এলসি ট্রাবলশুটিং-এর কিছু বিষয় কখনোই অপ্রাসঙ্গিক হয় না, কারণ সময়ের সাথে সাথে যন্ত্র প্রযুক্তির উন্নতি ঘটলেও এলসি ব্যবহারের ক্ষেত্রে সমস্যা থেকেই যায়। একটি এলসি সিস্টেমে বিভিন্ন উপায়ে সমস্যা দেখা দিতে পারে এবং এর ফলে পিক শেপ ত্রুটিপূর্ণ হতে পারে। যখন পিক শেপ সম্পর্কিত সমস্যা দেখা দেয়, তখন এই ফলাফলগুলোর সম্ভাব্য কারণগুলোর একটি সংক্ষিপ্ত তালিকা আমাদের ট্রাবলশুটিং-এর অভিজ্ঞতাকে সহজ করে তোলে।
এই “এলসি ট্রাবলশুটিং” কলামটি লিখতে এবং প্রতি মাসে বিষয় নিয়ে ভাবতে বেশ মজা লাগছে, কারণ কিছু বিষয় কখনোই পুরনো হয় না। ক্রোমাটোগ্রাফি গবেষণার ক্ষেত্রে কিছু বিষয় বা ধারণা অপ্রচলিত হয়ে যায় কারণ সেগুলি নতুন এবং উন্নততর ধারণা দ্বারা প্রতিস্থাপিত হয়, কিন্তু ট্রাবলশুটিং-এর ক্ষেত্রে, ১৯৮৩ সালে এই জার্নালে (তৎকালীন এলসি জার্নাল) প্রথম ট্রাবলশুটিং নিবন্ধটি প্রকাশিত হওয়ার পর থেকে কিছু বিষয় এখনও প্রাসঙ্গিক (1)। বিগত কয়েক বছর ধরে, আমি লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি (এলসি)-কে প্রভাবিত করে এমন সমসাময়িক প্রবণতাগুলির উপর বেশ কয়েকটি এলসি ট্রাবলশুটিং বিভাগকে কেন্দ্র করে লিখেছি (উদাহরণস্বরূপ, রিটেনশনের উপর চাপের প্রভাব সম্পর্কে আমাদের বোঝার আপেক্ষিক তুলনা [2] নতুন অগ্রগতি), এলসি ফলাফলের আমাদের ব্যাখ্যা এবং আধুনিক এলসি যন্ত্র দিয়ে কীভাবে ট্রাবলশুট করতে হয়। এই মাসের কিস্তিতে, আমি আমার সিরিজ (3) চালিয়ে যাচ্ছি, যা ডিসেম্বর ২০২১-এ শুরু হয়েছিল, এবং যা এলসি ট্রাবলশুটিং-এর কিছু "জীবন-মরণ" বিষয়ের উপর আলোকপাত করেছিল — এমন উপাদান যা যেকোনো ট্রাবলশুটারের জন্য অপরিহার্য, আমরা যে সিস্টেমই ব্যবহার করি না কেন। এই সিরিজের মূল বিষয় হল অনেক ল্যাবরেটরিতে টাঙানো LCGC-এর বিখ্যাত “LC ট্রাবলশুটিং গাইড” ওয়াল চার্টের (4) সাথে এটি অত্যন্ত প্রাসঙ্গিক। এই সিরিজের তৃতীয় পর্বের জন্য, আমি পিক শেপ বা পিকের বৈশিষ্ট্য সম্পর্কিত বিষয়গুলির উপর আলোকপাত করার সিদ্ধান্ত নিয়েছি। অবিশ্বাস্যভাবে, ওয়াল চার্টটিতে ত্রুটিপূর্ণ পিক শেপের ৪৪টি বিভিন্ন সম্ভাব্য কারণ তালিকাভুক্ত করা হয়েছে! একটি প্রবন্ধে আমরা এই সমস্ত বিষয় বিস্তারিতভাবে বিবেচনা করতে পারি না, তাই এই বিষয়ের উপর প্রথম পর্বে, আমি সবচেয়ে বেশি দেখা যায় এমন কয়েকটি বিষয়ের উপর মনোযোগ দেব। আমি আশা করি তরুণ এবং প্রবীণ LC ব্যবহারকারীরা এই গুরুত্বপূর্ণ বিষয়ে কিছু সহায়ক টিপস এবং অনুস্মারক খুঁজে পাবেন।
সমস্যা সমাধানের প্রশ্নগুলোর উত্তরে আমি প্রায়শই বলি, “যেকোনো কিছুই সম্ভব”। যেসব পর্যবেক্ষণের ব্যাখ্যা করা কঠিন, সেগুলোর ক্ষেত্রে এই উত্তরটি সহজ মনে হতে পারে, কিন্তু আমি প্রায়শই এটিকে যথাযথ বলে মনে করি। ত্রুটিপূর্ণ পিক শেপের অনেক সম্ভাব্য কারণ থাকায়, সমস্যাটি কী হতে পারে তা বিবেচনা করার সময় মন খোলা রাখা এবং আমাদের সমস্যা সমাধানের প্রচেষ্টা শুরু করার জন্য সম্ভাব্য কারণগুলোকে অগ্রাধিকার দিতে পারাটা জরুরি; এক্ষেত্রে সবচেয়ে সাধারণ সম্ভাবনাগুলোর উপর মনোযোগ দেওয়া প্রয়োজন। এই বিষয়টি খুবই গুরুত্বপূর্ণ।
যেকোনো সমস্যা সমাধানের অনুশীলনের একটি মূল পদক্ষেপ — কিন্তু আমি মনে করি এটিকে অবমূল্যায়ন করা হয় — হলো এমন একটি সমস্যা আছে তা শনাক্ত করা যার সমাধান করা প্রয়োজন। একটি সমস্যা আছে তা শনাক্ত করার অর্থ প্রায়শই এটি স্বীকার করা যে, যন্ত্রটির সাথে যা ঘটছে তা আমাদের প্রত্যাশা থেকে ভিন্ন, যা তত্ত্ব, অভিজ্ঞতামূলক জ্ঞান এবং অভিজ্ঞতা (5) দ্বারা গঠিত। এখানে উল্লেখিত "শীর্ষের আকৃতি" আসলে কেবল শীর্ষের আকৃতিকেই (প্রতিসম, অপ্রতিসম, মসৃণ, তুলতুলে, অগ্রবর্তী প্রান্ত, পশ্চাৎবর্তী প্রান্ত, ইত্যাদি) বোঝায় না, বরং এর প্রস্থকেও বোঝায়। প্রকৃত শীর্ষের আকৃতি সম্পর্কে আমাদের প্রত্যাশা সহজ। তত্ত্ব (6) পাঠ্যপুস্তকের প্রত্যাশাকে ভালোভাবে সমর্থন করে যে, বেশিরভাগ ক্ষেত্রে, ক্রোমাটোগ্রাফিক শীর্ষগুলি প্রতিসম হওয়া উচিত এবং একটি গাউসিয়ান বন্টনের আকৃতির সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ হওয়া উচিত, যেমনটি চিত্র 1a-তে দেখানো হয়েছে। শীর্ষের প্রস্থ থেকে আমরা যা প্রত্যাশা করি তা একটি আরও জটিল বিষয়, এবং আমরা ভবিষ্যতের একটি প্রবন্ধে এই বিষয়ে আলোচনা করব। চিত্র 1-এর অন্যান্য শীর্ষের আকৃতিগুলি কিছু অন্যান্য সম্ভাবনা দেখায় যা পর্যবেক্ষণ করা যেতে পারে — অন্য কথায়, কিছু উপায় যার মাধ্যমে জিনিসগুলি ভুল হতে পারে। এই পর্বের বাকি অংশে, আমরা কিছু নির্দিষ্ট উদাহরণ নিয়ে আলোচনা করতে সময় ব্যয় করব। এমন পরিস্থিতি যা এই ধরণের আকৃতি তৈরি করতে পারে।
কখনও কখনও ক্রোমাটোগ্রামে পিকগুলি একেবারেই দেখা যায় না, যেখানে সেগুলি ইলিউটেড হওয়ার কথা। উপরের ওয়াল চার্টটি নির্দেশ করে যে, একটি পিকের অনুপস্থিতি (যদি ধরে নেওয়া হয় যে নমুনাটিতে টার্গেট অ্যানালাইট এমন ঘনত্বে রয়েছে যা ডিটেক্টরের প্রতিক্রিয়াকে নয়েজের উপরে এটিকে দেখার জন্য যথেষ্ট করে তুলবে) সাধারণত যন্ত্রের কোনো সমস্যা বা ভুল মোবাইল ফেজ কন্ডিশনের সাথে সম্পর্কিত (যদি পিকগুলি আদৌ দেখা যায়)। এই বিভাগের সম্ভাব্য সমস্যা এবং সমাধানগুলির একটি সংক্ষিপ্ত তালিকা টেবিল I-তে পাওয়া যাবে।
উপরে যেমন উল্লেখ করা হয়েছে, মনোযোগ দেওয়ার এবং এটি ঠিক করার চেষ্টা করার আগে কতটা পিক ব্রডনিং সহ্য করা উচিত, সেই প্রশ্নটি একটি জটিল বিষয় যা আমি ভবিষ্যতের একটি প্রবন্ধে আলোচনা করব। আমার অভিজ্ঞতা হলো, উল্লেখযোগ্য পিক ব্রডনিং-এর সাথে প্রায়শই পিকের আকৃতিতে একটি উল্লেখযোগ্য পরিবর্তন দেখা যায়, এবং প্রি-পিক বা স্প্লিটিং-এর চেয়ে পিক টেইলিং বেশি সাধারণ। তবে, নামমাত্র প্রতিসম পিকগুলোও প্রশস্ত হয়, যা কয়েকটি ভিন্ন কারণে ঘটতে পারে:
ট্রাবলশুটিং এলসি-এর পূর্ববর্তী সংখ্যাগুলিতে এই প্রতিটি বিষয় নিয়ে বিস্তারিত আলোচনা করা হয়েছে, এবং এই বিষয়গুলিতে আগ্রহী পাঠকগণ সমস্যাগুলির মূল কারণ ও সম্ভাব্য সমাধান সম্পর্কে তথ্যের জন্য সেই পূর্ববর্তী নিবন্ধগুলি দেখতে পারেন। আরও বিস্তারিত।
পিক টেইলিং, পিক ফ্রন্টিং এবং স্প্লিটিং—এই সবই রাসায়নিক বা ভৌত কারণে ঘটতে পারে, এবং এই সমস্যাগুলোর সম্ভাব্য সমাধানের তালিকা ব্যাপকভাবে পরিবর্তিত হয়, যা নির্ভর করে আমরা রাসায়নিক নাকি ভৌত ​​সমস্যার সম্মুখীন হচ্ছি তার উপর। প্রায়শই, একটি ক্রোমাটোগ্রামের বিভিন্ন পিক তুলনা করে, কোনটি মূল কারণ সে সম্পর্কে গুরুত্বপূর্ণ সূত্র খুঁজে পাওয়া যায়। যদি একটি ক্রোমাটোগ্রামের সমস্ত পিকের আকৃতি একই রকম হয়, তবে এর কারণ সম্ভবত ভৌত নয়। যদি কেবল একটি বা কয়েকটি পিক প্রভাবিত হয়, কিন্তু বাকিগুলো ঠিক থাকে, তবে এর কারণ সম্ভবত রাসায়নিক।
পিক টেইলিং-এর রাসায়নিক কারণগুলো এতই জটিল যে এখানে সংক্ষেপে আলোচনা করা সম্ভব নয়। আগ্রহী পাঠককে আরও গভীর আলোচনার জন্য "LC ট্রাবলশুটিং"-এর সাম্প্রতিক সংখ্যাটি (10) দেখতে বলা হচ্ছে। যাইহোক, একটি সহজ উপায় হলো ইনজেক্ট করা অ্যানালাইটের ভর কমিয়ে দেখা যে পিকের আকৃতি উন্নত হয় কিনা। যদি তা হয়, তবে এটি একটি ভালো ইঙ্গিত যে সমস্যাটি হলো "মাস ওভারলোড"। এই ক্ষেত্রে, পদ্ধতিটিকে অবশ্যই কম অ্যানালাইট ভর ইনজেক্ট করার মধ্যে সীমাবদ্ধ রাখতে হবে, অথবা ক্রোমাটোগ্রাফিক শর্তাবলী পরিবর্তন করতে হবে যাতে বেশি ভর ইনজেক্ট করেও ভালো পিকের আকৃতি পাওয়া যায়।
পিক টেইলিং-এর অনেক সম্ভাব্য ভৌত কারণও রয়েছে। সম্ভাবনাগুলো সম্পর্কে বিস্তারিত আলোচনার জন্য আগ্রহী পাঠকদের "LC ট্রাবলশুটিং"-এর (11) আরেকটি সাম্প্রতিক সংখ্যা দেখার জন্য বলা হচ্ছে। পিক টেইলিং-এর অন্যতম সাধারণ ভৌত কারণ হলো ইনজেক্টর এবং ডিটেক্টরের মধ্যবর্তী কোনো একটি বিন্দুতে দুর্বল সংযোগ (12)। এর একটি চরম উদাহরণ চিত্র 1d-তে দেখানো হয়েছে, যা কয়েক সপ্তাহ আগে আমার ল্যাবে তোলা হয়েছিল। এক্ষেত্রে, আমরা একটি নতুন ইনজেকশন ভালভ দিয়ে একটি সিস্টেম তৈরি করেছিলাম যা আমরা আগে ব্যবহার করিনি, এবং একটি স্টেইনলেস স্টিল ক্যাপিলারির উপর ঢালাই করা একটি ফেরুলসহ একটি ছোট আয়তনের ইনজেকশন লুপ স্থাপন করেছিলাম। কিছু প্রাথমিক ট্রাবলশুটিং পরীক্ষার পর, আমরা বুঝতে পারলাম যে ইনজেকশন ভালভ স্টেটরের পোর্টের গভীরতা আমাদের অভ্যস্ততার চেয়ে অনেক বেশি ছিল, যার ফলে পোর্টের নীচে একটি বড় ডেড ভলিউম তৈরি হয়েছিল। এই সমস্যাটি ইনজেকশন লুপটিকে অন্য একটি টিউব দিয়ে প্রতিস্থাপন করে সহজেই সমাধান করা যায়, আমরা পোর্টের নীচের ডেড ভলিউমটি দূর করার জন্য ফেরুলটিকে সঠিক অবস্থানে সামঞ্জস্য করতে পারি।
চিত্র 1e-তে দেখানো পিক ফ্রন্টের মতো আকৃতি ভৌত ​​বা রাসায়নিক সমস্যার কারণেও হতে পারে। লিডিং এজের একটি সাধারণ ভৌত কারণ হলো কলামের পার্টিকেল বেড ভালোভাবে প্যাক করা না থাকা, অথবা সময়ের সাথে সাথে কণাগুলোর পুনর্বিন্যাস হওয়া। এই ভৌত ঘটনার কারণে সৃষ্ট পিক টেইলিং-এর মতোই, এটি ঠিক করার সর্বোত্তম উপায় হলো কলামটি প্রতিস্থাপন করে কাজ চালিয়ে যাওয়া। মূলত, রাসায়নিক উৎসযুক্ত লিডিং এজ পিকের আকৃতি প্রায়শই "নন-লিনিয়ার" রিটেনশন কন্ডিশন থেকে উদ্ভূত হয়। আদর্শ (লিনিয়ার) অবস্থায়, স্টেশনারি ফেজ দ্বারা ধরে রাখা অ্যানালাইটের পরিমাণ (এবং সেই কারণে, রিটেনশন ফ্যাক্টর) কলামে থাকা অ্যানালাইটের ঘনত্বের সাথে রৈখিকভাবে সম্পর্কিত। ক্রোমাটোগ্রাফিকভাবে, এর অর্থ হলো কলামে ইনজেক্ট করা অ্যানালাইটের ভর বাড়ার সাথে সাথে পিকটি লম্বা হয়, কিন্তু চওড়া হয় না। যখন রিটেনশন আচরণ নন-লিনিয়ার হয়, তখন এই সম্পর্কটি ভেঙে যায় এবং আরও বেশি ভর ইনজেক্ট করার সাথে সাথে পিকগুলো কেবল লম্বাই হয় না, চওড়াও হয়। এছাড়াও, নন-লিনিয়ার আকৃতি ক্রোমাটোগ্রাফিক পিকের আকৃতি নির্ধারণ করে, যার ফলে লিডিং বা ট্রেইলিং এজ তৈরি হয়। ভরের মতো ইনজেক্ট করা অ্যানালাইটের ভর কমিয়েও ওভারলোড যা পিক টেইলিং (10) ঘটায়, এবং নন-লিনিয়ার রিটেনশনের কারণে সৃষ্ট পিক লিডিং নির্ণয় করা যেতে পারে। যদি পিকের আকৃতি উন্নত হয়, তবে পদ্ধতিটি এমনভাবে পরিবর্তন করতে হবে যাতে লিডিং এজ সৃষ্টিকারী ইনজেকশনের মান অতিক্রম না করে, অথবা এই আচরণটি কমানোর জন্য ক্রোমাটোগ্রাফিক শর্তাবলী পরিবর্তন করতে হবে।
কখনও কখনও আমরা একটি "বিভক্ত" শিখর (peak) দেখতে পাই, যেমনটি চিত্র 1f-এ দেখানো হয়েছে। এই সমস্যা সমাধানের প্রথম ধাপ হলো শিখরের আকৃতিটি আংশিক সহ-এলুশনের (partial co-elution) কারণে হয়েছে কিনা তা নির্ধারণ করা (অর্থাৎ, দুটি স্বতন্ত্র কিন্তু কাছাকাছি সময়ে এলুটিং হওয়া যৌগের উপস্থিতি)। যদি প্রকৃতপক্ষে দুটি ভিন্ন অ্যানালাইট (analytes) কাছাকাছি সময়ে এলুটিং হয়, তাহলে তাদের রেজোলিউশন (resolution) উন্নত করার প্রয়োজন হয় (উদাহরণস্বরূপ, সিলেক্টিভিটি (selectivity), রিটেনশন (retention), বা প্লেট কাউন্ট (plate count) বাড়িয়ে), এবং আপাত "বিভক্ত" শিখরগুলো ভৌত সমস্যার সাথে সম্পর্কিত। পারফরম্যান্সের সাথে কলামটির নিজের কোনো সম্পর্ক নেই। প্রায়শই, এই সিদ্ধান্ত নেওয়ার সবচেয়ে গুরুত্বপূর্ণ সূত্র হলো ক্রোমাটোগ্রামের সমস্ত শিখর বিভক্ত আকৃতি প্রদর্শন করছে, নাকি কেবল এক বা দুটি। যদি কেবল এক বা দুটি হয়, তবে এটি সম্ভবত একটি সহ-এলুশনের সমস্যা; যদি সমস্ত শিখর বিভক্ত হয়, তবে এটি সম্ভবত একটি ভৌত ​​সমস্যা, যা সম্ভবত কলামটির নিজের সাথে সম্পর্কিত।
কলামের নিজস্ব ভৌত বৈশিষ্ট্যের সাথে সম্পর্কিত বিভক্ত শিখরগুলি সাধারণত আংশিকভাবে অবরুদ্ধ ইনলেট বা আউটলেট ফ্রিট, অথবা কলামের মধ্যে কণার পুনর্বিন্যাসের কারণে ঘটে, যা কলাম চ্যানেলের গঠনের নির্দিষ্ট কিছু অঞ্চলে মোবাইল ফেজকে অন্যান্য অঞ্চলের তুলনায় দ্রুত প্রবাহিত হতে দেয় (11)। আংশিকভাবে আটকে যাওয়া ফ্রিট কখনও কখনও কলামের মধ্য দিয়ে প্রবাহকে বিপরীত করে পরিষ্কার করা যেতে পারে; তবে, আমার অভিজ্ঞতায়, এটি সাধারণত একটি স্বল্পমেয়াদী সমাধান, দীর্ঘমেয়াদী নয়। আধুনিক কলামের ক্ষেত্রে এটি প্রায়শই মারাত্মক হয় যদি কণাগুলি কলামের মধ্যে পুনরায় একত্রিত হয়। এই পর্যায়ে, কলামটি প্রতিস্থাপন করে চালিয়ে যাওয়াই শ্রেয়।
চিত্র 1g-তে দেখানো চূড়াটি, যা আমার নিজের ল্যাবের একটি সাম্প্রতিক ঘটনা থেকে নেওয়া, সাধারণত নির্দেশ করে যে সিগন্যালটি এতটাই বেশি যে এটি রেসপন্স রেঞ্জের উচ্চ প্রান্তে পৌঁছে গেছে। অপটিক্যাল অ্যাবজর্বেন্স ডিটেক্টরের (এই ক্ষেত্রে UV-vis) জন্য, যখন অ্যানালাইটের ঘনত্ব খুব বেশি হয়, তখন অ্যানালাইট ডিটেক্টর ফ্লো সেলের মধ্য দিয়ে যাওয়া বেশিরভাগ আলো শোষণ করে নেয়, ফলে শনাক্ত করার জন্য খুব সামান্য আলোই অবশিষ্ট থাকে। এই পরিস্থিতিতে, ফটোডিটেক্টর থেকে আসা বৈদ্যুতিক সিগন্যালটি বিভিন্ন ধরনের নয়েজ, যেমন বিক্ষিপ্ত আলো এবং “ডার্ক কারেন্ট” দ্বারা ব্যাপকভাবে প্রভাবিত হয়, যা সিগন্যালটিকে দেখতে খুব “অস্পষ্ট” করে তোলে এবং অ্যানালাইটের ঘনত্বের ওপর নির্ভরশীলতা কমিয়ে দেয়। যখন এমনটা ঘটে, তখন অ্যানালাইটের ইনজেকশন ভলিউম কমিয়ে—যেমন ইনজেকশন ভলিউম কমানো, নমুনাকে লঘু করা, বা উভয়ই করে—সমস্যাটি প্রায়শই সহজেই সমাধান করা যায়।
ক্রোমাটোগ্রাফি স্কুলে, আমরা নমুনায় অ্যানালাইটের ঘনত্ব নির্দেশক হিসেবে ডিটেক্টর সিগন্যাল (অর্থাৎ, ক্রোমাটোগ্রামের y-অক্ষ) ব্যবহার করি। তাই শূন্যের নিচে সিগন্যালযুক্ত একটি ক্রোমাটোগ্রাম দেখলে অদ্ভুত মনে হয়, কারণ এর সহজ ব্যাখ্যা হলো এটি একটি ঋণাত্মক অ্যানালাইট ঘনত্ব নির্দেশ করে – যা অবশ্যই ভৌতভাবে সম্ভব নয়। আমার অভিজ্ঞতায়, অপটিক্যাল অ্যাবজর্বেন্স ডিটেক্টর (যেমন, UV-vis) ব্যবহার করার সময়ই ঋণাত্মক পিকগুলো সবচেয়ে বেশি দেখা যায়।
এক্ষেত্রে, একটি নেতিবাচক শিখর (negative peak) বলতে বোঝায় যে কলাম থেকে বেরিয়ে আসা অণুগুলি শিখরের ঠিক আগে এবং পরে মোবাইল ফেজের চেয়ে কম আলো শোষণ করে। এটি ঘটতে পারে, উদাহরণস্বরূপ, যখন তুলনামূলকভাবে কম সনাক্তকরণ তরঙ্গদৈর্ঘ্য (<230 nm) এবং মোবাইল ফেজ অ্যাডিটিভ ব্যবহার করা হয় যা এই তরঙ্গদৈর্ঘ্যে বেশিরভাগ আলো শোষণ করে। এই ধরনের অ্যাডিটিভগুলি হতে পারে মোবাইল ফেজ দ্রাবকের উপাদান যেমন মিথানল বা বাফারের উপাদান যেমন অ্যাসিটেট বা ফরমেট। প্রকৃতপক্ষে, একটি ক্রমাঙ্কন বক্ররেখা (caldation curve) তৈরি করতে এবং সঠিক পরিমাণগত তথ্য পেতে নেতিবাচক শিখর ব্যবহার করা যেতে পারে, তাই এগুলিকে সম্পূর্ণরূপে এড়িয়ে চলার কোনও মৌলিক কারণ নেই (এই পদ্ধতিকে কখনও কখনও "পরোক্ষ UV সনাক্তকরণ" বলা হয়) (13)। যাইহোক, যদি আমরা সত্যিই নেতিবাচক শিখর সম্পূর্ণরূপে এড়াতে চাই, শোষণ সনাক্তকরণের (absorbance detection) ক্ষেত্রে, সর্বোত্তম সমাধান হল একটি ভিন্ন সনাক্তকরণ তরঙ্গদৈর্ঘ্য ব্যবহার করা যাতে বিশ্লেষ্য (analyte) মোবাইল ফেজের চেয়ে বেশি শোষণ করে, অথবা মোবাইল ফেজের গঠন পরিবর্তন করা যাতে তারা বিশ্লেষ্যের চেয়ে কম আলো শোষণ করে।
প্রতিসরাঙ্ক (RI) ডিটেকশন ব্যবহার করার সময়ও নেগেটিভ পিক দেখা যেতে পারে, যখন নমুনার মধ্যে থাকা অ্যানালাইট ছাড়া অন্যান্য উপাদানের, যেমন সলভেন্ট ম্যাট্রিক্সের, প্রতিসরাঙ্ক মোবাইল ফেজের প্রতিসরাঙ্ক থেকে ভিন্ন হয়। এটি UV-vis ডিটেকশনের ক্ষেত্রেও ঘটে, কিন্তু এই প্রভাবটি RI ডিটেকশনের তুলনায় কম তীব্র হয়। উভয় ক্ষেত্রেই, স্যাম্পল ম্যাট্রিক্সের গঠনকে মোবাইল ফেজের গঠনের সাথে আরও ঘনিষ্ঠভাবে মেলানোর মাধ্যমে নেগেটিভ পিকগুলো কমানো যেতে পারে।
এলসি ট্রাবলশুটিং-এর মৌলিক বিষয়ের উপর তৃতীয় পর্বে, আমি এমন পরিস্থিতি নিয়ে আলোচনা করেছি যেখানে পর্যবেক্ষণকৃত পিকের আকৃতি প্রত্যাশিত বা স্বাভাবিক পিকের আকৃতি থেকে ভিন্ন হয়। এই ধরনের সমস্যার কার্যকর ট্রাবলশুটিং শুরু হয় প্রত্যাশিত পিকের আকৃতি সম্পর্কে জ্ঞান দিয়ে (যা তত্ত্ব বা বিদ্যমান পদ্ধতির সাথে পূর্ব অভিজ্ঞতার উপর ভিত্তি করে), তাই এই প্রত্যাশা থেকে বিচ্যুতিগুলো সুস্পষ্ট হয়। পিকের আকৃতির সমস্যার বিভিন্ন সম্ভাব্য কারণ রয়েছে (যেমন: খুব চওড়া, টেইলিং, লিডিং এজ ইত্যাদি)। এই পর্বে, আমি প্রায়শই দেখতে পাওয়া কিছু কারণ নিয়ে বিস্তারিত আলোচনা করব। এই বিবরণগুলো জানা ট্রাবলশুটিং শুরু করার জন্য একটি ভালো ভিত্তি প্রদান করে, কিন্তু সমস্ত সম্ভাবনাকে অন্তর্ভুক্ত করে না। যে সকল পাঠক কারণ এবং সমাধানের আরও গভীর তালিকা জানতে আগ্রহী, তারা এলসিজিসি-এর “এলসি ট্রাবলশুটিং গাইড” ওয়াল চার্টটি দেখতে পারেন।
(4) এলসিজিসি "এলসি ট্রাবলশুটিং গাইড" ওয়াল চার্ট। https://www.chromatographyonline.com/view/troubleshooting-wallchart (2021)।
(6) এ. ফেলিঙ্গার, ক্রোমাটোগ্রাফিতে ডেটা বিশ্লেষণ এবং সংকেত প্রক্রিয়াকরণ (এলসেভিয়ার, নিউ ইয়র্ক, এনওয়াই, 1998), পৃষ্ঠা 43-96।
(8) ওয়াহাব এমএফ, দাসগুপ্ত পিকে, কাডজো এএফ এবং আর্মস্ট্রং ডিডব্লিউ, অ্যানাল.চিম.জার্নাল.রেভ. 907, 31–44 (2016)। https://doi.org/10.1016/j.aca.2015.11.043.