Nature.com ପରିଦର୍ଶନ କରିଥିବାରୁ ଧନ୍ୟବାଦ |ଆପଣ ବ୍ୟବହାର କରୁଥିବା ବ୍ରାଉଜର୍ ସଂସ୍କରଣରେ ସୀମିତ CSS ସମର୍ଥନ ଅଛି |ସର୍ବୋତ୍ତମ ଅଭିଜ୍ଞତା ପାଇଁ, ଆମେ ପରାମର୍ଶ ଦେଉଛୁ ଯେ ଆପଣ ଏକ ଅପଡେଟ୍ ବ୍ରାଉଜର୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ (କିମ୍ବା ଇଣ୍ଟରନେଟ୍ ଏକ୍ସପ୍ଲୋରରରେ ସୁସଙ୍ଗତତା ମୋଡ୍ ଅକ୍ଷମ କରନ୍ତୁ) |ମ meantime ିରେ ମ continued ିରେ, ନିରନ୍ତର ସମର୍ଥନ ନିଶ୍ଚିତ କରିବାକୁ, ଆମେ ଶ yles ଳୀ ଏବଂ ଜାଭାସ୍କ୍ରିପ୍ଟ ବିନା ସାଇଟ୍ ଉପସ୍ଥାପନ କରିବୁ |
AFEX ସହିତ ପ୍ରସ୍ତୁତ ମକା ଷ୍ଟୋଭରରେ ସ୍ଥାୟୀ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ସର ଜଟିଳ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ ନୂତନ ଇମ୍ୟୁନୋଲୋଜିକାଲ୍ ଏବଂ ମାସ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋମେଟ୍ରିକ୍ ପଦ୍ଧତି |ଲିଗ୍ନୋସେଲୁଲୋଜିକ୍ ବାୟୋମାସ୍ ଜୀବାଶ୍ମ ଇନ୍ଧନ ପାଇଁ ଏକ ସ୍ଥାୟୀ ବିକଳ୍ପ ଏବଂ ଖାଦ୍ୟ, ଫିଡ୍, ଇନ୍ଧନ ଏବଂ ରାସାୟନିକ ପଦାର୍ଥ ଉତ୍ପାଦନ ପାଇଁ ବାୟୋଟେକ୍ନୋଲୋଜିର ବିକାଶ ପାଇଁ ବହୁଳ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |ଏହି ଟେକ୍ନୋଲୋଜିର ଚାବି ହେଉଛି ଉଦ୍ଭିଦ କୋଷ କାନ୍ଥରେ ଉପସ୍ଥିତ ଥିବା ଜଟିଳ କାର୍ବୋହାଇଡ୍ରେଟ୍କୁ ଗ୍ଲୁକୋଜ, ଜାଇଲୋଜ୍ ଏବଂ ଆରବିନୋଜ୍ ପରି ସରଳ ଶର୍କରା ରେ ପରିଣତ କରିବା ପାଇଁ ମୂଲ୍ୟ-ପ୍ରତିଯୋଗିତାମୂଳକ ପ୍ରକ୍ରିୟାର ବିକାଶ |କାରଣ ଲିଗ୍ନୋସେଲୁଲୋଜିକ୍ ବାୟୋମାସ୍ ଅତ୍ୟନ୍ତ ଜିଦ୍ଖୋର, ଏହାକୁ ଆବଶ୍ୟକ ଉତ୍ପାଦ ପାଇବା ପାଇଁ ଥର୍ମୋକେମିକାଲ୍ ଚିକିତ୍ସା (ଯଥା, ଆମୋନିୟା ଫାଇବର ଏକ୍ସଫୋଲିଏସନ୍ (AFEX), ଡ୍ୟୁଲେଟ୍ ଏସିଡ୍ (ଡିଏ), ଆୟନିକ୍ ଲିକ୍ୱିଡ୍ (ଆଇଏଲ୍) ଏବଂ ଜ ological ବିକ ଚିକିତ୍ସା (ଯଥା, ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ହାଇଡ୍ରୋଲାଇସିସ୍ ଏବଂ ମାଇକ୍ରୋବାୟଲ୍ ଫେମେଣ୍ଟେସନ୍) ଅଧୀନରେ ରହିବା ଆବଶ୍ୟକ |।ଅବଶ୍ୟ, ଯେତେବେଳେ ହାଇଡ୍ରୋଲାଇସିସ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟାରେ ବ୍ୟବସାୟିକ ଫଙ୍ଗଲ୍ ଏନଜାଇମ୍ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ, ସେତେବେଳେ ସୃଷ୍ଟି ହୋଇଥିବା ଦ୍ରବୀଭୂତ ଶର୍କରାର ମାତ୍ର 75-85% ମୋନୋସାକାରାଇଡ୍ ଅଟେ ଏବଂ ଅବଶିଷ୍ଟ 15-25% ଦ୍ରବଣୀୟ, ଇଣ୍ଟାକ୍ଟେବଲ୍ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ଅଟେ, ଯାହା ସର୍ବଦା ଅଣୁଜୀବ ପାଇଁ ଉପଲବ୍ଧ ନୁହେଁ |ପୂର୍ବରୁ, ଆମେ କାର୍ବନ ଏବଂ ଡାଏଟୋମାସିୟସ୍ ପୃଥିବୀ ପୃଥକତା ଏବଂ ଆକାର ବହିଷ୍କାର କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫିର ମିଶ୍ରଣ ବ୍ୟବହାର କରି ସଫଳତାର ସହିତ ଦ୍ରବୀଭୂତ ଜିଦ୍‌ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡକୁ ପୃଥକ ଏବଂ ଶୁଦ୍ଧ କରିଛୁ ଏବଂ ସେମାନଙ୍କର ଏନଜାଇମ୍ ନିରୋଧକ ଗୁଣ ମଧ୍ୟ ଅନୁସନ୍ଧାନ କରିଛୁ |ଆମେ ଜାଣିବାକୁ ପାଇଲୁ ଯେ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡସ୍ ଅଧିକ ମାତ୍ରାରେ ପଲିମେରାଇଜେସନ୍ (ଡିପି) ମିଥାଇଲେଟେଡ୍ ୟୁରୋନିକ୍ ଏସିଡ୍ ପ୍ରତିସ୍ଥାପନ ଧାରଣ କରିଥାଏ, କମ୍ ଡିପି ଏବଂ ନିରପେକ୍ଷ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ଅପେକ୍ଷା ବ୍ୟବସାୟିକ ଏନଜାଇମ୍ ମିଶ୍ରଣ ସହିତ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ କରିବା କଷ୍ଟକର |ଏଠାରେ ଆମେ ଅନେକ ଅତିରିକ୍ତ ପଦ୍ଧତିର ବ୍ୟବହାର ବିଷୟରେ ରିପୋର୍ଟ କରୁ, ଉଦ୍ଭିଦ କୋଷ ପ୍ରାଚୀର ଏବଂ ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ହାଇଡ୍ରୋଲାଇସେଟ୍, ମ୍ୟାଟ୍ରିକ୍ସ-ସହାୟକ ହୋଇଥିବା ଲେଜର ଡିସର୍ପସନ୍ ଆୟନାଇଜେସନ୍, ଟାଇମ୍ ଅଫ୍ ଫ୍ଲାଇଟ୍ ମାସ-ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋମେଟ୍ରିରେ ଗ୍ଲାଇକାନ୍ ବଣ୍ଡକୁ ବର୍ଣ୍ଣିତ କରିବା ପାଇଁ ମୋନୋକ୍ଲୋନାଲ ଆଣ୍ଟିବଡି (mAbs) ବ୍ୟବହାର କରି ଗ୍ଲାଇକାନ୍ ପ୍ରୋଫାଇଲ୍ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ |।MALDI-TOF-MS) ନକରାତ୍ମକ ଆୟନ, ଗ୍ୟାସ୍ କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫି ଏବଂ ମାସ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋମେଟ୍ରି (GC-MS) ର ଦ୍ secondary ିତୀୟ କ୍ଷୟ ପରେ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରସ୍କୋପି ଦ୍ obtained ାରା ପ୍ରାପ୍ତ ସଂରଚନା-ସୂଚନାମୂଳକ ଡାଇଗ୍ନୋଷ୍ଟିକ୍ ଶିଖରଗୁଡିକ ବ୍ୟବହାର କରେ ଏବଂ ଡେରିଭେଟାଇଜେସନ୍ ବିନା ଓଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ବଣ୍ଡକୁ ବର୍ଣ୍ଣିତ କରେ |ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ (DP 4–20) ର ଛୋଟ ଆକାର ହେତୁ, ଏହି ଅଣୁଗୁଡ଼ିକ mAb ବାନ୍ଧିବା ଏବଂ ଚରିତ୍ରକରଣ ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରିବା କଷ୍ଟକର |ଏହି ସମସ୍ୟାକୁ ଦୂର କରିବା ପାଇଁ, ଆମେ ଏକ ନୂତନ ବାୟୋଟିନ୍ କଞ୍ଜୁଗେସନ୍-ଆଧାରିତ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ଇମୋମୋବାଇଲାଇଜେସନ୍ ପଦ୍ଧତି ପ୍ରୟୋଗ କରିଥିଲୁ ଯାହା ମାଇକ୍ରୋପ୍ଲେଟ୍ ପୃଷ୍ଠରେ ଅଧିକାଂଶ ନିମ୍ନ DP ଦ୍ରବଣୀୟ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍କୁ ସଫଳତାର ସହ ଲେବଲ୍ କରିଥିଲା, ଯାହା ପରେ ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଲିଗେସନ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ ଏକ ଉଚ୍ଚ ଥ୍ରୋପଟ୍ mAb ସିଷ୍ଟମରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା |ଏହି ନୂତନ ପଦ୍ଧତି ଭବିଷ୍ୟତରେ ଅଧିକ ଉନ୍ନତ ଉଚ୍ଚ ଥ୍ରୋପପୁଟ ଗ୍ଲାଇକମ୍ ଆସେସ୍ ର ବିକାଶକୁ ସହଜ କରିବ ଯାହା ଡାଇଗ୍ନୋଷ୍ଟିକ୍ ଉଦ୍ଦେଶ୍ୟରେ ବାୟୋମାର୍କର୍ରେ ଉପସ୍ଥିତ ଥିବା ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍କୁ ପୃଥକ ଏବଂ ବର୍ଣ୍ଣିତ କରିବାରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇପାରିବ |
କୃଷି, ଜଙ୍ଗଲ, ଘାସ ଏବଂ କାଠ ସାମଗ୍ରୀକୁ ନେଇ ଗଠିତ ଲିଗ୍ନୋସେଲୁଲୋଜିକ୍ ବାୟୋମାସ୍, ଉଚ୍ଚ ମୂଲ୍ୟର ଉତ୍ପାଦ ଉତ୍ପାଦନ ପାଇଁ ଖାଦ୍ୟ, ଫିଡ୍, ଇନ୍ଧନ ଏବଂ ରାସାୟନିକ ପୂର୍ବାବଲୋକନ ସହିତ ବାୟୋ-ଆଧାରିତ ଉତ୍ପାଦ ଉତ୍ପାଦନ ପାଇଁ ଏକ ସମ୍ଭାବ୍ୟ ଫିଡଷ୍ଟକ୍ ଅଟେ |ଉଦ୍ଭିଦ କୋଷ କାନ୍ଥରେ ଥିବା କାର୍ବୋହାଇଡ୍ରେଟ୍ସ (ଯେପରିକି ସେଲୁଲୋଜ୍ ଏବଂ ହେମିକେଲୁଲୋଜ୍) ରାସାୟନିକ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ ଏବଂ ବାୟୋଟ୍ରାନ୍ସଫର୍ମେସନ୍ (ଯେପରିକି ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ହାଇଡ୍ରୋଲାଇସିସ୍ ଏବଂ ମାଇକ୍ରୋବାୟଲ୍ ଫେମେଣ୍ଟେସନ୍) ଦ୍ mon ାରା ମୋନୋସାକାରାଇଡରେ ଡିପୋଲାଇମେରାଇଜ୍ ହୋଇଥାଏ |ସାଧାରଣ ପ୍ରି-ଟ୍ରିଟମେଣ୍ଟରେ ଆମୋନିୟା ଫାଇବର ବିସ୍ତାର (AFEX), ମିଶ୍ରିତ ଏସିଡ୍ (DA), ଆୟନିକ୍ ଲିକ୍ୱିଡ୍ (ଆଇଏଲ୍), ଏବଂ ବାଷ୍ପ ବିସ୍ଫୋରଣ (SE) ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ, ଯାହା ଉଦ୍ଭିଦ କୋଷର କାନ୍ଥ ଖୋଲି ଲିଗ୍ନୋସେଲୁଲୋଜ୍ ଉତ୍ପାଦନକୁ ହ୍ରାସ କରିବା ପାଇଁ ରାସାୟନିକ ପଦାର୍ଥ ଏବଂ ଉତ୍ତାପର ମିଶ୍ରଣକୁ ବ୍ୟବହାର କରିଥାଏ |ପଦାର୍ଥର ଜିଦ, 5. ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ହାଇଡ୍ରୋଲାଇସିସ୍ ଏକ ଉଚ୍ଚ କଠିନ ଭାରରେ ବ୍ୟବସାୟିକ ସକ୍ରିୟ କାର୍ବୋହାଇଡ୍ରେଟ୍ ଧାରଣକାରୀ ଏନଜାଇମ୍ (CAZymes) ଏବଂ ବାୟୋ-ଆଧାରିତ ଇନ୍ଧନ ଏବଂ ରାସାୟନିକ ପଦାର୍ଥ ଉତ୍ପାଦନ ପାଇଁ ଟ୍ରାନ୍ସଜେନିକ୍ ଖମୀର କିମ୍ବା ଜୀବାଣୁ ବ୍ୟବହାର କରି ମାଇକ୍ରୋବାୟଲ୍ ଫେମେଣ୍ଟେସନ ବ୍ୟବହାର କରିଥାଏ |
ବାଣିଜ୍ୟିକ ଏନଜାଇମରେ CAZymes ଏକ ଏନଜାଇମର ଏକ ଜଟିଳ ମିଶ୍ରଣକୁ ନେଇ ଗଠିତ ଯାହା ମୋନୋସାକାରାଇଡ୍ ଗଠନ ପାଇଁ ଜଟିଳ କାର୍ବୋହାଇଡ୍ରେଟ୍-ଚିନି ବଣ୍ଡକୁ ସିନର୍ଜିଷ୍ଟିକ୍ ଭାବରେ ଖଣ୍ଡ କରିଦିଏ |ଯେହେତୁ ଆମେ ପୂର୍ବରୁ ରିପୋର୍ଟ କରିଥିଲୁ, କାର୍ବୋହାଇଡ୍ରେଟ୍ ସହିତ ଲିଗ୍ନାନ୍ ର ସୁଗନ୍ଧିତ ପଲିମରର ଜଟିଳ ନେଟୱାର୍କ ସେମାନଙ୍କୁ ଅତ୍ୟଧିକ ଇଣ୍ଟାକ୍ଟେବଲ୍ କରିଥାଏ, ଯାହା ଅସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଚିନି ରୂପାନ୍ତରକୁ ନେଇଥାଏ, 15-25% ଯ sex ନ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ସଂଗ୍ରହ କରିଥାଏ ଯାହା ପ୍ରାକୃତିକ ବାୟୋମାସର ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ହାଇଡ୍ରୋଲାଇସିସ୍ ସମୟରେ ଉତ୍ପନ୍ନ ହୁଏ ନାହିଁ |ବିଭିନ୍ନ ଜ om ବ ଜୀବ ପ୍ରଣାଳୀ ପ୍ରଣାଳୀ ସହିତ ଏହା ଏକ ସାଧାରଣ ସମସ୍ୟା |ଏହି ବୋତଲ ପାଇଁ କେତେକ କାରଣ ହାଇଡ୍ରୋଲାଇସିସ୍ ସମୟରେ ଏନଜାଇମ୍ ପ୍ରତିବନ୍ଧକ, କିମ୍ବା ଉଦ୍ଭିଦ ବାୟୋମାସରେ ଚିନି ବନ୍ଧ ଭାଙ୍ଗିବା ପାଇଁ ଆବଶ୍ୟକ ଅତ୍ୟାବଶ୍ୟକୀୟ ଏନଜାଇମର ଅନୁପସ୍ଥିତି କିମ୍ବା ନିମ୍ନ ସ୍ତର ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ କରେ |ଶର୍କରାର ରଚନା ଏବଂ ଗଠନମୂଳକ ବ characteristics ଶିଷ୍ଟ୍ୟ ବୁ standing ିବା, ଯେପରିକି ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡରେ ଥିବା ଚିନି ବଣ୍ଡ, ହାଇଡ୍ରୋଲାଇସିସ୍ ସମୟରେ ଚିନି ରୂପାନ୍ତରଣରେ ଉନ୍ନତି ଆଣିବାରେ ସାହାଯ୍ୟ କରିବ, ପେଟ୍ରୋଲିୟମ ଉତ୍ପାଦିତ ଉତ୍ପାଦ ସହିତ ବାୟୋଟେକ୍ନୋଲୋଜିକାଲ ପ୍ରକ୍ରିୟାକୁ ମୂଲ୍ୟ-ପ୍ରତିଯୋଗୀ କରାଇବ |
କାର୍ବୋହାଇଡ୍ରେଟ୍ସର ଗଠନ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା ଏକ ଆହ୍ is ାନପୂର୍ଣ୍ଣ ଏବଂ ତରଳ କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫି (LC) 11,12, ଆଣବିକ ଚୁମ୍ବକୀୟ ରିଜୋନାନ୍ସ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରସ୍କୋପି (NMR) 13, କ୍ୟାପିଲାରୀ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ (CE) 14,15,16 ଏବଂ ମାସ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋମେଟ୍ରି (MS) 17 ଭଳି ପଦ୍ଧତିର ମିଶ୍ରଣ ଆବଶ୍ୟକ କରେ |, ଅଠରଏମଏସ ପଦ୍ଧତିଗୁଡିକ ଯେପରିକି ଲେଜର ଡିସର୍ପସନ୍ ସହିତ ଟାଇମ୍-ଅଫ୍ ଫ୍ଲାଇଟ୍ ମାସ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋମେଟ୍ରି ଏବଂ ଏକ ମ୍ୟାଟ୍ରିକ୍ସ (MALDI-TOF-MS) ବ୍ୟବହାର କରି ଆୟନାଇଜେସନ୍ କାର୍ବୋହାଇଡ୍ରେଟ୍ ସଂରଚନା ଚିହ୍ନଟ ପାଇଁ ଏକ ବହୁମୁଖୀ ପଦ୍ଧତି |ସମ୍ପ୍ରତି, ସୋଡିୟମ୍ ଆୟନ ଆଡକ୍ଟସ୍ ର ଧକ୍କା-ପ୍ରେରିତ ଡିସୋସିଏସନ୍ (CID) ଟାଣ୍ଡେମ୍ ଏମ୍ଏସ୍ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ସଂଲଗ୍ନ ସ୍ଥାନ, ଆନୋମେରିକ୍ ବିନ୍ୟାସକରଣ, କ୍ରମ, ଏବଂ ଶାଖା ସ୍ଥିତି 20, 21 ସହିତ ଜଡିତ ଫିଙ୍ଗର ପ୍ରିଣ୍ଟ ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ ବହୁଳ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଛି |
କାର୍ବୋହାଇଡ୍ରେଟ୍ ବଣ୍ଡର ଗଭୀର ଚିହ୍ନଟ ପାଇଁ ଗ୍ଲାଇକାନ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ ହେଉଛି ଏକ ଉତ୍କୃଷ୍ଟ ଉପକରଣ |ଏହି ପଦ୍ଧତି ଜଟିଳ କାର୍ବୋହାଇଡ୍ରେଟ୍ ଲିଙ୍କେଜ୍ ବୁ understand ିବା ପାଇଁ ପ୍ରୋବ୍ ଭାବରେ ସେଲ୍ କାନ୍ଥ ଗ୍ଲାଇକାନ୍ ଲଗାଇବାକୁ ନିର୍ଦ୍ଦେଶିତ ମୋନୋକ୍ଲୋନାଲ ଆଣ୍ଟିବଡି (mAbs) ବ୍ୟବହାର କରେ |ବିଭିନ୍ନ ସାକାରାଇଡ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ବିଭିନ୍ନ ର ar ଖ୍ୟ ଏବଂ ଶାଖା ବିଶିଷ୍ଟ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ବିରୁଦ୍ଧରେ ଡିଜାଇନ୍ ହୋଇଥିବା 250 ରୁ ଅଧିକ mAbs ଉପଲବ୍ଧ |ଉଦ୍ଭିଦ କୋଷ ପ୍ରାଚୀରର ଗଠନ, ରଚନା, ଏବଂ ପରିବର୍ତ୍ତନକୁ ବର୍ଣ୍ଣିତ କରିବା ପାଇଁ ଅନେକ mAbs ବହୁଳ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଛି, କାରଣ ଉଦ୍ଭିଦ କୋଷ ପ୍ରକାର, ଅଙ୍ଗ, ବୟସ, ବିକାଶ ପର୍ଯ୍ୟାୟ ଏବଂ ଅଭିବୃଦ୍ଧି ପରିବେଶ ଉପରେ ନିର୍ଭର କରି ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପାର୍ଥକ୍ୟ ଅଛି 25,26 |ସମ୍ପ୍ରତି, ଏହି ପଦ୍ଧତି ଉଦ୍ଭିଦ ଏବଂ ପ୍ରାଣୀ ପ୍ରଣାଳୀରେ ଭେସିକଲ୍ ଜନସଂଖ୍ୟା ଏବଂ ଗ୍ଲାଇକାନ୍ ପରିବହନରେ ସେମାନଙ୍କର ସମ୍ପୃକ୍ତ ଭୂମିକା ବୁ sub ିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଛି, ଯେପରି ସବସେଲୁଲାର୍ ମାର୍କର୍, ବିକାଶ ପର୍ଯ୍ୟାୟ କିମ୍ବା ପରିବେଶ ଉତ୍ସାହ ଦ୍ determined ାରା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଏ ଏବଂ ଏନଜାଇମାଟିଭ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଏ |ଗ୍ଲାଇକାନ୍ ଏବଂ ଜିଲାନ୍ସର କେତେକ ଭିନ୍ନ ସଂରଚନା ଯାହା ଚିହ୍ନଟ ହୋଇଛି ସେଥିରେ ପେକ୍ଟିନ୍ (ପି), ଜାଇଲାନ୍ (ଏକ୍ସ), ମାନ୍ନା (ଏମ୍), ଜାଇଲୋଗ୍ଲୁକାନ୍ସ (XylG), ମିଶ୍ରିତ ବଣ୍ଡ ଗ୍ଲୁକାନ୍ସ (MLG), ଆରବିନୋକ୍ସିଲାନ (ଆର୍ବଏକ୍ସ), ଗାଲାକ୍ଟୋମାନାନ (ଗାଲଜି), ଗ୍ଲୁକୁରୋନିକ୍ ଏସିଡ୍-ଆରବିନୋକ୍ସିଲାନ୍ (GArbX) ଏବଂ ଆରବିନୋ-ଗାଲାକ୍ଟାନ୍ (GArbX) |
ତଥାପି, ଏହି ସମସ୍ତ ଗବେଷଣା ପ୍ରୟାସ ସତ୍ତ୍ୱେ, କେବଳ ଅଳ୍ପ କିଛି ଅଧ୍ୟୟନ ଉଚ୍ଚ ସଲିଡ୍ ଲୋଡ୍ (HSL) ହାଇଡ୍ରୋଲାଇସିସ୍ ସମୟରେ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ରିଲିଜ୍, ହାଇଡ୍ରୋଲାଇସିସ୍ ସମୟରେ ଅଲିଗୋମେରିକ୍ ଶୃଙ୍ଖଳା ଦ length ର୍ଘ୍ୟ ପରିବର୍ତ୍ତନ, ବିଭିନ୍ନ ନିମ୍ନ ଡିପି ପଲିମର ଏବଂ ସେମାନଙ୍କର ବକ୍ରତା ଉପରେ ଧ୍ୟାନ ଦେଇଥାଏ |ବଣ୍ଟନ 30,31,32ଏହି ସମୟରେ, ଯଦିଓ ଗ୍ଲାଇକାନ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ ଗ୍ଲାଇକାନ୍ ଗଠନର ବିସ୍ତୃତ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ ଏକ ଉପଯୋଗୀ ସାଧନ ବୋଲି ପ୍ରମାଣିତ ହୋଇଛି, ଆଣ୍ଟିବଡି ପ୍ରଣାଳୀ ବ୍ୟବହାର କରି ଜଳରେ ଦ୍ରବୀଭୂତ କମ୍ DP ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରିବା କଷ୍ଟକର |5-10 kDa ରୁ କମ୍ ମଲିକୁଲାର୍ ଓଜନ ବିଶିଷ୍ଟ ଛୋଟ DP ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ELISA ପ୍ଲେଟ୍ 33, 34 ରେ ବାନ୍ଧେ ନାହିଁ ଏବଂ ଆଣ୍ଟିବଡି ଯୋଗ ପୂର୍ବରୁ ଧୋଇଯାଏ |
ଏଠାରେ, ପ୍ରଥମ ଥର ପାଇଁ, ଆମେ ମୋନୋକ୍ଲୋନାଲ ଆଣ୍ଟିବଡି ବ୍ୟବହାର କରି ଆଭିଡିନ-ଆବୃତ ପ୍ଲେଟଗୁଡିକରେ ଏକ ELISA ଅନୁଧ୍ୟାନ ପ୍ରଦର୍ଶନ କରୁ, ଗ୍ଲାଇକମ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ ସହିତ ଦ୍ରବୀଭୂତ ରିଫାକ୍ଟୋରୀ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ପାଇଁ ଏକ ସୋପାନ ବାୟୋଟିନାଇଲେସନ୍ ପ୍ରଣାଳୀକୁ ମିଶ୍ରଣ କରି |ଗ୍ଲାଇକମ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ ଆମର ଆଭିମୁଖ୍ୟ MALDI-TOF-MS ଏବଂ GC-MS ଆଧାରିତ ବିଶ୍ଳେଷଣ ଦ୍ୱାରା ହାଇଡ୍ରୋଲାଇଜେଡ୍ ଚିନି ରଚନାଗୁଡ଼ିକର ଟ୍ରାଇମେଥାଇଲସିଲିଲ୍ (TMS) ଡେରିଭେଟାଇଜେସନ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ଲିଙ୍କେଜ୍ ଦ୍ୱାରା ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା |ଭବିଷ୍ୟତରେ ଏକ ଉଚ୍ଚ-ଥ୍ରୋପୁଟ୍ ପଦ୍ଧତି ଭାବରେ ଏହି ଅଭିନବ ଉପାୟକୁ ବିକଶିତ କରାଯାଇପାରିବ ଏବଂ ଜ omed ବ ଚିକିତ୍ସା ଅନୁସନ୍ଧାନରେ ବ୍ୟାପକ ପ୍ରୟୋଗ ଖୋଜି ପାରିବେ 35 |
ଏନଜାଇମ୍ ଏବଂ ଆଣ୍ଟିବଡିଗୁଡିକର ପରବର୍ତ୍ତୀ ଅନୁବାଦ ରୂପାନ୍ତରଣ, ଯେପରିକି ଗ୍ଲାଇକୋସାଇଲେସନ୍, 36 ସେମାନଙ୍କର ଜ ological ବିକ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରେ |ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, ସେରମ୍ ପ୍ରୋଟିନର ଗ୍ଲାଇକୋସାଇଲେସନ୍ରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ ପ୍ରଦାହ ଜନିତ ଆର୍ଥ୍ରାଇଟିସରେ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରିଥାଏ ଏବଂ ଗ୍ଲାଇକୋସାଇଲେସନ୍ରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ ଡାଇଗ୍ନୋଷ୍ଟିକ୍ ମାର୍କର୍ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |ବିଭିନ୍ନ ଗ୍ଲାଇକାନ୍ ସାହିତ୍ୟରେ ବିଭିନ୍ନ ରୋଗରେ ସହଜରେ ଦେଖାଯିବା ପାଇଁ ରିପୋର୍ଟ କରାଯାଇଛି, ଯେପରିକି ପାକସ୍ଥଳୀ ଏବଂ ଯକୃତର କ୍ରନିକ୍ ପ୍ରଦାହଜନକ ରୋଗ, ଭାଇରାଲ୍ ସଂକ୍ରମଣ, ଓଭାରିନ୍, ସ୍ତନ ଏବଂ ପ୍ରୋଷ୍ଟେଟ୍ କର୍କଟ 38,39,40 |ଆଣ୍ଟିବଡି-ଆଧାରିତ ଗ୍ଲାଇକାନ୍ ELISA ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରି ଗ୍ଲାଇକାନ୍ସର ଗଠନ ବୁ standing ିବା ଜଟିଳ MS ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର ନକରି ରୋଗ ନିରାକରଣରେ ଅତିରିକ୍ତ ଆତ୍ମବିଶ୍ୱାସ ପ୍ରଦାନ କରିବ |
ଆମର ପୂର୍ବ ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ ଜିଦ୍ଖୋର ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡସ୍ ପ୍ରାକୃତିକ ଚିକିତ୍ସା ଏବଂ ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ହାଇଡ୍ରୋଲାଇସିସ୍ ପରେ ଚିତ୍ରହୀନ ହୋଇ ରହିଥିଲା ​​(ଚିତ୍ର 1) |ଆମର ପୂର୍ବରୁ ପ୍ରକାଶିତ କାର୍ଯ୍ୟରେ, ଆମେ ଏକ ସକ୍ରିୟ ଅଙ୍ଗାର କଠିନ-ଚରଣ ନିଷ୍କାସନ ପ୍ରଣାଳୀ ବିକଶିତ କରି AFEX- ପ୍ରିଟେଡ୍ ମକା ଷ୍ଟୋଭର ହାଇଡ୍ରୋଲାଇଜେଟ୍ (ACSH) 8 ରୁ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡକୁ ପୃଥକ କରିବା |ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ଉତ୍ତୋଳନ ଏବଂ ପୃଥକତା ପରେ, ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ସାଇଜ୍ ବହିଷ୍କାର କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫି (SEC) ଦ୍ further ାରା ଅଧିକ ଭଗ୍ନାଂଶିତ ହୋଇ ମଲିକୁଲାର୍ ଓଜନ କ୍ରମରେ ସଂଗୃହିତ ହେଲା |ଚିନି ରଚନା ବିଶ୍ଳେଷଣ ଦ୍ various ାରା ବିଭିନ୍ନ ପ୍ରବୃତ୍ତିରୁ ମୁକ୍ତ ହୋଇଥିବା ଚିନି ମନୋମର ଏବଂ ଅଲିଗୋମର୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା |ବିଭିନ୍ନ ପ୍ରାକୃତିକ ପ୍ରଣାଳୀ ଦ୍ obtained ାରା ପ୍ରାପ୍ତ ଚିନି ଅଲିଗୋମରର ବିଷୟବସ୍ତୁ ତୁଳନା କରିବାବେଳେ, ଜିଜ୍ଞାସା ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ର ଉପସ୍ଥିତି ବାୟୋମାସକୁ ମୋନୋସାକାରାଇଡରେ ପରିଣତ କରିବାରେ ଏକ ସାଧାରଣ ସମସ୍ୟା ଅଟେ ଏବଂ ଚିନି ଉତ୍ପାଦନ ଅତିକମରେ 10-15% ହ୍ରାସ ହୋଇପାରେ ଏବଂ ଏପରିକି 18% ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ହୋଇପାରେ |USଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ଭଗ୍ନାଂଶଗୁଡିକର ବୃହତ ଆକାରର ଉତ୍ପାଦନ ପାଇଁ ଏହି ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |ଫଳାଫଳ ACH ଏବଂ ଏହାର ପରବର୍ତ୍ତୀ ଭଗ୍ନାଂଶଗୁଡିକ ବିଭିନ୍ନ ମଲିକୁଲାର ଓଜନ ସହିତ ଏହି କାର୍ଯ୍ୟରେ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡଗୁଡିକର ଚରିତ୍ରକରଣ ପାଇଁ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ପଦାର୍ଥ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା |
ପ୍ରାକୃତିକ ଚିକିତ୍ସା ଏବଂ ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ହାଇଡ୍ରୋଲାଇସିସ୍ ପରେ, ସ୍ଥାୟୀ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ଅଣହାଇଡ୍ରୋଲାଇଜ୍ ରହିଲା |ଏଠାରେ (କ) ଏକ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ପୃଥକ ପ୍ରଣାଳୀ ଯେଉଁଥିରେ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ AFEX- ପ୍ରିଟେଡ୍ ମକା ଷ୍ଟୋଭର ହାଇଡ୍ରୋଲାଇଜେଟ୍ (ACSH) ରୁ ସକ୍ରିୟ ଅଙ୍ଗାରକାମ୍ଳ ଏବଂ ଡାଏଟୋମାସିୟସ୍ ପୃଥିବୀର ଏକ ପ୍ୟାକ୍ ବେଡ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ପୃଥକ ହୋଇଛି |(ଖ) ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ପୃଥକ କରିବା ପାଇଁ ପଦ୍ଧତି |ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡଗୁଡିକ ଆକାର ବର୍ଜନ କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫି (SEC) ଦ୍ୱାରା ଆହୁରି ପୃଥକ କରାଯାଇଥିଲା;)ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ହାଇଡ୍ରୋଲାଇସିସ୍ ଅବସ୍ଥା: 25% (w / w) (ପ୍ରାୟ 8% ଗ୍ଲୁକାନ୍ ଲୋଡିଂ), 96 ଘଣ୍ଟା ହାଇଡ୍ରୋଲାଇସିସ୍, 20 ମିଗ୍ରା / g ବାଣିଜ୍ୟିକ ଏନଜାଇମ୍ ଲୋଡିଙ୍ଗ୍ (Ctec2: Htec2: MP-2: 1: 1 ଅନୁପାତ) ଏବଂ (D) ଚିନି ମୋନୋମର ଏବଂ ଗ୍ଲୁକୋଜ୍, ଜାଇଲୋଜ୍ ଏବଂ ଆରବିନୋଜ୍ AFEX ପ୍ରି-ଚିକିତ୍ସିତ ମକା ଷ୍ଟୋଭରରୁ ମୁକ୍ତ |
ଗ୍ଲାଇକାନ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ କଠିନ ବାୟୋମାସ୍ ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶରୁ ବିଚ୍ଛିନ୍ନ ହୋଇଥିବା ଗ୍ଲାଇକାନ୍ସର ବିସ୍ତୃତ ଗଠନମୂଳକ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ ଏକ ଉପଯୋଗୀ ଉପକରଣ ବୋଲି ପ୍ରମାଣିତ ହୋଇଛି |ଅବଶ୍ୟ, ଏହି ପାରମ୍ପାରିକ ପଦ୍ଧତିକୁ ବ୍ୟବହାର କରି ଜଳରେ ଦ୍ରବୀଭୂତ ସାକାରାଇଡଗୁଡିକ ଅଳ୍ପ ଉପସ୍ଥାପିତ ହୋଇଛି କାରଣ କମ୍ ମଲିକୁଲାର୍ ଓଜନ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ELISA ପ୍ଲେଟରେ ଅସ୍ଥିର ହେବା କଷ୍ଟକର ଏବଂ ଆଣ୍ଟିବଡି ଯୋଗ ପୂର୍ବରୁ ଧୋଇଯାଏ |ତେଣୁ, ଆଣ୍ଟିବଡି ବାନ୍ଧିବା ଏବଂ ଚରିତ୍ରକରଣ ପାଇଁ, ଆଭିଡିନ୍-ଆବୃତ ELISA ପ୍ଲେଟଗୁଡିକରେ ଦ୍ରବୀଭୂତ, ଅନୁପଯୁକ୍ତ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ଗୁଡ଼ିକୁ କୋଟ୍ କରିବା ପାଇଁ ଏକ ସୋପାନ ବାୟୋଟିନାଇଲେସନ୍ ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହୃତ ହେଲା |ଏହି ପଦ୍ଧତି ଆମର ପୂର୍ବରୁ ଉତ୍ପାଦିତ ACSH ଏବଂ ଏହାର ମଲିକୁଲାର ଓଜନ (କିମ୍ବା ପଲିମେରାଇଜେସନ୍ ଡିଗ୍ରୀ, DP) ଉପରେ ଆଧାର କରି ଏକ ଭଗ୍ନାଂଶ ବ୍ୟବହାର କରି ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଥିଲା |କାର୍ବୋହାଇଡ୍ରେଟ୍ (ଚିତ୍ର 2) ରେ ବାୟୋଟିନ୍-ଏଲ୍ସି-ହାଇଡ୍ରାଜାଇଡ୍ ଯୋଗ କରି ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ବାନ୍ଧିବା ସମ୍ବନ୍ଧୀୟତା ବୃଦ୍ଧି ପାଇଁ ଏକ ସୋପାନ ବାୟୋଟିନାଇଲେସନ୍ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା |ସମାଧାନରେ, ହ୍ରାସ ଶେଷରେ ଥିବା ହେମିଆସେଟାଲ୍ ଗ୍ରୁପ୍ ବାୟୋଟିନ୍-ଏଲ୍ସି-ହାଇଡ୍ରାଜାଇଡ୍ ର ହାଇଡ୍ରାଜାଇଡ୍ ଗ୍ରୁପ୍ ସହିତ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କରି ଏକ ହାଇଡ୍ରାଜୋନ୍ ବଣ୍ଡ ଗଠନ କରେ |ହ୍ରାସକାରୀ ଏଜେଣ୍ଟ NaCNBH3 ର ଉପସ୍ଥିତିରେ, ହାଇଡ୍ରାଜୋନ୍ ବଣ୍ଡ ଏକ ସ୍ଥିର ବାୟୋଟିନାଇଟେଡ୍ ଶେଷ ଉତ୍ପାଦକୁ କମିଯାଏ |ଚିନି ହ୍ରାସ ଶେଷର ପରିବର୍ତ୍ତନ ସହିତ, କମ୍ DP ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ସକୁ ELISA ପ୍ଲେଟରେ ବାନ୍ଧିବା ସମ୍ଭବ ହେଲା, ଏବଂ ଆମର ଅଧ୍ୟୟନରେ ଏହା ଗ୍ଲାଇକାନ୍-ଟାର୍ଗେଟେଡ୍ mAbs ବ୍ୟବହାର କରି ଆଭିଡିନ-ଆବୃତ ପ୍ଲେଟରେ କରାଯାଇଥିଲା |
ବାୟୋଟିନାଇଟେଡ୍ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ପାଇଁ ELISA ଉପରେ ଆଧାରିତ ମୋନୋକ୍ଲୋନାଲ ଆଣ୍ଟିବଡିଗୁଡିକର ସ୍କ୍ରିନିଂ |ଏଠାରେ (କ) ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ର ମିଳିତ ବାୟୋଟିନାଇଲେସନ୍ ଏବଂ ପରବର୍ତ୍ତୀ ELISA ସ୍କ୍ରିନିଂ, ନିଉଟ୍ରାଭିଡିନ ଆବୃତ ପ୍ଲେଟଗୁଡିକରେ ଗ୍ଲାଇକାନ୍-ଟାର୍ଗେଟେଡ୍ mAbs ସହିତ ଏବଂ (B) ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଉତ୍ପାଦଗୁଡିକର ବାୟୋଟିନାଇଲେସନ୍ ପାଇଁ ଏକ ପର୍ଯ୍ୟାୟ ପ୍ରଣାଳୀ ଦେଖାଏ |
ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍-କଞ୍ଜୁଗେଟେଡ୍ ଆଣ୍ଟିବଡି ସହିତ ଆଭିଡିନ-ଆବୃତ ପ୍ଲେଟଗୁଡିକ ପ୍ରାଥମିକ ଏବଂ ଦ୍ secondary ିତୀୟ ଆଣ୍ଟିବଡିରେ ଯୋଡି ହୋଇ ହାଲୁକା ଏବଂ ସମୟ ସମ୍ବେଦନଶୀଳ ମାଧ୍ୟମରେ ଧୋଇଗଲା |ଆଣ୍ଟିବଡି ବନ୍ଧନ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ହେବା ପରେ, ପ୍ଲେଟକୁ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରିବାକୁ TMB ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ଯୋଗ କରନ୍ତୁ |ଶେଷରେ ସଲଫୁରିକ୍ ଏସିଡ୍ ସହିତ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ବନ୍ଦ ହୋଇଗଲା |ଆଣ୍ଟିବଡି ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ କ୍ରସ୍-ଲିଙ୍କ୍ ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଆଣ୍ଟିବଡିର ବନ୍ଧନ ଶକ୍ତି ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବାକୁ ଏକ ELISA ରିଡର୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଇନକ୍ୟୁବେଡ୍ ପ୍ଲେଟଗୁଡିକ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା |ପରୀକ୍ଷଣର ବିବରଣୀ ଏବଂ ପାରାମିଟରଗୁଡିକ ପାଇଁ, ସମ୍ପୃକ୍ତ ବିଭାଗ “ସାମଗ୍ରୀ ଏବଂ ପଦ୍ଧତି” ଦେଖନ୍ତୁ |
ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପ୍ରୟୋଗଗୁଡ଼ିକ ପାଇଁ ଆମେ ଏହି ନୂତନ ବିକଶିତ ପଦ୍ଧତିର ଉପଯୋଗିତାକୁ ACSH ରେ ଉପସ୍ଥିତ ଥିବା ଦ୍ରବୀଭୂତ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡକୁ ବର୍ଣ୍ଣିତ କରିବା ସହିତ ଲିଗ୍ନୋସେଲୁଲୋଜିକ୍ ହାଇଡ୍ରୋଲାଇସେଟ୍ ଠାରୁ ପୃଥକ ଅଶୋଧିତ ଏବଂ ଶୁଦ୍ଧ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ଭଗ୍ନାଂଶରେ ବର୍ଣ୍ଣିତ କରୁ |ଚିତ୍ର 3 ରେ ଦେଖାଯାଇଥିବା ପରି, ବାୟୋସାଇଲେଟେଡ୍ ଗ୍ଲାଇକମ୍ ଆସେ ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରି ACSH ରେ ଚିହ୍ନିତ ହୋଇଥିବା ସାଧାରଣ ଏପିଟୋପ୍-ପ୍ରତିସ୍ଥାପିତ ଜିଲାନ୍ସ ସାଧାରଣତ ur ୟୁରୋନିକ୍ (U) କିମ୍ବା ମିଥାଇଲୁରୋନିକ୍ (MeU) ଏବଂ ପେକ୍ଟିକ୍ ଆରବିନୋଗାଲାକ୍ଟାନ୍ |ସେମାନଙ୍କ ମଧ୍ୟରୁ ଅଧିକାଂଶ ଆମର ପୂର୍ବ ଅଧ୍ୟୟନରେ ଅଣ-ହାଇଡ୍ରୋଲାଇଜେଡ୍ କଠିନ (UHS) 43 ର ଗ୍ଲାଇକାନ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ ଉପରେ ମିଳିଥିଲା ​​|
କୋଷ ପ୍ରାଚୀର ଗ୍ଲାଇକାନକୁ ନିର୍ଦ୍ଦେଶିତ ଏକ ମୋନୋକ୍ଲୋନାଲ ଆଣ୍ଟିବଡି ବ୍ୟବହାର କରି ରିସାଲସିଟାଣ୍ଟ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ଏପିଟୋପ୍ ଚିହ୍ନଟ |“ନିରପେକ୍ଷ” ଭଗ୍ନାଂଶ ହେଉଛି ACN ଭଗ୍ନାଂଶ ଏବଂ “ଅମ୍ଳୀୟ” ଭଗ୍ନାଂଶ ହେଉଛି FA ଭଗ୍ନାଂଶ |ହିଟ୍ମ୍ୟାପରେ ଉଜ୍ଜ୍ୱଳ ଲାଲ୍ ଅଧିକ ଏପିଟୋପ୍ ବିଷୟବସ୍ତୁ ସୂଚାଇଥାଏ ଏବଂ ଉଜ୍ଜ୍ୱଳ ବ୍ଲୁସ୍ ଏକ ଖାଲି ପୃଷ୍ଠଭୂମି ସୂଚାଇଥାଏ |ସ୍କେଲରେ ରଙ୍ଗ ମୂଲ୍ୟ N = 2 ସୂତ୍ର ପାଇଁ କଞ୍ଚା OD ମୂଲ୍ୟ ଉପରେ ଆଧାରିତ |ଆଣ୍ଟିବଡି ଦ୍ recognized ାରା ଚିହ୍ନିତ ମୁଖ୍ୟ ଏପିଟୋପ୍ ଗୁଡିକ ଡାହାଣ ପାର୍ଶ୍ୱରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି |
ଏହି ଅଣ-ସେଲୁଲୋଜ୍ ସଂରଚନାଗୁଡିକ ପରୀକ୍ଷିତ ବାଣିଜ୍ୟିକ ଏନଜାଇମ୍ ମିଶ୍ରଣରେ ଅତି ସାଧାରଣ ସେଲୁଲେଜ୍ ଏବଂ ହେମିକେଲୁଲେଜ୍ ଦ୍ୱାରା ସଫା ହୋଇପାରିବ ନାହିଁ, ଯେଉଁଥିରେ ସାଧାରଣତ used ବ୍ୟବହୃତ ବାଣିଜ୍ୟିକ ଏନଜାଇମ୍ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ |ତେଣୁ, ସେମାନଙ୍କର ହାଇଡ୍ରୋଲାଇସିସ୍ ପାଇଁ ନୂତନ ସହାୟକ ଏନଜାଇମ୍ ଆବଶ୍ୟକ |ଆବଶ୍ୟକ ଅଣ-ସେଲୁଲୋଜ୍ ଆନୁଷଙ୍ଗିକ ଏନଜାଇମ୍ ବିନା, ଏହି ଅଣ-ସେଲୁଲୋଜ୍ ବଣ୍ଡଗୁଡିକ ମୋନୋସାକାରାଇଡରେ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ରୂପାନ୍ତରକୁ ରୋକିଥାଏ, ଯଦିଓ ସେମାନଙ୍କ ପିତାମାତା ଚିନି ପଲିମରଗୁଡିକ କ୍ଷୁଦ୍ର ଖଣ୍ଡରେ ହାଇଡ୍ରୋଲାଇଜ୍ ହୋଇ ବ୍ୟବସାୟିକ ଏନଜାଇମ୍ ମିଶ୍ରଣ ବ୍ୟବହାର କରି ବିସର୍ଜନ କରାଯାଇଥାଏ |
ସଙ୍କେତ ବଣ୍ଟନ ଏବଂ ଏହାର ବନ୍ଧନ ଶକ୍ତି ଉପରେ ଅଧିକ ଅଧ୍ୟୟନ ଦର୍ଶାଇଲା ଯେ ଉଚ୍ଚ DP ଚିନି ଭଗ୍ନାଂଶ (A, B, C, DP 20+ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ) କମ୍ DP ଭଗ୍ନାଂଶ (D, E, F, DP) ତୁଳନାରେ ବାନ୍ଧିବା ଏପିଟୋପ୍ କମ୍ ଥିଲା (ଚିତ୍ର 1) |ନିରପେକ୍ଷ ଖଣ୍ଡ ଅପେକ୍ଷା ଅଣ-ସେଲୁଲୋଜ୍ ଏପିଟୋପରେ ଏସିଡ୍ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ଅଧିକ ଦେଖାଯାଏ |ଏହି ଘଟଣାଗୁଡ଼ିକ ଆମର ପୂର୍ବ ଅଧ୍ୟୟନରେ ଦେଖାଯାଇଥିବା pattern ାଞ୍ଚା ସହିତ ସମାନ, ଯେଉଁଠାରେ ଉଚ୍ଚ ଡିପି ଏବଂ ଏସିଡ୍ ମୋଏଟିସ୍ ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ହାଇଡ୍ରୋଲାଇସିସ୍ ପ୍ରତି ଅଧିକ ପ୍ରତିରୋଧୀ ଥିଲା |ତେଣୁ, ଅଣ-ସେଲୁଲୋଜ୍ ଗ୍ଲାଇକାନ୍ ଏପିଟୋପ୍ ଏବଂ U ଏବଂ MeU ପ୍ରତିସ୍ଥାପନର ଉପସ୍ଥିତି ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ସର ସ୍ଥିରତା ପାଇଁ ବହୁତ ସହାୟକ ହୋଇପାରେ |ଏହା ମନେ ରଖିବା ଉଚିତ ଯେ କମ୍ ଡିପି ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ପାଇଁ ବାନ୍ଧିବା ଏବଂ ଚିହ୍ନଟ ଦକ୍ଷତା ସମସ୍ୟା ସୃଷ୍ଟି କରିପାରେ, ବିଶେଷତ if ଯଦି ଏପିଟୋପ୍ ଏକ ଡାଇମେରିକ୍ କିମ୍ବା ଟ୍ରାଇମେରିକ୍ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ଅଟେ |ବିଭିନ୍ନ ଦ s ର୍ଘ୍ୟର ବାଣିଜ୍ୟିକ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଏହା ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇପାରେ, ପ୍ରତ୍ୟେକରେ କେବଳ ଗୋଟିଏ ଏପିଟୋପ୍ ଥାଏ ଯାହାକି ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ mAb ସହିତ ବାନ୍ଧେ |
ଏହିପରି, ସଂରଚନା-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଆଣ୍ଟିବଡିଗୁଡିକର ବ୍ୟବହାର କେତେକ ପ୍ରକାରର ପୁନ al ବ୍ୟବହାରକାରୀ ବଣ୍ଡକୁ ପ୍ରକାଶ କଲା |ବ୍ୟବହୃତ ଆଣ୍ଟିବଡି ପ୍ରକାର, ଉପଯୁକ୍ତ ଲିଗେସନ୍ pattern ାଞ୍ଚା ଏବଂ ଏହା ଉତ୍ପାଦନ କରୁଥିବା ସଙ୍କେତର ଶକ୍ତି ଉପରେ ନିର୍ଭର କରି (ନୂତନ ଏବଂ ସର୍ବନିମ୍ନ ପ୍ରଚୁର ପରିମାଣରେ), ନୂତନ ଏନଜାଇମଗୁଡିକ ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇପାରିବ ଏବଂ ଅଧିକ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ଗ୍ଲାଇକୋକୋନଭର୍ସନ ପାଇଁ ଏନଜାଇମ୍ ମିଶ୍ରଣରେ ଅର୍ଦ୍ଧ-ପରିମାଣିକ ଭାବରେ ଯୋଗ କରାଯାଇପାରିବ |ACSH oligosaccharides ର ବିଶ୍ଳେଷଣକୁ ଏକ ଉଦାହରଣ ଭାବରେ ଗ୍ରହଣ କରି, ଆମେ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଜ om ବ ପଦାର୍ଥ ପାଇଁ ଗ୍ଲାଇକାନ୍ ବଣ୍ଡର ଏକ ଡାଟାବେସ୍ ସୃଷ୍ଟି କରିପାରିବା |ଏଠାରେ ଧ୍ୟାନ ଦେବା ଉଚିତ ଯେ ଆଣ୍ଟିବଡିଗୁଡିକର ଭିନ୍ନ ସମ୍ବନ୍ଧକୁ ଧ୍ୟାନରେ ରଖିବା ଉଚିତ, ଏବଂ ଯଦି ସେମାନଙ୍କର ସମ୍ବନ୍ଧ ଜଣା ନଥାଏ, ତେବେ ବିଭିନ୍ନ ଆଣ୍ଟିବଡିଗୁଡିକର ସଙ୍କେତ ତୁଳନା କରିବାବେଳେ ଏହା କିଛି ଅସୁବିଧା ସୃଷ୍ଟି କରିବ |ଏହା ସହିତ, ଗ୍ଲାଇକାନ୍ ବଣ୍ଡର ତୁଳନା ସମାନ ଆଣ୍ଟିବଡି ପାଇଁ ନମୁନା ମଧ୍ୟରେ ସର୍ବୋତ୍ତମ କାର୍ଯ୍ୟ କରିପାରେ |ଏହି ଜିଦ୍ଖୋର ବନ୍ଧଗୁଡିକ ପରେ CAZyme ଡାଟାବେସ୍ ସହିତ ସଂଯୁକ୍ତ ହୋଇପାରିବ, ଯେଉଁଥିରୁ ଆମେ ଏନଜାଇମ୍ ଚିହ୍ନଟ କରିପାରିବା, ପ୍ରାର୍ଥୀ ଏନଜାଇମ୍ ଚୟନ କରିପାରିବା ଏବଂ ବଣ୍ଡ-ବ୍ରେକିଙ୍ଗ୍ ଏନଜାଇମ୍ ପାଇଁ ପରୀକ୍ଷା କରିପାରିବା, କିମ୍ବା ବାୟୋରେଫିନେରୀରେ ବ୍ୟବହାର ପାଇଁ ଏହି ଏନଜାଇମ୍ ପ୍ରକାଶ କରିବାକୁ ମାଇକ୍ରୋବାୟଲ୍ ସିଷ୍ଟମ ବିକାଶ କରିପାରିବା |
ଲିଗ୍ନୋସେଲୁଲୋଜିକ୍ ହାଇଡ୍ରୋଲାଇସେଟ୍ରେ ଉପସ୍ଥିତ ଥିବା କମ୍ ମଲିକୁଲାର୍ ଓଜନ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍କୁ ବର୍ଣ୍ଣିତ କରିବା ପାଇଁ ପ୍ରତିରୋପଣ ପ୍ରଣାଳୀ କିପରି ବିକଳ୍ପ ପଦ୍ଧତିକୁ ପରିପୂର୍ଣ୍ଣ କରେ ତାହାର ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରିବାକୁ, ଆମେ ସମାନ ପ୍ୟାନେଲରେ (ଚିତ୍ର 5) ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ଅଂଶରେ GC-MS ଉପରେ ଆଧାରିତ TMS- ଉତ୍ପାଦିତ ସାକାରାଇଡ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରି MALDI (ଚିତ୍ର 4, S1-S8) ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିଥିଲୁ |ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ଅଣୁଗୁଡ଼ିକର ବହୁଳ ବଣ୍ଟନ ଉଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଗଠନ ସହିତ ମେଳ ଖାଉଛି କି ନାହିଁ ତୁଳନା କରିବାକୁ MALDI ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |ଡିମ୍ବିରି ଉପରେ4 ନିରପେକ୍ଷ ଉପାଦାନଗୁଡ଼ିକର MS ଦେଖାଏ ACN-A ଏବଂ ACN-B |ACN-A ବିଶ୍ଳେଷଣରେ DP 4–8 (ଚିତ୍ର 4) ରୁ DP 22 (ଚିତ୍ର S1) ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ପେଣ୍ଟୋଜ୍ ଶର୍କରାର ଏକ ସୀମା ନିଶ୍ଚିତ ହୋଇଛି, ଯାହାର ଓଜନ MeU-xylan oligosaccharides ସହିତ ଅନୁରୂପ ଅଟେ |ACN-B ବିଶ୍ଳେଷଣ DP 8-15 ସହିତ ପେଣ୍ଟୋଜ୍ ଏବଂ ଗ୍ଲୁକୋକ୍ସିଲାନ୍ ସିରିଜ୍ ନିଶ୍ଚିତ କଲା |ଚିତ୍ର S3 ପରି ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ ପଦାର୍ଥରେ, FA-C ଅମ୍ଳୀୟ ମୋୟାଟି ଜନ ବଣ୍ଟନ ମାନଚିତ୍ରରେ ଏକ ପରିସର (Me) U ପ୍ରତିସ୍ଥାପିତ ପେଣ୍ଟୋଜ୍ ଶର୍କରାକୁ DP ସହିତ 8-15 ଦର୍ଶାଏ ଯାହା ELISA- ଆଧାରିତ mAb ସ୍କ୍ରିନିଂରେ ମିଳୁଥିବା ବଦଳାଯାଇଥିବା ଜିଲାନ୍ସ ସହିତ ସମାନ ଅଟେ |ଏପିଟୋପ୍ ଗୁଡିକ ସ୍ଥିର ଅଟେ |
ACS ରେ ଉପସ୍ଥିତ ଦ୍ରବୀଭୂତ ଅଣ-ଅନୁକୂଳ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ସର MALDI-MS ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରମ |ଏଠାରେ, (A) ACN-A କମ୍ ଓଜନ ପରିସର ଭଗ୍ନାଂଶ ମିଥାଇଲେଟେଡ୍ ୟୁରୋନିକ୍ ଏସିଡ୍ (DP 4-8) ଗ୍ଲୁକୁରୋକ୍ସିଲାନ୍ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ଏବଂ (B) ACN-B xylan ଏବଂ ମିଥାଇଲେଟେଡ୍ ୟୁରୋନିକ୍ ଏସିଡ୍ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ଗ୍ଲୁକୁରୋକ୍ସିଲାନ୍ (DP 8-15) ସହିତ ବଦଳାଇଲା |
ଚିତ୍ତାକର୍ଷକ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ସର ଗ୍ଲାଇକାନ୍ ଅବଶିଷ୍ଟ ଗଠନର ବିଶ୍ଳେଷଣ |ଏଠାରେ (A) GC-MS ବିଶ୍ଳେଷଣ ବ୍ୟବହାର କରି ପ୍ରାପ୍ତ ବିଭିନ୍ନ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ଭଗ୍ନାଂଶଗୁଡିକର TMS ସାକାରାଇଡ୍ ରଚନା |(ଖ) ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ସରେ ଉପସ୍ଥିତ ଥିବା ବିଭିନ୍ନ TMS- ଉତ୍ପାଦିତ ଶର୍କରା ଗଠନ |ACN - ନିଟ୍ରାଲ୍ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ଏବଂ ଏଫ୍ - ଫେରୁଲିକ୍ ଏସିଡ୍ ଭଗ୍ନାଂଶ ଧାରଣ କରିଥିବା ଏସିଟୋନିଟ୍ରିଲ୍ ଭଗ୍ନାଂଶ |
ଚିତ୍ର S9 ରେ ଦେଖାଯାଇଥିବା ପରି ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ଭଗ୍ନାଂଶର LC-MS ବିଶ୍ଳେଷଣରୁ ଅନ୍ୟ ଏକ ଆକର୍ଷଣୀୟ ସିଦ୍ଧାନ୍ତ ଅଙ୍କାଯାଇଥିଲା (ପଦ୍ଧତିଗୁଡିକ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋନିକ୍ ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ ପଦାର୍ଥରେ ଦେଖାଯାଇପାରେ) |ACN-B ଭଗ୍ନାଂଶର ଲିଗେସନ୍ ସମୟରେ ହେକ୍ସୋଜ୍ ଏବଂ -ଓଏକ୍ ଗୋଷ୍ଠୀର ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ବାରମ୍ବାର ଦେଖାଗଲା |ଏହି ଅନୁସନ୍ଧାନ କେବଳ ଗ୍ଲାଇକମ୍ ଏବଂ MALDI-TOF ବିଶ୍ଳେଷଣରେ ଦେଖାଯାଇଥିବା ଖଣ୍ଡବିଖଣ୍ଡନକୁ ନିଶ୍ଚିତ କରେ ନାହିଁ, ବରଂ ଲିଗ୍ନୋସେଲୁଲୋଜିକ୍ ବାୟୋମାସରେ ସମ୍ଭାବ୍ୟ କାର୍ବୋହାଇଡ୍ରେଟ୍ ଡେରିଭେଟିକ୍ସ ବିଷୟରେ ମଧ୍ୟ ନୂତନ ସୂଚନା ପ୍ରଦାନ କରେ |
ଆମେ ମଧ୍ୟ TMS ଗ୍ଲାଇକାନ୍ ଡେରିଭେଟାଇଜେସନ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ଭଗ୍ନାଂଶର ଗ୍ଲାଇକାନ୍ ରଚନା ବିଶ୍ଳେଷଣ କରିଥିଲୁ |GC-MS ବ୍ୟବହାର କରି, ଆମେ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ଭଗ୍ନାଂଶ (ଚିତ୍ର 5) ରେ ସ୍ନାୟୁ (ଅଣ-ଡେରିଭେଟିଭ୍) ଏବଂ ଅମ୍ଳୀୟ ଶର୍କରା (ଗ୍ଲୁଏ ଏବଂ ଗାଲା) ର ଗଠନ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିଥିଲୁ |ଗ୍ଲୁକୁରୋନିକ୍ ଏସିଡ୍ ଏସିଡ୍ ଉପାଦାନ C ଏବଂ D ରେ ମିଳିଥିବାବେଳେ ଗାଲାକ୍ଟୁରୋନିକ୍ ଏସିଡ୍ ଏସିଡ୍ ଉପାଦାନ A ଏବଂ B ରେ ମିଳିଥାଏ, ଉଭୟ ଅମ୍ଳଯୁକ୍ତ ଶର୍କରାର ଉଚ୍ଚ DP ଉପାଦାନ |ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡିକ କେବଳ ଆମର ELISA ଏବଂ MALDI ତଥ୍ୟକୁ ନିଶ୍ଚିତ କରେ ନାହିଁ, ବରଂ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ସଂଗ୍ରହର ଆମର ପୂର୍ବ ଅଧ୍ୟୟନ ସହିତ ମଧ୍ୟ ସମାନ ଅଟେ |ତେଣୁ, ଆମେ ବିଶ୍ believe ାସ କରୁ ଯେ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ର ବାୟୋଟିନାଇଲେସନ୍ ଏବଂ ପରବର୍ତ୍ତୀ ELISA ସ୍କ୍ରିନିଂ ବ୍ୟବହାର କରି ଆଧୁନିକ ଇମ୍ୟୁନୋଲୋଜିକାଲ୍ ପଦ୍ଧତିଗୁଡିକ ବିଭିନ୍ନ ଜ ological ବିକ ନମୁନାରେ ଦ୍ରବୀଭୂତ ପୁନ al ବ୍ୟବହାରକାରୀ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ ଯଥେଷ୍ଟ |
ଯେହେତୁ ELISA- ଆଧାରିତ mAb ସ୍କ୍ରିନିଂ ପଦ୍ଧତିଗୁଡିକ ବିଭିନ୍ନ ଭିନ୍ନ ପଦ୍ଧତି ଦ୍ୱାରା ବ valid ଧ ହୋଇଛି, ଆମେ ଏହି ନୂତନ ପରିମାଣିକ ପଦ୍ଧତିର ସମ୍ଭାବନାକୁ ଅଧିକ ଅନୁସନ୍ଧାନ କରିବାକୁ ଚାହୁଁଛୁ |ଦୁଇଟି ବାଣିଜ୍ୟିକ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍, xylohexasaccharide oligosaccharide (XHE) ଏବଂ 23-α-L-arabinofuranosyl-xylotriose (A2XX), ସେଲ୍ କାନ୍ଥ ଗ୍ଲାଇକାନ୍ କୁ ଲକ୍ଷ୍ୟ କରି ଏକ ନୂତନ mAb ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରି କ୍ରୟ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ପରୀକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା |ଚିତ୍ର 6 ବାୟୋଟିନାଇଟେଡ୍ ବାଇଣ୍ଡିଂ ସିଗ୍ନାଲ୍ ଏବଂ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ଏକାଗ୍ରତାର ଲଗ୍ ଏକାଗ୍ରତା ମଧ୍ୟରେ ଏକ ର ar ଖ୍ୟ ସମ୍ବନ୍ଧକୁ ଦର୍ଶାଏ, ଏକ ସମ୍ଭାବ୍ୟ ଲାଙ୍ଗମୁଏର ଆଡସର୍ପସନ୍ ମଡେଲକୁ ସୂଚିତ କରେ |MAbs ମଧ୍ୟରେ, CCRC-M137, CCRC-M138, CCRC-M147, CCRC-M148, ଏବଂ CCRC-M151 XHE ସହିତ ସଂଯୁକ୍ତ, ଏବଂ CCRC-M108, CCRC-M109, ଏବଂ LM11 A2XX ସହିତ 1 nm ରୁ 100 ନାନୋ ମଧ୍ୟରେ ସଂଯୁକ୍ତ |ପରୀକ୍ଷଣ ସମୟରେ ଆଣ୍ଟିବଡିଗୁଡିକର ସୀମିତ ଉପଲବ୍ଧତା ହେତୁ, ପ୍ରତ୍ୟେକ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ଏକାଗ୍ରତା ସହିତ ସୀମିତ ପରୀକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା |ଏଠାରେ ଧ୍ୟାନ ଦେବା ଉଚିତ୍ ଯେ କେତେକ ଆଣ୍ଟିବଡି ସମାନ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ଉପରେ ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ଭାବରେ ଭିନ୍ନ ଭାବରେ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କରନ୍ତି, ସମ୍ଭବତ because ସେମାନେ ସାମାନ୍ୟ ଭିନ୍ନ ଏପିଟୋପ୍ ସହିତ ବାନ୍ଧି ହୋଇଥାନ୍ତି ଏବଂ ବହୁତ ଭିନ୍ନ ବନ୍ଧନ ସମ୍ବନ୍ଧୀୟ ରହିପାରନ୍ତି |ପ୍ରକୃତ ଏପିଟୋପ୍ ପରିଚୟର ଯନ୍ତ୍ରକ and ଶଳ ଏବଂ ପ୍ରଭାବ ଅଧିକ ଜଟିଳ ହେବ ଯେତେବେଳେ ପ୍ରକୃତ ନମୁନାରେ ନୂତନ mAb ପଦ୍ଧତି ପ୍ରୟୋଗ ହେବ |
ବିଭିନ୍ନ ଗ୍ଲାଇକାନ୍-ଟାର୍ଗେଟ୍ କରୁଥିବା mAbs ର ଚିହ୍ନଟ ପରିସର ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବାକୁ ଦୁଇଟି ବ୍ୟବସାୟିକ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା |ଏଠାରେ, ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ଏକାଗ୍ରତାର ଲଗ୍ ଏକାଗ୍ରତା ସହିତ ର ar ଖ୍ୟ ସମ୍ବନ୍ଧ (A) XHE ପାଇଁ mAb ଏବଂ (B) A2XX ପାଇଁ ଲ୍ୟାଙ୍ଗମୁଏର ଆଡସର୍ପସନ୍ s ାଞ୍ଚାକୁ ସୂଚିତ କରେ |ଅନୁଧ୍ୟାନରେ ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ବାଣିଜ୍ୟିକ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ସର ସଂରଚନାକୁ ସଂପୃକ୍ତ ଏପିଟୋପ୍ ସୂଚିତ କରେ |
ଗ୍ଲାଇକାନ୍-ଟାର୍ଗେଟେଡ୍ ମୋନୋକ୍ଲୋନାଲ୍ ଆଣ୍ଟିବଡିଗୁଡିକର ବ୍ୟବହାର (ଗ୍ଲାଇକୋକୋମିକ୍ ଆନାଲିସିସ୍ କିମ୍ବା ELISA- ଆଧାରିତ mAb ସ୍କ୍ରିନିଂ) ଉଦ୍ଭିଦ ବାୟୋମାସ୍ ଗଠନ କରୁଥିବା ଅଧିକାଂଶ ପ୍ରମୁଖ କୋଷ ପ୍ରାଚୀର ଗ୍ଲାଇକାନ୍ସର ଗଭୀର ଚରିତ୍ର ପାଇଁ ଏକ ଶକ୍ତିଶାଳୀ ଉପକରଣ |ଅବଶ୍ୟ, ଶାସ୍ତ୍ରୀୟ ଗ୍ଲାଇକାନ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ କେବଳ ବୃହତ କୋଷ ପ୍ରାଚୀର ଗ୍ଲାଇକାନ୍ସକୁ ବର୍ଣ୍ଣିତ କରେ, କାରଣ ଅଧିକାଂଶ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ELISA ପ୍ଲେଟରେ ଦକ୍ଷତାର ସହିତ ଅସ୍ଥିର ହୋଇନଥାଏ |ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ, AFEX- ପ୍ରିଟେଡ୍ ମକା ଷ୍ଟୋଭର୍ ଏକ ଉଚ୍ଚ କଠିନ ପଦାର୍ଥରେ ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ହାଇଡ୍ରୋଲାଇଜ୍ କରାଯାଇଥିଲା |ହାଇଡ୍ରୋଲାଇଜେଟରେ ରିକାଲସିଟାଣ୍ଟ ସେଲ୍ କାନ୍ଥ କାର୍ବୋହାଇଡ୍ରେଟ୍ ର ଗଠନ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା ପାଇଁ ଚିନି ବିଶ୍ଳେଷଣ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା |ତଥାପି, ହାଇଡ୍ରୋଲାଇସେଟରେ ଛୋଟ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡଗୁଡିକର mAb ବିଶ୍ଳେଷଣକୁ କମ୍ ମୂଲ୍ୟ ଦିଆଯାଏ, ଏବଂ ELISA ପ୍ଲେଟଗୁଡିକରେ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍କୁ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଭାବରେ ଅସ୍ଥିର କରିବା ପାଇଁ ଅତିରିକ୍ତ ଉପକରଣଗୁଡ଼ିକ ଆବଶ୍ୟକ |
ଆମେ ଏଠାରେ ଏକ ଉପନ୍ୟାସ ଏବଂ ଦକ୍ଷ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ଇମୋମୋବାଇଲାଇଜେସନ୍ ପଦ୍ଧତିକୁ mAb ସ୍କ୍ରିନିଂ ପାଇଁ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ବାୟୋଟିନାଇଲେସନ୍ ମିଶ୍ରଣ କରି NeutrAvidin ™ ଆବୃତ ପ୍ଲେଟଗୁଡିକରେ ELISA ସ୍କ୍ରିନିଂ ରିପୋର୍ଟ କରି ରିପୋର୍ଟ କରୁ |ଇମ୍ମୋବାଇଲାଇଜଡ୍ ବାୟୋଟିନାଇଟେଡ୍ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ଆଣ୍ଟିବଡି ପାଇଁ ଯଥେଷ୍ଟ ସ୍ନେହ ଦେଖାଇଲା ଯାହା ପୁନ al ବ୍ୟବହାରକାରୀ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ସର ଶୀଘ୍ର ଏବଂ ଦକ୍ଷ ଚିହ୍ନଟକୁ ସକ୍ଷମ କରିଥାଏ |ମାସ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋମେଟ୍ରି ଉପରେ ଆଧାରିତ ଏହି ଜିଦ୍ଖୋର ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡଗୁଡିକର ରଚନା ବିଶ୍ଳେଷଣ ଇମ୍ୟୁନୋସ୍କ୍ରିନ୍ ପାଇଁ ଏହି ନୂତନ ପଦ୍ଧତିର ଫଳାଫଳକୁ ନିଶ୍ଚିତ କଲା |ଏହିପରି, ଏହି ଅଧ୍ୟୟନଗୁଡିକ ଦର୍ଶାଏ ଯେ ଅଲିଗ୍ନୋସାକାରାଇଡ୍ ବାୟୋଟିନାଇଲେସନ୍ ଏବଂ ଗ୍ଲାଇକାନ୍-ଟାର୍ଗେଟେଡ୍ ମୋନୋକ୍ଲୋନାଲ୍ ଆଣ୍ଟିବଡି ସହିତ ELISA ସ୍କ୍ରିନିଂର ମିଶ୍ରଣ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡରେ କ୍ରସ୍ ଲିଙ୍କ୍ ଚିହ୍ନଟ କରିବାରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇପାରିବ ଏବଂ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ଗଠନକୁ ବର୍ଣ୍ଣିତ ଅନ୍ୟ ବାୟୋକେମିକାଲ୍ ଅଧ୍ୟୟନରେ ବହୁଳ ଭାବରେ ପ୍ରୟୋଗ କରାଯାଇପାରିବ |
ଏହି ବାୟୋଟିନ୍-ଆଧାରିତ ଗ୍ଲାଇକାନ୍ ପ୍ରୋଫାଇଲ୍ ପଦ୍ଧତି ହେଉଛି ପ୍ରଥମ ରିପୋର୍ଟ ଯାହା ଉଦ୍ଭିଦ ବାୟୋମାସରେ ଦ୍ରବୀଭୂତ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ସର ପୁନ al ବ୍ୟବହାରକାରୀ କାର୍ବୋହାଇଡ୍ରେଟ୍ ବଣ୍ଡ ଅନୁସନ୍ଧାନ କରିବାରେ ସକ୍ଷମ |ଜ bi ବ ଇନ୍ଧନ ଉତ୍ପାଦନ ବିଷୟରେ ଜ bi ବ ଜୀବର କିଛି ଅଂଶ କାହିଁକି ଜିଦ୍ଖୋର ତାହା ବୁ to ିବାରେ ସାହାଯ୍ୟ କରେ |ଏହି ପଦ୍ଧତି ଗ୍ଲାଇକମ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପ୍ରଣାଳୀରେ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ବ୍ୟବଧାନ ପୂରଣ କରେ ଏବଂ ଏହାର ପ୍ରୟୋଗକୁ ଉଦ୍ଭିଦ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ବାହାରେ ଏକ ବିସ୍ତୃତ ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ବିସ୍ତାର କରେ |ଭବିଷ୍ୟତରେ, ଆମେ ବାୟୋଟିନାଇଲେସନ୍ ପାଇଁ ରୋବୋଟିକ୍ସ ବ୍ୟବହାର କରିପାରିବା ଏବଂ ELISA ବ୍ୟବହାର କରି ନମୁନାଗୁଡିକର ଉଚ୍ଚ-ଥ୍ରୋପୁଟ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ ଆମେ ବିକଶିତ ପଦ୍ଧତିକୁ ବ୍ୟବହାର କରିପାରିବା |
Pioneer 33A14 ହାଇବ୍ରିଡ୍ ମଞ୍ଜିରୁ ଉତ୍ପାଦିତ ମକା ନଡ଼ା (CS) 2010 ରେ କଲୋରଡୋର ରେଏର କ୍ରାମର ଫାର୍ମରୁ ଅମଳ କରାଯାଇଥିଲା |ଜମି ମାଲିକଙ୍କ ଅନୁମତି କ୍ରମେ ଏହି ବାୟୋମାସ୍ ଗବେଷଣା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇପାରିବ | ନମୁନାଗୁଡିକ ରୁମ୍ ତାପମାତ୍ରାରେ ଜିପ୍-ଲକ୍ ବ୍ୟାଗରେ ଶୁଖିଲା <6% ଆର୍ଦ୍ରତା ଗଚ୍ଛିତ କରାଯାଇଥିଲା | ନମୁନାଗୁଡିକ ରୁମ୍ ତାପମାତ୍ରାରେ ଜିପ୍-ଲକ୍ ବ୍ୟାଗରେ ଶୁଖିଲା <6% ଆର୍ଦ୍ରତା ଗଚ୍ଛିତ କରାଯାଇଥିଲା | Об чинцы хранились сухим при влажности <6% в пакетах с застежкой-молнией при комнатной зине। କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ ଜିପର୍ଡ ବ୍ୟାଗରେ <6% ଆର୍ଦ୍ରତା ଉପରେ ନମୁନାଗୁଡିକ ଶୁଖିଲା ରଖାଯାଇଥିଲା |样品 在 室温 下 6 <6% 的 水分 储存 在 自封袋。。6 在 室温 下 以 干燥 <6% Об كانцы хранят в пакетх с застежкой-молнией при комнатной че с влажностью <6% | ନମୁନାଗୁଡିକ ଆର୍ଦ୍ରତା <6% ସହିତ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ ଜିପର୍ ବ୍ୟାଗରେ ଗଚ୍ଛିତ |ଅଧ୍ୟୟନ ସ୍ଥାନୀୟ ଏବଂ ଜାତୀୟ ନିର୍ଦ୍ଦେଶାବଳୀକୁ ମାନିଛି |NREL ପ୍ରୋଟୋକଲ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ରଚନାତ୍ମକ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା |ଏହି ରଚନାରେ 31.4% ଗ୍ଲୁକାନ୍, 18.7% ଜିଲାନ୍, 3.3% ଆରବିନାନ୍, 1.2% ଗାଲାକ୍ଟାନ୍, 2.2% ଆସେଟିଲ୍, 14.3% ଲିଗ୍ନାନ୍, 1.7% ପ୍ରୋଟିନ୍ ଏବଂ 13. 4% ପାଉଁଶ ଥିବା ଜଣାପଡିଛି |
ସେଲଭିକ୍ CTec2 (138 ମିଗ୍ରା ପ୍ରୋଟିନ୍ / ମିଲି, ଲଟ୍ VCNI 0001) ନୋଭୋଜାଇମ୍ସ (ଫ୍ରାଙ୍କଲିଣ୍ଟନ୍, ଏନସି, ଯୁକ୍ତରାଷ୍ଟ୍ର) ରୁ ସେଲୁଲେଜ୍, β- ଗ୍ଲୁକୋସିଡେଜ୍ ଏବଂ ସେଲିକ୍ HTec2 (157 ମିଗ୍ରା ପ୍ରୋଟିନ୍ / ମିଲି, ଲଟ୍ VHN00001) ର ଜଟିଳ ମିଶ୍ରଣ |ଡୁପଣ୍ଟ ଇଣ୍ଡଷ୍ଟ୍ରିଆଲ୍ ବାୟୋ ସାଇନ୍ସେସ୍ (ପାଲୋ ଆଲ୍ଟୋ, CA, ଯୁକ୍ତରାଷ୍ଟ୍ର) ଦ୍ୱାରା ମଲ୍ଟିଫେକ୍ଟ ପେକ୍ଟିନେଜ୍ (72 ମିଗ୍ରା ପ୍ରୋଟିନ୍ / ଏମଏଲ୍), ପେକ୍ଟିନ୍ ଡିଗ୍ରେଡିଂ ଏନଜାଇମର ଜଟିଳ ମିଶ୍ରଣ |କେଜେଲଡାହଲ ନାଇଟ୍ରୋଜେନ ବିଶ୍ଳେଷଣ (AOAC ପଦ୍ଧତି 2001.11, ଡେରି ୱାନ କୋଅପରେଟିଭ Inc.ଡାଏଟୋମାସିସ୍ ପୃଥିବୀ 545 EMD ମିଲିପୋର (ବିଲେରିକା, MA) ରୁ କ୍ରୟ କରାଯାଇଥିଲା |ସିଗମା-ଆଲଡ୍ରିଚ୍ (ସେଣ୍ଟ୍ ଲୁଇସ୍, MO) ରୁ ସକ୍ରିୟ ଅଙ୍ଗାରକାମ୍ଳ (DARCO, 100 ଜାଲ୍ ଗ୍ରାନୁଲ୍), ଆଭିସେଲ୍ (PH-101), ବିଚ୍ ଜିଲାନ୍ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ରାସାୟନିକ ପଦାର୍ଥ କ୍ରୟ କରାଯାଇଥିଲା |
GLEBRC (ବାୟୋମାସ୍ କନଭର୍ସନ୍ ରିସର୍ଚ୍ଚ ଲାବୋରେଟୋରୀ, ଏମଏସୟୁ, ଲାନସିଂ, MI, ଯୁକ୍ତରାଷ୍ଟ୍ର) ରେ AFEX ପ୍ରାକୃତିକ ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିଲା |15 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 140 ° C ରେ ପୂର୍ବ ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିଲା |ଷ୍ଟେନଲେସ୍ ଷ୍ଟିଲ୍ ବେଞ୍ଚଟପ୍ ବ୍ୟାଚ୍ ରିଆକ୍ଟର (ପ୍ୟାର୍ ଇନଷ୍ଟ୍ରୁମେଣ୍ଟସ୍ କମ୍ପାନୀ) ରେ ଲୋଡିଙ୍ଗ୍ 60% (w / w) ରେ ବାୟୋହ୍ୟାସ୍ ସହିତ ଆନ୍ହାଇଡ୍ରସ୍ ଆମୋନିଆର 1: 1 ଅନୁପାତରେ 46 ରହଣି ସମୟ |ଏହା 30 ମିନିଟ୍ ନେଇଥିଲା |ରିଆକ୍ଟରକୁ 140 ° C କୁ ଅଣାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଆମୋନିୟା ଶୀଘ୍ର ମୁକ୍ତ ହୋଇ ଜ om ବ ଜୀବକୁ ଶୀଘ୍ର କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାକୁ ଫେରିବାକୁ ଦେଇଥାଏ |AFEX ପୂର୍ବରୁ ଚିକିତ୍ସିତ ମକା ଷ୍ଟୋଭର୍ (ACS) ର ରଚନା ଚିକିତ୍ସା ହୋଇନଥିବା ମକା ଷ୍ଟୋଭର୍ (UT-CS) ସହିତ ସମାନ ଥିଲା |
ଉଚ୍ଚ ସଲିଡ୍ ACSH 25% (w / w) (ପ୍ରାୟ 8% ଡେକ୍ସଟ୍ରାନ୍ ଲୋଡିଂ) ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ଉତ୍ପାଦନ ପାଇଁ ଏକ ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ପଦାର୍ଥ ଭାବରେ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରାଯାଇଥିଲା |ACS ର ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ହାଇଡ୍ରୋଲାଇସିସ୍ ସେଲିକ® Ctec2 10 ମିଗ୍ରା ପ୍ରୋଟିନ୍ / ଜି ଗ୍ଲୁକାନ୍ (ପ୍ରିଟେଟେଡ୍ ବାୟୋମାସରେ), Htec2 (ନୋଭୋଜାଇମ୍ସ, ଫ୍ରାଙ୍କଲିଣ୍ଟନ୍, ଏନସି), 5 ମିଗ୍ରା ପ୍ରୋଟିନ୍ / ଜି ଗ୍ଲୁକାନ୍, ଏବଂ ମଲ୍ଟିଫେକ୍ଟ ପେକ୍ଟିନେଜ୍ (ଜେନେନକୋର Inc, ଯୁକ୍ତରାଷ୍ଟ୍ର) ସହିତ ଏକ ବ୍ୟବସାୟିକ ଏନଜାଇମ୍ ମିଶ୍ରଣ ବ୍ୟବହାର କରି କରାଯାଇଥିଲା |)), 5 ମିଗ୍ରା ପ୍ରୋଟିନ୍ / ଜି ଡେକ୍ସଟ୍ରାନ୍ |ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ହାଇଡ୍ରୋଲାଇସିସ୍ 5 ଲିଟର ବାୟୋରାକ୍ଟରରେ 3 ଲିଟର, pH 4.8, 50 ° C ଏବଂ 250 rpm ର କାର୍ଯ୍ୟ ପରିମାଣ ସହିତ କରାଯାଇଥିଲା |96 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ହାଇଡ୍ରୋଲାଇସିସ୍ ପରେ, ହାଇଡ୍ରୋଲାଇଜେଟ୍ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗେସନ୍ ଦ୍ୱାରା 6000 rpm ରେ 30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଏବଂ ପରେ 14000 rpm ରେ 30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଅଣହାଇଡ୍ରୋଲାଇଜେଡ୍ କଠିନଗୁଡିକ ବାହାର କରାଯାଇଥିଲା |ପରେ ହାଇଡ୍ରୋଲାଇଜେଟ୍ 0.22 ମିଲିମିଟର ଫିଲ୍ଟର ବିକର ମାଧ୍ୟମରେ ନିର୍ଜଳ ଫିଲ୍ଟରେସନ୍ ଅଧୀନରେ ରହିଲା |ଫିଲ୍ଟର ହୋଇଥିବା ହାଇଡ୍ରୋଲାଇଜେଟ୍ 4 ° C ରେ ନିର୍ଜଳ ବୋତଲରେ ଗଚ୍ଛିତ ହୋଇଥିଲା ଏବଂ ପରେ ଅଙ୍ଗାରକାମ୍ଳ ଉପରେ ଭଗ୍ନାଂଶ କରାଯାଇଥିଲା |
NREL ଲାବୋରେଟୋରୀ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପ୍ରଣାଳୀ ଅନୁଯାୟୀ ନିର୍ବାହ-ଆଧାରିତ ବାୟୋମାସ୍ ନମୁନାଗୁଡ଼ିକର ରଚନା ବିଶ୍ଳେଷଣ: ରଚନା ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ ନମୁନା ପ୍ରସ୍ତୁତି (NREL / TP-510-42620) ଏବଂ ବାୟୋମାସରେ ଷ୍ଟ୍ରକଚରାଲ୍ କାର୍ବୋହାଇଡ୍ରେଟ୍ ଏବଂ ଲିଗ୍ନାନ୍ ନିର୍ଣ୍ଣୟ (NREL / TP-510 - 42618) 47 |
ହାଇଡ୍ରୋଲାଇଜେଟ୍ ଷ୍ଟ୍ରିମର ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ ଏକ ଅଟୋକ୍ଲେଭ୍ ଆଧାରିତ ଏସିଡ୍ ହାଇଡ୍ରୋଲାଇସିସ୍ ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରି 2 ମିଲି ସ୍କେଲରେ କରାଯାଇଥିଲା |ହାଇଡ୍ରୋଲାଇଜେଟ୍ ନମୁନାକୁ 69.7 µl 72% ସଲଫୁରିକ୍ ଏସିଡ୍ ସହିତ 10 ମିଲି ସ୍କ୍ରୁ କ୍ୟାପ୍ କଲଚର ଟ୍ୟୁବରେ ମିଶାନ୍ତୁ ଏବଂ 121 ° C ରେ ବେଞ୍ଚଟପ୍ ଉପରେ 1 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଇନ୍କ୍ୟୁବେଟ୍ କରନ୍ତୁ, ବରଫରେ ଥଣ୍ଡା କରନ୍ତୁ ଏବଂ ଏକ ଉଚ୍ଚ କ୍ଷମତା ସମ୍ପନ୍ନ ତରଳ କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫି (HPLC) ଭିଆଲରେ ଫିଲ୍ଟର୍ କରନ୍ତୁ |ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ର ଏକାଗ୍ରତା ଅଣ-ହାଇଡ୍ରୋଲାଇଜେଡ୍ ନମୁନାରେ ମୋନୋସାକାରାଇଡ୍ର ଏକାଗ୍ରତାକୁ ଏସିଡ୍-ହାଇଡ୍ରୋଲାଇଜେଡ୍ ନମୁନାରେ ଥିବା ଚିନି ଏକାଗ୍ରତାରୁ ବାହାର କରି ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା |
ଏସିଡ୍ ହାଇଡ୍ରୋଲାଇଜଡ୍ ବାୟୋମାସରେ ଗ୍ଲୁକୋଜ୍, ଜାଇଲୋଜ୍ ଏବଂ ଆରବିନୋଜ୍ ଏକାଗ୍ରତା ଏକ ବାୟୋ-ରେଡ୍ ଆମିନକ୍ସ HPX-87H ସ୍ତମ୍ଭରେ ଏକ ଅଟୋସାମପ୍ଲର୍, ସ୍ତମ୍ଭ ହିଟର, ଇସୋକ୍ରାଟିକ୍ ପମ୍ପ ଏବଂ ପ୍ରତୀକାତ୍ମକ ସୂଚକାଙ୍କ ସହିତ ସଜ୍ଜିତ ଏକ ଶିମାଡଜୁ HPLC ସିଷ୍ଟମ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା |ସ୍ତମ୍ଭ 50 ° C ରେ ରକ୍ଷଣାବେକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ 0.6 ମିଲି / ମିନିଟ୍ 5 ମିମି H2SO4 ପାଣିରେ ବ uted ଼ାଯାଇଥିଲା |ପ୍ରବାହ
ମୋନୋମର ଏବଂ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ବିଷୟବସ୍ତୁ ପାଇଁ ହାଇଡ୍ରୋଲାଇଜେଟ୍ ସୁପରନେଟାଣ୍ଟକୁ ମିଶ୍ରିତ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା |ଏନଜାଇମାଟିକ୍ ହାଇଡ୍ରୋଲାଇସିସ୍ ପରେ ପ୍ରାପ୍ତ ମୋନୋମେରିକ୍ ଶର୍କରାକୁ ବାୟୋ-ରେଡ୍ (ହର୍କ୍ୟୁଲସ୍, CA) ଆମିନକ୍ସ HPX-87P ସ୍ତମ୍ଭ ଏବଂ ଏକ ପାଉଁଶ ଗାର୍ଡ ସ୍ତମ୍ଭ ସହିତ HPLC ଦ୍ୱାରା ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା |ସ୍ତମ୍ଭର ତାପମାତ୍ରା 80 ° C ରେ ରକ୍ଷଣାବେକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା, ଜଳ ମୋବାଇଲ୍ ପର୍ଯ୍ୟାୟ ଭାବରେ 0.6 ମିଲି / ମିନିଟ୍ ପ୍ରବାହ ହାର ସହିତ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା |ରେଫ୍ସରେ ବର୍ଣ୍ଣିତ ପଦ୍ଧତି ଅନୁଯାୟୀ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ 121 ° C ରେ ହାଇଡ୍ୟୁଲାଇସିସ୍ ଦ୍ determined ାରା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା |41, 48, 49
ପୂର୍ବରୁ ବର୍ଣ୍ଣିତ ପ୍ରଣାଳୀ 27, 43, 50, 51 ବ୍ୟବହାର କରି କଞ୍ଚା, AFEX ପୂର୍ବରୁ ଚିକିତ୍ସିତ ଏବଂ ସମସ୍ତ ଅଣ-ହାଇଡ୍ରୋଲାଇଜଡ୍ ବାୟୋମାସ୍ ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶ (କ୍ରମିକ ସେଲ୍ ପ୍ରାଚୀରର ଉତ୍ପାଦନ ଏବଂ ସେମାନଙ୍କର mAb ସ୍କ୍ରିନିଂ ଅନ୍ତର୍ଭୂକ୍ତ କରି) ଉପରେ ସାକାରାଇଡ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା |ଗ୍ଲାଇକମ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ, ଉଦ୍ଭିଦ ସେଲ୍ ପ୍ରାଚୀର ପଦାର୍ଥର ମଦ୍ୟପାନ-ଅବିସ୍ମରଣୀୟ ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶଗୁଡିକ ବାୟୋମାସ୍ ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶରୁ ପ୍ରସ୍ତୁତ ହୋଇ ଆମୋନିୟମ୍ ଅକ୍ସାଲେଟ୍ (50 ମିମି), ସୋଡିୟମ୍ କାର୍ବୋନାଟ୍ (50 ମିମି ଏବଂ 0.5% w / v), CON ଭଳି କ୍ରମାଗତ ଆକ୍ରମଣାତ୍ମକ ରେଜେଣ୍ଟ୍ ସହିତ କ୍ରମିକ ନିର୍ବାହର ଶିକାର ହୁଏ |(1 ମି ଏବଂ 4 ମି, ଉଭୟ 1% w / v ସୋଡିୟମ୍ ବୋରୋହାଇଡ୍ରାଇଡ୍ ସହିତ) ଏବଂ ଏସିଡ୍ କ୍ଲୋରାଇଟ୍ ପୂର୍ବରୁ ବର୍ଣ୍ଣନା କରାଯାଇଥିବା ପରି 52,53 |କୋଷ ପ୍ରାଚୀର ଗ୍ଲାଇକାନକୁ ନିର୍ଦ୍ଦେଶିତ mAb50 ର ଏକ ଜଟିଳ ପ୍ୟାନେଲ ବିରୁଦ୍ଧରେ ନିର୍ବାହଗୁଡିକ ELISA ଅଧୀନରେ ରହିଲା, ଏବଂ mAb ବନ୍ଧନ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାଗୁଡ଼ିକୁ ଏକ ଉତ୍ତାପ ମାନଚିତ୍ର ଭାବରେ ଉପସ୍ଥାପିତ କରାଗଲା |ପ୍ଲାଣ୍ଟ ସେଲ୍ କାନ୍ଥ ଗ୍ଲାଇକାନ୍କୁ ଟାର୍ଗେଟ୍ କରୁଥିବା mAbs ଲାବୋରେଟୋରୀ ଷ୍ଟକ୍ (CCRC, JIM ଏବଂ MAC ସିରିଜ୍) ରୁ କ୍ରୟ କରାଯାଇଥିଲା |
ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ସର ଏକ ସୋପାନ ବାୟୋଟିନାଇଲେସନ୍ |ନିମ୍ନଲିଖିତ ପ୍ରଣାଳୀ ବ୍ୟବହାର କରି ବାୟୋଟିନ୍-ଏଲ୍ସି-ହାଇଡ୍ରାଜାଇଡ୍ ସହିତ କାର୍ବୋହାଇଡ୍ରେଟ୍ସର ମିଶ୍ରଣ କରାଯାଇଥିଲା |ବାୟୋଟିନ୍-ଏଲସି-ହାଇଡ୍ରାଜାଇଡ୍ (4.6 ମିଗ୍ରା / 12 olmol) ଡାଇମେଥାଇଲ୍ ସଲଫକ୍ସାଇଡ୍ (DMSO, 70 μl) ରେ 1 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 65 ° C ରେ ଜୋରରେ ଉତ୍ତେଜିତ ହୋଇ ଗରମ ହୋଇଯାଇଥିଲା |ଗ୍ଲାସିଆଲ୍ ଏସିଟିକ୍ ଏସିଡ୍ (30 µl) ଯୋଗ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଏହି ମିଶ୍ରଣକୁ ସୋଡିୟମ୍ ସିଆନୋବୋରୋହାଇଡ୍ରାଇଡ୍ (6.4 ମିଗ୍ରା / 100 olmol) ଉପରେ poured ାଳି ଦିଆଗଲା ଏବଂ ପ୍ରାୟ 1 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 65 ° C ରେ ଗରମ ହେବା ପରେ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଦ୍ରବୀଭୂତ ହେଲା |ତାପରେ, 5 ରୁ 8 μl ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ମିଶ୍ରଣକୁ ଶୁଖିଲା ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ (1-100 nmol) ରେ ଯୋଗ କରାଯାଇ ଲେବଲ୍ ର 10 ଗୁଣା କିମ୍ବା ଅଧିକ ମୋଲାର ଅତିରିକ୍ତ ହ୍ରାସ ପାଇବା ପାଇଁ |ପ୍ରତିକ୍ରିୟା 2 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 65 ° C ରେ କରାଯାଇଥିଲା, ଯାହା ପରେ ନମୁନାଗୁଡିକ ତୁରନ୍ତ ଶୁଦ୍ଧ କରାଯାଇଥିଲା |ହ୍ରାସ ବିନା ଲେବେଲିଂ ପରୀକ୍ଷଣରେ କ No ଣସି ସୋଡିୟମ୍ ସିଆନୋବୋରୋହାଇଡ୍ରାଇଡ୍ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇନଥିଲା ଏବଂ ନମୁନାଗୁଡିକ 65 ° C ରେ 2.5 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କରାଯାଇଥିଲା |
ବାୟୋଟିନାଇଟେଡ୍ ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ସର ନମୁନାଗୁଡିକର ELISA ଆବରଣ ଏବଂ ଧୋଇବା |ଆଭିଡିନ-ଆବୃତ ପ୍ଲେଟର ପ୍ରତ୍ୟେକ କୂଅରେ 25 μl ବାୟୋଟିନାଇଟେଡ୍ ନମୁନା (5 ମି.ଲି.0.1 M TBS ରେ 10 μg / ml ର ଏକାଗ୍ରତାରେ 50 μl ବାୟୋଟିନ୍ ସହିତ କଣ୍ଟ୍ରୋଲ୍ କୂଅଗୁଡିକ ଆବୃତ କରାଯାଇଥିଲା |ଡିଅନାଇଜଡ୍ ଜଳକୁ ଖାଲି ମାପ ପାଇଁ ଏକ ଆବରଣ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା |ଅନ୍ଧାରରେ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ ଟ୍ୟାବଲେଟ୍ 2 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା |ପ୍ରୋଗ୍ରାମ୍ ନଂ ବ୍ୟବହାର କରି 0.1 M TBS ରେ 0.1% ସ୍କିମଡ୍ କ୍ଷୀର ସହିତ ପ୍ଲେଟକୁ times ଥର ଧୋଇ ଦିଅନ୍ତୁ |ଗ୍ରେନିଅର୍ ଫ୍ଲାଟ 3A ପାଇଁ 11 |
ପ୍ରାଥମିକ ଆଣ୍ଟିବଡି ଯୋଗ ଏବଂ ଧୋଇବା |ପ୍ରତ୍ୟେକ କୂଅରେ 40 µl ପ୍ରାଥମିକ ଆଣ୍ଟିବଡି ମିଶାନ୍ତୁ |ଅନ୍ଧାରରେ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ 1 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ମାଇକ୍ରୋପ୍ଲେଟ୍ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରନ୍ତୁ |ପରେ ପ୍ଲେନଗୁଡିକ ଗ୍ରେନିଅର୍ ଫ୍ଲାଟ 3A ପାଇଁ ୱାଶ୍ ପ୍ରୋଗ୍ରାମ୍ # 11 ବ୍ୟବହାର କରି 0.1M TBS ରେ 0.1% କ୍ଷୀର ସହିତ 3 ଥର ଧୋଇଗଲା |
ଦ୍ secondary ିତୀୟ ଆଣ୍ଟିବଡି ମିଶାନ୍ତୁ ଏବଂ ଧୋଇ ଦିଅନ୍ତୁ |ପ୍ରତ୍ୟେକ କୂଅରେ 50 µl ମାଉସ୍ / ରାଟ୍ ସେକେଣ୍ଡାରୀ ଆଣ୍ଟିବଡି (0.1% କ୍ଷୀରରେ 1: 5000 ମିଶ୍ରିତ) ମିଶାନ୍ତୁ |ଅନ୍ଧାରରେ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ 1 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ମାଇକ୍ରୋପ୍ଲେଟ୍ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରନ୍ତୁ |ପରେ ମାଇକ୍ରୋପ୍ଲେଟ୍ ଗ୍ରେନିଅର୍ ଫ୍ଲାଟ 5 ଏ ପ୍ଲେଟ୍ ୱାଶ୍ ପ୍ରୋଗ୍ରାମ୍ # 12 ବ୍ୟବହାର କରି 0.1 M TBS ରେ 0.1% କ୍ଷୀର ସହିତ 5 ଥର ଧୋଇଗଲା |
ଏକ ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ଯୋଡିବା |ବେସ୍ ସବଷ୍ଟ୍ରେଟରେ 50 µl 3,3 ′, 5,5′-ଟେଟ୍ରାମେଥାଇଲବେଞ୍ଜାଇଡାଇନ୍ (ଟିଏମବି) ମିଶାନ୍ତୁ (2 ବୁନ୍ଦା ବଫର୍, 3 ବୁନ୍ଦା ଟିଏମବି, 2 ବୁନ୍ଦା ହାଇଡ୍ରୋଜେନ୍ ପେରକ୍ସାଇଡ୍ ମିଶାଇ 15 ମିଲି ଡିଅନାଇଜଡ୍ ପାଣିରେ) |ଟିଏମବି ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରନ୍ତୁ |ଏବଂ ବ୍ୟବହାର ପୂର୍ବରୁ ଭର୍ଟେକ୍ସ) |30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ ମାଇକ୍ରୋପ୍ଲେଟ୍ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରନ୍ତୁ |ଅନ୍ଧାରରେ
ଷ୍ଟେପ୍ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ କରନ୍ତୁ ଏବଂ ଟାବଲେଟ୍ ପ read ନ୍ତୁ |ପ୍ରତ୍ୟେକ କୂଅରେ 50 Nl 1 N ସଲଫୁରିକ୍ ଏସିଡ୍ ମିଶାନ୍ତୁ ଏବଂ ଏକ ELISA ରିଡର୍ ବ୍ୟବହାର କରି 450 ରୁ 655 nm ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଅବଶୋଷଣକୁ ରେକର୍ଡ କରନ୍ତୁ |
ଡିଓନାଇଜଡ୍ ପାଣିରେ ଏହି ଆନାଲିଟଗୁଡିକର mg ୦ ମିଗ୍ରା / ମିଲ୍ ସମାଧାନ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରନ୍ତୁ: ଆରାବିନୋଜ୍, ରାମନୋଜ୍, ଫୁକୋଜ୍, ଜାଇଲୋଜ୍, ଗାଲାକ୍ଟୁରୋନିକ୍ ଏସିଡ୍ (ଗାଲା), ଗ୍ଲୁକୁରୋନିକ୍ ଏସିଡ୍ (ଗ୍ଲକା), ମାନ୍ନାଜ୍, ଗ୍ଲୁକୋଜ୍, ଗାଲାକ୍ଟୋଜ୍, ଲାକ୍ଟୋଜ୍, ଏନ-ଏସିଟାଇଲମାନୋସାମାଇନ୍ (ମାନନାକ୍), ଏନ-ଏସିଟାଇଲଗ୍ଲୁକୋସାମାଇନ୍ |(glcNAc), N-acetylgalactosamine (galNAc), inositol (ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ମାନକ) |ସାରଣୀ 1 ରେ ଦେଖାଯାଇଥିବା 1 ମିଗ୍ରା / ଏମଏଲ୍ ଚିନି ସମାଧାନ ଯୋଗ କରି ଦୁଇଟି ମାନକ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରାଯାଇଥିଲା | ସମସ୍ତ ଜଳ ଅପସାରଣ ନହେବା ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ (ସାଧାରଣତ about ପ୍ରାୟ 12-18 ଘଣ୍ଟା) ନମୁନାଗୁଡିକ -80 ° C ରେ ଫ୍ରିଜ୍ ହୋଇ ଲାଇଫିଲାଇଜ୍ କରାଯାଇଥାଏ |
ଏକ ଆନାଲିଟିକାଲ୍ ସନ୍ତୁଳନରେ ସ୍କ୍ରୁ କ୍ୟାପ୍ ଟ୍ୟୁବ୍ ପାଇଁ 100-500 µg ନମୁନା ଯୋଡନ୍ତୁ |ଯୋଗ କରାଯାଇଥିବା ପରିମାଣକୁ ରେକର୍ଡ କରନ୍ତୁ |ଦ୍ରବଣର ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଏକାଗ୍ରତାରେ ନମୁନାକୁ ତରଳାଇ ଏହାକୁ ଏକ ତରଳ ଆଲିକୋଟ ଭାବରେ ଟ୍ୟୁବରେ ମିଶାଇବା ଭଲ |ପ୍ରତ୍ୟେକ ନମୁନା ଟ୍ୟୁବ୍ ପାଇଁ ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ମାନକ ଭାବରେ 20 ମିଗ୍ରା 1 ମିଲିଗ୍ରାମ୍ / ମିଲି ଇନୋଜିଟୋଲ୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ |ନମୁନାରେ ଯୋଡି ହୋଇଥିବା ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ମାନାଙ୍କ ପରିମାଣ ନିଶ୍ଚିତ ଭାବରେ ଷ୍ଟାଣ୍ଡାର୍ଡ ଟ୍ୟୁବରେ ଯୋଡି ହୋଇଥିବା ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ମାନାଙ୍କ ପରିମାଣ ସହିତ ସମାନ ହେବା ଆବଶ୍ୟକ |
ଏକ ସ୍କ୍ରୁ କ୍ୟାପ୍ ଭିଆଲରେ 8 ମିଲି ଆନ୍ହାଇଡ୍ରସ୍ ମିଥାନୋଲ୍ ମିଶାନ୍ତୁ |ତା’ପରେ 4 N. 3 ମିଥାନୋଲିକ୍ HCl ଦ୍ରବଣ, କ୍ୟାପ୍ ଏବଂ ହଲାଇ |ଏହି ପ୍ରକ୍ରିୟା ଜଳ ବ୍ୟବହାର କରେ ନାହିଁ |
ଅଲିଗୋସାକାରାଇଡ୍ ନମୁନା ଏବଂ ମାନକ TMS ଟ୍ୟୁବରେ 500 Ml 1 M HCl ମିଥାନୋଲ୍ ସମାଧାନ ମିଶାନ୍ତୁ |ଏକ ଥର୍ମାଲ୍ ବ୍ଲକ୍ରେ ରାତିସାରା (168 ଘଣ୍ଟା) 80 ° C ରେ ନମୁନାଗୁଡିକ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା |ଏକ ଶୁଖାଇବା ମେନିଫୋଲ୍ଡ ବ୍ୟବହାର କରି କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ ମିଥାନୋଲାଇସିସ୍ ଉତ୍ପାଦକୁ ଶୁଖାନ୍ତୁ |200 µl MeOH ମିଶାନ୍ତୁ ଏବଂ ପୁଣି ଶୁଖାନ୍ତୁ |ଏହି ପ୍ରକ୍ରିୟା ଦୁଇଥର ପୁନରାବୃତ୍ତି ହୁଏ |ନମୁନାରେ 200 µl ମିଥାନୋଲ, 100 µl ପିରାଇଡାଇନ୍ ଏବଂ 100 µl ଏସିଟିକ୍ ଆନ୍ହାଇଡ୍ରାଇଡ୍ ମିଶାଇ ଭଲ ଭାବରେ ମିଶାନ୍ତୁ |ରୁମ ତାପମାତ୍ରାରେ 30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ନମୁନା ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରନ୍ତୁ |ଏବଂ ଶୁଖିଗଲା |200 µl ମିଥାନୋଲ୍ ମିଶାଇ ପୁଣି ଶୁଖାନ୍ତୁ |
200 µl ଟ୍ରାଇ-ସିଲ୍ ଏବଂ 20 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଗରମ କ୍ୟାପ୍ ଟ୍ୟୁବ୍ ମିଶାନ୍ତୁ |80 ° C, ତା’ପରେ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ ଥଣ୍ଡା |ନମୁନାକୁ ପାଖାପାଖି 50 µl ପରିମାଣରେ ଶୁଖାଇବା ପାଇଁ ଏକ ଶୁଖାଇବା ମେନିଫୋଲ୍ଡ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ |ଏହା ଧ୍ୟାନ ଦେବା ଜରୁରୀ ଯେ ଆମେ ନମୁନାଗୁଡ଼ିକୁ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଶୁଖିବାକୁ ଦେଇନାହୁଁ |
2 ମିଲି ହେକ୍ସନ୍ ମିଶାନ୍ତୁ ଏବଂ ଭର୍ଟେକ୍ସିଙ୍ଗ୍ ଦ୍ୱାରା ଭଲ ଭାବରେ ମିଶାନ୍ତୁ |5-3 / 4 ଇଞ୍ଚ ବ୍ୟାସ ପାଇପେଟ୍ ଉପରେ ଗ୍ଲାସ୍ ଲୋମ ଭର୍ତ୍ତି କରି ଗ୍ଲାସ୍ ଲୋମ ଖଣ୍ଡ ସହିତ ପେଷ୍ଟର୍ ପାଇପେଟ୍ (5-8 ମିଲିମିଟର) ର ଟିପ୍ସ ପୁରଣ କରନ୍ତୁ |ନମୁନାଗୁଡିକ 3000 ଗ୍ରାମରେ 2 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ କରାଯାଇଥିଲା |ଯେକ Any ଣସି ଅବିସ୍ମରଣୀୟ ଅବଶିଷ୍ଟାଂଶଗୁଡିକ ପ୍ରବାହିତ ହୁଏ |ନମୁନାକୁ 100-150 µl ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଶୁଖାନ୍ତୁ |ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ତାପମାତ୍ରା 80 ° C ଏବଂ ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ସମୟ 2.0 ମିନିଟ୍ (ସାରଣୀ 2) ରେ GC-MS ରେ ପ୍ରାୟ 1 μl ଭଲ୍ୟୁମ୍ ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ ଦିଆଯାଇଥିଲା |