ʻAʻole pau ka lā o kekahi mau kumuhana hoʻoponopono pilikia LC, no ka mea, aia nā pilikia i ka hana LC, ʻoiai ke holomua nei ka ʻenehana mea kani i ka hala ʻana o ka manawa. Nui nā ala e hiki ai i nā pilikia ke kū mai i loko o kahi ʻōnaehana LC a hoʻopau i ke ʻano piko maikaʻi ʻole. Ke kū mai nā pilikia e pili ana i ke ʻano piko, ʻo kahi papa inoa pōkole o nā kumu hiki no kēia mau hopena e kōkua i ka hoʻomaʻalahi ʻana i kā mākou ʻike hoʻoponopono pilikia.
He mea leʻaleʻa ke kākau ʻana i kēia kolamu "LC Troubleshooting" a me ka noʻonoʻo ʻana i nā kumuhana i kēlā me kēia mahina, no ka mea, ʻaʻole e pau kekahi mau kumuhana i ke ʻano. ʻOiai ma ke kahua o ka noiʻi chromatography, lilo kekahi mau kumuhana a manaʻo paha i mea kahiko i ka wā e pani ʻia ai e nā manaʻo hou a ʻoi aku ka maikaʻi, ma ke kahua o ka hoʻoponopono pilikia, mai ka wā i puka mai ai ka ʻatikala hoʻoponopono pilikia mua ma kēia puke pai (ʻo ka LC Journal i kēlā manawa) ʻoiai kekahi mau kumuhana e pili mau ana) i ka makahiki 1983 (1). I nā makahiki i hala iho nei, ua kālele au i kekahi mau ʻāpana LC Troubleshooting ma nā ʻano hou e pili ana i ka chromatography wai (LC) (no ka laʻana, ka hoʻohālikelike pili o ko mākou ʻike ʻana i ka hopena o ke kaomi ma ka paʻa ʻana [2] New Advances) ʻO kā mākou wehewehe ʻana i nā hopena LC a pehea e hoʻoponopono ai me nā mea hana LC hou. Ma ka hoʻokomo ʻana o kēia mahina, ke hoʻomau nei au i kaʻu moʻo (3), i hoʻomaka i Dekemaba 2021, i kālele ʻia ma kekahi o nā kumuhana "ola a me ka make" o ka hoʻoponopono pilikia LC - nā mea maikaʻi loa no kekahi mea hoʻoponopono pilikia he mea nui, ʻaʻohe mea i ka makahiki o ka ʻōnaehana a mākou e hoʻohana nei. ʻO ke kumuhana nui o kēia moʻo he mea pili loa ia i ka LCGC kaulana. "LC Troubleshooting Guide" pakuhi paia (4) e kau ana ma nā keʻena hoʻokolohua he nui. No ka hapakolu o kēia moʻo, ua koho wau e kālele i nā pilikia e pili ana i ke ʻano o ka piko a i ʻole nā ​​​​ʻano o ka piko. ʻO ka mea kupaianaha, ua papa inoa ka pakuhi paia i 44 mau kumu like ʻole o ke ʻano o ka piko maikaʻi ʻole! ʻAʻole hiki iā mākou ke noʻonoʻo i kēia mau pilikia āpau i nā kikoʻī ma kahi ʻatikala hoʻokahi, no laila ma kēia ʻāpana mua ma ke kumuhana, e kālele wau i kekahi o nā mea aʻu e ʻike pinepine ai. Manaʻolana wau e loaʻa i nā mea hoʻohana LC ʻōpio a me ka ʻelemakule kekahi mau ʻōlelo aʻoaʻo a me nā hoʻomanaʻo kōkua ma kēia kumuhana koʻikoʻi.
Ke ʻike nei au iaʻu iho e pane pinepine ana i nā nīnau hoʻoponopono pilikia me ka ʻōlelo "hiki nā mea āpau". Me he mea lā he maʻalahi kēia pane i ka noʻonoʻo ʻana i nā nānā ʻana he paʻakikī ke wehewehe, akā ʻike pinepine wau he kūpono ia. Me nā kumu he nui o ke ʻano piko maikaʻi ʻole, he mea nui e mālama i kahi noʻonoʻo ākea i ka noʻonoʻo ʻana i ka pilikia, a hiki ke hoʻonohonoho i nā kumu kūpono e hoʻomaka ai i kā mākou mau hana hoʻoponopono pilikia, e kālele ana i kēlā mau mea hiki ke hana pinepine ʻia, he mea nui loa kēia kiko. hiki.
ʻO kahi hana koʻikoʻi i kekahi hana hoʻoponopono pilikia - akā ʻo ka mea aʻu e manaʻo nei he mea i hoʻohaʻahaʻa ʻia - ʻo ia ka ʻike ʻana he pilikia e pono e hoʻoponopono ʻia. ʻO ka ʻike ʻana he pilikia pinepine ia e ʻike ai he ʻokoʻa ka mea e hana ʻia i ka mea hana mai kā mākou mau manaʻolana, i hoʻohālikelike ʻia e ke kumumanaʻo, ka ʻike empirical, a me ka ʻike (5). ʻO ke "ʻano piko" i ʻōlelo ʻia ma ʻaneʻi ʻaʻole ia e pili wale i ke ʻano o ka piko (symmetrical, asymmetrical, smooth, fluffy, leading edge, tailing, etc.), akā i ka laulā hoʻi. He maʻalahi kā mākou mau manaʻolana no ke ʻano piko maoli. Kākoʻo maikaʻi ke kumumanaʻo (6) i ka manaʻolana puke aʻo, i ka hapa nui o nā hihia, pono e symmetrical nā piko chromatographic a kūlike i ke ʻano o kahi hoʻolaha Gaussian, e like me ka mea i hōʻike ʻia ma ke Kiʻi 1a. ʻO ka mea a mākou e manaʻo ai mai nā laulā piko he pilikia paʻakikī, a e kūkākūkā mākou i kēia kumuhana ma kahi ʻatikala e hiki mai ana. Hōʻike nā ʻano piko ʻē aʻe ma ke Kiʻi 1 i kekahi o nā mea hiki ke ʻike ʻia - ma nā huaʻōlelo ʻē aʻe, kekahi o nā ala e hiki ai i nā mea ke hewa. Ma ke koena o kēia ʻāpana, e hoʻolilo mākou i ka manawa e kūkākūkā ai i kekahi mau hiʻohiʻona kikoʻī o nā kūlana e hiki ai ke alakaʻi i kēia mau ʻano kinona.
I kekahi manawa, ʻaʻole ʻike ʻia nā piko i loko o ka chromatogram kahi e manaʻo ʻia ai e eluted. Hōʻike ka pakuhi paia ma luna nei ʻo ka loaʻa ʻole o kahi piko (me ka manaʻo he loaʻa maoli ka analyte i manaʻo ʻia ma kahi ʻano e pono ai ka pane ʻike e lawa ai e ʻike iā ia ma luna o ka walaʻau) pili pinepine ia i kekahi pilikia o ka mea hana a i ʻole nā ​​kūlana pae mobile hewa (inā ʻike ʻia). piko, maʻamau "nāwaliwali loa"). Hiki ke loaʻa kahi papa inoa pōkole o nā pilikia a me nā hoʻonā kūpono ma kēia māhele ma ka Papa I.
E like me ka mea i ʻōlelo ʻia ma luna, ʻo ka nīnau no ka nui o ka hoʻonui ʻana o ka piko e pono e ʻae ʻia ma mua o ka nānā ʻana a me ka hoʻāʻo ʻana e hoʻoponopono iā ia he kumuhana paʻakikī aʻu e kūkākūkā ai ma kahi ʻatikala e hiki mai ana. ʻO koʻu ʻike, ʻo ka hoʻonui nui ʻana o ka piko e hele pū pinepine ʻia me kahi loli koʻikoʻi i ke ʻano o ka piko, a ʻoi aku ka maʻamau o ka piko ma mua o ka pre-peak a i ʻole ka splitting. Eia nō naʻe, ua hoʻonui ʻia nā piko symmetric nominal, hiki ke hana ʻia e kekahi mau kumu like ʻole:
Ua kūkākūkā kikoʻī ʻia kēlā me kēia o kēia mau pilikia ma nā puke i hala o Troubleshooting LC, a hiki i ka poʻe heluhelu e makemake ana i kēia mau kumuhana ke kuhikuhi i kēia mau ʻatikala i hala no ka ʻike e pili ana i nā kumu kumu a me nā hopena kūpono i kēia mau pilikia. Nā kikoʻī hou aku.
Hiki ke hana ʻia ka peak tailing, peak fronting, a me ka splitting e nā hanana kemika a kino paha, a ʻokoʻa loa ka papa inoa o nā hopena kūpono i kēia mau pilikia, ma muli o ka mea e hana nei mākou me kahi pilikia kemika a kino paha. I ka manawa pinepine, ma ka hoʻohālikelike ʻana i nā peaks like ʻole i loko o kahi chromatogram, hiki iā ʻoe ke loaʻa nā hōʻailona koʻikoʻi e pili ana i ka mea hewa. Inā hōʻike nā peaks āpau i loko o kahi chromatogram i nā ʻano like, ʻaʻole paha ke kino ke kumu. Inā hoʻokahi a i ʻole kekahi mau peaks i hoʻopilikia ʻia, akā maikaʻi ke koena, ʻo ke kumu paha he kemika.
He paʻakikī loa nā kumu kemika o ka peak tailing e kūkākūkā pōkole ma aneʻi. Kuhikuhi ʻia ka mea heluhelu hoihoi i ka puke hou o "LC Troubleshooting" no kahi kūkākūkā hohonu (10). Eia nō naʻe, he mea maʻalahi e hoʻāʻo ai, ʻo ia ka hoʻemi ʻana i ka nui o ka analyte i hoʻokomo ʻia a ʻike inā hoʻomaikaʻi ke ʻano o ka peak. Inā pēlā, a laila he hōʻailona maikaʻi kēia ʻo ka pilikia ka "mass overload". I kēia hihia, pono e kaupalena ʻia ke ʻano i ka hoʻokomo ʻana i nā nui liʻiliʻi o ka analyte, a i ʻole pono e hoʻololi ʻia nā kūlana chromatographic i hiki ke loaʻa nā ʻano peak maikaʻi me nā nui nui i hoʻokomo ʻia.
Nui nō hoʻi nā kumu kino kūpono no ka peak tailing. ʻO ka poʻe heluhelu e makemake ana i kahi kūkākūkā kikoʻī o nā mea hiki ke kuhikuhi ʻia i kahi puke hou o "LC Troubleshooting" (11). ʻO kekahi o nā kumu kino maʻamau o ka peak tailing he pilina maikaʻi ʻole ma kahi kiko ma waena o ka injector a me ka detector (12). Hōʻike ʻia kahi laʻana koʻikoʻi ma ke Kiʻi 1d, i loaʻa ma kaʻu lab i kekahi mau pule i hala. I kēia hihia, ua kūkulu mākou i kahi ʻōnaehana me kahi valve injection hou a mākou i hoʻohana ʻole ai ma mua, a ua hoʻokomo i kahi loop injection liʻiliʻi me kahi ferrule i hoʻoheheʻe ʻia ma luna o kahi capillary kila kila. Ma hope o kekahi mau hoʻokolohua hoʻoponopono pilikia mua, ua ʻike mākou ʻoi aku ka hohonu o ka port i loko o ka stator valve injection ma mua o ka mea i maʻa mau ai mākou, e hopena ana i kahi nui make ma lalo o ke awa. Hoʻoponopono maʻalahi ʻia kēia pilikia ma ka hoʻololi ʻana i ka loop injection me kahi paipu ʻē aʻe, hiki iā mākou ke hoʻoponopono i ka ferrule i ke kūlana kūpono e hoʻopau i ka nui make ma lalo o ke awa.
Hiki ke hana ʻia nā ʻaoʻao piko e like me nā mea i hōʻike ʻia ma ke Kiʻi 1e e nā pilikia kino a kemika paha. ʻO kahi kumu kino maʻamau o ka lihi alakaʻi ʻo ia ka hoʻopaʻa ʻole ʻia o ka moena ʻāpana o ke kolamu, a i ʻole ua hoʻonohonoho hou ʻia nā ʻāpana i ka hala ʻana o ka manawa. E like me ka piko tailing i hoʻokumu ʻia e kēia hanana kino, ʻo ke ala maikaʻi loa e hoʻoponopono ai i kēia, ʻo ia ke pani i ke kolamu a hoʻomau. Ma ke kumu, ʻo nā ʻano piko lihi alakaʻi me ke kumu kemika e kū pinepine mai ana mai nā mea a mākou e kapa nei he "non-linear" mau kūlana paʻa. Ma lalo o nā kūlana kūpono (linear), ʻo ka nui o ka analyte i mālama ʻia e ka pae paʻa (no laila, ʻo ka mea paʻa) e pili pono ana i ka nui o ka analyte i loko o ke kolamu. Chromatographically, ʻo ia hoʻi, i ka piʻi ʻana o ka nui o ka analyte i hoʻokomo ʻia i loko o ke kolamu, e piʻi aʻe ka piko, akā ʻaʻole ākea. Ua haki kēia pilina i ka wā e non-linear ai ke ʻano paʻa, a ʻaʻole wale nā ​​​​piko e piʻi aʻe akā ākea hoʻi i ka wā e hoʻokomo ʻia ai ka nui o ka nui. Eia kekahi, hoʻoholo nā ʻano nonlinear i ke ʻano o nā piko chromatographic, e hopena ana i nā kihi alakaʻi a i ʻole nā ​​​​​​lihi hope. E like me ka nui o ka nui e hoʻoulu ai i ka piko tailing (10), hiki ke ʻike ʻia ke alakaʻi piko i hoʻokumu ʻia e ka paʻa nonlinear ma ka hoʻemi ʻana i ka nui o ka analyte i hoʻokomo ʻia. Inā hoʻomaikaʻi ke ʻano o ka piko, pono e hoʻololi ʻia ke ʻano hana i ʻole e ʻoi aku ma mua o ke ʻano o ka injection e hoʻoulu ai i ka lihi alakaʻi, a i ʻole pono e hoʻololi ʻia nā kūlana chromatographic e hōʻemi i kēia ʻano.
I kekahi manawa ʻike mākou i ka mea i ʻike ʻia he piko "māhele", e like me ka mea i hōʻike ʻia ma ke Kiʻi 1f. ʻO ka hana mua i ka hoʻoponopono ʻana i kēia pilikia, ʻo ia ka hoʻoholo ʻana inā paha ma muli o ka co-elution hapa (ʻo ia hoʻi, ke alo o ʻelua mau hui like ʻole akā kokoke loa). Inā he ʻelua mau analytes like ʻole e eluting kokoke ana, a laila he mea ia e hoʻomaikaʻi ai i kā lākou hoʻonā (no ka laʻana, ma ka hoʻonui ʻana i ke koho, ka paʻa ʻana, a i ʻole ka helu pā), a ʻo nā piko "māhele" i ʻike ʻia e pili ana i ke kino ʻAʻohe pili o ka hana me ke kolamu ponoʻī. ʻO ka pinepine, ʻo ka hōʻailona koʻikoʻi loa i kēia hoʻoholo ʻana inā hōʻike nā piko āpau i loko o ka chromatogram i nā ʻano māhele, a i ʻole hoʻokahi a ʻelua paha. Inā hoʻokahi a ʻelua paha, he pilikia co-elution paha ia; inā māhele ʻia nā piko āpau, he pilikia kino paha ia, pili paha i ke kolamu ponoʻī.
ʻO nā piko i māhele ʻia e pili ana i nā waiwai kino o ke kolamu ponoʻī ma muli o nā frits komo a i ʻole nā ​​​​​​puka i ālai ʻia, a i ʻole ka hoʻonohonoho hou ʻana o nā ʻāpana i loko o ke kolamu, e ʻae ana i ka pae mobile e kahe wikiwiki ma mua o ka pae mobile ma kekahi mau wahi o ke kūkulu ʻana o ke kahawai kolamu. ma nā wahi ʻē aʻe (11). Hiki ke hoʻomaʻemaʻe ʻia ka frit i ālai ʻia i kekahi manawa ma ka hoʻohuli ʻana i ke kahe ma o ke kolamu; akā naʻe, i koʻu ʻike, he manawa pōkole kēia ma mua o kahi hopena lōʻihi. He mea make pinepine kēia me nā kolamu hou inā hui hou nā ʻāpana i loko o ke kolamu. I kēia manawa, ʻoi aku ka maikaʻi o ka hoʻololi ʻana i ke kolamu a hoʻomau.
ʻO ka piko ma ke Kiʻi 1g, mai kahi hiʻohiʻona hou i loko o kaʻu keʻena hana ponoʻī, hōʻike pinepine ia ua kiʻekiʻe loa ka hōʻailona a ua hiki i ka hopena kiʻekiʻe o ka pae pane. No nā mea ʻike absorbance optical (UV-vis i kēia hihia), i ka wā e kiʻekiʻe loa ai ka nui o ka analyte, hoʻopili ka analyte i ka hapa nui o ke kukui e hele ana ma o ke kelepona kahe detector, e waiho ana i ka mālamalama liʻiliʻi e ʻike ʻia. Ma lalo o kēia mau kūlana, ua hoʻopilikia nui ʻia ka hōʻailona uila mai ka photodetector e nā kumu walaʻau like ʻole, e like me ke kukui hele hewa a me ke "au pōʻeleʻele", e hoʻolilo ana i ka hōʻailona i "fuzzy" loa i ke ʻano a kūʻokoʻa i ka nui o ka analyte. Ke hana ʻia kēia, hiki ke hoʻoponopono maʻalahi ʻia ka pilikia ma ka hoʻemi ʻana i ka nui o ka injection o ka analyte—e hoʻemi ana i ka nui o ka injection, e hoʻoheheʻe ana i ka laʻana, a i ʻole nā ​​​​mea ʻelua.
Ma ke kula chromatography, hoʻohana mākou i ka hōʻailona detector (ʻo ia hoʻi, ka y-axis i loko o ka chromatogram) ma ke ʻano he hōʻailona o ka nui o ka analyte i loko o ka laʻana. No laila, he mea kupanaha ke ʻike ʻana i kahi chromatogram me kahi hōʻailona ma lalo o ka zero, ʻoiai ʻo ka wehewehe maʻalahi ʻo ia ka hōʻike ʻana i kahi nui o ka analyte maikaʻi ʻole - ʻo ia hoʻi, ʻaʻole hiki ke kino. I koʻu ʻike, ʻike pinepine ʻia nā piko maikaʻi ʻole i ka wā e hoʻohana ai i nā mea ʻike absorbance optical (e laʻa, UV-vis).
I kēia hihia, ʻo ka piko maikaʻi ʻole ke ʻano o ka emi ʻana o ka mālamalama o nā molekala e puka mai ana mai ke kolamu ma mua o ka pae kelepona ponoʻī ma mua koke a ma hope o ka piko. Hiki i kēia ke hana, no ka laʻana, i ka wā e hoʻohana ai i nā nalu ʻike haʻahaʻa (<230 nm) a me nā mea hoʻohui pae kelepona e omo i ka hapa nui o ka mālamalama ma kēia mau nalu. Hiki i kēlā mau mea hoʻohui ke lilo i mau ʻāpana hoʻoheheʻe pae kelepona e like me ka methanol a i ʻole nā ​​​​​​mea buffer e like me ka acetate a i ʻole formate. Hiki i kekahi ke hoʻohana maoli i nā piko maikaʻi ʻole e hoʻomākaukau i kahi piʻo calibration a loaʻa ka ʻike quantitative pololei, no laila ʻaʻohe kumu kumu e pale aku ai iā lākou per se (ua kapa ʻia kēia ʻano hana he "ʻike UV pololei ʻole") (13). Eia nō naʻe, inā makemake maoli mākou e pale aku i nā piko maikaʻi ʻole, i ka hihia o ka ʻike ʻana i ka absorbance, ʻo ka hopena maikaʻi loa ka hoʻohana ʻana i kahi nalu ʻike ʻokoʻa i hiki i ka analyte ke omo ma mua o ka pae kelepona, a i ʻole e hoʻololi i ka haku mele o ka pae kelepona i hiki iā lākou ke omo i ka mālamalama liʻiliʻi ma mua o nā analytes.
Hiki ke ʻike ʻia nā piko maikaʻi ʻole i ka wā e hoʻohana ai i ka ʻike ʻana o ka refractive index (RI) i ka wā e ʻokoʻa ai ka refractive index o nā ʻāpana ʻē aʻe ma mua o ka analyte i loko o ka laʻana, e like me ka matrix solvent, mai ka refractive index o ka mobile phase. Hana pū kēia me ka ʻike ʻana o UV-vis, akā e hoʻemi ʻia kēia hopena e pili ana i ka ʻike ʻana o RI. I nā hihia ʻelua, hiki ke hoʻemi ʻia nā piko maikaʻi ʻole ma ka hoʻohālikelike pono ʻana i ka haku mele ʻana o ka matrix laʻana i ko ka mobile phase.
Ma ka ʻāpana ʻekolu ma ke kumuhana kumu o ka hoʻoponopono pilikia LC, ua kūkākūkā au i nā kūlana kahi i ʻokoʻa ai ke ʻano o ka piko i ʻike ʻia mai ke ʻano piko i manaʻo ʻia a i ʻole ke ʻano maʻamau. Hoʻomaka ka hoʻoponopono pilikia kūpono o ia mau pilikia me ka ʻike o nā ʻano piko i manaʻo ʻia (ma muli o ke kumumanaʻo a i ʻole ka ʻike mua me nā ʻano hana i loaʻa), no laila ua maopopo nā ʻokoʻa mai kēia mau manaʻolana. He nui nā kumu like ʻole o nā pilikia ʻano piko (ākea loa, huelo, ʻoi aku ka lihi, a pēlā aku). Ma kēia ʻāpana, kūkākūkā au i nā kikoʻī i kekahi o nā kumu aʻu e ʻike pinepine ai. ʻO ka ʻike ʻana i kēia mau kikoʻī e hāʻawi i kahi maikaʻi e hoʻomaka ai i ka hoʻoponopono pilikia, akā ʻaʻole i hopu i nā mea hiki āpau. Hiki i ka poʻe heluhelu e makemake ana i kahi papa inoa hohonu o nā kumu a me nā hoʻonā ke kuhikuhi i ka pakuhi paia LCGC "LC Troubleshooting Guide".
(4) Palapala paia LCGC "LC Troubleshooting Guide". https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021).
(6) A. Felinger, Ka Nānā ʻIkepili a me ka Hana ʻana i nā Hōʻailona ma Chromatography (Elsevier, New York, NY, 1998), pp. 43-96.
(8) Wahab MF, Dasgupta PK, Kadjo AF lāua ʻo Armstrong DW, Anal.Chim.Journal.Rev. 907, 31–44 (2016).https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043.