Kea leboha ha le etetse Nature.com. Mofuta wa sebatli seo o se sebedisang o na le tshehetso e fokolang ya CSS. Bakeng sa boiphihlelo bo botle ka ho fetisisa, re kgothaletsa hore o sebedise sebatli se ntjhafaditsweng (kapa o tima Mokgwa wa ho Kopana ho Internet Explorer). Ho sa le jwalo, ho netefatsa tshehetso e tswelang pele, re tla etsa sebaka sena sa marang-rang ntle le mekgwa le JavaScript.
Ho nona ha linonyana ho itšetlehile ka bokhoni ba tsona ba ho boloka peō e lekaneng e sebetsang nako e telele ka har'a li-tubule tsa polokelo ea peō (SST). Mokhoa o nepahetseng oo peō e kenang ka oona, e lulang ka hare ho eona, le ho tsoa ka har'a SST o ntse o phehisanoa khang. Peō ea likhoho tsa sharkasi e bontšitse tšekamelo e phahameng ea ho kopana, e leng se etsang li-bundle tse tsamaeang tse nang le lisele tse ngata. Ka lebaka la bothata ba ho shebella motility le boitšoaro ba peō ea spermatozoa ka har'a tube ea fallopian e sa bonahaleng, re sebelisitse sesebelisoa sa microfluidic se nang le karolo e tšekaletseng ea microchannel e tšoanang le ea spermatozoa ho ithuta ho kopana ha peō ea spermatozoa le motility. Phuputso ena e tšohla kamoo li-bundle tsa peō ea sperm li thehoang kateng, kamoo li tsamaeang kateng, le karolo ea tsona e ka khonehang ho atoloseng bolulo ba peō ea sperm ka har'a SST. Re batlisisitse lebelo la peō ea sperm le boitšoaro ba rheological ha phallo ea metsi e ne e hlahisoa ka har'a kanale ea microfluidic ka khatello ea hydrostatic (sekhahla sa phallo = 33 µm/s). Peō ea spermatozoa e atisa ho sesa khahlanong le hona joale (rheology e ntle) 'me lebelo la sehlopha sa peō ea spermatozoon le fokotsehile haholo ha le bapisoa le peō e le 'ngoe ea spermatozoa. Ho bonoe hore li-sperm groups li tsamaea ka mokhoa o potolohang le ho eketseha ha bolelele le botenya ha peō e le 'ngoe e ntse e bokellana. Ho ile ha bonoa lihlopha tsa peō ea botona li atamela le ho khomarela maboteng a litsela tsa microfluidic ho qoba ho hoholeha ka lebelo la phallo ea mokelikeli > 33 µm/s. Ho ile ha bonoa lihlopha tsa peō ea botona li atamela le ho khomarela maboteng a litsela tsa microfluidic ho qoba ho hoholeha ka lebelo la phallo ea mokelikeli > 33 µm/s. Было замечено, что пучки сперматозоидов приближаются и прилипают к боковым стенкам микрофлюидных каналов, чтобы избежают смета жидкости> 33 мкм / p. Ho bonoe hore dipakete tsa peō ea botona li atamela le ho khomarela mabota a mahlakoreng a likanale tsa microfluidic ho qoba ho hoholeha ha metsi a phalla ka lebelo la >33 µm/s.观察到精子束接近并粘附在微流体通道的侧壁上，以避免被流体流速> 33 µm/s 扫过.33 µm/s 扫过. Было замечено, что пучки сперматозоидов приближаются и прилипают к боковым стенкам микрожидкостного канала, чтобы избежать сместо канала, чтобы избежать смести перед место > 33 мкм/с. Ho bonoe hore dihlopha tsa peō ea botona li atamela le ho khomarela mabota a mahlakoreng a kanale ea microfluidic ho qoba ho hoholeha ke phallo ea mokelikeli ho >33 µm/s.Ho hlahloba le ho fetisa dieleketerone tsa diselefounu ho senotse hore dihlopha tsa peo ya botona di tsheheditswe ke thepa e ngata e teteaneng. Lintlha tse fumanweng di bontsha ho tsamaya ho ikgethang ha spermatozoa ya kana ya Sharkazi, hammoho le bokgoni ba spermatozoa ba ho kopana le ho theha dihlopha tse tsamayang, e leng se thusang ho utlwisisa hantle polokelo ya nako e telele ya spermatozoa ho SMT.
Ho finyella ho nontšoa ha peō ho batho le liphoofolong tse ngata, peō le mahe li tlameha ho fihla sebakeng seo ho nontšoa ha peō ka nako e nepahetseng. Ka hona, ho nontšoa ha peō ho lokela ho etsahala pele kapa nakong ea ho nontšoa ha peō. Ka lehlakoreng le leng, liphoofolo tse ling tse anyesang, tse kang lintja, hammoho le mefuta e seng ea liphoofolo tse anyesang, tse kang likokoanyana, litlhapi, lihahabi le linonyana, li boloka peō lithong tsa tsona tsa ho ikatisa ka nako e telele ho fihlela mahe a tsona a se a loketse ho nontšoa (ho nontšoa ha peō ka nako e le 'ngoe 1). Linonyana li khona ho boloka matla a peō ea botona e khonang ho nontšoa mahe ka libeke tse 2-102.
Ena ke tšobotsi e ikhethang e khethollang linonyana ho liphoofolo tse ling, kaha e fana ka monyetla o moholo oa ho nontšoa ha peō ka mor'a ho kenngoa peō hanngoe ka libeke tse 'maloa ntle le ho kopana ha peō le ho beleha ka nako e le' ngoe. Setho se seholo sa polokelo ea peō, se bitsoang tubule ea polokelo ea peō (SST), se fumaneha ka har'a mehele ea mucosal e ka hare ho moo peō e kopanang teng. Ho fihlela joale, mekhoa eo peō e kenang, e lulang le ho tsoa ka eona ka har'a banka ea peō ha e utloisisoe ka botlalo. Ho latela lithuto tse fetileng, ho 'nile ha hlahisoa likhopolo-taba tse ngata, empa ha ho le e 'ngoe ea tsona e tiisitsoeng.
Forman4 o ne a nahana hore spermatozoa e boloka bolulo ba eona ka har'a cavity ea SST ka motsamao o tsoelang pele oa oscillatory khahlanong le tataiso ea phallo ea mokelikeli ka har'a likanale tsa protheine tse fumanehang liseleng tsa epithelial tsa SST (rheology). ATP e fokotsehile ka lebaka la ts'ebetso e sa khaotseng ea flagellar e hlokahalang ho boloka peō ka har'a lumen ea SST 'me motility qetellong ea fokotseha ho fihlela peō e etsoa ka bankeng ea peō ka phallo ea mokelikeli' me e qala leeto le lecha ho theosa le tube ea fallopian e nyolohang ho ea nontša peō. Lehe (Forman4). Mohlala ona oa polokelo ea peō o tšehetsoa ke ho fumanoa ka immunocytochemistry ea aquaporins 2, 3 le 9 e teng liseleng tsa epithelial tsa SST. Ho fihlela joale, lithuto mabapi le rheology ea peō ea khoho le karolo ea eona polokelong ea SST, khetho ea peō ea botšehali, le tlholisano ea peō ha li eo. Likhohong, peō e kena ka har'a botšehali kamora ho kopana ka tlhaho, empa ho feta 80% ea peō e ntšoa ka har'a botšehali nakoana kamora ho kopana. Sena se fana ka maikutlo a hore botšehali ke sebaka sa mantlha sa khetho ea peō linonyanang. Ho phaella moo, ho tlalehiloe hore ka tlase ho 1% ea peō ea botona e nontšitsoeng ka hara botšehali e fella ka SST2. Ha ho kenngoa peō ea botona ka hara botšehali ka maiketsetso, palo ea peō ea botona e fihlang ho SST e atisa ho eketseha lihora tse 24 kamora ho kenngoa peō. Ho fihlela joale, mokhoa oa ho khetha peō nakong ena ha o hlake, 'me ho tsamaea ha peō ea botona ho ka bapala karolo ea bohlokoa ho nkeng peō ea botona ea SST. Ka lebaka la mabota a teteaneng le a sa bonahaleng a li-tube tsa fallopian, ho thata ho beha leihlo ka ho toba ho tsamaea ha peō ea botona ka har'a li-tube tsa fallopian tsa linonyana. Ka hona, ha re na tsebo ea motheo ea hore na peō ea botona e fetela joang ho SST kamora ho nontšoa.
Rheology e sa tsoa tsejoa e le ntlha ea bohlokoa e laolang ho tsamaisoa ha peō ea botona lithong tsa botona tsa mammalian. Ho latela bokhoni ba peō ea botona e tsamaeang ho falla khahlanong le hona joale, Zaferani le ba bang ba sebelisitse sistimi ea corra microfluidic ho arola peō ea botona e tsamaeang ho tsoa lisampoleng tsa peō e pentiloeng. Mofuta ona oa ho hlophisa peō ea botona o bohlokoa bakeng sa kalafo ea ho hloka thari ea bongaka le lipatlisiso tsa bongaka, 'me o khethoa ho feta mekhoa ea setso e nkang nako le mosebetsi o boima 'me e ka beha sebopeho sa peō ea botona kotsing le botšepehi ba sebopeho. Leha ho le joalo, ho fihlela joale, ha ho na lithuto tse entsoeng mabapi le phello ea mantle a tsoang lithong tsa botona tsa likhoho ho tsamaisong ea peō ea botona.
Ho sa tsotelehe mokhoa o bolokang peo e bolokiloeng ka har'a SST, bafuputsi ba bangata ba hlokometse hore spermatozoa e lulang e le teng e kopana hlooho le hlooho ka har'a SST ea likhoho tsa 9, 10, quail 2, le turkeys 11 ho theha li-bundle tsa peo e kopantsoeng. Bangoli ba fana ka maikutlo a hore ho na le kamano pakeng tsa ho kopana hona le polokelo ea nako e telele ea spermatozoa ka har'a SST.
Tingari le Lake12 ba tlalehile kamano e matla pakeng tsa spermatozoa ka har'a tšoelesa e amohelang peō ea khoho 'me ba botsa hore na spermatozoa ea linonyana e agglutinate ka tsela e tšoanang le spermatozoa ea mammalian. Ba lumela hore likamano tse tebileng pakeng tsa peō ka har'a vas deferens li ka bakoa ke khatello ea maikutlo e bakoang ke boteng ba palo e kholo ea peō sebakeng se senyenyane.
Ha ho hlahlojoa boitšoaro ba peō ea botona li-slide tse ncha tsa khalase tse leketlileng, matšoao a nakoana a ho kopana a ka bonoa, haholo-holo mathōkong a marotholi a peō ea botona. Leha ho le joalo, ho kopana hangata ho ne ho sitisoa ke ketso ea ho potoloha e amanang le motsamao o tsoelang pele, e leng se hlalosang tlhaho ea nakoana ea ketsahalo ena. Bafuputsi ba boetse ba hlokometse hore ha motsoako o eketsoa peōng ea botona, ho ile ha hlaha lihlopha tsa lisele tse telele tse "joaloka khoele".
Maiteko a pele a ho etsisa peo ea botona a entsoe ka ho tlosa terata e tšesaane lerothong le leketlileng, e leng se ileng sa fella ka hore peo e telele e kang peo e hlahe ho tsoa lerothong la peo ea botona. Peo ea botona e ile ea ema ka mokhoa o ts'oanang ka har'a peo ea botona, empa yuniti eohle e ile ea nyamela kapele ka lebaka la moeli oa 3D. Ka hona, ho ithuta ho kopana ha peo ea botona, ho hlokahala ho shebella motility le boitšoaro ba peo ea botona ka ho toba ka har'a li-tubule tse arohaneng tsa polokelo ea peo ea botona, e leng ntho e thata ho e finyella. Ka hona, ho hlokahala ho nts'etsapele sesebelisoa se etsisang peo ea botona ho tšehetsa lithuto tsa motility le agglutination ea peo ea botona. Brillard et al13 ba tlalehile hore bolelele bo tloaelehileng ba li-tubule tsa polokelo ea peo ho litsuonyana tse kholo ke 400–600 µm, empa li-SST tse ling li ka ba bolelele ba 2000 µm. Mero le Ogasawara14 li arotse litšoelesa tse nyenyane ka li-tubule tse kholo le tse sa holang tsa polokelo ea peō, tseo ka bobeli li neng li lekana ka bolelele (~500 µm) le bophara ba molala (~38 µm), empa bophara ba lumen bo tloaelehileng ba li-tubule e ne e le 56.6 le 56.6 µm. . , ka ho latellana 11.2 μm, ka ho latellana. Phuputsong ea hona joale, re sebelisitse sesebelisoa sa microfluidic se nang le boholo ba kanale ea 200 µm × 20 µm (W × H), seo karolo ea sona e tšekaletseng e batlang e le haufi le ea SST e atolositsoeng. Ho phaella moo, re hlahlobile motility ea peō le boitšoaro ba agglutination mokelikeling o phallang, e leng se lumellanang le khopolo-taba ea Foreman ea hore mokelikeli o hlahisoang ke lisele tsa epithelial tsa SST o boloka peō ka har'a lumen ka tsela e fapaneng (rheological).
Sepheo sa phuputso ena e ne e le ho hlola mathata a ho bona ho tsamaya ha peō ea botona ka har'a mothapo oa fallopian le ho qoba mathata a ho ithuta rheology le boitšoaro ba peō ea botona tikolohong e fetohang. Ho sebelisitsoe sesebelisoa sa microfluidic se hlahisang khatello ea hydrostatic ho etsisa ho tsamaea ha peō ka har'a litho tsa botona tsa khoho.
Ha lerotholi la sampole ea peō e hlapolotsoeng (1:40) le ne le kenngoa ka har'a sesebelisoa sa microchannel, mefuta e 'meli ea ho tsamaea ha peō e ne e ka khetholloa (peō e arohaneng le peō e tlamiloeng). Ho phaella moo, peō e ne e sekametse ho sesa khahlanong le phallo ea metsi (rheology e ntle; video 1, 2). Leha dihlopha tsa peo ya botona di ne di le lebelo le tlase ho feta la peo ya botona e nang le bodutu (p < 0.001), di ekeditse peresente ya peo ya botona e bontshang rheotaxis e ntle (p < 0.001; Tafole ya 2). Leha dihlopha tsa peo ya botona di ne di le lebelo le tlase ho feta la peo ya botona e nang le bodutu (p < 0.001), di ekeditse peresente ya peo ya botona e bontshang rheotaxis e ntle (p < 0.001; Tafole ya 2). Хотя пучки сперматозоидов имели более низкую скорость, чем у одиночных сперматозоидов (p <0,001), они увеличивали процемант, процемали демонстрирующих положительный реотаксис (p <0,001; таблица 2). Leha dihlopha tsa spermatozoa di ne di na le lebelo le tlase ho feta la spermatozoa e le nngwe (p < 0.001), di ekeditse peresente ya spermatozoa e bontshang rheotaxis e ntle (p < 0.001; Tafole ya 2).尽管精子束的速度低于孤独精子的速度（p < 0.001），但它們增加了显示阳性流变性的羞的羅物0.001;表2).尽管 精子束 的 速度 低于 孤独 的 速度（p <0.001） , 但 增加 显示 阳性 流 玲 流 玲 流 爾(p <0.001 ; 2...."...)(())) Хотя скорость пучков сперматозоидов была ниже, чем у одиночных сперматозоидов (p <0,001), они увеличивали процент одиночных сперматозоидов (p <0,001), они увеличивали процент одиночных сперматозоидов реологией (p <0,001; таблица 2). Leha lebelo la dipakete tsa peo ya botona le ne le le tlase ho feta la spermatozoa e le nngwe (p < 0.001), ba ekeditse peresente ya spermatozoa ka rheology e ntle (p < 0.001; Tafole ya 2).Rheology e ntle bakeng sa peō e le 'ngoe le li-tuft e hakanngoa ho hoo e ka bang 53% le 85%, ka ho latellana.
Ho hlokometsoe hore peō ea botona ea likhoho tsa sharkasi hang ka mor'a ho ntša peō e etsa liphutheloana tse otlolohileng, tse nang le tse 'maloa. Li-tuft tsena lia eketseha ka bolelele le botenya ha nako e ntse e ea 'me li ka lula li le ka har'a vitro lihora tse' maloa pele li fela (video ea 3). Liphutheloana tsena tse nang le filamentous li bōpehile joaloka peō ea botona ea echidna e thehoang qetellong ea epididymis. Peō ea botona ea Sharkashi e fumanoe e e-na le tšekamelo e phahameng ea ho kopana le ho etsa sephutheloana sa reticulate ka nako e ka tlase ho motsotso o le mong kamora ho bokelloa. Mahlaseli ana aa fetoha 'me a khona ho khomarela maboteng afe kapa afe a haufi kapa lintho tse sa sisinyeheng. Le hoja liphutheloana tsa peō ea botona li fokotsa lebelo la lisele tsa peō ea botona, ho hlakile hore ka macroscopic li eketsa linearity ea tsona. Bolelele ba liphutheloana boa fapana ho latela palo ea peō ea botona e bokelletsoeng ka liphutheloana. Likarolo tse peli tsa sephutheloana li ile tsa aroloa: karolo ea pele, ho kenyeletsoa hlooho e lokolohileng ea peō ea botona e kopantsoeng, le karolo ea ho qetela, ho kenyeletsoa mohatla le pheletso eohle ea peō ea botona. Ka ho sebedisa khamera e lebelo le hodimo (950 fps), dihlooho tse lokolohileng tsa spermatozoa e kopaneng di ile tsa bonwa karolong ya pele ya sephuthelwana, di ikarabella bakeng sa motsamao wa sephuthelwana ka lebaka la motsamao wa tsona o sisinyehang, di hula tse setseng ka hara sephuthelwana ka motsamao o potolohang (Video 4). Leha ho le jwalo, di-tuft tse telele, ho hlokometswe hore dihlooho tse ding tsa spermatozoa tse lokolohileng di kgomaretse mmele mme karolo ya ho qetela ya sephuthelwana e sebetsa jwalo ka di-vane ho thusa ho tsamaisa sephuthelwana.
Leha ho le jwalo, ha dihlopha tsa peo ya botona di ntse di phalla butle, di tsamaya di bapile, leha ho le jwalo, di qala ho kopana le ho kgomarela ntho e nngwe le e nngwe e sa sisinyeheng, e le hore di se ke tsa hlatsuwa ke phallo ya motlakase ha lebelo la phallo le ntse le eketseha. Dihlopha di bopeha ha disele tse mmalwa tsa peo ya botona di atamelana, di qala ho tsamaya ka synchrony le ho phuthelana, ebe di kgomarelana le ntho e kgomarelang. Ditshwantsho tsa 1 le tsa 2 di bontsha kamoo peo ya botona e atamelanang kateng, e leng se etsang hore mehatla e phuthelane.
Bafuputsi ba sebelisitse khatello ea hydrostatic ho etsa phallo ea mokelikeli ka har'a microchannel ho ithuta rheology ea peō ea botona. Ho sebelisitsoe microchannel e nang le boholo ba 200 µm × 20 µm (W × H) le bolelele ba 3.6 µm. Sebelisa microchannels pakeng tsa lijana tse nang le li-syringe tse kentsoeng lipheletsong. Ho sebelisitsoe 'mala oa lijo ho etsa hore li-channel li bonahale haholoanyane.
Tlama dithapo tsa kgokelo le disebediswa leboteng. Video e nkilwe ka microscope ya phase contrast. Ka setshwantsho se seng le se seng, ho hlahiswa ditshwantsho tsa phase contrast le tsa 'mapa. (A) Kgokagano pakeng tsa melapo e mmedi e hanela phallo ka lebaka la motsamao wa helical (motsu o mofubedu). (B) Kgokagano pakeng tsa phase bundle le lebota la kanale (metsu e mefubedu), ka nako e le nngwe di hokahantswe le dihlopha tse ding tse pedi (metsu e tshehla). (C) Dihlopha tsa peo ya botona ka hara kanale ya microfluidic di qala ho hokahana (metsu e mefubedu), di etsa letlooeng la dihlopha tsa peo ya botona. (D) Ho thehwa ha marangrang a dihlopha tsa peo ya botona.
Ha lerotholi la peo e hlapolotsoeng le ne le kentsoe ka har'a sesebelisoa sa microfluidic 'me phallo e etsoa, ​​​​lehlaseli la peo le ile la bonoa le tsamaea khahlanong le tataiso ea phallo. Likotwana li lekana hantle maboteng a likanale tse nyane, 'me lihlooho tse lokolohileng karolong ea pele ea likotwana li lekana hantle khahlanong le tsona (video ea 5). Li boetse li khomarela likaroloana life kapa life tse sa sisinyeheng tseleng ea tsona, joalo ka lithōle, ho hanela ho hoholoa ke phallo. Ha nako e ntse e ea, likotwana tsena li fetoha likhoele tse telele tse tšoasang peo e 'ngoe e le 'ngoe le likotwana tse khutšoane (Video ea 6). Ha phallo e qala ho fokotseha, mela e melelele ea peo e qala ho theha marang-rang a mela ea peo (Video ea 7; Setšoantšo sa 2).
Ka lebelo le phahameng la phallo (V > 33 µm/s), metsamao e potolohang ea likhoele e ea eketseha e le boiteko ba ho tšoasa peō e ngata e etsang li-bundle tse hanelang matla a phallo a ho hoholeha hamolemo. Ka lebelo le phahameng la phallo (V > 33 µm/s), metsamao e potolohang ea likhoele e ea eketseha e le boiteko ba ho tšoasa peō e ngata e etsang li-bundle tse hanelang matla a phallo a ho hoholeha hamolemo. При высокой скорости потока (V > 33 мкм/с) спиралевидные движения нитей усиливаются, поскольку они пытаются поймать множество оздень образующих пучки, которые лучше противостоят дрейфующей силе потока. Ka sekhahla se phahameng sa phallo (V > 33 µm/s), metsamao e helical ea likhoele ea eketseha ha e ntse e leka ho tšoara spermatozoa tse ngata tse etsang liphutheloana tse khonang ho hanela matla a phallo a hoholeha hamolemo.在高流速(V > 33 µm/s)时，螺纹的螺旋运动增加，以试图捕捉许多形成束的单个精子，从而更好地抵抗流动的。在 高 流速 (v> 33 µm/s) 时， 的 螺旋 运动 增加 ， 以抵抗 的 漂移力。。。。. При высоких скоростях потока (V > 33 мкм/с) спиральное движение нитей увеличивается в попытке захватить множество отделььное движение нитей увеличивается в попытке захватить множество отделььное движение нитей увеличивается пучки, чтобы лучше сопротивляться силам дрейфа потока. Ka lebelo le phahameng la phallo (V > 33 µm/s), motsamao o potolohang wa di-filament o a eketseha boitekong ba ho tshwara di-spermatozoa tse ngata tse etsang di-bundle ho hanela matla a phallo hamolemo.Ba ile ba boela ba leka ho hokela dikanale tse nyane maboteng a mahlakoreng.
Dihlopha tsa peo ea botona li ile tsa khetholloa e le lihlopha tsa lihlooho tsa peo ea botona le mehatla e kobehileng ho sebelisoa microscopy e bobebe (LM). Lihlopha tsa peo ea botona tse nang le lihlopha tse fapaneng li boetse li khetholloa e le lihlooho tse sothehileng le lihlopha tsa li-flagellar, mehatla ea peo ea botona e kopantsoeng ka bongata, lihlooho tsa peo ea botona tse khomaretsoeng mohatleng, le lihlooho tsa peo ea botona tse nang le li-nuclei tse kobehileng e le li-nuclei tse ngata tse kopantsoeng. transmission electron microscopy (TEM). Scanning electron microscopy (SEM) e bontšitse hore lihlopha tsa peo ea botona e ne e le lihlopha tse koahetsoeng tsa lihlooho tsa peo ea botona 'me lihlopha tsa peo ea botona li bontšitse marang-rang a khomaretsoeng a mehatla e phuthetsoeng.
Sebopeho le sebopeho sa ultrastructure sa spermatozoa, ho thehoa ha lihlopha tsa spermatozoa ho ithutiloe ho sebelisoa microscopy e bobebe (halofo ea karolo), scanning electron microscopy (SEM) le transmission electron microscopy (TEM), sperm smears li ile tsa dauoa ka acridine orange 'me tsa hlahlojoa ho sebelisoa microscopy ea epifluorescence.
Ho tshwaya peo ka acridine orange (Setshwantsho sa 3B) ho bontshitse hore dihlooho tsa peo di ne di kgomaretswe mmoho mme di kwahetswe ka thepa e ntshang secretory, e leng se ileng sa lebisa ho thehweng ha di-tuft tse kgolo (Setshwantsho sa 3D). Dihlopha tsa peo di ne di entswe ka di-aggregate tsa peo tse nang le marangrang a mehatla e kgomaretsweng (Setshwantsho sa 4A-C). Dihlopha tsa peo di bopilwe ka mehatla ya di-spermatozoa tse ngata tse kgomaretsweng mmoho (Setshwantsho sa 4D). Diphiri (Setshwantsho sa 4E,F) di ne di kwahetse dihlooho tsa dihlopha tsa peo.
Ho thehoa ha sehlopha sa spermatozoa Ho sebelisoa microscopy ea phapang ea mekhahlelo le li-smear tsa peō tse pentiloeng ka lamunu ea acridine, ho bontšitse hore lihlooho tsa spermatozoa lia khomarelana. (A) Ho thehoa ha peō ea botona ea pele ho qala ka peō ea botona (selikalikoe se sesoeu) le peō ea botona e meraro (selikalikoe se mosehla), moo spiral e qalang mohatleng 'me e fella hloohong. (B) Fotomicrograph ea peō ea botona e pentiloeng ka lamunu ea acridine e bontšang lihlooho tsa peō ea botona tse khomarelang (metsu). Ho tsoa ha peō ho koahela hlooho/lihlooho. Ho holisa × 1000. (C) Nts'etsopele ea lehlaseli le leholo le tsamaisoang ke phallo ka har'a kanale ea microfluidic (ho sebelisoa khamera ea lebelo le phahameng ka 950 fps). (D) Micrograph ea peō ea botona e pentiloeng ka lamunu ea acridine e bontšang li-tufts tse kholo (metsu). Ho holisa: ×200.
Ho hlahloba micrograph ea elektrone ea lehlaseli la peō le smear ea peō e takiloeng ka lamunu ea acridine. (A, B, D, E) ke li-micrograph tsa elektrone tse takiloeng ka mebala ea dijithale tsa peō ea botona, 'me C le F ke li-micrograph tsa li-sperm tse takiloeng ka lamunu ea acridine tse bontšang ho khomareloa ha peō ea botona e mengata e phuthetseng lebanta la caudal. (AC) Lihlopha tsa peō ea botona li bontšoa e le marang-rang a mehatla e khomaretsoeng (metsu). (D) Ho khomarela peō ea botona e 'maloa (e nang le ntho e khomarelang, moralo o pinki, motsu) ho phuthela mohatla. (E le F) Lihlopha tsa hlooho ea peō ea botona (litšupiso) tse koahetsoeng ka thepa e khomarelang (litšupiso). Peō ea botona e entse liphutheloana tse nang le meaho e 'maloa e kang ea vortex (F). (C) ×400 le (F) ×200 ho holisa.
Ka ho sebedisa microscopy ya elektrone ya phetiso, re fumane hore dihlopha tsa peo ya botona di ne di na le mehatla e kgomaretsweng (Setshwantsho sa 6A, C), dihlooho tse kgomaretsweng mehatla (Setshwantsho sa 6B), kapa dihlooho tse kgomaretsweng mehatla (Setshwantsho sa 6D). Dihlooho tsa spermatozoa ka hara sephuthelwana di kobehile, di hlaha karolong ya bobedi ya dibaka tsa nyutlelie (Setshwantsho sa 6D). Sephuthelwaneng sa ho seha, spermatozoa e ne e na le hlooho e sothehileng e nang le dibaka tse pedi tsa nyutlelie le dibaka tse ngata tsa flagellar (Setshwantsho sa 5A).
Micrograph ea elektrone ea 'mala oa dijithale e bonts'ang mehatla e hokahanyang ka har'a sephutheloana sa peo ea botona le thepa e kopanyang e hokahanyang lihlooho tsa peo ea botona. (A) Mohatla o khomaretsoeng oa palo e kholo ea peo ea botona. Hlokomela hore na mohatla o shebahala joang liponts'ong tsa setšoantšo (motsu) le tsa naha (motsu). (B) Hlooho (motsu) ea peo ea botona e hokahane le mohatla (motsu). (C) Mehatla e 'maloa ea peo ea botona (metsu) e hokahane. (D) Thepa ea ho kopanya (AS, e putsoa) e hokahanya lihlooho tse 'ne tsa peo ea botona (pherese).
Ho hlahloba ka microscopy ea elektronike ho sebelisitsoe ho lemoha lihlooho tsa peō ea botona ka har'a li-sperm bundle tse koahetsoeng ka li-secretion kapa lera (Setšoantšo sa 6B), ho bontša hore li-sperm bundle li ne li khomaretsoe ke thepa e tsoang kantle ho naha. Thepa e kopantsoeng e ne e khomaretsoe hloohong ea peō ea botona (seboka se kang hlooho ea jellyfish; Setšoantšo sa 5B) 'me e atolosoa hole, e fana ka ponahalo e mosehla e khanyang tlas'a microscopy ea fluorescence ha e daelitsoe ka acridine orange (Setšoantšo sa 6C). Ntho ena e bonahala ka ho hlaka tlas'a microscope e skenang 'me e nkoa e le binder. Likarolo tse tšesaane hanyane (Setšoantšo sa 5C) le li-sperm smears tse daelitsoeng ka acridine orange li bontšitse li-sperm bundle tse nang le lihlooho tse teteaneng le mehatla e kobehileng (Setšoantšo sa 5D).
Lifotomicrograph tse fapaneng tse bonts'ang ho bokellana ha lihlooho tsa peo ea botona le mehatla e mennweng ho sebelisoa mekhoa e fapaneng. (A) Micrograph ea elektrone ea phetisetso ea mebala ea dijithale ea sephutheloana sa peo ea botona e bonts'ang hlooho ea peo ea botona e kobehileng e nang le nucleus ea likarolo tse peli (e putsoa) le likarolo tse 'maloa tsa flagellar (e tala). (B) Micrograph ea elektrone e hlahlobang mebala ea dijithale e bonts'ang sehlopha sa lihlooho tsa peo ea botona tse kang jellyfish (metsu) tse bonahalang li koahetsoe. (C) Karolo e tšesaane e bonts'ang lihlooho tsa peo ea botona tse kopantsoeng (metsu) le mehatla e kobehileng (metsu). (D) Micrograph ea smear ea peo e dailoeng ka acridine lamunu e bonts'ang lihlopha tsa lihlooho tsa peo ea botona (metsu) le mehatla e kobehileng e khomaretseng (metsu). Hlokomela hore ntho e khomarelang (S) e koahela hlooho ea peo ea botona. (D) × 1000 magnification.
Ka ho sebedisa microscopy ya elektrone ya phetiso (Setshwantsho sa 7A), ho ile ha boela ha hlokomelwa hore dihlooho tsa peo ya botona di ne di sothile mme di-nuclei di ne di na le sebopeho sa spiral, jwalo ka ha ho tiisitswe ke di-smear tsa peo ya botona tse daeditsweng ka lamunu ya acridine mme tsa hlahlojwa ka ho sebedisa microscopy ya fluorescence (Setshwantsho sa 7B).
(A) Micrograph ea elektrone ea phetiso ea 'mala oa dijithale le (B) Acridine orange dae sperm smear e bonts'ang lihlooho tse kobehileng le ho hokela ha lihlooho tsa peō le mehatla (metsu). (B) × 1000 gnification.
Sephetho se khahlisang ke hore peo ea botona ea Sharkazi e kopana ho etsa liphutheloana tse tsamaeang tse nang le filamentous. Litšobotsi tsa liphutheloana tsena li re lumella ho utloisisa karolo ea tsona e ka bang teng ho monyeng le ho bolokoeng ha peo ea botona ka har'a SST.
Kamora ho kopana, peo e kena ka hara botshehadi mme e feta ts'ebetsong e matla ya kgetho, e leng se fellang ka palo e fokolang feela ya peo e kenang ka hara SST15,16. Ho fihlela jwale, mekgwa eo peo e kenang le ho tswa ka yona ka hara SST ha e a hlaka. Ho dikgoho, peo e bolokwa ka hara SST nako e telele ya dibeke tse 2 ho isa ho tse 10, ho itshetlehile ka mofuta6. Phehisano e ntse e le teng mabapi le boemo ba peo nakong ya polokelo ka hara SST. Na di tsamaya kapa di phomotse? Ka mantswe a mang, disele tsa peo di boloka boemo ba tsona jwang ka hara SST nako e telele hakaale?
Forman4 o fane ka maikutlo a hore bolulo ba SST le ho ntsha peo li ka hlalosoa ho latela motsamao oa peo. Bangoli ba nahana hore peo e boloka boemo ba eona ka ho sesa khahlanong le phallo ea mokelikeli e hlahisoang ke epithelium ea SST le hore peo e ntšoa ho tsoa ho SST ha lebelo la eona le oela ka tlase ho ntlha eo e qalang ho khutlela morao ho eona ka lebaka la khaello ea matla. Zaniboni5 o tiisitse boteng ba aquaporins 2, 3, le 9 karolong ea apical ea lisele tsa epithelial tsa SST, tse ka tšehetsang mohlala oa polokelo ea peo ea Foreman ka tsela e sa tobang. Phuputsong ea hajoale, re fumane hore hoo e ka bang halofo ea spermatozoa ea Sharkashi e bontša rheology e ntle mokelikeling o phallang, 'me hore lihlopha tsa peo tse kopantsoeng li eketsa palo ea spermatozoa e bontšang rheology e ntle, leha agglutination e liehisa. Hore na lisele tsa peo li tsamaea joang ho ea fihla sebakeng sa nonyana sa ho nona ha ho utloisisoe ka botlalo. Liphoofolong tse anyesang, chemoat ea follicular fluid e hohela spermatozoa. Leha ho le joalo, ho lumeloa hore chemoattractants e tataisa spermatozoa ho atamela libaka tse telele7. Ka hona, mekhoa e meng e ikarabella bakeng sa ho tsamaisoa ha peō ea botona. Bokhoni ba peō ea botona ba ho sheba le ho phalla khahlanong le mokelikeli oa fallopian tube o lokolloang ka mor'a ho kopana ho tlalehiloe e le ntlha e kholo ho shebaneng le peō ea botona litoebeng. Parker 17 o ile a etsa tlhahiso ea hore peō ea botona e tšele maeba ka ho sesa khahlanong le phallo ea ciliary linonyana le lihahabi. Le hoja ho sa ka ha bontšoa ka liteko ho linonyana, Adolphi18 e bile oa pele ho fumana hore peō ea linonyana e fana ka liphetho tse ntle ha lera le lesesaane la mokelikeli pakeng tsa sekoahelo le slide le etsoa ka lesela la pampiri ea sefe. Rheology. Hino le Yanagimachi [19] ba behile motsoako oa ovary-tubal-uterine ea toeba ka har'a lesale la phallo 'me ba kenya 1 µl ea enke ka har'a isthmus ho bona phallo ea mokelikeli ka har'a li-tubes tsa fallopian. Ba hlokometse motsamao o mafolofolo oa ho honyela le ho phomola ka har'a tube ea fallopian, moo libolo tsohle tsa enke li neng li tsamaea butle-butle ho ea ampulla ea tube ea fallopian. Bangoli ba hatisa bohlokoa ba phallo ea mokelikeli oa tubal ho tloha tlase ho ea li-tubes tse ka holimo tsa fallopian bakeng sa ho phahamisa peō le ho emolisa. Brillard20 o tlalehile hore ho likhoho le li-turkey, spermatozoa e falla ka motsamao o mafolofolo ho tloha monyako oa botšehali, moo li bolokiloeng teng, ho ea moo li bolokoang teng. Leha ho le joalo, motsamao ona ha o hlokehe pakeng tsa moo li kopanang teng le infundibulum hobane spermatozoa e tsamaisoa ke ho falla ho sa sebetseng. Ha re tseba likhothaletso tsena tsa pele le liphetho tse fumanoeng thutong ea hona joale, ho ka nahanoa hore bokhoni ba spermatozoa ba ho fallela holimo (rheology) ke e 'ngoe ea litšobotsi tseo ts'ebetso ea khetho e thehiloeng ho tsona. Sena se etsa qeto ea ho feta ha spermatozoa ka har'a botšehali le ho kena ha tsona ho CCT bakeng sa polokelo. Joalokaha Forman4 a boletse, sena se ka boela sa nolofatsa ts'ebetso ea peō ea botona e kenang SST le sebaka sa eona sa bolulo ka nako e itseng ebe e tsoa ha lebelo la eona le qala ho fokotseha.
Ka lehlakoreng le leng, Matsuzaki le Sasanami 21 ba fane ka maikutlo a hore peō ea linonyana e fetohe liphetohong tsa motsamao ho tloha ho dormancy ho ea ho motsamaong liphatseng tsa botona le botšehali tsa banna le basali. Ho thibeloa ha motsamao oa peō ea linonyana e lulang ho SST ho hlahisitsoe ho hlalosa nako e telele ea polokelo ea peō ebe e tsosolosoa ka mor'a ho tsoa ho SST. Tlas'a maemo a hypoxia, Matsuzaki le ba bang ba tlalehile tlhahiso e phahameng le ho lokolloa ha lactate ho SST, e leng se ka lebisang ho thibeloeng ha motsamao oa peō ea linonyana e lulang ho eona. Tabeng ena, bohlokoa ba rheology ea peō bo bonahala khethong le ho monyeng ha peō ea botona, eseng polokelong ea eona.
Paterone ea ho kopana ha peō e nkoa e le tlhaloso e utloahalang bakeng sa nako e telele ea polokelo ea peō ka har'a SST, kaha ena ke mokhoa o tloaelehileng oa ho boloka peō ka har'a likhoho2,22,23. Bakst le ba bang 2 ba hlokometse hore boholo ba peō ea botona bo ile ba khomarelana, ba etsa lihlopha tse fapaneng, 'me peō ea botona e le 'ngoe e ne e sa fumanehe ka seoelo ho CCM ea likhoele. Ka lehlakoreng le leng, Wen le ba bang 24 ba bone peō ea botona e hasaneng haholo le li-tuft tse fokolang tsa peō ea botona ka har'a lumen ea SST likhoho. Ho latela lintho tsena tse hlokometsoeng, ho ka nahanoa hore tšekamelo ea ho kopana ha peō ea botona e fapana pakeng tsa linonyana le pakeng tsa peō ea botona ka har'a ejaculate e tšoanang. Ho phaella moo, Van Krey le ba bang 9 ba ile ba fana ka maikutlo a hore ho arohana ka mokhoa o sa reroang ha peō ea botona e kopantsoeng ho ikarabella bakeng sa ho kenella butle-butle ha peō ea botona ka har'a lumen ea tube ea fallopian. Ho ea ka khopolo-taba ena, peō ea botona e nang le bokhoni bo tlase ba ho kopana e lokela ho ntšoa ho SST pele. Moelelong ona, bokgoni ba peo ya botona ho kopana e ka ba ntlha e susumetsang sephetho sa tlholisano ya peo ya botona dinonyaneng tse ditshila. Ho feta moo, ha peo ya botona e kopanang e arohana nako e telele, monono o dula o le teng nako e telele.
Leha ho bokelloa ha spermatozoa le ho kopana ha tsona ka lihlopha ho bokeletsoe lithutong tse 'maloa2,22,24, ha lia hlalosoa ka botlalo ka lebaka la ho rarahana ha tlhokomelo ea tsona ea kinematic ka har'a SST. Ho entsoe boiteko bo 'maloa ba ho ithuta ho kopana ha sperm in vitro. Ho bokelloa ho hoholo empa e le ha nakoana ho bokeletsoe ha terata e tšesaane e tlosoa lerothong la peo le leketlileng. Sena se lebisa tabeng ea hore bubble e telele e hlahella lerothong, e etsisa tšoelesa ea peō. Ka lebaka la meeli ea 3D le linako tse khutšoane tsa ho omisa ka marotholi, boloko bohle bo ile ba senyeha kapele9. Phuputsong ea hona joale, re sebelisa likhoho tsa Sharkashi le li-chips tsa microfluidic, re khonne ho hlalosa hore na li-tuft tsena li thehoa joang le hore na li tsamaea joang. Lihlopha tsa peō li ile tsa thehoa hang ka mor'a ho bokelloa ha peō 'me tsa fumanoa li tsamaea ka har'a spiral, li bontša rheology e ntle ha li le teng phallong. Ho feta moo, ha li shejoa ka macroscopically, lihlopha tsa peō li bokeletsoe ho eketsa linearity ea motility ha li bapisoa le spermatozoa e arohaneng. Sena se fana ka maikutlo a hore ho kopana ha peo ea botona ho ka etsahala pele ho ho kenella ha SST le hore tlhahiso ea peo ea botona ha e felle feela sebakeng se senyenyane ka lebaka la khatello ea maikutlo joalo ka ha ho ne ho bontšitsoe pele (Tingari le Lake12). Nakong ea ho thehoa ha tuft, peo ea botona e sesa ka synchrony ho fihlela e theha kopano, ebe mehatla ea eona ea phuthelana 'me hlooho ea peo ea botona e lula e lokolohile, empa mohatla le karolo e ka thoko ea peo ea botona li khomarelana hammoho le ntho e khomarelang. Ka hona, hlooho e lokolohileng ea ligament e ikarabella bakeng sa motsamao, e hula karolo e setseng ea ligament. Ho skena microscopy ea li-elektrone tsa li-peo tsa botona ho bontšitse lihlooho tsa peo tse khomaretsoeng tse koahetsoeng ka thepa e ngata e khomarelang, ho fana ka maikutlo a hore lihlooho tsa peo ea botona li ne li khomaretsoe ka li-bundle tse phomotseng, e leng se ka 'nang sa etsahala ka mor'a ho fihla sebakeng sa polokelo (SST).
Ha smear ea peō e daelitsoe ka acridine orange, thepa ea sekhomaretsi sa kantle ho sele e potileng lisele tsa peō e ka bonoa tlas'a microscope ea fluorescent. Ntho ena e lumella liphutheloana tsa peō ho khomarela le ho khomarela holim'a libaka kapa likaroloana tse potolohileng e le hore li se ke tsa hoholeha le phallo e potolohileng. Kahoo, lintho tseo re li boneng li bontša karolo ea ho khomarela ha spermatozoa ka mokhoa oa liphutheloana tse tsamaeang. Bokhoni ba tsona ba ho sesa khahlanong le motlakase le ho khomarela libakeng tse haufi bo lumella peō ho lula nako e telele ho SST.
Rothschild25 o sebelisitse khamera ea hemocytometry ho ithuta kabo e phaphametseng ea peo ea khomo ka lerotholi la ho emisoa, a nka li-photomicrograph ka khamera e nang le axis ea optical e otlolohileng le e otlolohileng ea microscope. Liphetho li bontšitse hore spermatozoa e ne e hoheloa holim'a kamore. Bangoli ba fana ka maikutlo a hore ho ka ba le likamano tsa hydrodynamic pakeng tsa peo ea botona le bokaholimo. Ha ho nahanoa ka sena, hammoho le bokhoni ba peo ea khoho ea Sharkashi ho theha li-tuft tse khomarelang, ho ka eketsa monyetla oa hore peo ea botona e tla khomarela leboteng la SST 'me e bolokoe nako e telele.
Bccetti le Afzeliu26 ba tlalehile hore glycocalyx ea peō ea botona ea hlokahala bakeng sa ho lemoha gamete le ho kopana ha peō. Forman10 o hlokometse hore hydrolysis ea litlamo tsa α-glycosidic tse koahetsoeng ka glycoprotein-glycolipid ka ho phekola peō ea linonyana ka neuraminidase e fella ka ho fokotseha ha monono ntle le ho ama ho sisinyeha ha peō ea botona. Bangoli ba fana ka maikutlo a hore phello ea neuraminidase ho glycocalyx e sitisa ho bokella peō ea botona kopanong ea utero-botšehali, ka hona e fokotsa monono. Litemoho tsa bona li ke ke tsa hlokomoloha monyetla oa hore kalafo ea neuraminidase e ka fokotsa ho lemoha peō ea botona le ea oocyte. Forman le Engel10 ba fumane hore monono o fokotsehile ha likhoho li ne li kenngoa peō ea botona ka hare ho peō ka peō e phekoloang ka neuraminidase. Leha ho le joalo, IVF ka peō e phekoloang ka neuraminidase ha ea ka ea ama monono ha e bapisoa le likhoho tse laoloang. Bangoli ba fihletse qeto ea hore liphetoho tse koahetsoeng ke glycoprotein-glycolipid ho potoloha lera la peō li fokolitse bokhoni ba peō ea botona ho nontša ka ho sitisa ho hlophisoa ha peō ea botona sebakeng seo peō ea botona e kopanang ho sona, e leng se ileng sa eketsa tahlehelo ea peō ea botona ka lebaka la lebelo la sebaka seo peō ea botona e kopanang ho sona, empa ha se ame ho lemoha peō ea botona le lehe.
Ho di-turkey Bakst le Bauchan 11 ba fumane di-vesicle tse nyane le dikotwana tsa lera ka hara lumen ya SST mme ba hlokomela hore tse ding tsa di-granule tsena di ne di kopane le lera la peo. Bangodi ba fana ka maikutlo a hore dikamano tsena di ka kenya letsoho polokelong ya nako e telele ya spermatozoa ho SST. Leha ho le jwalo, bafuputsi ha ba a ka ba hlalosa mohlodi wa dikarolwana tsena, hore na di ntshwa ke disele tsa epithelial tsa CCT, tse hlahiswang le ho ntshwa ke sistimi ya ho ikatisa ya banna, kapa tse hlahiswang ke peo ka boyona. Hape, dikarolwana tsena di ikarabella bakeng sa ho kopana. Grützner le al27 ba tlalehile hore disele tsa epithelial tsa epididymal di hlahisa le ho ntsha protheine e itseng e hlokahalang bakeng sa ho thehwa ha dipampitshana tsa seminal tse nang le pore e le nngwe. Bangodi ba boetse ba tlaleha hore ho hasana ha dihlopha tsena ho itshetlehile ka tshebedisano ya diprotheine tsa epididymal. Nixon le al28 ba fumane hore adnexa e ntsha protheine, e leng acidic cysteine-rich osteonectin; SPARC e ameha ho thehweng ha di-tuft tsa peo ka hara di-echidnas tse kgutshwane le di-platypuses. Ho hasana ha mahlasedi ana ho amana le tahlehelo ea protheine ena.
Phuputsong ea hona joale, tlhahlobo ea sebopeho sa ultrastructural e sebelisang microscopy ea elektronike e bontšitse hore spermatozoa e khomaretse bongata bo boholo ba lintho tse teteaneng. Lintho tsena ho nahanoa hore li ikarabella bakeng sa agglutination e kopanang pakeng tsa le ho potoloha lihlooho tse khomarelang, empa ka bongata bo tlase sebakeng sa mohatla. Re nahana hore ntho ena e kopanyang e ntšoa tsamaisong ea botona ea ho ikatisa (epididymis kapa vas deferens) hammoho le peo ea botona, kaha hangata re bona peo ea botona e arohana le lymph le plasma ea peo ea botona nakong ea ho ntša peo. Ho tlalehiloe hore ha spermatozoa ea linonyana e feta ka har'a epididymis le vas deferens, li feta liphetohong tse amanang le ho hola tse tšehetsang bokhoni ba tsona ba ho tlama liprotheine le ho fumana li-glycoprotein tse amanang le plasma lemma. Ho phehella ha liprotheine tsena holim'a li-membrane tsa peo ea botona tse lulang ho SST ho bontša hore liprotheine tsena li ka susumetsa ho fumanoa ha botsitso ba lera la peo ea botona 30 le ho fumana tsoalo ea tsona 31. Ahammad le ba bang ba tlalehile hore spermatozoa e fumanoeng likarolong tse fapaneng tsa tsamaiso ea botona ea ho ikatisa (ho tloha li-testes ho ea ho distal vas deferens) e bontšitse keketseho e tsoelang pele ea ho phela tlas'a maemo a polokelo ea metsi, ho sa tsotelehe mocheso oa polokelo, 'me ho phela ha likhoho le hona hoa eketseha ka har'a li-tubes tsa fallopian kamora ho kenngoa peō ka maiketsetso.
Li-sperm tuft tsa khoho tsa Sharkashi li na le litšobotsi le mesebetsi e fapaneng le mefuta e meng e kang li-echidna, li-platypuse, litoeba tsa patsi, likhoto tsa likhama le likolobe tsa Guinea. Likhohong tsa sharkasi, ho thehoa ha li-spermatozoa ho fokolitse lebelo la tsona la ho sesa ha ho bapisoa le spermatozoa e le 'ngoe. Leha ho le joalo, li-sperm buft tsena li ekelitse peresente ea spermatozoa e nang le rheologically positive 'me tsa eketsa bokhoni ba spermatozoa ba ho its'etleha tikolohong e matla. Kahoo, liphetho tsa rona li tiisa tlhahiso ea pejana ea hore ho kopana ha peō ho SST ho amahanngoa le polokelo ea peō ea nako e telele. Re boetse re nahana hore tšekamelo ea peō ea ho etsa li-tuft e ka laola sekhahla sa tahlehelo ea peō ho SST, e leng se ka fetolang sephetho sa tlholisano ea peō. Ho ea ka khopolo-taba ena, spermatozoa e nang le bokhoni bo tlase ba ho kopana e lokolla SST pele, ha spermatozoa e nang le bokhoni bo phahameng ba ho kopana e hlahisa boholo ba bana. Ho thehoa ha li-sperm buft tsa peō ea single-pore ho molemo ebile ho ama karolelano ea motsoali le ngoana, empa ho sebelisa mokhoa o fapaneng. Ho di-echidna le di-platypuse, di-spermatozoa di hlophisitswe ka ho bapa ho eketsa lebelo la ho ya pele la lehlasedi. Dihlopha tsa di-echidna di tsamaya ka potlako ka makgetlo a mararo ho feta spermatozoa e le nngwe. Ho dumelwa hore ho thehwa ha di-peo tse jwalo tsa peo ho di-echidna ke phetoho ya ho iphetola ha dintho ho boloka puso, kaha tse tshehadi di na le boitshwaro bo bobe mme hangata di kopana le tse tona tse mmalwa. Ka hona, di-spermatozoa tse tswang diphatseng tse fapaneng tsa peo di qothisana lehlokoa ka matla bakeng sa ho nontsha lehe.
Ho bonolo ho bona spermatozoa e kopantsoeng ea likhoho tsa sharkasi ka microscopy ea phase contrast, e nkoang e le molemo hobane e lumella ho ithuta habonolo boitšoaro ba spermatozoa ka vitro. Mokhoa oo ka oona ho thehoa ha peō ea botona ho khothalletsang ho ikatisa ha likhoho tsa sharkasi o fapane le o bonoang liphoofolong tse ling tse anyesang tse emelang boitšoaro ba peō ea botona ba kopanelo joalo ka litoeba tsa patsi, moo spermatozoa e itseng e fihlang mahe, e thusang batho ba bang ba amanang ho fihlela le ho senya mahe a bona. ho ipaka. boitšoaro bo se nang boithati. Ho iketsetsa manyolo 34. Mohlala o mong oa boitšoaro ba tšebelisano-'moho ho spermatozoa o fumanoe ho litoeba tsa likhama, moo spermatozoa e ileng ea khona ho khetholla le ho kopana le spermatozoa e amanang ka ho fetisisa le liphatsa tsa lefutso le ho theha lihlopha tsa tšebelisano-'moho ho eketsa lebelo la tsona ha li bapisoa le spermatozoa e sa amaneng35.
Liphetho tse fumanoeng thutong ena ha li hanyetse khopolo-taba ea Foman ea polokelo ea nako e telele ea spermatozoa ho SWS. Bafuputsi ba tlaleha hore lisele tsa peō ea botona li ntse li tsoela pele ho tsamaea phallong ea lisele tsa epithelial tse koahelang SST ka nako e telele, 'me ka mor'a nako e itseng, mabenkele a matla a lisele tsa peō ea botona aa fokotseha, e leng se fellang ka ho fokotseha ha lebelo, e leng se lumellang ho lelekoa ha lintho tse nyenyane tse boima ba limolek'hule. Matla a spermatozoa ka phallo ea mokelikeli ho tsoa lumen ea SST. Phutuhong ea hona joale, re hlokometse hore halofo ea peō ea botona e le 'ngoe e bontšitse bokhoni ba ho sesa khahlanong le metsi a phallang, 'me ho khomarela ha tsona ka har'a sephutheloana ho ekelitse bokhoni ba tsona ba ho bontša rheology e ntle. Ho feta moo, lintlha tsa rona li lumellana le tsa Matsuzaki et al. 1 ba tlalehileng hore keketseho ea lactate secretion ho SST e ka thibela motility ea peō ea botona e lulang teng. Leha ho le joalo, liphetho tsa rona li hlalosa ho thehoa ha li-ligament tse tsamaeang tsa peō ea botona le boitšoaro ba tsona ba rheological boteng ba tikoloho e matla ka har'a microchannel ho leka ho hlakisa boitšoaro ba tsona ho SST. Diphuputso tsa nakong e tlang di ka nna tsa shebana le ho fumana hore na motsoako wa dikhemikhale le tshimoloho ya moemedi ya kopanyang ke efe, e leng se tla thusa bafuputsi ho ntshetsa pele mekgwa e metjha ya ho boloka peo e metsi le ho eketsa nako ya ho nona.
Di-sharkasi tse tona tse leshome le metso e mehlano tse se nang molala (homozygous dominant; Na Na) tse dilemo di 15 di kgethilwe ho ba bafani ba peo ya botona phuputsong ena. Dinonyana tsena di hodisitswe Polasing ya Diphuputso ya Dikhoho ya Lefapha la Temo, Yunivesithi ya Ashit, Provense ya Ashit, Egepeta. Dinonyana di ile tsa kenngwa ka hara dihoko tse arohaneng (30 x 40 x 40 cm), tsa fuwa lenaneo la lesedi (dihora tse 16 tsa lesedi le dihora tse 8 tsa lefifi) mme tsa fepuwa dijo tse nang le 160 g ya protheine e tala, 2800 kcal ya matla a ka sebediswang ho tjheswa, 35 g ya khalsiamo ka nngwe. 5 digrama tsa phosphorus e fumanehang ka kilogerama ya dijo.
Ho ya ka data ya 36, ​​​​37, peo e ile ya bokellwa ho banna ka ho sililwa ka mpeng. Disampole tse 45 tsa peo di ile tsa bokellwa ho banna ba 15 ka matsatsi a 3. Peo e tona (n = 15/letsatsi) e ile ya hlapollwa hang-hang ka 1:1 (v:v) ka Belsville Poultry Semen Diluent, e nang le potassium diphosphate (1.27 g), monosodium glutamate monohydrate (0.867 g), fructose (0.5 d) anhydrous sodium. acetate (0.43 g), tris(hydroxymethyl)aminomethane (0.195 g), potassium citrate monohydrate (0.064 g), potassium monophosphate (0.065 g), magnesium chloride (0.034 g) le H2O (100 ml), pH = 7, 5, osmolarity 333 mOsm/kg38. Disampole tsa peo e hlapolotsweng di ile tsa hlahlojwa pele ka microscope e bobebe ho netefatsa boleng bo botle ba peo (mongobo) ebe di bolokwa ka bateng ya metsi mochesong wa 37°C ho fihlela di sebediswa nakong ya halofo ya hora kamora ho di bokella.
Kinematics le rheology ea spermatozoa li hlalosoa ho sebelisoa sistimi ea lisebelisoa tsa microfluidic. Lisampole tsa peo ea botona li ile tsa qhibilihisoa ho fihlela ho 1:40 ho Beltsville Avian Semen Diluent, tsa kenngoa sesebelisoa sa microfluidic (sheba ka tlase), 'me liparamente tsa kinetic li ile tsa fumanoa ho sebelisoa sistimi ea Computerized Semen Analysis (CASA) e neng e etselitsoe pele bakeng sa tlhaloso ea microfluidics. mabapi le ho tsamaea ha spermatozoa mecheng ea metsi (Lefapha la Boenjiniere ba Mechanical, Lefapha la Boenjiniere, Univesithi ea Assiut, Egepeta). Plugin e ka jarollwa ho: http://www.assiutmicrofluidics.com/research/casa39. Lebelo la curve (VCL, μm/s), lebelo la linear (VSL, μm/s) le lebelo la karolelano la trajectory (VAP, μm/s) li ile tsa lekanngoa. Livideo tsa spermatozoa li ile tsa nkuoa ho sebelisoa microscope ea inverted Optika XDS-3 phase contrast (e nang le sepheo sa 40x) e hokahantsoeng le khamera ea Tucson ISH1000 ka 30 fps ka metsotsoana e 3. Sebelisa software ea CASA ho ithuta bonyane libaka tse tharo le litsela tsa peō tse 500 ka sampole. Video e rekotiloeng e sebetsitsoe ho sebelisoa CASA e entsoeng hae. Tlhaloso ea motility ho plug-in ea CASA e ipapisitse le lebelo la ho sesa la peō ha le bapisoa le sekhahla sa phallo, 'me ha e kenyelletse liparamente tse ling tse kang motsamao o tlohang lehlakoreng ho ea lehlakoreng, kaha sena se fumanoe se tšepahala haholoanyane phallong ea metsi. Motsamao oa rheological o hlalosoa e le motsamao oa lisele tsa peō khahlanong le tataiso ea phallo ea metsi. Spermatozoa e nang le thepa ea rheological e arotsoe ka palo ea spermatozoa e tsamaeang; spermatozoa e neng e phomotse 'me spermatozoa e tsamaeang ka mokhoa o feto-fetohang e ne e sa kenyelletsoe palong.
Lik'hemik'hale tsohle tse sebelisitsoeng li fumanoe ho Elgomhoria Pharmaceuticals (Cairo, Egepeta) ntle le haeba ho boletsoe ka tsela e 'ngoe. Sesebelisoa sena se entsoe joalo ka ha ho hlalositsoe ke El-sherry et al. 40 ka liphetoho tse ling. Lisebelisoa tse sebelisitsoeng ho etsa li-microchannel li ne li kenyelletsa lipoleiti tsa khalase (Howard Glass, Worcester, MA), SU-8-25 negative resist (MicroChem, Newton, CA), diacetone alcohol (Sigma Aldrich, Steinheim, Jeremane), le polyacetone. -184, Dow Corning, Midland, Michigan). Li-microchannel li etsoa ka ho sebelisa lithography e bonolo. Taba ea pele, maske e hlakileng e sireletsang sefahleho e nang le moralo oa microchannel o lakatsehang e ile ea hatisoa khatisong ea qeto e phahameng (Prismatic, Cairo, Egypt le Pacific Arts and Design, Markham, ON). Li-master li entsoe ka ho sebelisa lipoleiti tsa khalase e le li-substrate. Lipoleiti li ile tsa hloekisoa ka acetone, isopropanol le metsi a hloekisitsoeng ebe li koaheloa ka lera la 20 µm la SU8-25 ka ho roala ka spin (3000 rpm, 1 min). Mealo ea SU-8 e ile ea omisoa ka bonolo (65°C, metsotso e 2 le 95°C, metsotso e 10) 'me ea pepesetsoa mahlaseli a UV metsotsoana e 50. Ho baka kamora ho pepesetsoa mocheso ho 65°C le 95°C ka motsotso o le mong le metsotso e 4 ho ea ho mealo ea SU-8 e pepesehileng, e lateloe ke nts'etsopele ea joala ea diacetone metsotso e 6.5. Ho baka li-waffle ka thata (200°C metsotso e 15) ho tiisa lera la SU-8 haholoanyane.
PDMS e lokisitsoe ka ho kopanya monomer le hardener ka karolelano ea boima ba 10:1, ebe e ntšoa ka har'a vacuum desiccator 'me ea tšeloa holim'a foreimi e kholo ea SU-8. PDMS e ile ea phekoloa ka ontong (120°C, metsotso e 30), eaba likanale lia khaoloa, tsa aroloa ho master, 'me tsa phunyeletsoa ho lumella lipeipi ho hokeloa ka hare le kantle ho microchannel. Qetellong, likanale tse nyenyane tsa PDMS li ile tsa hokeloa ka ho sa feleng ho li-slide tsa microscope ho sebelisoa processor ea corona e nkehang habobebe (Electro-Technic Products, Chicago, IL) joalo ka ha ho hlalositsoe libakeng tse ling. Microchannel e sebelisitsoeng thutong ena e lekanya 200 µm × 20 µm (W × H) 'me e bolelele ba 3.6 cm.
Phallo ea mokelikeli e bakoang ke khatello ea hydrostatic ka har'a microchannel e finyelloa ka ho boloka boemo ba mokelikeli ka har'a polokelo ea metsi e kenang ka holim'a phapang ea bolelele Δh39 ka har'a polokelo ea metsi e tsoang (Setšoantšo sa 1).
moo f e leng coefficient ea khohlano, e hlalosoang e le f = C/Re bakeng sa phallo ea laminar ka har'a kanale e khutlonnetsepa, moo C e leng ntho e sa fetoheng ho latela karolelano ea aspect ratio ea kanale, L ke bolelele ba kanale e nyane, Vav ke lebelo le tloaelehileng ka har'a kanale e nyane, Dh ke bophara ba hydraulic ba kanale, g - ho potlakisa matla a khoheli. Ha ho sebelisoa equation ena, lebelo le tloaelehileng la kanale le ka baloa ho sebelisoa equation e latelang: