Misy lohahevitra sasany momba ny famahana olana amin'ny LC izay tsy lany andro mihitsy, satria misy olana amin'ny fampiharana ny LC, na dia mihatsara aza ny teknolojian'ny fitaovana rehefa mandeha ny fotoana. Misy fomba maro mety hipoiran'ny olana amin'ny rafitra LC izay mety hiteraka olana amin'ny endrika tendrony ratsy. Rehefa misy olana mifandraika amin'ny endriky ny tendrony, ny lisitra fohy misy ny antony mety mahatonga ireo vokatra ireo dia manampy amin'ny fanamorana ny traikefantsika amin'ny famahana olana.
Mahafinaritra ny manoratra ity tsanganana "LC Troubleshooting" ity sy mieritreritra lohahevitra isam-bolana, satria misy lohahevitra sasany tsy lany andro mihitsy. Raha eo amin'ny sehatry ny fikarohana chromatography dia misy lohahevitra na hevitra sasany lasa lany andro rehefa soloina hevitra vaovao sy tsara kokoa, eo amin'ny sehatry ny famahana olana, hatramin'ny nivoahan'ny lahatsoratra famahana olana voalohany tao amin'ity gazety ity (ny LC Journal tamin'izany fotoana izany) satria mbola misy lohahevitra sasany) tamin'ny 1983 (1). Nandritra ny taona vitsivitsy lasa izay, nifantoka tamin'ny fironana ankehitriny misy fiantraikany amin'ny liquid chromatography (LC) aho (ohatra, ny fampitahana ny fahatakarantsika ny fiantraikan'ny tsindry amin'ny fitazonana [2] New Advances) Ny fandikantsika ny valin'ny LC sy ny fomba famahana olana amin'ny fitaovana LC maoderina. Amin'ity fizarana amin'ity volana ity, dia hanohy ny andian-dahatsoratra (3) aho, izay nanomboka tamin'ny Desambra 2021, izay nifantoka tamin'ny lohahevitra "fiainana sy fahafatesana" sasany momba ny famahana olana LC - singa izay tsara ho an'ny mpanadihady olana rehetra dia tena ilaina, na firy taona na firy taona ny rafitra ampiasainay. Ny lohahevitra fototra amin'ity andiany ity dia tena mifandraika amin'ny LCGC malaza. "Torolàlana momba ny famahana olana amin'ny LC" tabilao rindrina (4) mihantona any amin'ny laboratoara maro. Ho an'ny fizarana fahatelo amin'ity andiany ity, nisafidy ny hifantoka amin'ny olana mifandraika amin'ny endriky ny tendrony na ny toetran'ny tendrony aho. Mahagaga fa ny tabilao rindrina dia mitanisa antony mety ho antony 44 samihafa mahatonga ny endriky ny tendrony ratsy! Tsy afaka mandinika ireo olana rehetra ireo amin'ny antsipiriany ao anaty lahatsoratra iray isika, ka amin'ity fizarana voalohany momba ny lohahevitra ity dia hifantoka amin'ny sasany amin'ireo hitako matetika indrindra aho. Manantena aho fa hahita torohevitra sy fampahatsiahivana mahasoa momba ity lohahevitra manan-danja ity ireo mpampiasa LC tanora sy antitra.
Hitako fa miha-mitombo hatrany ny famaliako fanontaniana momba ny famahana olana amin'ny hoe "azo atao ny zava-drehetra". Mety ho toa mora io valiny io rehefa mandinika ireo fandinihana izay sarotra adika, saingy hitako fa matetika izany no mety. Miaraka amin'ny antony maro mety mahatonga ny endrika ratsy amin'ny tendrony, dia zava-dehibe ny mitazona saina misokatra rehefa mandinika izay mety ho olana, ary mba hahafahana mamantatra ny laharam-pahamehana ireo antony mety hitranga hanombohana ny ezaka famahana olana, amin'ny fifantohana amin'ireo mety ho azo atao matetika indrindra, dia tena zava-dehibe io teboka io.
Dingana iray manan-danja amin'ny fanazaran-tena famahana olana rehetra — saingy heveriko fa tsy dia omena lanja loatra — ny fanekena fa misy olana mila vahana. Ny fanekena fa misy olana matetika dia midika hoe fanekena fa ny zava-mitranga amin'ny fitaovana dia tsy mitovy amin'ny zavatra antenaintsika, izay voaforon'ny teoria, ny fahalalana empirika ary ny traikefa (5). Ny "endrika tendrony" resahina eto dia tsy manondro fotsiny ny endriky ny tendrony (simetrika, tsy simetrika, malama, malefaka, sisiny mitarika, rambony, sns.), fa koa ny sakany. Tsotra ny fanantenantsika amin'ny endriky ny tendrony tena izy. Ny teoria (6) dia manohana tsara ny fanantenan'ny boky fianarana fa, amin'ny ankamaroan'ny tranga, ny tendrony chromatografika dia tokony ho simetrika ary mifanaraka amin'ny endriky ny fizarana Gaussian, araka ny aseho amin'ny Sary 1a. Ny zavatra antenaintsika amin'ny sakany tendrony dia olana sarotra kokoa, ary hiresaka momba izany lohahevitra izany amin'ny lahatsoratra ho avy isika. Ny endriky ny tendrony hafa ao amin'ny Sary 1 dia mampiseho ny sasany amin'ireo mety ho hita hafa — raha lazaina amin'ny teny hafa, ny sasany amin'ireo fomba mety tsy handehanan'ny zavatra. Ao amin'ny ambin'ity fizarana ity, dia handany fotoana hiresahana ohatra manokana momba ny toe-javatra izay mety hitarika amin'ny ireo karazana endrika ireo.
Indraindray dia tsy hita mihitsy ny tendrony ao amin'ny chromatogram izay antenaina hanesorana azy ireo. Ny tabilao etsy ambony dia manondro fa ny tsy fisian'ny tendrony (raha heverina fa misy ny analyte kendrena amin'ny fifantohana izay tokony hahatonga ny valintenin'ny detector ho ampy hahitana azy ambonin'ny tabataba) dia matetika mifandray amin'ny olana amin'ny fitaovana na ny fepetra tsy mety amin'ny dingana finday (raha hita mihitsy). Ny tendrony, matetika "malemy loatra"). Ny lisitra fohy momba ny olana sy vahaolana mety hitranga amin'ity sokajy ity dia hita ao amin'ny Tabilao I.
Araka ny voalaza etsy ambony, ny fanontaniana hoe hatraiza ny fivelaran'ny tendrony tokony ho leferina alohan'ny handinihana sy hanitsiana izany dia lohahevitra sarotra izay horesahiko amin'ny lahatsoratra ho avy. Ny zavatra niainako dia ny fivelaran'ny tendrony lehibe dia matetika miaraka amin'ny fiovana lehibe eo amin'ny endriky ny tendrony, ary ny tailing amin'ny tendrony dia mahazatra kokoa noho ny mialoha ny tendrony na ny fisarahana. Na izany aza, mivelatra ihany koa ireo tendrony mitovy habe, izay mety ho vokatry ny antony vitsivitsy samihafa:
Efa noresahina tamin'ny antsipiriany tao amin'ny laharana teo aloha tamin'ny Troubleshooting LC ireo olana tsirairay ireo, ary ireo mpamaky liana amin'ireo lohahevitra ireo dia afaka mijery ireo lahatsoratra teo aloha ireo raha mila fanazavana momba ny antony fototra sy ny vahaolana mety ho azo amin'ireo olana ireo. Antsipiriany bebe kokoa.
Ny fiakaran'ny tailing, ny fiakaran'ny tailing, ary ny fisarahana dia mety ho vokatry ny trangan-javatra simika na ara-batana, ary miovaova be ny lisitry ny vahaolana mety ho an'ireo olana ireo, miankina amin'ny hoe olana simika na ara-batana no atrehintsika. Matetika, amin'ny fampitahana ireo tendrony samihafa ao amin'ny chromatogram, dia afaka mahita fanazavana manan-danja momba izay meloka ianao. Raha mitovy endrika avokoa ny tendrony rehetra ao amin'ny chromatogram, dia azo inoana fa tsy ara-batana ny antony. Raha tendrony iray na vitsivitsy ihany no voakasika, fa toa tsara ny ambiny, dia azo inoana fa simika ny antony.
Sarotra loatra ny antony simika mahatonga ny fiakaran'ny tailing ka tsy azo resahina fohifohy eto. Aseho amin'ny mpamaky liana ny laharana vao haingana amin'ny "LC Troubleshooting" raha mila fifanakalozan-kevitra lalindalina kokoa (10). Na izany aza, zavatra mora andramana ny mampihena ny lanjan'ny analyte atsindrona ary jereo raha mihatsara ny endriky ny tendrony. Raha izany no izy, dia famantarana tsara izany fa ny olana dia ny "fihoaram-pefy". Amin'ity tranga ity, ny fomba dia tsy maintsy ferana amin'ny fampidirana vondron-analyte kely, na tsy maintsy ovana ny fepetra chromatografika mba hahazoana endrika tendrony tsara na dia amin'ny vondron-petsy lehibe kokoa aza atsindrona.
Misy ihany koa antony ara-batana maro mety hitranga amin'ny fiakaran'ny rano be loatra. Ireo mpamaky liana amin'ny fifanakalozan-kevitra amin'ny antsipiriany momba ireo mety hitranga dia asaina mijery ny laharana vaovao iray hafa amin'ny "LC Troubleshooting" (11). Ny iray amin'ireo antony ara-batana mahazatra indrindra amin'ny fiakaran'ny rano be loatra dia ny fifandraisana tsy mahomby eo amin'ny teboka iray eo anelanelan'ny injector sy ny detector (12). Ohatra iray tafahoatra no aseho amin'ny Sary 1d, azo tao amin'ny laboratoarako herinandro vitsivitsy lasa izay. Amin'ity tranga ity, dia nanamboatra rafitra misy valva fampidirana vaovao izay tsy mbola nampiasainay teo aloha izahay, ary nametraka tadivavarana fampidirana kely misy ferrule izay namboarina tamin'ny kapila vy tsy misy harafesina. Taorian'ny fanandramana voalohany momba ny famahana olana, dia tsapanay fa ny halalin'ny seranana ao amin'ny stator valva fampidirana dia lalina kokoa noho ny nahazatra anay, ka nahatonga ny habetsahana maty be dia be eo amin'ny faran'ny seranana. Mora voavaha ity olana ity amin'ny fanoloana ny tadivavarana fampidirana amin'ny fantsona hafa, afaka manitsy ny ferrule amin'ny toerana mety izahay mba hanafoanana ny habetsahana maty eo amin'ny faran'ny seranana.
Ny tendrony ivelany toy ireo aseho amin'ny Sary 1e dia mety ho vokatry ny olana ara-batana na simika ihany koa. Ny antony ara-batana mahazatra amin'ny sisiny ivelany dia ny tsy fitoviana tsara eo amin'ny fandriana poti-javatra amin'ny tsanganana, na ny fandaminana indray ny poti-javatra rehefa mandeha ny fotoana. Toy ny amin'ny tailing tendrony ivelany vokatry ny tranga ara-batana ity, ny fomba tsara indrindra hamahana izany dia ny fanoloana ny tsanganana ary ny fanohizana izany. Amin'ny ankapobeny, ny endriky ny tendrony ivelany avy amin'ny simika dia matetika avy amin'izay antsointsika hoe fepetra fitazonana "tsy linear". Amin'ny toe-javatra idealy (linear), ny habetsaky ny analyte voatazon'ny dingana tsy mihetsika (noho izany, ny retention factor) dia mifandray amin'ny fifantohana amin'ny analyte ao amin'ny tsanganana. Amin'ny alàlan'ny kromatografika, midika izany fa rehefa mitombo ny lanjan'ny analyte ampidirina ao amin'ny tsanganana, dia mihalava ny tendrony, fa tsy mivelatra kokoa. Tapaka io fifandraisana io rehefa tsy linear ny fitondran-tena fitazonana, ary tsy mihalava fotsiny ny tendrony fa mivelatra kokoa rehefa ampidirina ny lanja bebe kokoa. Ho fanampin'izany, ny endrika tsy linear no mamaritra ny endriky ny tendrony chromatografika, ka miteraka sisiny ivelany na aoriana. Toy ny amin'ny be loatra ny lanja izay miteraka tailing tendrony ivelany (10), Azo fantarina ihany koa ny fiakaran'ny tendrony vokatry ny fihazonana tsy mitongilana amin'ny alàlan'ny fampihenana ny faoben'ny analyte atsindrona. Raha mihatsara ny endriky ny tendrony, dia tsy maintsy ovaina ny fomba fiasa mba tsy hihoatra ny kalitaon'ny tsindrona izay miteraka ny sisiny atsindrona, na tsy maintsy ovaina ny fepetra momba ny kromatografika mba hampihenana izany fihetsika izany.
Indraindray isika dia mahita izay toa tendrony "mizara", araka ny aseho amin'ny Sary 1f. Ny dingana voalohany amin'ny famahana ity olana ity dia ny mamaritra raha toa ka vokatry ny co-elution ampahany (izany hoe, ny fisian'ny singa roa miavaka nefa mifanakaiky ny endriky ny tendrony). Raha misy analyte roa samy hafa mifanakaiky ny elution, dia mila manatsara ny famaha azy ireo (ohatra, amin'ny fampitomboana ny selectivity, ny fitazonana, na ny isan'ny takelaka), ary ny tendrony "mizara" miharihary dia mifandraika amin'ny fizika. Ny fahombiazana dia tsy misy ifandraisany amin'ny tsanganana mihitsy. Matetika, ny famantarana manan-danja indrindra amin'ity fanapahan-kevitra ity dia ny hoe mampiseho endrika mizara ve ny tendrony rehetra ao amin'ny chromatogram, sa iray na roa fotsiny. Raha iray na roa fotsiny izany, dia mety ho olana amin'ny co-elution izany; raha mizara daholo ny tendrony rehetra, dia mety ho olana ara-batana izany, izay mety mifandray amin'ny tsanganana mihitsy.
Ny fizarazarana ny tendrony mifandraika amin'ny toetra ara-batana amin'ny tsanganana dia matetika vokatry ny fidirana na fivoahan'ny frits voasakana ampahany, na ny fandaminana indray ny poti-javatra ao amin'ny tsanganana, izay mamela ny dingana finday hikoriana haingana kokoa noho ny dingana finday any amin'ny faritra sasany amin'ny fananganana fantsona tsanganana. any amin'ny faritra hafa (11). Indraindray ny frit voasakana ampahany dia azo esorina amin'ny alàlan'ny famadihana ny fikorianan'ny rano ao amin'ny tsanganana; na izany aza, araka ny zavatra niainako, dia matetika vahaolana fohy ezaka izany fa tsy maharitra. Matetika izany dia mahafaty amin'ny tsanganana maoderina raha toa ka miverina miangona ao anatin'ny tsanganana ireo poti-javatra. Amin'izao fotoana izao, tsara kokoa ny manolo ny tsanganana ary manohy.
Ny tampon'isa ao amin'ny Sary 1g, izay avy amin'ny ohatra vao haingana tao amin'ny laboratoarako manokana ihany koa, dia mazàna manondro fa avo dia avo ny famantarana ka nahatratra ny fara tampony amin'ny elanelan'ny valiny. Ho an'ny fitaovana fitiliana absorbance optika (UV-vis amin'ity tranga ity), rehefa avo dia avo ny fifantohan'ny analyte, dia mandray ny ankamaroan'ny hazavana mandalo amin'ny sela mikoriana ao amin'ny fitaovana fitiliana ny analyte, ka mamela hazavana kely dia kely ho hita. Amin'ireny toe-javatra ireny, ny famantarana elektrika avy amin'ny photodetector dia voataonan'ny loharanon-tabataba isan-karazany, toy ny hazavana miparitaka sy ny "courant maizina", ka mahatonga ny famantarana ho "manjavozavo" be ary tsy miankina amin'ny fifantohan'ny analyte. Rehefa mitranga izany, dia matetika azo vahana mora foana ny olana amin'ny alàlan'ny fampihenana ny habetsaky ny tsindrona amin'ny analyte - fampihenana ny habetsaky ny tsindrona, fanalefahana ny santionany, na izy roa miaraka.
Ao amin'ny sekoly chromatography, mampiasa ny famantarana detector (ohatra, ny y-axis ao amin'ny chromatogram) ho toy ny famantarana ny fifantohana analyte ao amin'ny santionany isika. Noho izany dia toa hafahafa ny mahita chromatogram misy famantarana ambanin'ny aotra, satria ny fandikana tsotra dia midika fa fifantohana analyte ratsy izany - izay mazava ho azy fa tsy azo atao ara-batana. Araka ny zavatra niainako, ny tendrony ratsy dia matetika hita rehefa mampiasa detector absorbance optika (ohatra, UV-vis).
Amin'ity tranga ity, ny tendrony ratsy dia midika fotsiny hoe ireo molekiola mivoaka avy amin'ny tsanganana dia mandray hazavana kely kokoa noho ny dingana finday mihitsy aloha sy aorian'ny tendrony. Mety hitranga izany, ohatra, rehefa mampiasa halavan'ny onjam-pandrefesana ambany (<230 nm) sy ireo akora fanampiny amin'ny dingana finday izay mandray ny ankamaroan'ny hazavana amin'ireo halavan'ny onjam-pandrefesana ireo. Ireo akora fanampiny ireo dia mety ho singa solvent amin'ny dingana finday toy ny methanol na singa buffer toy ny acetate na formate. Azo ampiasaina ny tendrony ratsy mba hanomanana ny fiolahana calibration sy hahazoana fampahalalana marina momba ny habetsahana, ka tsy misy antony fototra tokony hialana amin'izany (ity fomba ity dia antsoina indraindray hoe "famantarana UV tsy mivantana") (13). Na izany aza, raha tena te hisoroka tanteraka ny tendrony ratsy isika, amin'ny trangan'ny famantarana ny absorbance, ny vahaolana tsara indrindra dia ny fampiasana halavan'ny onjam-pandrefesana hafa mba hahafahan'ny analyte mandray hazavana bebe kokoa noho ny dingana finday, na manova ny firafitry ny dingana finday mba hahafahan'izy ireo mandray hazavana kely kokoa noho ny analyte.
Mety hiseho ihany koa ny tendrony ratsy rehefa mampiasa ny fitiliana ny refractive index (RI) rehefa tsy mitovy amin'ny refractive index an'ny dingana finday ny refractive index an'ireo singa hafa ankoatra ny analyte ao amin'ny santionany, toy ny solvent matrix. Mitranga ihany koa izany amin'ny fitiliana UV-vis, saingy mirona ho mihena io vokatra io raha oharina amin'ny fitiliana RI. Amin'ireo tranga roa ireo, dia azo ahena ny tendrony ratsy amin'ny alàlan'ny fampifanarahana akaiky kokoa ny firafitry ny matrice santionany amin'ny an'ny dingana finday.
Ao amin'ny fizarana fahatelo momba ny lohahevitra fototra momba ny famahana olana amin'ny LC, dia niresaka momba ireo toe-javatra izay tsy mitovy amin'ny endrika tendrony andrasana na mahazatra ny endriky ny tendrony hita maso. Ny famahana olana mahomby amin'ny olana toy izany dia manomboka amin'ny fahalalana ny endriky ny tendrony andrasana (mifototra amin'ny teoria na traikefa teo aloha tamin'ny fomba efa misy), ka miharihary ny fiviliana amin'ireo fanantenana ireo. Ny olana amin'ny endriky ny tendrony dia manana antony maro samihafa mety hitranga (mivelatra loatra, midina, sisiny mitarika, sns.). Amin'ity fizarana ity, dia hiresaka amin'ny antsipiriany ny sasany amin'ireo antony hitako matetika aho. Ny fahafantarana ireo antsipiriany ireo dia manome toerana tsara hanombohana ny famahana olana, saingy tsy mahafeno ny mety ho vitany rehetra. Ireo mpamaky liana amin'ny lisitra lalindalina kokoa momba ny antony sy ny vahaolana dia afaka mijery ny tabilao rindrina "Torolalana momba ny famahana olana amin'ny LCGC".
(4) Tabilao rindrina "Torolàlana momba ny famahana olana LC" an'ny LCGC. https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021).
(6) A. Felinger, Famakafakana angon-drakitra sy fanodinana famantarana amin'ny kromatografia (Elsevier, New York, NY, 1998), pp. 43-96.
(8) Wahab MF, Dasgupta PK, Kadjo AF sy Armstrong DW, Anal.Chim.Journal.Rev. 907, 31–44 (2016).https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043.