah halkii ay ka ahaan lahayd xal muddo dheer ah. Tani badanaa waa mid dilaa ah tiirarka casriga ah haddii walxaha ay dib ugu soo noqdaan tiirka. Waqtigan xaadirka ah, waxaa ugu wanaagsan in la beddelo tiirka oo la sii wado.
Heerka ugu sarreeya ee Jaantuska 1g, oo sidoo kale laga soo xigtay dhacdo dhawaan ka dhacday shaybaarkayga, badanaa waxay muujinaysaa in calaamaddu aad u sarreyso oo ay gaartay dhammaadka sare ee heerka jawaabta. Qalabka lagu ogaado nuugista indhaha (UV-vis kiiskan), marka fiirsashada falanqaynta ay aad u sarreyso, falanqeeyaha ayaa nuugaya inta badan iftiinka ka gudbaya unugyada socodka qalabka, taasoo ka tagaysa iftiin aad u yar in la ogaado. Xaaladahan oo kale, calaamadda korontada ee ka timaadda qalabka sawir-qaadaha waxaa si weyn u saameeya ilo kala duwan oo buuq ah, sida iftiinka qalloocan iyo "current mugdi ah", taasoo ka dhigaysa calaamadda mid aad u "cad" muuqaalka oo ka madax bannaan fiirsashada falanqaynta. Marka tani dhacdo, dhibaatada badanaa si fudud ayaa loo xallin karaa iyadoo la dhimayo mugga duritaanka ee falanqeeyaha - yareynta mugga duritaanka, yareynta muunadda, ama labadaba.
Dugsiga koromatografiga, waxaan u isticmaalnaa calaamadda ogaanshaha (tusaale ahaan, dhidibka y ee koromatografiga) sidii tilmaame muujinaya fiirsashada falanqaynta ee muunadda. Markaa waxay u muuqataa wax lala yaabo in la arko koromatografi oo leh calaamad ka hooseysa eber, maadaama fasiraadda fudud ay tahay in tani ay muujinayso fiirsashada falanqeeye taban - taas oo dabcan aan suurtogal ahayn jir ahaan. Waayo-aragnimadayda, meelaha ugu sarreeya ee taban waxaa badanaa la arkaa marka la isticmaalayo qalabka lagu ogaado nuugista indhaha (tusaale ahaan, UV-vis).
Xaaladdan, meesha ugu sarreysa ee taban waxay si fudud u la macno tahay in molecules-ka ka soo baxaya tiirka ay nuugaan iftiin ka yar marxaladda moobilka laftiisa isla markiiba ka hor iyo ka dib meesha ugu sarreysa. Tani waxay dhici kartaa, tusaale ahaan, marka la isticmaalayo hirarka ogaanshaha oo hooseeya (<230 nm) iyo walxaha lagu daro marxaladda moobilka ee nuugaya inta badan iftiinka hirarkan. Waxyaabaha lagu daro ee noocan oo kale ah waxay noqon karaan qaybaha dareeraha wejiga moobilka sida methanol ama qaybaha kaydka sida acetate ama formate. Qofku wuxuu dhab ahaantii isticmaali karaa meelaha ugu sarreeya ee taban si uu u diyaariyo qalooca cabbiraadda oo uu u helo macluumaad sax ah oo tiro ahaan ah, markaa ma jirto sabab aasaasi ah oo looga fogaado iyaga (habkan waxaa mararka qaarkood loogu yeeraa "ogaanshaha UV-ga aan tooska ahayn") (13). Si kastaba ha ahaatee, haddii aan runtii rabno inaan ka fogaano meelaha ugu sarreeya ee taban gebi ahaanba, marka la eego ogaanshaha nuugista, xalka ugu fiican waa in la isticmaalo hirarka ogaanshaha oo ka duwan si falanqeeyaha uu u nuugo wax ka badan marxaladda moobilka, ama uu u beddelo halabuurka marxaladda moobilka si ay u nuugaan iftiin ka yar kuwa falanqeeyayaasha.
Meelaha ugu sarreeya ee taban ayaa sidoo kale soo bixi kara marka la isticmaalayo ogaanshaha tusmada refractive (RI) marka tusmada refractive ee qaybaha aan ahayn falanqeeyaha muunadda, sida matrix-ka dareeraha, ay ka duwan tahay tusmada refractive ee wejiga moobaylka. Tani waxay sidoo kale dhacdaa marka la ogaado UV-vis, laakiin saameyntani waxay u egtahay in la yareeyo marka loo eego ogaanshaha RI. Labada xaaladoodba, meelaha ugu sarreeya ee taban waxaa lagu yarayn karaa iyadoo si dhow ula jaanqaadaysa halabuurka matrix-ka muunadda kan wejiga moobaylka.
Qaybta saddexaad ee ku saabsan mowduuca aasaasiga ah ee xallinta dhibaatooyinka LC, waxaan ka hadlay xaaladaha qaabka ugu sarreeya ee la arkay uu ka duwan yahay qaabka ugu sarreeya ee la filayo ama kan caadiga ah. Xal u helidda dhibaatooyinka noocaas ah waxay ka bilaabataa aqoonta qaababka ugu sarreeya ee la filayo (iyadoo lagu saleynayo aragti ama waayo-aragnimo hore oo loo leeyahay hababka jira), sidaa darteed leexashada filashooyinkan waa mid iska cad. Dhibaatooyinka qaabka ugu sarreeya waxay leeyihiin sababo badan oo suurtagal ah oo kala duwan (aad u ballaaran, dabada, geeska hoggaaminta, iwm.). Qaybtan, waxaan si faahfaahsan uga hadlayaa qaar ka mid ah sababaha aan inta badan arko. Ogaanshaha faahfaahintan waxay bixisaa meel wanaagsan oo lagu bilaabo xallinta dhibaatooyinka, laakiin ma qabato dhammaan fursadaha. Akhristayaasha xiisaynaya liis qoto dheer oo ah sababaha iyo xalalka waxay tixraaci karaan jaantuska derbiga "Hagaha Xal u helidda Dhibaatooyinka LC" ee LCGC.
(4) Shaxda derbiga ee "Tilmaamaha Dhibaatooyinka LC" ee LCGC.https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021).
(6) A. Felinger, Falanqaynta Xogta iyo Habaynta Calaamadaha ee Chromatography (Elsevier, New York, NY, 1998), boggaga 43-96.
(8) Wahab MF, Dasgupta PK, Kadjo AF iyo Armstrong DW, Anal.Chim.Journal.Rev. 907, 31–44 (2016).https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043.