Asante kwa kutembelea Nature.com. Toleo la kivinjari unachotumia lina usaidizi mdogo wa CSS. Kwa matumizi bora zaidi, tunapendekeza utumie kivinjari kilichosasishwa (au uzime Hali ya Utangamano katika Internet Explorer). Wakati huo huo, ili kuhakikisha usaidizi unaoendelea, tutatoa tovuti bila mitindo na JavaScript.
Mazingira ya huduma ya afya yaliyochafuliwa yana jukumu muhimu katika kuenea kwa viumbe vinavyostahimili dawa nyingi (MDR) na C. difficile. Madhumuni ya utafiti huu yalikuwa kutathmini athari ya ozoni inayozalishwa na kichocheo cha plasma cha dielectric barrier discharge (DBD) kwenye hatua ya Enterococcus faecalis (VRE) inayostahimili vancomycin, Klebsiella pneumoniae (CRE) inayostahimili carbapenem, inayostahimili carbapenem. Athari za antibacterial za vifaa tofauti vilivyochafuliwa na Pseudomonas spp. Pseudomonas aeruginosa (CRPA), Acinetobacter baumannii (CRAB) inayostahimili carbapenem na Clostridium difficile. Vifaa mbalimbali vilivyochafuliwa na VRE, CRE, CRPA, CRAB na C. difficile vilitibiwa na ozoni kwa viwango tofauti na nyakati za kuathiriwa. Hadubini ya nguvu ya atomiki (AFM) ilionyesha mabadiliko ya uso wa bakteria baada ya matibabu ya ozoni. Wakati kipimo cha ozoni 500 ppm kilitumika kwa VRE na CRAB kwa dakika 15, kupungua kwa takriban log10 2 au zaidi kulionekana katika chuma cha pua, kitambaa na mbao, na kupungua kwa log10 1-2 kulionekana katika kioo na plastiki. Spores za C. difficile ziligunduliwa kuwa sugu zaidi kwa ozoni kuliko viumbe vingine vyote vilivyojaribiwa. Katika AFM, baada ya matibabu na ozoni, seli za bakteria zilivimba na kuharibika. Ozoni inayozalishwa na DBD Plasma Reactor ni kifaa rahisi na muhimu cha kuondoa uchafuzi kwa spores za MDRO na C. difficile, ambazo zinajulikana kuwa vimelea vya kawaida vya maambukizi yanayohusiana na huduma ya afya.
Kuibuka kwa viumbe sugu kwa dawa nyingi (MDR) husababishwa na matumizi mabaya ya viuavijasumu kwa binadamu na wanyama na kumetambuliwa na Shirika la Afya Duniani (WHO) kama tishio kubwa kwa afya ya umma1. Hasa, taasisi za afya zinazidi kukabiliwa na kuibuka na kuenea kwa MRO. MRO kuu ni Staphylococcus aureus sugu kwa methicillin na enterococcus sugu kwa vancomycin (VRE), enterobacteria inayozalisha beta-lactamase (ESBL) iliyopanuliwa, Pseudomonas aeruginosa sugu kwa dawa nyingi, Acinetobacter baumannii sugu kwa dawa nyingi, na Enterobacter sugu kwa carbapenem (CRE). Zaidi ya hayo, maambukizi ya Clostridium difficile ni chanzo kikuu cha kuhara kinachohusiana na huduma ya afya, na kuweka mzigo mkubwa kwenye mfumo wa huduma ya afya. MDRO na C. difficile hupitishwa kupitia mikono ya wafanyakazi wa afya, mazingira yaliyochafuliwa, au moja kwa moja kutoka kwa mtu mmoja hadi mwingine. Uchunguzi wa hivi karibuni umeonyesha kuwa mazingira yaliyochafuliwa katika mazingira ya huduma ya afya yana jukumu muhimu katika maambukizi ya MDRO na C. difficile wakati wafanyakazi wa afya (HCWs) wanapogusana na nyuso zilizochafuliwa au wakati wagonjwa wanapogusana moja kwa moja na nyuso zilizochafuliwa 3,4. mazingira yaliyochafuliwa katika mazingira ya huduma ya afya hupunguza matukio ya maambukizi ya MLRO na C. difficile au ukoloni5,6,7. Kwa kuzingatia wasiwasi wa kimataifa kuhusu kuongezeka kwa upinzani wa antimicrobial, ni wazi kwamba utafiti zaidi unahitajika kuhusu mbinu na taratibu za kuondoa uchafu katika mazingira ya huduma ya afya. Hivi karibuni, njia za kusafisha vituo visivyogusana, hasa vifaa vya urujuanimno (UV) au mifumo ya peroksidi ya hidrojeni, zimetambuliwa kama njia zenye matumaini za kuondoa uchafu. Hata hivyo, vifaa hivi vya UV au peroksidi ya hidrojeni vinavyopatikana kibiashara si ghali tu, kuondoa uchafu wa UV kunafaa tu kwenye nyuso zilizo wazi, huku kuondoa uchafu wa plasma kwa peroksidi ya hidrojeni kunahitaji muda mrefu wa kuondoa uchafu kabla ya mzunguko unaofuata wa kuondoa uchafu5.
Ozoni ina sifa zinazojulikana za kuzuia kutu na inaweza kuzalishwa kwa bei nafuu8. Pia inajulikana kuwa sumu kwa afya ya binadamu, lakini inaweza kuoza haraka na kuwa oksijeni8. Vinu vya plasma vya kutokwa na vizuizi vya dielectric (DBD) ndio jenereta za kawaida za ozoni9. Vifaa vya DBD hukuruhusu kuunda plasma yenye joto la chini hewani na kutoa ozoni. Hadi sasa, matumizi ya vitendo ya ozoni yamekuwa yakipunguzwa sana kwa kusafisha maji ya bwawa la kuogelea, maji ya kunywa na maji taka10. Tafiti kadhaa zimeripoti matumizi yake katika mazingira ya afya8,11.
Katika utafiti huu, tulitumia jenereta ndogo ya ozoni ya plasma ya DBD kuonyesha ufanisi wake katika kusafisha MDRO na C. difficile, hata zile zilizochanjwa kwenye vifaa mbalimbali vinavyotumika sana katika mazingira ya kimatibabu. Zaidi ya hayo, mchakato wa utakaso wa ozoni umefafanuliwa kwa kutumia picha za hadubini ya nguvu ya atomiki (AFM) za seli zilizotibiwa na ozoni.
Aina za bakteria zilipatikana kutoka kwa vijidudu vya kliniki vya: VRE (SCH 479 na SCH 637), Klebsiella pneumoniae (CRE; SCH CRE-14 na DKA-1), Pseudomonas aeruginosa (CRPA; 54 na 83) na bakteria sugu ya carbapenem. Bakteria Pseudomonas aeruginosa (CRPA; 54 na 83). Acinetobacter baumannii (CRAB; F2487 na SCH-511) sugu. C. difficile ilipatikana kutoka kwa Mkusanyiko wa Kitaifa wa Utamaduni wa Vimelea (NCCP 11840) wa Shirika la Korea la Kudhibiti na Kuzuia Magonjwa. Ilitengwa kutoka kwa mgonjwa huko Korea Kusini mnamo 2019 na ikagundulika kuwa ni ya ST15 kwa kutumia uchapaji wa mfuatano wa multilocus. Mchuzi wa Moyo wa Ubongo (BHI) (BD, Sparks, MD, USA) uliochanjwa na VRE, CRE, CRPA na CRAB ulichanganywa vizuri na kuwekwa kwenye incubator kwa nyuzi joto 37 kwa saa 24.
C. difficile iliwekwa kwenye agar ya damu kwa njia ya kupigwa bila kuoza kwa mwili kwa saa 48. Makoloni kadhaa yaliongezwa kwenye 5 ml ya mchuzi wa moyo wa ubongo na kuwekwa kwenye incubator chini ya hali ya anaerobic kwa saa 48. Baada ya hapo, mmea ulitikiswa, 5 ml ya 95% ya ethanoli iliongezwa, ikatikiswa tena na kuachwa kwenye joto la kawaida kwa dakika 30. Baada ya kuchujwa kwa 3000 g kwa dakika 20, tupa supernatant na usimamishe chembechembe zenye spores na uue bakteria katika 0.3 ml ya maji. Seli zinazoweza kuishi zilihesabiwa kwa kupanda mbegu za seli za bakteria kwenye sahani za agar ya damu baada ya kupunguzwa kwa uwazi. Madoa ya gramu yalithibitisha kwamba 85% hadi 90% ya miundo ya bakteria ilikuwa spores.
Utafiti ufuatao ulifanywa ili kuchunguza athari za ozoni kama dawa ya kuua vijidudu kwenye nyuso mbalimbali zilizochafuliwa na spores za MDRO na C. difficile, ambazo zinajulikana kusababisha maambukizi yanayohusiana na huduma ya afya. Andaa sampuli za chuma cha pua, kitambaa (pamba), kioo, plastiki (akriliki), na mbao (pine) zenye ukubwa wa sentimita moja kwa sentimita moja. Safisha kuponi kabla ya matumizi. Sampuli zote zilisafishwa kwa kufungia moja kwa moja kabla ya kuambukizwa na bakteria.
Katika utafiti huu, seli za bakteria zilisambazwa kwenye nyuso mbalimbali za substrate pamoja na kwenye sahani za agar. Paneli hizo husafishwa kwa kuziweka kwenye ozoni kwa muda fulani na kwa kiwango fulani katika chumba kilichofungwa. Kwenye mchoro 1 kuna picha ya vifaa vya kusafisha ozoni. Vinu vya plasma vya DBD vilitengenezwa kwa kuunganisha elektrodi za chuma cha pua zilizotobolewa na zilizo wazi mbele na nyuma ya sahani za alumina (dielectric) zenye unene wa milimita 1. Kwa elektrodi zilizotobolewa, eneo la uwazi na shimo lilikuwa milimita 3 na 0.33, mtawalia. Kila elektrodi ina umbo la duara lenye kipenyo cha milimita 43. Ugavi wa umeme wa masafa ya juu wa volteji ya juu (GBS Elektronik GmbH Minipuls 2.2) ulitumika kutumia volteji ya sinusoidal ya takriban kV 8 kilele kwa masafa ya 12.5 kHz kwa elektrodi zilizotobolewa ili kutoa plasma kwenye kingo za elektrodi. elektrodi zilizotobolewa. Kwa kuwa teknolojia hii ni mbinu ya kusafisha gesi, kusafisha hufanywa katika chumba kilichogawanywa kwa ujazo katika sehemu za juu na za chini, ambazo zina sampuli zilizochafuliwa na bakteria na jenereta za plasma, mtawalia. Sehemu ya juu ina milango miwili ya vali ya kuondoa na kutoa mabaki ya ozoni. Kabla ya kutumia katika jaribio, mabadiliko ya wakati wa mkusanyiko wa ozoni katika chumba baada ya kuwasha usakinishaji wa plasma yalipimwa kulingana na wigo wa unyonyaji wa mstari wa spektrali wa 253.65 nm wa taa ya zebaki.
(a) Mpango wa mpangilio wa majaribio wa utakaso wa bakteria kwenye vifaa mbalimbali kwa kutumia ozoni inayozalishwa katika kianzio cha plasma cha DBD, na (b) mkusanyiko wa ozoni na muda wa uzalishaji wa plasma katika chumba cha utakaso. Mchoro ulitengenezwa kwa kutumia toleo la OriginPro 9.0 (programu ya OriginPro, Northampton, MA, Marekani; https://www.originlab.com).
Kwanza, kwa kusafisha seli za bakteria zilizowekwa kwenye sahani za agar kwa kutumia ozoni, huku ikibadilisha mkusanyiko wa ozoni na muda wa matibabu, mkusanyiko unaofaa wa ozoni na muda wa matibabu kwa ajili ya kuondoa uchafuzi wa MDRO na C. difficile ulibainishwa. Wakati wa mchakato wa kusafisha, chumba husafishwa kwanza kwa hewa ya kawaida na kisha kujazwa na ozoni kwa kuwasha kitengo cha plasma. Baada ya sampuli kutibiwa na ozoni kwa muda uliopangwa, pampu ya diaphragm hutumika kuondoa ozoni iliyobaki. Vipimo vilitumia sampuli ya utamaduni kamili wa saa 24 (~ 108 CFU/ml). Sampuli za seli za bakteria zilizosimamishwa (20 μl) kwanza zilipunguzwa mara kumi mfululizo na saline tasa, na kisha sampuli hizi zilisambazwa kwenye sahani za agar zilizosafishwa kwa ozoni kwenye chumba. Baada ya hapo, sampuli zilizorudiwa, zikiwa na sampuli zilizo wazi na ambazo hazikuwekwa wazi kwa ozoni, ziliwekwa kwenye incubator kwa 37°C kwa saa 24 na kuhesabiwa makoloni ili kutathmini ufanisi wa kusafisha.
Zaidi ya hayo, kulingana na masharti ya kuua vijidudu yaliyoainishwa katika utafiti hapo juu, athari ya kuondoa uchafuzi wa teknolojia hii kwenye MDRO na C. difficile ilitathminiwa kwa kutumia kuponi za vifaa mbalimbali (chuma cha pua, kitambaa, kioo, plastiki na kuponi za mbao) zinazotumika sana katika taasisi za matibabu. Vipandikizi kamili vya saa 24 (~108 cfu/ml) vilitumika. Sampuli za kusimamishwa kwa seli za bakteria (20 μl) zilipunguzwa mara kumi mfululizo na saline tasa, na kisha kuponi zilizamishwa kwenye mchuzi huu wa dilution ili kutathmini uchafuzi. Sampuli zilizoondolewa baada ya kuzamishwa kwenye mchuzi wa dilution ziliwekwa kwenye sahani tasa za Petri na kukaushwa kwenye joto la kawaida kwa saa 24. Weka kifuniko cha sahani ya petri kwenye sampuli na uweke kwa uangalifu kwenye chumba cha majaribio. Ondoa kifuniko kutoka kwenye sahani ya Petri na uweke sampuli kwenye ozoni ya 500 ppm kwa dakika 15. Sampuli za udhibiti ziliwekwa kwenye kabati la usalama la kibiolojia na hazikuwekwa kwenye ozoni. Mara tu baada ya kuambukizwa na ozoni, sampuli na sampuli zisizo na mionzi (yaani vidhibiti) zilichanganywa na saline tasa kwa kutumia mchanganyiko wa vortex ili kutenganisha bakteria kutoka kwenye uso. Kifaa cha kunyonya kilichopunguzwa maji kilipunguzwa maji mfululizo mara 10 kwa kutumia saline tasa, baada ya hapo idadi ya bakteria waliopunguzwa maji iliamuliwa kwenye sahani za agar ya damu (kwa bakteria wa aerobic) au sahani za agar ya damu isiyo na aerobic kwa Brucella (kwa Clostridium difficile) na kuwekwa kwenye incubator kwa 37°C kwa saa 24. au chini ya hali ya anaerobic kwa saa 48 kwa 37°C kwa mara mbili ili kubaini mkusanyiko wa awali wa chanjo. Tofauti katika hesabu za bakteria kati ya vidhibiti visivyo wazi na sampuli zilizo wazi ilihesabiwa ili kutoa punguzo la kumbukumbu katika hesabu za bakteria (yaani, ufanisi wa sterilization) chini ya hali ya majaribio.
Seli za kibiolojia lazima zizuiwe kwenye bamba la upigaji picha la AFM; kwa hivyo, diski ya mica tambarare na iliyosokotwa yenye kipimo cha ukali kidogo kuliko ukubwa wa seli hutumika kama substrate. Kipenyo na unene wa diski hizo zilikuwa 20 mm na 0.21 mm, mtawalia. Ili kushikilia seli kwenye uso kwa nguvu, uso wa mica hufunikwa na poly-L-lysine (200 µl), na kuifanya iwe na chaji chanya na utando wa seli kuwa na chaji hasi. Baada ya kufunikwa na poly-L-lysine, diski za mica zilioshwa mara 3 na maji ya deionized (DI) 1 ml na kukaushwa kwa hewa usiku kucha. Kisha, seli za bakteria zilipakwa kwenye uso wa mica uliofunikwa na poly-L-lysine kwa kutumia myeyusho wa bakteria uliopunguzwa, ulioachwa kwa dakika 30, na kisha uso wa mica ulioshwa na 1 ml ya maji deionized.
Nusu ya sampuli zilitibiwa na ozoni na umbo la uso wa sahani za mica zilizojaa VRE, CRAB na C. spores ngumu zilionyeshwa kwa kutumia AFM (XE-7, mifumo ya hifadhi). Hali ya uendeshaji ya AFM imewekwa kwenye hali ya kugonga, ambayo ni njia ya kawaida ya kupiga picha seli za kibiolojia. Katika majaribio, kifaa kidogo cha kuchuja kilichoundwa kwa hali isiyo ya kugusana (OMCL-AC160TS, OLYMPUS Microscopy) kilitumika. Picha za AFM zilirekodiwa kulingana na kiwango cha uchanganuzi wa probe cha 0.5 Hz na kusababisha azimio la picha la pikseli 2048 × 2048.
Ili kubaini hali ambazo vinu vya plasma vya DBD vinafaa kwa ajili ya kuua vijidudu, tulifanya mfululizo wa majaribio kwa kutumia MDRO (VRE, CRE, CRPA, na CRAB) na C. difficile kubadilisha mkusanyiko wa ozoni na muda wa kuathiriwa. Kwenye mchoro 1b inaonyesha mkondo wa muda wa mkusanyiko wa ozoni kwa kila hali ya jaribio baada ya kuwasha kifaa cha plasma. Mkusanyiko uliongezeka kiogarithmic, na kufikia 300 na 500 ppm baada ya dakika 1.5 na 2.5, mtawalia. Majaribio ya awali na VRE yameonyesha kuwa kiwango cha chini kinachohitajika ili kuondoa bakteria kwa ufanisi ni ozoni 300 ppm kwa dakika 10. Hivyo, katika majaribio yafuatayo, MDRO na C. difficile ziliathiriwa na ozoni kwa viwango viwili tofauti (300 na 500 ppm) na kwa nyakati mbili tofauti za kuathiriwa (dakika 10 na 15). Ufanisi wa sterilization kwa kila kipimo cha ozoni na mpangilio wa muda wa mfiduo ulihesabiwa na kuonyeshwa katika Jedwali 1. Mfiduo kwa ozoni 300 au 500 ppm kwa dakika 10-15 ulisababisha kupungua kwa jumla kwa VRE kwa logi 2 au zaidi. Kiwango hiki cha juu cha mauaji ya bakteria na CRE kilifikiwa kwa dakika 15 za mfiduo kwa ozoni 300 au 500 ppm. Kupungua kwa kiwango cha CRPA (> 7 log10) kulipatikana kwa kufichuliwa na ozoni kwa 500 ppm kwa dakika 15. Kupungua kwa kiwango cha CRPA (> 7 log10) kulipatikana kwa kufichuliwa na ozoni kwa 500 ppm kwa dakika 15. Высокое снижение CRPA (> 7 log10) было достигнуто при воздействии 500 частей на миллион озона в течение 15 минут. Kupungua kwa kiwango cha CRPA (> 7 log10) kulipatikana kwa kuathiriwa na ozoni ya 500 ppm kwa dakika 15.暴露于500 ppm 的臭氧15 分钟后，可大幅降低CRPA (> 7 log10).暴露于500 ppm 的臭氧15 分钟后，可大幅降低CRPA (> 7 log10). Существенное снижение CRPA (> 7 log10) после 15-минутного воздействия озона с концентрацией 500 ppm. Kupungua kwa kiasi kikubwa kwa CRPA (> 7 log10) baada ya dakika 15 kuathiriwa na ozoni ya 500 ppm.Uuaji mdogo wa bakteria wa CRAB kwa ozoni ya 300 ppm; hata hivyo, katika ozoni ya 500 ppm, kulikuwa na upungufu wa > 1.5 log10. hata hivyo, katika ozoni ya 500 ppm, kulikuwa na upungufu wa > 1.5 log10. однако при концентрации озона 500 частей на миллион наблюдалось снижение > 1,5 log10. hata hivyo, katika mkusanyiko wa ozoni wa 500 ppm, kupungua kwa >1.5 log10 kulionekana.然而，在500 ppm 臭氧下，减少了> 1.5 log10.然而，在500 ppm 臭氧下，减少了> 1.5 log10. Однако при концентрации озона 500 частей на миллион наблюдалось снижение >1,5 log10. Hata hivyo, katika mkusanyiko wa ozoni wa 500 ppm, kupungua kwa >1.5 log10 kulionekana. Kufichua spores za C. difficile kwa ozoni ya 300 au 500 ppm kulisababisha kupungua kwa > 2.5 log10. Kufichua spores za C. difficile kwa ozoni ya 300 au 500 ppm kulisababisha kupungua kwa > 2.5 log10. Воздействие на споры C. difficile озона с концентрацией 300 au 500 частей на миллион приводило к снижению > 2,5 log10. Kufichuliwa kwa spores za C. difficile kwa ozoni ya 300 au 500 ppm kulisababisha kupungua kwa >2.5 log10.将艰难梭菌孢子暴露于300 或500 ppm的臭氧中导致> 2.5 log10 减少. 300 或500 ppm 的臭氧中导致> 2.5 log10 减少。 Воздействие на споры C. difficile озона с концентрацией 300 au 500 частей на миллион приводило к снижению >2,5 log10. Kufichuliwa kwa spores za C. difficile kwa ozoni ya 300 au 500 ppm kulisababisha kupungua kwa >2.5 log10.
Kulingana na majaribio hapo juu, hitaji la kutosha lilipatikana ili kuzima bakteria kwa kipimo cha ozoni 500 ppm kwa dakika 15. Vijidudu vya VRE, CRAB na C. difficile vimejaribiwa kwa athari ya kuua vijidudu ya ozoni kwenye vifaa mbalimbali ikiwa ni pamoja na chuma cha pua, kitambaa, kioo, plastiki na mbao zinazotumika sana hospitalini. Ufanisi wao wa kusafisha unaonyeshwa katika Jedwali la 2. Vijidudu vya majaribio vilipimwa mara mbili. Katika VRE na CRAB, ozoni haikuwa na ufanisi mkubwa kwenye nyuso za kioo na plastiki, ingawa upungufu wa log10 wa takriban kipengele cha 2 au zaidi ulionekana kwenye nyuso za chuma cha pua, kitambaa na mbao. Vijidudu vya C. difficile viligunduliwa kuwa sugu zaidi kwa matibabu ya ozoni kuliko viumbe vingine vyote vilivyojaribiwa. Ili kusoma kitakwimu athari ya ozoni kwenye athari ya kuua ya vifaa tofauti dhidi ya VRE, CRAB, na C. difficile, vipimo vya t vilitumika kulinganisha tofauti kati ya idadi ya CFU kwa mililita katika vikundi vya udhibiti na majaribio kwenye vifaa tofauti (Mchoro 2). Aina zilionyesha tofauti muhimu kitakwimu, lakini tofauti kubwa zaidi zilizingatiwa kwa spores za VRE na CRAB kuliko kwa spores za C. difficile.
Mchoro mtawanyiko wa athari za ozoni kwenye mauaji ya bakteria ya vitu mbalimbali (a) VRE, (b) CRAB, na (c) C. difficile.
Upigaji picha wa AFM ulifanywa kwenye spores za VRE, CRAB, na C. difficile zilizotibiwa na zisizotibiwa ili kujifunza kwa undani mchakato wa utakasaji wa gesi ya ozoni. Kwenye mchoro 3a, c na e zinaonyesha picha za AFM za spores za VRE, CRAB na C. difficile ambazo hazijatibiwa, mtawalia. Kama inavyoonekana katika picha za 3D, seli ni laini na hazijaharibika. Mchoro 3b, d na f zinaonyesha spores za VRE, CRAB na C. difficile baada ya matibabu ya ozoni. Sio tu kwamba zilipungua kwa ukubwa wa jumla kwa seli zote zilizojaribiwa, lakini uso wao ukawa mgumu zaidi baada ya kuathiriwa na ozoni.
Picha za AFM za spores za VRE, MRAB na C. difficile ambazo hazijatibiwa (a, c, e) na (b, d, f) zilizotibiwa na ozoni ya 500 ppm kwa dakika 15. Picha zilichorwa kwa kutumia toleo la 5.1.6 la Park Systems XEI (XEI Software, Suwon, Korea; https://www.parksystems.com/102-products/park-xe-bio).
Utafiti wetu unaonyesha kwamba ozoni inayozalishwa na vifaa vya plasma vya DBD inaonyesha uwezo wa kuondoa uchafuzi kwa ufanisi kwenye spores za MDRO na C. difficile, ambazo zinajulikana kuwa sababu kuu za maambukizi yanayohusiana na huduma ya afya. Zaidi ya hayo, katika utafiti wetu, kutokana na kwamba uchafuzi wa mazingira na spores za MDRO na C. difficile zinaweza kuwa chanzo cha maambukizi yanayohusiana na huduma ya afya, athari ya kuua vijidudu ya ozoni ilibainika kuwa na mafanikio kwa vifaa vinavyotumika hasa katika mazingira ya hospitali. Vipimo vya kuondoa uchafuzi vilifanywa kwa kutumia vifaa vya plasma vya DBD baada ya uchafuzi bandia wa vifaa kama vile chuma cha pua, kitambaa, kioo, plastiki na mbao zenye spores za MDRO na C. difficile. Matokeo yake, ingawa athari ya kuondoa uchafuzi hutofautiana kulingana na nyenzo, uwezo wa kuondoa uchafuzi wa ozoni ni wa ajabu.
Vitu vinavyoguswa mara kwa mara katika vyumba vya hospitali vinahitaji kuua vijidudu vya kawaida na vya kiwango cha chini. Njia ya kawaida ya kusafisha vitu hivyo ni kusafisha kwa mikono kwa kutumia dawa ya kuua vijidudu kama vile kiwanja cha ammonium cha quaternary 13. Hata kwa kufuata kabisa mapendekezo ya matumizi ya dawa za kuua vijidudu, MPO ni vigumu kuondoa kwa kusafisha mazingira kwa njia ya kitamaduni (kawaida kusafisha kwa mikono)14. Kwa hivyo, teknolojia mpya zinahitajika, kama vile mbinu zisizo za kugusa. Kwa hivyo, kumekuwa na nia ya dawa za kuua vijidudu za gesi, ikiwa ni pamoja na peroksidi ya hidrojeni na ozoni10. Faida ya dawa za kuua vijidudu za gesi ni kwamba zinaweza kufikia maeneo na vitu ambavyo njia za jadi za mikono haziwezi kufikia. Peroksidi ya hidrojeni imetumika hivi karibuni katika mazingira ya kimatibabu, hata hivyo peroksidi ya hidrojeni yenyewe ni sumu na lazima ishughulikiwe kulingana na taratibu kali za utunzaji. Kuua vijidudu kwa plasma kwa kutumia peroksidi ya hidrojeni inahitaji muda mrefu wa kusafisha kabla ya mzunguko unaofuata wa kuua vijidudu. Kwa upande mwingine, ozoni hufanya kazi kama wakala wa antibacterial wa wigo mpana, unaofaa dhidi ya bakteria na virusi ambavyo ni sugu kwa dawa zingine za kuua vijidudu8,11,15. Kwa kuongezea, ozoni inaweza kuzalishwa kwa bei nafuu kutoka kwa hewa ya angahewa na haihitaji kemikali za ziada zenye sumu ambazo zinaweza kuacha alama hatari katika mazingira, kwani hatimaye huvunjika na kuwa oksijeni. Hata hivyo, sababu kwa nini ozoni haitumiki sana kama dawa ya kuua vijidudu ni kama ifuatavyo. Ozoni ni sumu kwa afya ya binadamu, kwa hivyo mkusanyiko wake hauzidi 0.07 ppm kwa wastani kwa zaidi ya saa 816, kwa hivyo viua vijidudu vya ozoni vimetengenezwa na kuwekwa sokoni, haswa kwa kusafisha gesi za kutolea moshi. Inawezekana pia kuvuta gesi na kutoa harufu mbaya baada ya kuondoa uchafu5,8. Ozoni haikutumika kikamilifu katika taasisi za matibabu. Hata hivyo, ozoni inaweza kutumika kwa usalama katika vyumba vya kusafisha vijidudu na kwa taratibu sahihi za uingizaji hewa, na kuondolewa kwake kunaweza kuharakishwa sana kwa kutumia kibadilishaji kichocheo. Katika utafiti huu, tunaonyesha kuwa viua vijidudu vya ozoni vya plasma vinaweza kutumika kwa ajili ya kusafisha vijidudu katika mazingira ya huduma ya afya. Tumeunda kifaa chenye uwezo mkubwa wa kusafisha vijidudu, uendeshaji rahisi na huduma ya haraka kwa wagonjwa waliolazwa hospitalini. Kwa kuongezea, tumeunda kitengo rahisi cha kusafisha vijidudu kinachotumia hewa ya kawaida bila gharama ya ziada. Hadi leo, hakuna taarifa za kutosha kuhusu mahitaji ya chini kabisa ya ozoni kwa ajili ya kuzima MDRO. Vifaa vilivyotumika katika utafiti wetu ni rahisi kuviweka na vina muda mfupi wa kufanya kazi na vinatarajiwa kuwa muhimu kwa ajili ya kuua vijidudu mara kwa mara kwenye vifaa.
Utaratibu wa hatua ya bakteria ya ozoni kuua bakteria haujaeleweka vizuri. Tafiti kadhaa zimeonyesha kuwa ozoni huharibu utando wa seli za bakteria, na kusababisha uvujaji wa ndani ya seli na hatimaye seli kuganda. Ozoni inaweza kuingilia shughuli za kimeng'enya cha seli kwa kuitikia vikundi vya thiol na inaweza kurekebisha besi za purine na pyrimidine katika asidi za kiini. Utafiti huu uliibua mofolojia ya spores za VRE, CRAB, na C. difficile kabla na baada ya matibabu ya ozoni na kugundua kuwa sio tu kwamba zilipungua kwa ukubwa, lakini pia zilizidi kuwa mbaya juu ya uso, zikionyesha uharibifu au kutu wa utando wa nje. na vifaa vya ndani kutokana na gesi ya ozoni ina uwezo mkubwa wa oksidi. Uharibifu huu unaweza kusababisha kuzima kwa seli, kulingana na ukali wa mabadiliko ya seli.
Vijidudu vya C. difficile ni vigumu kuondoa kutoka kwenye vyumba vya hospitali. Vijidudu hivyo hubaki katika sehemu ambazo humwaga 10,20. Zaidi ya hayo, katika utafiti huu, ingawa kiwango cha juu cha logarithmic cha kupunguza idadi ya bakteria kwenye sahani za agar kwenye ozoni ya 500 ppm kwa dakika 15 kilikuwa 2.73, athari ya bakteria ya ozoni kwenye vifaa mbalimbali vyenye vijidudu vya C. difficile imepunguzwa. Kwa hivyo, mikakati mbalimbali inaweza kuzingatiwa ili kupunguza maambukizi ya C. difficile katika mazingira ya huduma ya afya. Kwa matumizi katika vyumba vilivyotengwa vya C. difficile pekee, inaweza pia kuwa muhimu kurekebisha muda wa mfiduo na nguvu ya matibabu ya ozoni. Kwa kuongezea, lazima tukumbuke kwamba njia ya kuondoa uchafuzi wa ozoni haiwezi kuchukua nafasi kabisa ya usafi wa kawaida wa mikono na dawa za kuua vijidudu na mikakati ya kuua vijidudu, na pia inaweza kuwa na ufanisi mkubwa katika kudhibiti C. difficile 5. Katika utafiti huu, ufanisi wa ozoni kama dawa ya kuua vijidudu ulitofautiana kwa aina tofauti za MPO. Ufanisi unaweza kutegemea mambo kadhaa kama vile hatua ya ukuaji, ukuta wa seli, na ufanisi wa mifumo ya ukarabati21,22. Sababu ya athari tofauti za kuua vijidudu za ozoni kwenye uso wa kila nyenzo inaweza kuwa kutokana na uundaji wa biofilm. Uchunguzi wa awali umeonyesha kuwa E. faecium na E. faecium huongeza upinzani wa mazingira zinapokuwepo kama biofilms23, 24, 25. Hata hivyo, utafiti huu unaonyesha kuwa ozoni ina athari kubwa ya kuua bakteria kwenye spores za MDRO na C. difficile.
Kikwazo cha utafiti wetu ni kwamba tulitathmini athari za uhifadhi wa ozoni baada ya kurekebishwa. Hii inaweza kusababisha makadirio kupita kiasi ya idadi ya seli za bakteria zinazoweza kuishi.
Ingawa utafiti huu ulifanywa ili kutathmini ufanisi wa ozoni kama dawa ya kuua vijidudu katika mazingira ya hospitali, ni vigumu kujumlisha matokeo yetu katika mazingira yote ya hospitali. Kwa hivyo, utafiti zaidi unahitajika ili kuchunguza matumizi na utangamano wa kisafishaji hiki cha ozoni cha DBD katika mazingira halisi ya hospitali.
Ozoni inayozalishwa na vinu vya plasma vya DBD inaweza kuwa wakala rahisi na muhimu wa kuondoa uchafuzi kwa MDRO na C. difficile. Hivyo, matibabu ya ozoni yanaweza kuchukuliwa kama njia mbadala inayofaa ya kuua vijidudu katika mazingira ya hospitali.
Seti za data zilizotumika na/au kuchambuliwa katika utafiti wa sasa zinapatikana kutoka kwa waandishi husika kwa ombi linalofaa.
Mkakati wa kimataifa wa WHO wa kudhibiti usugu wa viuavijasumu. https://www.who.int/drugresistance/WHO_Global_Strategy.htm/en/ Inapatikana.
Dubberke, ER & Olsen, MA Mzigo wa Clostridium difficile kwenye mfumo wa huduma ya afya. Dubberke, ER & Olsen, MA Mzigo wa Clostridium difficile kwenye mfumo wa huduma ya afya.Dubberke, ER na Olsen, MA Mzigo wa Clostridium ngumu katika mfumo wa huduma ya afya. Dubberke, ER & Olsen, MA 艰难梭菌对医疗保健系统的负担. Dubberke, ER na Olsen, MADubberke, ER na Olsen, MA Mzigo wa Clostridium difficile kwenye mfumo wa huduma ya afya.kliniki. Inaambukiza. Dis. https://doi.org/10.1093/cid/cis335 (2012).
Boyce, JM Uchafuzi wa mazingira una athari kubwa kwa maambukizi ya nosocomial. J. Hospitali. Infect. 65 (Kiambatisho 2), 50-54. https://doi.org/10.1016/s0195-6701(07)60015-2 (2007).
Kim, YA, Lee, H. & K L.,. Kim, YA, Lee, H. & K L.,.Kim, YA, Lee, H. na KL,. Kim, YA, Lee, H. & K L.,. Kim, YA, Lee, H. & K L.,.Kim, YA, Lee, H. na KL,.Udhibiti wa uchafuzi na maambukizi ya mazingira ya hospitali na bakteria wa vimelea [J. Korea J. Udhibiti wa Maambukizi ya Hospitali. 20(1), 1-6 (2015).
Mchezaji, SJ Mapambano dhidi ya maambukizi ya nosocomial: umakini kwa jukumu la mazingira na teknolojia mpya za kuua vijidudu. kliniki. vijidudu. wazi 27(4), 665–690. https://doi.org/10.1128/cmr.00020-14 (2014).
Weber, DJ et al. Ufanisi wa vifaa vya UV na mifumo ya peroksidi ya hidrojeni kwa ajili ya kuondoa uchafuzi katika maeneo ya mwisho: kuzingatia majaribio ya kliniki. Ndiyo. J. Udhibiti wa maambukizi. 44 (nyongeza 5), ​​e77-84. https://doi.org/10.1016/j.ajic.2015.11.015 (2016).
Siani, H. & Maillard, JY Mbinu bora katika kusafisha mazingira ya huduma ya afya. Siani, H. & Maillard, JY Mbinu bora katika kusafisha mazingira ya huduma ya afya. Siani, H. & Maillard, JY Передовая практика дезактивации среды здравоохранения. Siani, H. & Maillard, JY Utendaji mzuri katika kusafisha mazingira ya huduma ya afya. Siani, H. & Maillard, JY 医疗环境净化的最佳实践. Siani, H. & Maillard, JY Mbinu bora ya utakaso wa mazingira ya kimatibabu. Siani, H. & Maillard, JY Передовой опыт обеззараживания медицинских учреждений. Siani, H. & Maillard, JY Mbinu bora za kusafisha vituo vya matibabu.EURO. J. Clin. vijidudu Kuambukiza Dis. 34(1), 1-11. https://doi.org/10.1007/s10096-014-2205-9 (2015).
Sharma, M. & Hudson, JB Gesi ya ozoni ni wakala wa antibacterial wenye ufanisi na vitendo. Sharma, M. & Hudson, JB Gesi ya ozoni ni wakala wa antibacterial wenye ufanisi na vitendo.Sharma, M. na Hudson, JB Ozoni ya gesi ni wakala wa antibacterial wenye ufanisi na vitendo. Sharma, M. & Hudson, JB 臭氧气体是一种有效且实用的抗菌剂. Sharma, M. & Hudson, JBSharma, M. na Hudson, JB Ozoni ya gesi ni wakala wa antimicrobial wenye ufanisi na vitendo.Ndiyo. J. Udhibiti wa Maambukizi. 36(8), 559-563. https://doi.org/10.1016/j.ajic.2007.10.021 (2008).
Seung-Lok Pak, J.-DM, Lee, S.-H. & Shin, S.-Y. & Shin, S.-Y.na Shin, S.-Yu. & Shin, S.-Y. & Shin, S.-Y.na Shin, S.-Yu.Ozoni huzalishwa kwa ufanisi kwa kutumia elektrodi za bamba la gridi katika jenereta ya ozoni ya aina ya kutokwa yenye kizuizi cha dielektri. J. Electrostatics. 64(5), 275-282. https://doi.org/10.1016/j.elstat.2005.06.007 (2006).
Moat, J., Cargill, J., Shone, J. & Upton, M. Matumizi ya mchakato mpya wa kuondoa uchafu kwa kutumia ozoni ya gesi. Moat, J., Cargill, J., Shone, J. & Upton, M. Matumizi ya mchakato mpya wa kuondoa uchafu kwa kutumia ozoni ya gesi.Moat J., Cargill J., Sean J. na Upton M. Utumiaji wa mchakato mpya wa kuondoa uchafu kwa kutumia gesi ya ozoni. Moat, J., Cargill, J., Shone, J. & Upton, M. 使用气态臭氧的新型净化工艺的应用. Moat, J., Cargill, J., Shone, J. & Upton, M.Moat J., Cargill J., Sean J. na Upton M. Utumiaji wa mchakato mpya wa utakaso kwa kutumia gesi ya ozoni.Can. J. Vijidudu. 55(8), 928–933. https://doi.org/10.1139/w09-046 (2009).
Zoutman, D., Shannon, M. & Mandel, A. Ufanisi wa mfumo mpya unaotegemea ozoni kwa ajili ya kuua vijidudu haraka katika maeneo ya huduma za afya na nyuso zake. Zoutman, D., Shannon, M. & Mandel, A. Ufanisi wa mfumo mpya unaotegemea ozoni kwa ajili ya kuua vijidudu haraka katika maeneo ya huduma za afya na nyuso zake.Zutman, D., Shannon, M. na Mandel, A. Ufanisi wa mfumo mpya unaotegemea ozoni kwa ajili ya kusafisha haraka na kwa kiwango cha juu mazingira na nyuso za kimatibabu. Zoutman, D., Shannon, M. & Mandel, A. 新型臭氧系统对医疗保健空间和表面进行快速高水平消毒的有敬性. Zoutman, D., Shannon, M. & Mandel, A.Zutman, D., Shannon, M. na Mandel, A. Ufanisi wa mfumo mpya wa ozoni kwa ajili ya kuua vijidudu haraka na kwa kiwango cha juu katika mazingira na nyuso za kimatibabu.Ndiyo. J. Udhibiti wa maambukizi. 39(10), 873-879. https://doi.org/10.1016/j.ajic.2011.01.012 (2011).
Wullt, M., Odenholt, I. & Walder, M. Shughuli ya viuatilifu vitatu na nitriti iliyo na asidi dhidi ya spores za Clostridium difficile. Wullt, M., Odenholt, I. & Walder, M. Shughuli ya viuatilifu vitatu na nitriti iliyo na asidi dhidi ya spores za Clostridium difficile.Woollt, M., Odenholt, I. na Walder, M. Shughuli ya viuatilifu vitatu na nitriti iliyo na asidi dhidi ya spores za Clostridium difficile.Vullt M, Odenholt I na Walder M. Shughuli ya viuatilifu vitatu na nitriti zenye asidi dhidi ya spores za Clostridium difficile. Hospitali ya Kudhibiti Maambukizi. Epidemiology. 24(10), 765-768. https://doi.org/10.1086/502129 (2003).
Ray, A. et al. Uondoaji wa vijidudu vya hidrojeni peroksidi kwa mvuke wakati wa mlipuko wa Acinetobacter baumannii sugu kwa dawa nyingi katika hospitali ya utunzaji wa muda mrefu. Hospitali ya Kudhibiti Maambukizi. Epidemiolojia. 31(12), 1236-1241. https://doi.org/10.1086/657139 (2010).
Ekshtein, BK et al. Kupunguza uchafuzi wa nyuso za mazingira kwa kutumia Clostridium difficile na enterococci sugu kwa vancomycin kufuatia kupitishwa kwa hatua za kuboresha mbinu za kusafisha. Ugonjwa wa kuambukiza wa Jeshi la Wanamaji. 7, 61. https://doi.org/10.1186/1471-2334-7-61 (2007).
Martinelli, M., Giovannangeli, F., Rotunno, S., Trombetta, CM & Montomoli, E. Matibabu ya ozoni ya maji na hewa kama teknolojia mbadala ya usafi. Martinelli, M., Giovannangeli, F., Rotunno, S., Trombetta, CM & Montomoli, E. Matibabu ya ozoni ya maji na hewa kama teknolojia mbadala ya usafi.Martinelli, M., Giovannangeli, F., Rotunno, S., Trombetta, KM na Montomoli, E. Matibabu ya ozoni ya maji na hewa kama teknolojia mbadala ya usafi wa mazingira. Martinelli, M., Giovannangeli, F., Rotunno, S., Trombetta, CM & Montomoli, E. 水 na空气臭氧处理作為替代消毒技术. Martinelli, M., Giovannangeli, F., Rotunno, S., Trombetta, CM & Montomoli, E.Martinelli M, Giovannangeli F, Rotunno S, Trombetta SM na Montomoli E. Matibabu ya ozoni ya maji na hewa kama njia mbadala ya kuua vijidudu.J. Ukurasa uliotangulia. dawa. Hagrid. 58(1), E48-e52 (2017).
Wizara ya Mazingira ya Korea. https://www.me.go.kr/mamo/web/index.do?menuId=586 (2022). Kufikia Januari 12, 2022
Thanomsub, B. et al. Athari ya matibabu ya ozoni kwenye ukuaji wa seli za bakteria na mabadiliko ya kimuundo. Kiambatisho J. Gen. vijidudu. 48(4), 193-199. https://doi.org/10.2323/jgam.48.193 (2002).
Zhang, YQ, Wu, QP, Zhang, JM & Yang, XH Athari za ozoni kwenye upenyezaji wa utando na muundo wa juu zaidi katika Pseudomonas aeruginosa. Zhang, YQ, Wu, QP, Zhang, JM & Yang, XH Athari za ozoni kwenye upenyezaji wa utando na muundo wa juu zaidi katika Pseudomonas aeruginosa. Zhang, YQ, Wu, QP, Zhang, JM & Yang, XH Влияние озона на проницаемость мембран и ультраструктуру Pseudomonas aeruginosa. Zhang, YQ, Wu, QP, Zhang, JM & Yang, XH Athari ya ozoni kwenye upenyezaji wa utando na muundo wa juu zaidi wa Pseudomonas aeruginosa. Zhang, YQ, Wu, QP, Zhang, JM & Yang, XH 臭氧对铜绿假单胞菌膜通透性 na超微结构的影响. Zhang, YQ, Wu, QP, Zhang, JM & Yang, XH Zhang, YQ, Wu, QP, Zhang, JM & Yang, XH Влияние озона на проницаемость мембран и ультраструктуру Pseudomonas aeruginosa. Zhang, YQ, Wu, QP, Zhang, JM & Yang, XH Athari ya ozoni kwenye upenyezaji wa utando na muundo wa juu zaidi wa Pseudomonas aeruginosa.J. Matumizi. vijidudu. 111(4), 1006-1015. https://doi.org/10.1111/j.1365-2672.2011.05113.x (2011).
Russell, AD Kufanana na tofauti katika majibu ya vijidudu kwa dawa za kuvu. J. Antibiotiki. kidini. 52(5), 750-763. https://doi.org/10.1093/jac/dkg422 (2003).
Whitaker, J., Brown, BS, Vidal, S. & Calcaterra, M. Kubuni itifaki inayoondoa Clostridium difficile: Mradi wa ushirikiano. Whitaker, J., Brown, BS, Vidal, S. & Calcaterra, M. Kubuni itifaki inayoondoa Clostridium difficile: Mradi wa ushirikiano.Whitaker J, Brown BS, Vidal S na Calcaterra M. Uundaji wa itifaki ya kuondoa Clostridium difficile: ubia. Whitaker, J., Brown, BS, Vidal, S. & Calcaterra, M. 设计一种消除艰难梭菌的方案：合作企业. Whitaker, J., Brown, Shahada ya Sayansi, Vidal, S. & Calcaterra, M.Whitaker, J., Brown, BS, Vidal, S. na Calcaterra, M. Uundaji wa itifaki ya kuondoa Clostridium difficile: ubia.Ndiyo. J. Udhibiti wa maambukizi. 35(5), 310-314. https://doi.org/10.1016/j.ajic.2006.08.010 (2007).
Broadwater, WT, Hoehn, RC & King, PH Unyeti wa spishi tatu za bakteria zilizochaguliwa kwa ozoni. Broadwater, WT, Hoehn, RC & King, PH Unyeti wa spishi tatu za bakteria zilizochaguliwa kwa ozoni. Broadwater, WT, Hoehn, RC & King, PH Чувствительность трех выбранных видов бактерий к озону. Unyeti wa ozoni wa spishi tatu za bakteria zilizochaguliwa katika Broadwater, WT, Hoehn, RC & King, PH. Broadwater, WT, Hoehn, RC & King, PH 三种选定细菌对臭氧的敏感性. Broadwater, WT, Hoehn, RC & King, PH Broadwater, WT, Hoehn, RC & King, PH Чувствительность трех выбранных бактерий к озону. Unyeti wa ozoni kwa bakteria tatu zilizochaguliwa katika Broadwater, WT, Hoehn, RC & King, PH.taarifa. vijidudu. 26(3), 391–393. https://doi.org/10.1128/am.26.3.391-393.1973 (1973).
Patil, S., Valdramidis, VP, Karatzas, KA, Cullen, PJ & Bourke, P. Kutathmini utaratibu wa msongo wa oksidi wa vijidudu wa matibabu ya ozoni kupitia majibu ya mabadiliko ya Escherichia coli. Patil, S., Valdramidis, VP, Karatzas, KA, Cullen, PJ & Bourke, P. Kutathmini utaratibu wa msongo wa oksidi wa vijidudu wa matibabu ya ozoni kupitia majibu ya mabadiliko ya Escherichia coli.Patil, S., Valdramidis, VP, Karatzas, KA, Cullen, PJ na Burk, P. Tathmini ya Utaratibu wa Mkazo wa Oksidati wa Vijidudu kwa Matibabu ya Ozoni kutoka kwa Athari za Escherichia coli Mutant. Patil, S., Valdramidis, VP, Karatzas, KA, Cullen, PJ & Bourke, P. Patil, S., Valdramidis, VP, Karatzas, KA, Cullen, PJ & Bourke, P.Patil, S., Valdramidis, VP, Karatsas, KA, Cullen, PJ na Bourque, P. Tathmini ya mifumo ya msongo wa oksidi wa vijidudu katika matibabu ya ozoni kupitia athari za mabadiliko ya Escherichia coli.J. Matumizi. vijidudu. 111(1), 136-144. https://doi.org/10.1111/j.1365-2672.2011.05021.x (2011).
Greene, C., Wu, J., Rickard, AH & Xi, C. Tathmini ya uwezo wa Acinetobacter baumannii kuunda biofilms kwenye nyuso sita tofauti za kibiolojia zinazohusiana. Greene, C., Wu, J., Rickard, AH & Xi, C. Tathmini ya uwezo wa Acinetobacter baumannii kuunda biofilms kwenye nyuso sita tofauti za kibiolojia zinazohusiana.Green, K., Wu, J., Rickard, A. Kh. na Si, K. Tathmini ya uwezo wa Acinetobacter baumannii kuunda biofilms kwenye nyuso sita tofauti zinazohusiana na kibiolojia. Greene, C., Wu, J., Rickard, AH & Xi, C. 评估鲍曼不动杆菌在六种不同生物医学相关表面上形成生物劜的评。 Greene, C., Wu, J., Rickard, AH & Xi, C. Tathmini ya uwezo wa 鲍曼不动天生在六种 kuunda biofilm kwenye nyuso mbalimbali zinazohusika za matibabu.Green, K., Wu, J., Rickard, A. Kh. na Si, K. Tathmini ya uwezo wa Acinetobacter baumannii kuunda biofilms kwenye nyuso sita tofauti zinazohusiana na kibiolojia.Wright. vijidudu vya matumizi 63(4), 233-239. https://doi.org/10.1111/lam.12627 (2016).