Lihlooho tse ling tsa ho rarolla mathata a LC ha li feleloe ke nako, kaha ho na le mathata ts'ebetsong ea LC, leha theknoloji ea lisebelisoa e ntlafala ha nako e ntse e ea. Ho na le litsela tse ngata tseo mathata a ka hlahang ka tsona tsamaisong ea LC 'me a qetella a le boemong bo bobe ba tlhōrō. Ha mathata a amanang le sebopeho sa tlhōrō a hlaha, lethathamo le lekhutšoanyane la lisosa tse ka bang teng tsa liphetho tsena li thusa ho nolofatsa phihlelo ea rona ea ho rarolla mathata.
Ho bile monate ho ngola kholomo ena ea "LC Troubleshooting" le ho nahana ka lihlooho khoeli le khoeli, hobane lihlooho tse ling ha li fele setaele. Ha ke ntse ke le lefapheng la chromatography, lipatlisiso tsa lihlooho kapa mehopolo e itseng lia fela ha li ntse li nkeloa sebaka ke mehopolo e mecha le e betere, lefapheng la ho rarolla mathata, ho tloha ha sengoloa sa pele sa ho rarolla mathata se hlaha koranteng ena (LC Journal ka nako eo) kaha lihlooho tse ling li ntse li le bohlokoa) ka 1983(1). Lilemong tse 'maloa tse fetileng, ke tsepamisitse maikutlo likarolong tse' maloa tsa LC Troubleshooting mekhoeng ea sejoale-joale e amang chromatography ea metsi (LC) (mohlala, papiso e amanang le kutloisiso ea rona ea phello ea khatello ho bolokeng [2] Tsoelo-pele e Ncha) Tlhaloso ea rona ea liphetho tsa LC le mokhoa oa ho rarolla mathata ka lisebelisoa tsa sejoale-joale tsa LC. Karolong ea khoeli ena, ke ntse ke tsoela pele ka letoto la ka (3), le qalileng ka Tšitoe 2021, le neng le shebane le tse ling tsa lihlooho tsa "bophelo le lefu" tsa ho rarolla mathata a LC - likarolo tse ntle bakeng sa mothati ofe kapa ofe oa mathata lia hlokahala, ho sa tsotelehe lilemo tsa sistimi eo re e sebelisang. Sehlooho sa mantlha sa letoto lena se bohlokoa haholo ho LCGC e tummeng Chate ea lebota ea "Tataiso ea Mathata a LC" (4) e leketlileng lilaboratoring tse ngata. Karolong ea boraro ea letoto lena, ke khethile ho tsepamisa maikutlo litabeng tse amanang le sebopeho sa tlhoro kapa litšobotsi tsa tlhoro. Ka mokhoa o makatsang, chate ea lebota e thathamisa lisosa tse 44 tse fapaneng tse ka bang teng tsa sebopeho se sebe sa tlhoro! Re ke ke ra nahana ka litaba tsena kaofela ka botlalo sehloohong se le seng, kahoo karolong ena ea pele ea sehlooho, ke tla tsepamisa maikutlo ho tse ling tsa tseo ke li bonang khafetsa. Ke tšepa hore basebelisi ba bacha le ba baholo ba LC ba tla fumana malebela le likhopotso tse thusang tabeng ena ea bohlokoa.
Ke iphumana ke ntse ke araba lipotso tsa ho rarolla mathata ka ho re "ntho efe kapa efe e ka etsahala". Karabo ena e ka bonahala e le bonolo ha ho nahanoa ka lintho tse hlokometsoeng tse thata ho li hlalosa, empa hangata ke e fumana e loketse. Ka mabaka a mangata a ka bang teng a sebopeho se sebe sa tlhoro, ho bohlokoa ho lula u bulehile kelellong ha u nahana hore na bothata e ka ba bofe, le ho khona ho beha pele lisosa tse ka bang teng ho qala boiteko ba rona ba ho rarolla mathata, re tsepamisitse maikutlo menyetla eo e tloaelehileng haholo, ntlha ena e bohlokoa haholo. e ka etsahala.
Mohato oa bohlokoa mosebetsing ofe kapa ofe oa ho rarolla mathata - empa oo ke nahanang hore ha o hlahlojoe hantle - ke ho hlokomela hore ho na le bothata bo hlokang ho rarolloa. Ho lemoha hore ho na le bothata hangata ho bolela ho hlokomela hore se etsahalang sesebelisoa se fapane le litebello tsa rona, tse bōpiloeng ke khopolo-taba, tsebo ea boiphihlelo, le phihlelo (5). "Sebopeho sa tlhōrō" seo ho buuoang ka sona mona ha se bolele feela sebopeho sa tlhōrō (se lekanang, se sa lekanang, se boreleli, se boreledi, se etellang pele, mohatla, jj.), empa hape le bophara. Litebello tsa rona bakeng sa sebopeho sa 'nete sa tlhōrō li bonolo. Khopolo-taba (6) e tšehetsa hantle tebello ea buka ea hore, maemong a mangata, litlhōrō tsa chromatographic li lokela ho ba tse lekanang 'me li lumellane le sebopeho sa kabo ea Gaussian, joalo ka ha ho bontšitsoe ho Setšoantšo sa 1a. Seo re se lebellang ho bophara ba tlhōrō ke taba e rarahaneng haholoanyane, 'me re tla buisana ka sehlooho sena sehloohong se tlang. Libopeho tse ling tsa tlhōrō ho Setšoantšo sa 1 li bontša tse ling tsa menyetla e meng e ka bonoang - ka mantsoe a mang, tse ling tsa litsela tseo lintho li ka tsamaeang hampe ka tsona. Karolong e setseng ea karolo ena, re tla qeta nako re buisana ka mehlala e itseng ea maemo a e ka lebisa ho mefuta ena ea libopeho.
Ka linako tse ling litlhōrō ha li bonoe ho hang ka har'a chromatogram moo ho lebeletsoeng hore li tla hlokomolohuoa. Chate ea lebota e ka holimo e bontša hore ho ba sieo ha tlhōrō (ha re nahana hore sampole e na le analyte e reretsoeng ho ba le mahloriso a lokelang ho etsa hore karabelo ea detector e lekane ho e bona ka holim'a lerata) hangata ho amana le bothata bo itseng ba sesebelisoa kapa maemo a fosahetseng a mokhahlelo oa ho tsamaea (haeba a bonoe ho hang). litlhōrō, hangata "li fokola haholo"). Lethathamo le lekhutšoanyane la mathata le litharollo tse ka bang teng sehlopheng sena le ka fumanoa ho Tafole ea I.
Jwalo ka ha ho boletswe ka hodimo, potso ya hore na ho atoloswa ha tlhoro ho lokela ho mamellwa hakae pele ho elwa hloko le ho leka ho e lokisa ke taba e rarahaneng eo ke tla e bua sehloohong se tlang. Phihlelo ya ka ke hore ho atoloswa ha tlhoro ho bohlokwa hangata ho tsamaisana le phetoho e kgolo sebopehong sa tlhoro, mme ho atoloswa ha tlhoro ho atile haholo ho feta pele ho tlhoro kapa ho arolwa. Leha ho le jwalo, ditlhoro tse tshwanang ka lebitso le tsona di atoloswa, tse ka bakwang ke mabaka a mmalwa a fapaneng:
E 'ngoe le e 'ngoe ea litaba tsena e tšohliloe ka botlalo likhatisong tse fetileng tsa Troubleshooting LC, 'me babali ba nang le thahasello lihloohong tsena ba ka sheba lihlooho tsena tse fetileng bakeng sa tlhahisoleseling mabapi le lisosa tsa mantlha le litharollo tse ka bang teng litabeng tsena. Lintlha tse ling.
Ho ba le mohatla o moholo, ho ba le mothapo o moholo, le ho arohana ha tsona kaofela li ka bakoa ke liketsahalo tsa lik'hemik'hale kapa tsa 'mele, 'me lethathamo la litharollo tse ka bang teng mathateng ana li fapana haholo, ho latela hore na re sebetsana le bothata ba lik'hemik'hale kapa ba 'mele. Hangata, ka ho bapisa litlhōrō tse fapaneng ho chromatogram, u ka fumana lintlha tsa bohlokoa mabapi le hore na sesosa ke sefe. Haeba litlhōrō tsohle ho chromatogram li bontša libopeho tse tšoanang, sesosa mohlomong ha se sa 'mele. Haeba litlhōrō tse le 'ngoe kapa tse 'maloa feela li amehile, empa tse ling kaofela li shebahala li lokile, sesosa mohlomong ke sa lik'hemik'hale.
Lisosa tsa lik'hemik'hale tsa ho tetebela ha moriri ka sehlohlolong li rarahane haholo hore li ka tšohloa ka bokhutšoanyane mona. 'Mali ea nang le thahasello o fetisetsoa khatisong ea morao tjena ea "LC Troubleshooting" bakeng sa puisano e tebileng haholoanyane (10). Leha ho le joalo, ntho e bonolo ho e leka ke ho fokotsa boima ba analyte e kenngoeng le ho bona hore na sebopeho sa tlhōrō sea ntlafala. Haeba ho joalo, joale ena ke leseli le letle la hore bothata ke "boima bo feteletseng". Tabeng ena, mokhoa o tlameha ho lekanyetsoa ho kenya mass a manyane a analyte, kapa maemo a chromatographic a tlameha ho fetoloa e le hore libopeho tse ntle tsa tlhōrō li ka fumanoa esita le ka mass a maholo a kenngoeng.
Hape ho na le mabaka a mangata a ka bang teng a ho hula ha tlhōrō. Babali ba nang le thahasello puisanong e qaqileng ea menyetla ba fetisetsoa khatisong e 'ngoe ea morao tjena ea "LC Troubleshooting" (11). E 'ngoe ea lisosa tse tloaelehileng tsa 'mele tsa ho hula ha tlhōrō ke khokahano e fokolang sebakeng se pakeng tsa injector le detector (12). Mohlala o feteletseng o bontšoa ho Setšoantšo sa 1d, se fumanoeng laboratoring ea ka libeke tse 'maloa tse fetileng. Tabeng ena, re hahile sistimi ka valve e ncha ea ente eo re neng re e-so e sebelise pele, 'me ra kenya loop e nyane ea ente ea volume e nang le ferrule e neng e bōpiloe holim'a capillary ea tšepe e sa hloekang. Kamora liteko tse ling tsa pele tsa ho rarolla mathata, re ile ra hlokomela hore botebo ba kou ho stator ea valve ea ente bo ne bo tebile haholo ho feta kamoo re neng re tloaetse kateng, e leng se ileng sa fella ka volume e kholo e shoeleng tlase koung. Bothata bona bo rarolloa habonolo ka ho nkela loop ea ente sebaka ka tube e 'ngoe, re ka fetola ferrule sebakeng se nepahetseng ho felisa volume e shoeleng tlase koung.
Mahlakore a tlhoro a kang a bontšitsoeng ho Setšoantšo sa 1e a ka boela a bakoa ke mathata a 'mele kapa a lik'hemik'hale. Sesosa se tloaelehileng sa 'mele sa moeli o ka pele ke hore karoloana ea kholomo ha e ea tlama hantle, kapa hore likaroloana li hlophisitsoe bocha ha nako e ntse e ea. Joalo ka ha ho le joalo ka ho tetebela ha ntlha e ka holimo ho bakoang ke ketsahalo ena ea 'mele, tsela e molemohali ea ho lokisa sena ke ho nkela kholomo sebaka le ho tsoela pele. Ha e le hantle, libopeho tsa ntlha ea ntlha e ka pele tse nang le tšimoloho ea lik'hemik'hale hangata li hlaha maemong a ho boloka a "non-linear". Tlas'a maemo a loketseng (a linear), bongata ba analyte bo bolokiloeng ke mohato o sa sisinyeheng (kahoo, ntlha ea ho boloka) bo amana ka ho otloloha le mahloriso a analyte kholomong. Ka chromatographic, sena se bolela hore ha boima ba analyte bo kenngoang kholomong bo ntse bo eketseha, tlhoro e ba telele, empa e se e pharaletseng. Kamano ena ea robeha ha boitšoaro ba ho boloka bo se na mola, 'me litlhōrō ha li be telele feela empa li boetse li pharalla ha boima bo bongata bo kenngoa. Ho phaella moo, libopeho tse seng mola li khetholla sebopeho sa litlhōrō tsa chromatographic, e leng se fellang ka mahlakore a etellang pele kapa a salang morao. Joalo ka boima bo feteletseng bo bakang ho tetebela ha ntlha e ka holimo (10), tlhoro Ho etella pele ho bakoang ke ho boloka ho sa laoleheng ho ka boela ha fumanoa ka ho fokotsa boima ba analyte e kentsweng. Haeba sebopeho sa tlhoro se ntlafala, mokhoa o tlameha ho fetoloa hore o se ke oa feta boleng ba ente bo bakang bohale bo etellang pele, kapa maemo a chromatographic a tlameha ho fetoloa ho fokotsa boits'oaro bona.
Ka linako tse ling re bona se bonahalang e le tlhoro ea "ho arohana", joalo ka ha ho bontšitsoe ho Setšoantšo sa 1f. Mohato oa pele oa ho rarolla bothata bona ke ho fumana hore na sebopeho sa tlhoro se bakoa ke ho kopana ha karolo (ke hore, boteng ba metsoako e 'meli e fapaneng empa e fapana haholo). Haeba ho hlile ho na le li-analyte tse peli tse fapaneng tse kopanang haufi-ufi, joale ke taba ea ho ntlafatsa qeto ea tsona (mohlala, ka ho eketsa khetho, ho boloka, kapa palo ea lipoleiti), 'me litlhōrō tse bonahalang tsa "ho arohana" li amana le 'mele. Tshebetso ha e amane le kholomo ka boeona. Hangata, leseli la bohlokoa ka ho fetisisa qetong ena ke hore na litlhōrō tsohle tse ka har'a chromatogram li bontša libopeho tse arohaneng, kapa e le 'ngoe kapa tse peli feela. Haeba e le e 'ngoe kapa tse peli feela, mohlomong ke bothata ba ho kopana; haeba litlhōrō tsohle li arohane, mohlomong ke bothata ba 'mele, mohlomong bo amana le kholomo ka boeona.
Litlhōrō tse arohaneng tse amanang le thepa ea 'mele ea kholomo ka boeona hangata li bakoa ke li-frits tse koetsoeng ka mokhoa o itseng kapa tse tsoang, kapa ho hlophisoa bocha ha likaroloana kholomong, ho lumella karolo e tsamaeang ho phalla ka potlako ho feta karolo e tsamaeang libakeng tse itseng tsa ho thehoa ha kanale ea kholomo. libakeng tse ling (11). Li-frit tse koetsoeng ka mokhoa o itseng ka linako tse ling li ka tlosoa ka ho khutlisetsa phallo ka har'a kholomo; leha ho le joalo, ho ea ka phihlelo ea ka, hangata ena ke tharollo ea nako e khuts'oane ho fapana le ea nako e telele. Sena hangata se bolaea ka likholomo tsa sejoale-joale haeba likaroloana li kopana hape ka har'a kholomo. Ntlheng ena, ho molemo ho nkela kholomo sebaka 'me u tsoele pele.
Sehlohlolo se ho Setšoantšo sa 1g, le sona se tsoang ketsahalong ea morao tjena laboratoring ea ka, hangata se bontša hore lets'oao le holimo hoo le fihlileng pheletsong e phahameng ea sebaka sa karabelo. Bakeng sa li-detector tsa optical absorbance (UV-vis tabeng ena), ha mahloriso a analyte a le holimo haholo, analyte e monya boholo ba leseli le fetang ka har'a sele ea phallo ea detector, e siea leseli le lenyenyane haholo hore le lemohuoe. Tlas'a maemo ana, lets'oao la motlakase le tsoang ho photodetector le susumetsoa haholo ke mehloli e fapaneng ea lerata, joalo ka leseli le lahlehileng le "leqhubu le lefifi", e leng se etsang hore lets'oao le be "lerootho" haholo ka ponahalo 'me le sa itšetlehe ka mahloriso a analyte. Ha sena se etsahala, bothata hangata bo ka rarolloa habonolo ka ho fokotsa bophahamo ba ente ea analyte - ho fokotsa bophahamo ba ente, ho fokotsa sampole, kapa ka bobeli.
Sekolong sa chromatography, re sebelisa lets'oao la detector (ke hore, y-axis ho chromatogram) e le sesupo sa khatello ea analyte sampole. Kahoo ho bonahala ho makatsa ho bona chromatogram e nang le lets'oao le ka tlase ho lefela, kaha tlhaloso e bonolo ke hore sena se bontša khatello ea analyte e mpe - e leng ntho e ke keng ea etsahala 'meleng. Phihlelong ea ka, litlhōrō tse mpe li bonoa hangata ha ho sebelisoa li-detector tsa optical absorbance (mohlala, UV-vis).
Tabeng ena, tlhoro e mpe e bolela feela hore limolek'hule tse tlohang kholomong li monya leseli le lenyenyane ho feta karolo e tsamaeang ka boeona hang pele le ka mor'a tlhoro. Sena se ka etsahala, mohlala, ha ho sebelisoa maqhubu a fokolang a ho lemoha (<230 nm) le li-additives tsa karolo e tsamaeang tse monyang boholo ba leseli maqhubung ana a maqhubu. Li-additives tse joalo e ka ba likarolo tsa tharollo ea karolo e tsamaeang joalo ka methanol kapa likarolo tsa buffer joalo ka acetate kapa formate. Motho a ka sebelisa litlhōrō tse mpe ho lokisa sekhahla sa ho lekanya le ho fumana tlhaiso-leseling e nepahetseng ea lipalo, kahoo ha ho na lebaka la motheo la ho li qoba ka bohona (mokhoa ona ka linako tse ling o bitsoa "tlhahlobo ea UV e sa tobang") (13). Leha ho le joalo, haeba re hlile re batla ho qoba litlhōrō tse mpe ka ho feletseng, tabeng ea tlhahlobo ea monya, tharollo e molemohali ke ho sebelisa bolelele bo fapaneng ba leqhubu la ho lemoha e le hore analyte e monye ho feta karolo e tsamaeang, kapa ho fetola sebopeho sa karolo e tsamaeang e le hore e monye leseli le lenyenyane ho feta li-analyte.
Litlhōrō tse mpe li ka boela tsa hlaha ha ho sebelisoa tlhahlobo ea refractive index (RI) ha index ea refractive ea likarolo tse ling ntle le analyte sampole, joalo ka matrix ea solvent, e fapane le index ea refractive ea mohato o tsamaeang. Sena se etsahala hape ka tlhahlobo ea UV-vis, empa phello ena e atisa ho fokotseha ha e bapisoa le tlhahlobo ea RI. Maemong ana ka bobeli, litlhōrō tse mpe li ka fokotsoa ka ho bapisa haufi-ufi sebopeho sa matrix ea sampole le sa mohato o tsamaeang.
Karolong ea boraro mabapi le sehlooho sa motheo sa ho rarolla mathata a LC, ke buile ka maemo ao ho 'ona sebopeho sa tlhoro se bonoang se fapaneng le sebopeho sa tlhoro se lebelletsoeng kapa se tloaelehileng. Ho rarolla mathata a joalo ka katleho ho qala ka tsebo ea libopeho tsa tlhoro tse lebelletsoeng (ho latela khopolo-taba kapa boiphihlelo ba pele ka mekhoa e seng e ntse e le teng), kahoo ho kheloha litebellong tsena ho totobetse. Mathata a sebopeho sa tlhoro a na le lisosa tse ngata tse fapaneng tse ka bang teng (tse pharaletseng haholo, tse ka morao, tse etellang pele, jj.). Karolong ena, ke buisana ka botlalo ka mabaka a mang ao ke a bonang hangata. Ho tseba lintlha tsena ho fana ka sebaka se setle sa ho qala ho rarolla mathata, empa ha ho nke menyetla eohle. Babali ba nang le thahasello lenaneng le tebileng la lisosa le litharollo ba ka sheba chate ea lebota ea "LC Troubleshooting Guide" ea LCGC.
(4) Chate ea lebota ea "Tataiso ea ho Tharolla Mathata ea LC" ea LCGC.https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021).
(6) A. Felinger, Tlhahlobo ea Lintlha le Ts'ebetso ea Matšoao ho Chromatography (Elsevier, New York, NY, 1998), maq. 43-96.
(8) Wahab MF, Dasgupta PK, Kadjo AF le Armstrong DW, Anal.Chim.Journal.Rev. 907, 31–44 (2016).https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043.