Mèsi paske ou te vizite Nature.com. Vèsyon navigatè w ap itilize a gen yon sipò CSS limite. Pou pi bon eksperyans lan, nou rekòmande pou w itilize yon navigatè ki ajou (oswa dezaktive Mòd Konpatibilite nan Internet Explorer). Antretan, pou asire sipò kontinyèl, nou pral rann sit la san estil ak JavaScript.
Fètilite zwazo yo depann de kapasite yo pou estoke ase espèm ki ka viv pandan yon peryòd tan pwolonje nan tib depo espèm yo (SST). Mekanis egzak la ke spermatozoyid yo itilize pou antre, rete nan, epi kite SST a rete kontwovèse. Espèm poul sharkasi yo te montre yon gwo tandans pou aglutinasyon, sa ki fòme pake filamante mobil ki gen anpil selil. Akòz difikilte pou obsève mobilite ak konpòtman spermatozoyid yo nan yon twonp falòp opak, nou te itilize yon aparèy mikwofluidik ak yon seksyon mikwokanal menm jan ak sa ki nan spermatozoyid yo pou etidye aglutinasyon ak mobilite spermatozoyid yo. Etid sa a diskite sou kijan pake espèm yo fòme, kijan yo deplase, ak wòl posib yo nan pwolonje rezidans espèm nan SST a. Nou te envestige vitès espèm ak konpòtman reyolojik lè koule likid te pwodui nan yon kanal mikwofluidik pa presyon idrostatik (vitès koule = 33 µm/s). Spermatozoyid yo gen tandans naje kont kouran an (reoloji pozitif) epi vitès pake espèmatozoyid la siyifikativman redwi konpare ak yon sèl spermatozoyid. Yo obsève pake espèm yo deplase nan yon espiral epi ogmante nan longè ak epesè pandan y ap rekrite plis espèm sèl. Yo te obsève pake espèm yo ap pwoche epi kole sou mi bò chanèl mikrofluidik yo pou evite yo pase ak yon vitès koule likid > 33 µm/s. Yo te obsève pake espèm yo ap pwoche epi kole sou mi bò chanèl mikrofluidik yo pou evite yo pase ak yon vitès koule likid > 33 µm/s. Было замечено, что пучки сперматозоидов приближаются и прилипают к боковым стенкидов приближаются каналов, чтобы избежать сметания со скоростью потока жидкости> 33 мкм / с. Yo obsève pake espèm yo apwoche epi kole sou mi bò chanèl mikrofluidik yo pou evite yo ale nan vitès koule likid >33 µm/s.观察到精子束接近并粘附在微流体通道的侧壁上，以避免被流体流速在微流体通道的侧壁上，以避免被流体流速> 33流速> 33 怉µ迫33 µm/s 扫过。 Было замечено, что пучки сперматозоидов приближаются и прилипают к боковым стендокрам ближаются канала, чтобы избежать сметания потоком жидкости со скоростью > 33 мкм/с. Yo obsève pake espèm yo apwoche epi kole sou mi bò kanal mikrofluidik la pou evite pou koule likid la >33 µm/s pote yo ale.Mikwoskòp elektwonik optik ak transmisyon te revele ke pake espèm yo te sipòte pa yon materyèl dans an abondans. Done yo jwenn yo demontre mobilite inik spermatozoyid poul Sharkazi a, ansanm ak kapasite spermatozoyid yo pou yo aglutine epi fòme pake mobil, sa ki kontribye nan yon pi bon konpreyansyon sou depo spermatozoyid alontèm nan SMT.
Pou moun ak pifò bèt ka fè fekondasyon, espèm ak ze dwe rive nan plas fekondasyon an nan bon moman an. Se poutèt sa, kwazman dwe fèt anvan oswa nan moman ovulasyon an. Yon lòt bò, gen kèk mamifè, tankou chen, ansanm ak espès ki pa mamifè, tankou ensèk, pwason, reptil ak zwazo, ki estoke espèm nan ògàn repwodiktif yo pandan yon peryòd tan pwolonje jiskaske ze yo pare pou fekondasyon (fekondasyon asenkron 1 ). Zwazo yo kapab kenbe viabilité spermatozoyid ki kapab fekonde ze pandan 2-10 semèn 2 .
Sa a se yon karakteristik inik ki distenge zwazo yo ak lòt bèt yo, paske li bay yon gwo pwobabilite pou fètilizasyon apre yon sèl enseminasyon pandan plizyè semèn san kwazman ak ovulasyon similtane. Ògàn prensipal depo espèm nan, yo rele tib depo espèm (SST), sitiye nan pli mikez entèn yo nan jonksyon uterovajinal la. Jiska prezan, mekanis ki itilize pou antre, rete, epi soti nan bank espèm nan poko byen konprann. Baze sou etid anvan yo, yo te prezante anpil ipotèz, men yo pa ko konfime okenn nan yo.
Forman4 te fè ipotèz ke spermatozoyid yo kenbe rezidans yo nan kavite SST a atravè mouvman osilatwa kontinyèl kont direksyon koule likid la atravè chanèl pwoteyin ki sitiye sou selil epitelyal SST yo (reoloji). ATP a diminye akòz aktivite flagelè konstan ki nesesè pou kenbe espèm nan nan lumen SST a epi mobilite evantyèlman diminye jiskaske espèm yo pote soti nan bank espèm nan pa koule likid epi yo kòmanse yon nouvo vwayaj desann twonp falòp k ap monte a pou fekonde espèm nan. Ze (Forman4). Modèl depo espèm sa a sipòte pa deteksyon pa imunositochimik akwaporin 2, 3 ak 9 ki prezan nan selil epitelyal SST yo. Jiska prezan, etid sou reoloji espèm poul ak wòl li nan depo SST, seleksyon espèm vajinal, ak konpetisyon espèm yo manke. Nan poul, espèm antre nan vajen an apre kwazman natirèl, men plis pase 80% nan spermatozoyid yo soti nan vajen an yon ti tan apre kwazman. Sa sijere ke vajen an se sit prensipal pou seleksyon espèm nan zwazo yo. Anplis de sa, yo rapòte ke mwens pase 1% nan espèmatozoyid ki fètilize nan vajen an fini nan SST2. Nan enseminasyon atifisyèl poul nan vajen an, kantite espèmatozoyid ki rive nan SST gen tandans ogmante 24 èdtan apre enseminasyon. Jiskaprezan, mekanis seleksyon espèmatozoyid pandan pwosesis sa a pa klè, epi mobilite espèmatozoyid la ka jwe yon wòl enpòtan nan absòpsyon espèmatozoyid SST. Akòz miray epè ak opak twonp tronp yo, li difisil pou kontwole dirèkteman mobilite espèmatozoyid nan twonp tronp zwazo yo. Se poutèt sa, nou manke konesans debaz sou kijan espèmatozoyid yo fè tranzisyon an nan SST apre fekondasyon.
Dènyèman, yo rekonèt reoloji kòm yon faktè enpòtan ki kontwole transpò espèm nan ògàn jenital mamifè yo. Baze sou kapasite spermatozoyid motil yo pou migre kont kouran, Zaferani et al8 te itilize yon sistèm mikrofluidik corra pou izole pasivman spermatozoyid motil nan echantiyon espèm ki nan pak. Kalite klasman espèm sa a esansyèl pou tretman medikal pou lakòz lakòz pwoblèm enfètilite ak rechèch klinik, epi li pi pito pase metòd tradisyonèl yo ki pran anpil tan ak travay epi ki ka konpwomèt mòfoloji ak entegrite estriktirèl espèm. Sepandan, jiska prezan, pa gen okenn etid ki fèt sou efè sekresyon ki soti nan ògàn jenital poul yo sou mobilite espèm.
Kèlkeswa mekanis ki kenbe espèm yo estoke nan SST a, anpil chèchè obsève ke spermatozoyid rezidan yo aglutine tèt-a-tèt nan SST poul 9, 10, kay 2, ak kodenn 11 pou fòme pake espèm aglutine. Otè yo sijere ke gen yon lyen ant aglutinasyon sa a ak depo alontèm spermatozoyid nan SST a.
Tingari ak Lake12 te rapòte yon gwo asosyasyon ant spermatozoyid ki nan glann poul ki resevwa espèm nan epi yo te kesyone si spermatozoyid zwazo yo aglutine menm jan ak spermatozoyid mamifè yo. Yo kwè ke koneksyon pwofon ki genyen ant espèm nan kanal deferan an ka akòz estrès ki koze pa prezans yon gwo kantite espèm nan yon ti espas.
Lè y ap evalye konpòtman espèmatozoyid yo sou lam vè fre ki pandye, yo ka wè siy aglutinasyon pasajè, sitou nan kwen gout espèm yo. Sepandan, aglutinasyon an te souvan deranje pa aksyon wotasyonèl ki asosye avèk mouvman kontinyèl la, sa ki eksplike nati pasajè fenomèn sa a. Chèchè yo te remake tou ke lè yo te ajoute diluan an nan espèm nan, agregasyon selil ki long "tankou fil" te parèt.
Premye tantativ pou imite yon spermatozoyid yo te fèt lè yo te retire yon fil mens nan yon gout ki pandye, sa ki te lakòz yon vesikil long ki sanble ak yon espèm ki te soti nan gout espèm nan. Spermatozoyid yo te aliyen imedyatman nan yon fason paralèl andedan vesikil la, men tout inite a te disparèt byen vit akòz limitasyon 3D a. Se poutèt sa, pou etidye aglutinasyon spermatozoyid, li nesesè pou obsève mobilite ak konpòtman spermatozoyid yo dirèkteman nan tibul depo espèm izole yo, sa ki difisil pou reyalize. Se poutèt sa, li nesesè pou devlope yon enstriman ki imite spermatozoyid pou sipòte etid sou mobilite ak konpòtman aglutinasyon espèm. Brillard et al13 te rapòte ke longè mwayèn tibul depo espèm nan ti poul adilt se 400-600 µm, men kèk SST ka rive jiska 2000 µm. Mero ak Ogasawara14 te divize glann seminifè yo an tibul depo espèm ki elaji ak ki pa elaji, tou de te menm longè (~500 µm) ak lajè kou (~38 µm), men dyamèt mwayèn limen tibul yo te 56.6 ak 56.6 µm. , respektivman 11.2 μm, respektivman. Nan etid aktyèl la, nou te itilize yon aparèy mikrofluidik ak yon gwosè kanal 200 µm × 20 µm (L × H), ki gen seksyon kwa a yon ti jan pre ak sa ki nan SST anplifye a. Anplis de sa, nou te egzamine mobilite espèm ak konpòtman aglutinasyon nan likid k ap koule, ki konsistan avèk ipotèz Foreman an ki di likid ki pwodui pa selil epitelyal SST yo kenbe espèm nan limen an nan yon direksyon kontkouran (reolojik).
Objektif etid sa a se te pou simonte pwoblèm pou obsève mobilite espèm nan twonp falòp la epi pou evite difikilte pou etidye reoloji ak konpòtman espèm nan yon anviwònman dinamik. Yo te itilize yon aparèy mikrofluidik ki kreye presyon idrostatik pou simile mobilite espèm nan pati jenital yon poul.
Lè yo te mete yon gout echantiyon espèm dilye (1:40) nan aparèy mikwochanèl la, yo te kapab idantifye de kalite mobilite espèm (espèm izole ak espèm mare). Anplis de sa, spermatozoyid yo te gen tandans naje kont kouran an (reoloji pozitif; videyo 1, 2). Malgre ke pake espèm yo te gen pi ba vitès pase espèm solitè yo (p < 0.001), yo te ogmante pousantaj espèm ki te montre retotaksi pozitif (p < 0.001; Tablo 2). Malgre ke pake espèm yo te gen pi ba vitès pase espèm solitè yo (p < 0.001), yo te ogmante pousantaj espèm ki te montre retotaksi pozitif (p < 0.001; Tablo 2). Хотя пучки сперматозоидов имели более низкую скорость, чем у одиночных сперматочных сперматозо1 (), 0, низкую скорость увеличивали процент сперматозоидов, демонстрирующих положительный реотаксис (p < 0,001; цтал). Malgre ke pake spermatozoyid yo te gen yon vitès pi ba pase vitès spermatozoyid endividyèl yo (p < 0.001), yo te ogmante pousantaj spermatozoyid ki te montre reotaksi pozitif (p < 0.001; Tablo 2).尽管精子束的速度低于孤独精子的速度（p < 0.001），但它们增加了显示阳性流变性的精子百分比（p < 0.001；表2）。尽管 精子束 的 速度 低于 孤独 的 速度 （p <0.001） ， 但 增加 了 显礏 昳怏 昳怏 昳怏百分比 （p <0.001 ； 2。。。。。。）））））） Хотя скорость пучков сперматозоидов была ниже, чем у одиночных сперматозоидов (p < 0,001), процент сперматозоидов с положительной реологией (p < 0,001; таблица 2). Malgre vitès pake espèm yo te pi ba pase vitès yon sèl spermatozoid (p < 0.001), yo te ogmante pousantaj spermatozoid ki gen reoloji pozitif (p < 0.001; Tablo 2).Yo estime reoloji pozitif pou yon sèl spermatozoid ak touf yo a apeprè 53% ak 85% respektivman.
Yo obsève ke spermatozoyid poul sharkashi yo fòme pake lineyè touswit apre ejakulasyon, ki gen plizyè douzèn espèm. Touf sa yo ogmante nan longè ak epesè sou tan epi yo ka rete in vitro pandan plizyè èdtan anvan yo disparèt (videyo 3). Pake filamanteu sa yo gen fòm spermatozoyid ekidna ki fòme nan fen epididim lan. Yo jwenn espèm poul Sharkashi gen yon gwo tandans pou aglutine epi fòme yon pake retikile nan mwens pase yon minit apre yo fin kolekte li. Rezo sa yo dinamik epi yo kapab kole sou nenpòt mi ki tou pre oswa objè estatik. Malgre ke pake espèm yo diminye vitès selil espèm yo, li klè ke makroskopikman yo ogmante linearite yo. Longè pake yo varye selon kantite espèm yo kolekte nan pake yo. Yo te izole de pati nan pake a: pati inisyal la, ki gen ladan tèt lib espèm aglutine a, ak pati tèminal la, ki gen ladan ke a ak tout bout distal espèm nan. Lè l sèvi avèk yon kamera gwo vitès (950 fps), yo te obsève tèt espèmatozoyid aglutine ki te lib nan pati inisyal pake a. Yo responsab mouvman pake a akòz mouvman osilatwa yo, yo trennen rès yo nan pake a avèk yon mouvman elikoid (Videyo 4). Sepandan, nan touf long yo, yo te obsève ke kèk tèt espèmatozoyid lib te kole sou kò a epi pòsyon tèminal touf la aji kòm palèt pou ede pouse touf la.
Pandan yon likid ap koule dousman, pake espèm yo deplase paralèl youn ak lòt, sepandan, yo kòmanse sipèpoze epi kole sou tout sa ki rete an plas, pou yo pa lave pa koule kouran an pandan vitès koule a ap ogmante. Pake yo fòme lè yon ti ponyen selil espèm pwoche youn ak lòt, yo kòmanse deplase an senkronizasyon epi vlope youn otou lòt, epi answit kole sou yon sibstans kolan. Figi 1 ak 2 montre kijan espèm yo pwoche youn ak lòt, fòme yon jonksyon pandan ke yo vlope youn otou lòt.
Chèchè yo te aplike presyon idrostatik pou kreye yon koule likid nan yon mikwokanal pou etidye reoloji espèm. Yo te itilize yon mikwokanal ki gen yon gwosè 200 µm × 20 µm (L × H) ak yon longè 3.6 µm. Sèvi ak mikwokanal ant resipyan yo ak sereng ki tache nan bout yo. Yo te itilize koloran manje pou fè kanal yo pi vizib.
Mare kab koneksyon yo ak akseswa yo nan miray la. Videyo a te pran ak yon mikwoskòp kontras faz. Avèk chak imaj, yo prezante imaj mikwoskòp kontras faz ak imaj katografi. (A) Koneksyon ant de kouran yo reziste koule a akòz mouvman elikoidal (flèch wouj). (B) Koneksyon ant pake tib la ak miray kanal la (flèch wouj), an menm tan yo konekte ak de lòt pake (flèch jòn). (C) Pake espèm nan kanal mikwofluidik la kòmanse konekte youn ak lòt (flèch wouj), fòme yon may pake espèm. (D) Fòmasyon yon rezo pake espèm.
Lè yo te mete yon gout espèm dilye nan aparèy mikwofluidik la epi yo te kreye yon koule, yo te obsève ke faisceau espèm nan t ap deplase nan sans kont direksyon koule a. Fasil yo byen anfòm kont mi mikwokanal yo, epi tèt lib ki nan pati inisyal fasil yo byen anfòm kont yo (videyo 5). Yo kole tou sou nenpòt patikil estasyonè sou chemen yo, tankou debri, pou reziste kont kouran an ap pote yo ale. Avèk letan, touf sa yo vin tounen filaman long ki pran lòt spermatozoyid endividyèl ak touf ki pi kout (Videyo 6). Pandan koule a kòmanse ralanti, liy long espèm yo kòmanse fòme yon rezo liy espèm (Videyo 7; Figi 2).
Lè vitès koule a wo (V > 33 µm/s), mouvman espiral fil yo ogmante kòm yon tantativ pou kenbe anpil espèm endividyèl k ap fòme pake pou pi byen reziste fòs derive koule a. Lè vitès koule a wo (V > 33 µm/s), mouvman espiral fil yo ogmante kòm yon tantativ pou kenbe anpil espèm endividyèl k ap fòme pake pou pi byen reziste fòs derive koule a. При высокой скорости потока (V > 33 мкм/с) спиралевидные движения нитей усиливаются, постольпы постоньпы поймать множество отдельных сперматозоидов, образующих пучки, которые лучше протюфитевой силе потока. Nan vitès koule ki wo (V > 33 µm/s), mouvman elikoidal fil yo ogmante pandan y ap eseye kenbe anpil spermatozoid endividyèl pou fòme pake ki pi byen kapab reziste fòs derive koule a.在高流速(V > 33 µm/s)时，螺纹的螺旋运动增加，以试图捕捉许多形成束的单个精子，从而更好地抵抗流动的漂移力。在 高 流速 (v> 33 µm/s) 时 ， 的 螺旋 运动 增加 ， 以 试图 许多 形成 束 形成 束 形 束 动 增加 ，从而 更 地 抵抗 的 漂移力。。。。。。。。。。 При высоких скоростях потока (V > 33 мкм/с) спиральное движение нитей увеличивается в потьтхтка множество отдельных сперматозоидов, образующих пучки, чтобы лучше сопротивлше сопротивлятьа содматозоидов. Nan vitès koule ki wo (V > 33 µm/s), mouvman elikoidal filaman yo ogmante nan yon tantativ pou kaptire anpil pake spermatozoid endividyèl ki fòme pou pi byen reziste fòs derive koule a.Yo te eseye tou tache mikrochanèl sou mi bò yo.
Yo te idantifye pake espèm yo kòm gwoup tèt espèm ak ke ki pliye lè l sèvi avèk mikwoskòp optik (LM). Yo te idantifye tou pake espèm ak divès agregasyon kòm tèt trese ak agregasyon flagelè, plizyè ke espèm kole, tèt espèm tache ak yon ke, ak tèt espèm ak nwayo koube kòm plizyè nwayo kole. mikwoskòp elektwonik transmisyon (TEM). Mikwoskòp elektwonik optik (SEM) te montre ke pake espèm yo te agregasyon tèt espèm ki anvlope epi agregasyon espèm yo te montre yon rezo ke vlope ki tache.
Yo te etidye mòfoloji ak ultrastrikti spermatozoyid yo, fòmasyon pake spermatozoyid yo lè l sèvi avèk mikwoskòp optik (demi seksyon), mikwoskòp elektwonik optik (SEM) ak mikwoskòp elektwonik transmisyon (TEM), yo te kolore froti espèm yo ak zoranj akridin epi yo te egzamine yo lè l sèvi avèk mikwoskòp epifluoresans.
Kolorasyon espèm ak zoranj akidin (Fig. 3B) te montre ke tèt espèm yo te kole ansanm epi kouvri ak materyèl sekretè, sa ki te mennen nan fòmasyon gwo touf (Fig. 3D). Pake espèm yo te konpoze de agregasyon espèm ak yon rezo ke tache (Fig. 4A-C). Pake espèm yo konpoze de ke anpil spermatozoyid ki kole ansanm (Fig. 4D). Sekrè (Fig. 4E,F) te kouvri tèt pake espèm yo.
Fòmasyon pake espèmatozoyid la Lè yo te itilize mikwoskopi kontras faz ak echantiyon espèm ki te kolore ak zoranj akridin, yo te montre ke tèt espèmatozoyid yo kole ansanm. (A) Fòmasyon touf espèm byen bonè a kòmanse avèk yon espèm (sèk blan) ak twa espèm (sèk jòn), avèk espiral la kòmanse nan ke a epi li fini nan tèt la. (B) Mikwofoto yon echantiyon espèm ki te kolore ak zoranj akridin ki montre tèt espèm ki kole ansanm (flèch). Egzeyat la kouvri tèt(yo). Agrandisman × 1000. (C) Devlopman yon gwo bout espèm ki transpòte pa koule nan yon kanal mikwofluidik (lè l sèvi avèk yon kamera gwo vitès a 950 fps). (D) Mikwofoto yon echantiyon espèm ki te kolore ak zoranj akridin ki montre gwo touf (flèch). Agrandisman: ×200.
Mikwograf elektwonik optik yon faisceau espèm ak yon froti espèm kolore ak zoranj akridin. (A, B, D, E) se mikwograf elektwonik optik koulè dijital nan spermatozoyid, epi C ak F se mikwograf froti espèm kolore ak zoranj akridin ki montre atachman plizyè spermatozoyid ki vlope twal kodal la. (AC) Agregasyon espèm yo montre kòm yon rezo ke tache (flèch). (D) Adezyon plizyè spermatozoyid (ak sibstans adezif, kontou woz, flèch) ki vlope otou ke a. (E ak F) Agregasyon tèt espèm (pwent) kouvri ak materyèl adezif (pwent). Spermatozoyid yo te fòme pake ak plizyè estrikti ki sanble ak toubiyon (F). (C) Agrandisman ×400 ak (F) ×200.
Lè nou te itilize mikwoskòp elektwonik transmisyon, nou te jwenn ke pake espèm yo te gen ke tache (Fig. 6A, C), tèt tache ak ke (Fig. 6B), oubyen tèt tache ak ke (Fig. 6D). Tèt spermatozoyid yo nan pake a koube, prezante nan seksyon de rejyon nikleyè (Fig. 6D). Nan pake ensizyon an, spermatozoyid yo te gen yon tèt trese ak de rejyon nikleyè ak plizyè rejyon flagelè (Fig. 5A).
Mikwografi elektwonik koulè dijital ki montre ke koneksyon yo nan pake espèm nan ak materyèl aglutinan ki konekte tèt espèm yo. (A) Ke yon gwo kantite spermatozoyid ki tache. Remake kijan ke a sanble nan pwojeksyon pòtrè (flèch) ak peyizaj (flèch). (B) Tèt espèm nan (flèch) konekte ak ke a (flèch). (C) Plizyè ke espèm (flèch) tache. (D) Materyèl aglutinan (AS, ble) konekte kat tèt espèm (vyolèt).
Yo te itilize mikwoskòp elektwonik optik pou detekte tèt espèm nan pake espèm ki kouvri ak sekresyon oswa manbràn (Figi 6B), sa ki endike ke pake espèm yo te ankre pa materyèl ekstraselilè. Materyèl aglutine a te konsantre nan tèt espèm nan (asanblaj ki sanble ak tèt mediz; Fig. 5B) epi li te elaji distalman, sa ki te bay yon aparans jòn briyan anba mikwoskòp fliyoresans lè yo te kolore l ak zoranj akridin (Fig. 6C). Sibstans sa a vizib klèman anba yon mikwoskòp optik epi yo konsidere li kòm yon lyan. Seksyon semi-mens (Fig. 5C) ak froti espèm ki te kolore ak zoranj akridin te montre pake espèm ki gen tèt byen chaje ak ke ki pliye (Fig. 5D).
Plizyè mikrofoto ki montre agregasyon tèt espèm ak ke ki pliye yo lè l sèvi avèk divès metòd. (A) Mikwofoto elektwonik transmisyon koulè dijital kwa-seksyonèl yon pake espèm ki montre yon tèt espèm ki vlope ak yon nwayo an de pati (ble) ak plizyè pati flagelè (vèt). (B) Mikwofoto elektwonik eskanè koulè dijital ki montre yon gwoup tèt espèm ki sanble ak meduz (flèch) ki sanble kouvri. (C) Seksyon semi-mens ki montre tèt espèm ki rasanble (flèch) ak ke ki pliye (flèch). (D) Mikwofoto yon froti espèm ki kolore ak zoranj akridin ki montre agregasyon tèt espèm (flèch) ak ke adezif ki pliye (flèch). Remake byen ke yon sibstans kolan (S) kouvri tèt spermatozoyid la. (D) Agrandisman × 1000.
Lè yo te itilize mikwoskòp elektwonik transmisyon (Fig. 7A), yo te note tou ke tèt espèm yo te trese epi nwayo yo te gen yon fòm espiral, jan froti espèm yo te kolore ak zoranj akridin epi yo te egzamine lè l sèvi avèk mikwoskòp fliyoresans (Fig. 7B) te konfime sa.
(A) Mikwografi elektwonik transmisyon koulè dijital ak (B) Froti espèm kolore ak zoranj akridin ki montre tèt ki vlope ak atachman tèt ak ke espèm yo (flèch). (B) Agrandisman × 1000.
Yon dekouvèt enteresan se ke espèm Sharkazi yo rasanble ansanm pou fòme pake filamante mobil. Pwopriyete pake sa yo pèmèt nou konprann wòl posib yo nan absòpsyon ak depo espèmatozoyid nan SST a.
Apre kwazman, espèm nan antre nan vajen an epi sibi yon pwosesis seleksyon entans, sa ki lakòz sèlman yon kantite limite espèm ki antre nan SST a15,16. Jiska prezan, mekanis ki fè espèm yo antre epi sòti nan SST a pa klè. Nan bèt volay, espèmatozoyid yo estoke nan SST a pou yon peryòd pwolonje de 2 a 10 semèn, tou depann de espès la6. Toujou gen kontwovèsi sou kondisyon espèm nan pandan depo nan SST a. Èske yo an mouvman oswa an repo? Nan lòt mo, kijan selil espèm yo kenbe pozisyon yo nan SST a pou yon tan konsa?
Forman4 te sigjere ke rezidans ak ejeksyon SST a te kapab eksplike an tèm de mobilite espèm. Otè yo fè ipotèz ke espèm kenbe pozisyon yo lè yo naje kont koule likid ki kreye pa epitelyòm SST a epi ke espèm yo ejete soti nan SST a lè vitès yo desann anba pwen kote yo kòmanse deplase bak akòz mank enèji. Zaniboni5 te konfime prezans akwaporin 2, 3, ak 9 nan pòsyon apikal selil epitelyal SST yo, ki ka sipòte modèl depo espèm Foreman an endirèkteman. Nan etid aktyèl la, nou te jwenn ke prèske mwatye nan espèmatozoyid Sharkashi yo montre reoloji pozitif nan likid k ap koule a, epi ke pake espèm aglutine ogmante kantite espèmatozoyid ki montre reoloji pozitif, byenke aglutinasyon ralanti yo. Kijan selil espèm yo vwayaje nan twonp falòp zwazo a pou rive nan sit fekondasyon an poko byen konprann. Nan mamifè yo, likid folikilè a atire espèmatozoyid. Sepandan, yo kwè ke pwodui chemoatraktif yo dirije espèmatozoyid yo pou yo pwoche sou long distans7. Se poutèt sa, gen lòt mekanis ki responsab pou transpò espèm. Yo rapòte ke kapasite espèm pou oryante epi koule kont likid twonp falòp ki libere apre kwazman an se yon faktè enpòtan nan vize espèm nan sourit. Parker 17 te sigjere ke spermatozoyid yo travèse oviduk yo lè yo naje kont kouran siliyè a nan zwazo ak reptil. Malgre ke yo pa t demontre sa eksperimantalman nan zwazo, Adolphi18 te premye moun ki te jwenn ke espèm zwazo bay rezilta pozitif lè yo kreye yon kouch likid mens ant yon kouvèti ak yon lam ak yon teren papye filtè. Reoloji. Hino ak Yanagimachi [19] te mete yon konplèks ovè-twonp-uterin sourit nan yon bag pèfizyon epi yo te enjekte 1 µl lank nan istm nan pou yo te ka wè koule likid nan twonp falòp yo. Yo te remake yon mouvman trè aktif kontraksyon ak detant nan twonp falòp la, kote tout boul lank yo t ap deplase piti piti nan direksyon anpul twonp falòp la. Otè yo mete aksan sou enpòtans koule likid twonp ki soti nan twonp falòp ki pi ba yo pou rive nan twonp falòp ki anwo yo pou leve espèm ak fètilizasyon. Brillard20 rapòte ke nan poul ak kodenn, spermatozoyid yo migre pa mouvman aktif soti nan antre vajinal la, kote yo estoke yo, rive nan jonksyon utero-vajinal la, kote yo estoke yo. Sepandan, mouvman sa a pa nesesè ant jonksyon utero-vajinal la ak enfundibulum nan paske spermatozoyid yo transpòte pa deplasman pasif. Lè nou konnen rekòmandasyon sa yo anvan yo ak rezilta yo jwenn nan etid aktyèl la, nou ka sipoze ke kapasite spermatozoyid yo pou yo deplase an amon (reoloji) se youn nan pwopriyete sou ki pwosesis seleksyon an baze. Sa detèmine pasaj spermatozoyid yo nan vajinal la ak antre yo nan CCT a pou depo. Jan Forman4 te sijere a, sa ka fasilite tou pwosesis pou spermatozoyid antre nan SST a ak abita li pou yon peryòd tan epi sòti lè vitès yo kòmanse ralanti.
Yon lòt bò, Matsuzaki ak Sasanami 21 te sigjere ke spermatozoyid zwazo yo sibi chanjman mobilite soti nan dòmans rive nan mobilite nan aparèy repwodiktif gason ak fi yo. Yo te pwopoze inibisyon mobilite espèm rezidan nan SST a pou eksplike tan depo espèm ki long epi apre sa rajenisman an apre yo fin kite SST a. Anba kondisyon ipoksik, Matsuzaki et al. 1 te rapòte yon gwo pwodiksyon ak liberasyon laktat nan SST a, sa ki ka mennen nan inibisyon mobilite espèm rezidan. Nan ka sa a, enpòtans reoloji espèm nan reflete nan seleksyon ak absòpsyon espèm yo, epi non pa nan depo yo.
Modèl aglutinasyon espèm nan konsidere kòm yon eksplikasyon kredib pou peryòd depo espèm ki long nan SST a, paske sa a se yon modèl komen nan retansyon espèm nan bèt volay2,22,23. Bakst et al. 2 te obsève ke pifò spermatozoyid yo te kole youn ak lòt, fòme agregasyon fasikilè, epi yo te raman jwenn yon sèl spermatozoyid nan CCM kayil. Nan lòt men an, Wen et al. 24 te obsève plis spermatozoyid gaye ak mwens touf spermatozoyid nan limen SST a nan poul yo. Baze sou obsèvasyon sa yo, nou ka sipoze ke tandans pou aglutinasyon espèm diferan ant zwazo ak ant spermatozoyid nan menm ejakulasyon an. Anplis de sa, Van Krey et al. 9 te sijere ke disosyasyon o aza spermatozoyid aglutine yo responsab pou pénétrasyon gradyèl spermatozoyid yo nan limen twonp tronp lan. Dapre ipotèz sa a, spermatozoyid ki gen pi ba kapasite aglutinasyon yo ta dwe ekspilse nan SST a an premye. Nan kontèks sa a, kapasite espèmatozoyid yo pou yo aglutine kapab yon faktè ki enfliyanse rezilta konpetisyon espèm nan zwazo sal yo. Anplis de sa, plis tan espèm aglutine a disosye, se plis tan fètilite a konsève.
Malgre ke yo te obsève agregasyon espèm ak agregasyon an pake nan plizyè etid2,22,24, yo pa ko dekri yo an detay akòz konpleksite obsèvasyon sinematik yo nan SST a. Yo te fè plizyè tantativ pou etidye aglutinasyon espèm in vitro. Yo te obsève yon agregasyon vaste men pasajè lè yo te retire fil mens lan nan gout grenn ki pandye a. Sa mennen nan lefèt ke yon ti boul long soti nan gout la, li imite glann seminal la. Akòz limitasyon 3D ak tan siye degoute kout, tout blòk la te byen vit tonbe nan dega9. Nan etid aktyèl la, lè nou te itilize poul Sharkashi ak chip mikrofluidik, nou te kapab dekri kijan touf sa yo fòme ak kijan yo deplase. Pake espèm yo te fòme imedyatman apre koleksyon espèm epi yo te jwenn yo deplase nan yon espiral, ki montre yon reoloji pozitif lè yo prezan nan koule a. Anplis de sa, lè yo gade makroskopikman, yo te obsève pake espèm yo ogmante linearite mobilite konpare ak espèm izole yo. Sa sijere ke aglutinasyon espèm ka rive anvan pénétration SST a epi pwodiksyon espèm pa limite a yon ti zòn akòz estrès jan yo te sijere deja (Tingari ak Lake12). Pandan fòmasyon touf espèm yo, spermatozoyid yo naje an senkronizasyon jiskaske yo fòme yon jonksyon, answit ke yo vlope youn otou lòt epi tèt spermatozoyid la rete lib, men ke a ak pati distal spermatozoyid la kole ansanm ak yon sibstans kolan. Se poutèt sa, tèt lib ligaman an responsab mouvman an, li trennen rès ligaman an. Mikwoskopi elektwonik optik nan pake espèm yo te montre tèt espèm tache ki kouvri ak yon anpil materyèl kolan, sa ki sijere ke tèt espèm yo te tache nan pake repoze, ki te ka rive apre yo te fin rive nan sit depo a (SST).
Lè yo kolore yon froti espèm ak zoranj akridin, yo ka wè materyèl adezif ekstraselilè ki antoure selil espèm yo anba yon mikwoskòp fliyoresan. Sibstans sa a pèmèt pake espèm yo kole epi kole sou nenpòt sifas oswa patikil ki antoure yo pou yo pa derive ak koule ki antoure a. Kidonk, obsèvasyon nou yo montre wòl adezyon espèmatozoyid sou fòm pake mobil. Kapasite yo pou naje kont kouran an epi kole sou sifas ki toupre yo pèmèt espèm yo rete pi lontan nan SST a.
Rothschild25 te itilize yon kamera emositometri pou etidye distribisyon espèm bovin k ap flote nan yon gout sispansyon, li te pran fotomikwografi atravè yon kamera ki gen tou de aks optik vètikal ak orizontal nan mikwoskòp la. Rezilta yo te montre ke spermatozoyid yo te atire pa sifas chanm lan. Otè yo sijere ke ka gen entèraksyon idrodinamik ant espèm nan ak sifas la. Lè nou pran sa an kont, ansanm ak kapasite espèm poul Sharkashi pou fòme touf kolan, sa ka ogmante chans pou espèm nan kole sou miray SST a epi li estoke pandan yon bon bout tan.
Bccetti ak Afzeliu26 te rapòte ke glikokaliks espèm nan nesesè pou rekonesans ak aglutinasyon gamet yo. Forman10 te obsève ke idwoliz lyezon α-glikozidik nan kouch glikoprotein-glikolipid yo lè yo trete espèm zwazo ak neuraminidaz te lakòz yon rediksyon nan fètilite san afekte mobilite espèm. Otè yo sijere ke efè neuraminidaz sou glikokaliks la afekte sekestrasyon espèm nan jonksyon utero-vajinal la, kidonk li diminye fètilite. Obsèvasyon yo pa ka inyore posibilite ke tretman neuraminidaz ka diminye rekonesans espèm ak ovosit. Forman ak Engel10 te jwenn ke fètilite te redwi lè poul yo te ensemine intravajinalman ak espèm trete ak neuraminidaz. Sepandan, FIV ak espèm trete ak neuraminidaz pa t afekte fètilite konpare ak poul kontwòl yo. Otè yo te konkli ke chanjman nan kouch glikoprotein-glikolipid ki antoure manbràn espèm nan te diminye kapasite espèm nan pou fekonde lè yo te afekte sekestrasyon espèm nan jonksyon utero-vajinal la, ki an vire te ogmante pèt espèm akòz vitès jonksyon utero-vajinal la, men li pa te afekte rekonesans espèm ak ovul.
Nan kodenn, Bakst ak Bauchan 11 te jwenn ti vesikil ak fragman manbràn nan lumen SST a epi yo te obsève ke kèk nan granules sa yo te fizyone ak manbràn espèm nan. Otè yo sijere ke relasyon sa yo ka kontribye nan depo alontèm spermatozoyid nan SST. Sepandan, chèchè yo pa t presize sous patikil sa yo, si se selil epitelyal CCT yo sekrete yo, si sistèm repwodiktif gason an pwodui ak sekrete yo, oswa si espèm nan li menm pwodui yo. Epitou, patikil sa yo responsab aglutinasyon. Grützner et al27 te rapòte ke selil epitelyal epididim yo pwodui epi sekrete yon pwoteyin espesifik ki nesesè pou fòmasyon kanal seminal yon sèl pò. Otè yo rapòte tou ke dispèsyon pake sa yo depann de entèraksyon pwoteyin epididim yo. Nixon et al28 te jwenn ke adnexas yo sekrete yon pwoteyin, osteonectin asid ki rich an sistin; SPARC enplike nan fòmasyon touf espèm nan ekidna ak ornitorrink ki gen bèk kout. Dispèsyon reyon sa yo asosye avèk pèt pwoteyin sa a.
Nan etid aktyèl la, analiz iltrastriktwèl lè l sèvi avèk mikwoskòp elektwonik te montre ke spermatozoyid yo te kole sou yon gwo kantite materyèl dans. Yo panse sibstans sa yo responsab pou aglutinasyon ki kondanse ant ak alantou tèt adezif yo, men nan pi ba konsantrasyon nan rejyon ke a. Nou sipoze ke sibstans aglutinan sa a elimine nan sistèm repwodiktif gason an (epididim oswa kanal deferan) ansanm ak espèm, piske nou souvan obsève espèm k ap separe de lenf ak plasma seminal pandan ejakulasyon. Yo rapòte ke pandan spermatozoyid avyèn yo pase nan epididim ak kanal deferan, yo sibi chanjman ki gen rapò ak matirasyon ki sipòte kapasite yo pou mare pwoteyin epi pou yo jwenn glikoprotein ki asosye ak lèm plasma. Pèsistans pwoteyin sa yo sou manbràn espèm rezidan yo nan SST a sijere ke pwoteyin sa yo ka enfliyanse akizisyon estabilite manbràn espèm 30 epi detèmine fètilite yo 31. Ahammad et al32 te rapòte ke espèmatozoyid yo te jwenn nan divès pati nan sistèm repwodiktif gason an (soti nan tèstikul yo rive nan kanal deferan distal la) te montre yon ogmantasyon pwogresif nan viabilité anba kondisyon depo likid, kèlkeswa tanperati depo a, epi viabilité nan poul ogmante tou nan twonp tronp yo apre enseminasyon atifisyèl.
Touf espèm poul Sharkashi yo gen karakteristik ak fonksyon diferan de lòt espès tankou ekidna, ornitorrink, sourit bwa, rat sèf, ak kochon Gine. Nan poul sharkashi, fòmasyon pake espèm yo te diminye vitès naje yo konpare ak yon sèl spermatozoyid. Sepandan, pake sa yo te ogmante pousantaj spermatozoyid ki reyolojikman pozitif epi yo te ogmante kapasite spermatozoyid yo pou estabilize tèt yo nan yon anviwònman dinamik. Kidonk, rezilta nou yo konfime sijesyon anvan an ki di ke aglutinasyon espèm nan SST asosye avèk depo espèm alontèm. Nou fè ipotèz tou ke tandans espèm pou fòme touf ka kontwole vitès pèt espèm nan SST, sa ki ka chanje rezilta konpetisyon espèm. Dapre sipozisyon sa a, spermatozoyid ki gen kapasite aglutinasyon ki ba libere SST an premye, alòske spermatozoyid ki gen kapasite aglutinasyon ki wo pwodui pi fò nan pitit yo. Fòmasyon pake espèm ak yon sèl pò benefik epi li afekte rapò paran-pitit la, men li itilize yon mekanis diferan. Nan echidna ak ornitorink, spermatozoyid yo ranje paralèl youn ak lòt pou ogmante vitès avanse gwo bout bwa a. Pakèt echidna yo deplase apeprè twa fwa pi vit pase yon sèl spermatozoyid. Yo kwè ke fòmasyon touf espèm sa yo nan echidna se yon adaptasyon evolisyonè pou kenbe dominasyon, piske fi yo gen plizyè kalite gason epi anjeneral yo kwaze ak plizyè gason. Se poutèt sa, spermatozoyid ki soti nan diferan ejakulasyon yo fè yon konpetisyon feròs pou fètilizasyon ze a.
Spermatozoyid aglutine nan poul sharkasi yo fasil pou vizyalize lè w sèvi ak mikwoskòp kontras faz, ki konsidere kòm avantaje paske li pèmèt etid fasil sou konpòtman spermatozoyid yo in vitro. Mekanis kote fòmasyon touf espèm yo ankouraje repwodiksyon nan poul sharkasi yo diferan tou de sa yo wè nan kèk mamifè plasenta ki reprezante konpòtman espèm koperativ tankou sourit bwa, kote kèk spermatozoyid rive nan ze yo, ede lòt moun ki gen rapò rive nan ze yo epi domaje yo. pou pwouve tèt ou. konpòtman altruis. oto-fekondasyon 34. Yo te jwenn yon lòt egzanp konpòtman koperativ nan spermatozoyid nan sourit sèf, kote spermatozoyid yo te kapab idantifye epi konbine avèk spermatozoyid ki pi gen rapò jenetikman epi fòme gwoup koperativ pou ogmante vitès yo konpare ak spermatozoyid ki pa gen rapò35.
Rezilta yo jwenn nan etid sa a pa kontredi teyori Foman sou depo espèmatozoyid alontèm nan SWS. Chèchè yo rapòte ke selil espèmatozoyid yo kontinye deplase nan koule selil epitelyal ki kouvri SST a pandan yon peryòd tan pwolonje, epi apre yon sèten peryòd tan, rezèv enèji selil espèmatozoyid yo apovri, sa ki lakòz yon diminisyon nan vitès, ki pèmèt ekspilsyon sibstans ki gen ti pwa molekilè. enèji espèmatozoyid yo ak koule likid ki soti nan lumen SST a Kavite twonp falòp la. Nan etid aktyèl la, nou obsève ke mwatye nan espèmatozoyid endividyèl yo te montre kapasite pou naje kont likid k ap koule yo, epi adezyon yo nan pake a ogmante kapasite yo pou montre reoloji pozitif. Anplis de sa, done nou yo konsistan avèk sa yo ki nan Matsuzaki et al. 1 ki te rapòte ke ogmantasyon sekresyon laktat nan SST ka anpeche mobilite espèm rezidan yo. Sepandan, rezilta nou yo dekri fòmasyon ligaman motil espèm yo ak konpòtman reolojik yo an prezans yon anviwònman dinamik nan yon mikwokanal nan yon tantativ pou klarifye konpòtman yo nan SST. Rechèch nan lavni yo ka konsantre sou detèminasyon konpozisyon chimik ak orijin ajan aglutinan an, sa ki pral san dout ede chèchè yo devlope nouvo fason pou estoke espèm likid epi ogmante dire fètilite a.
Yo te chwazi kenz sharkasi mal (omozigòt dominan; Na Na) ki gen 30 semèn, san kou yo, kòm donatè espèm nan etid la. Yo te elve zwazo yo nan Fèm Volaj Rechèch Fakilte Agrikilti, Inivèsite Ashit, Gouvènman Ashit, peyi Lejip. Yo te loje zwazo yo nan kaj endividyèl (30 x 40 x 40 cm), yo te sibi yon pwogram limyè (16 èdtan limyè ak 8 èdtan fènwa) epi yo te ba yo yon rejim alimantè ki gen 160 g pwoteyin brit, 2800 kcal enèji metabolizab, 35 g kalsyòm pou chak. 5 gram fosfò disponib pou chak kilogram rejim alimantè.
Selon done 36, 37 yo, yo te kolekte espèm nan men gason yo pa masaj nan vant. Yo te kolekte yon total 45 echantiyon espèm nan men 15 gason pandan 3 jou. Yo te imedyatman delye espèm (n = 15/jou) 1:1 (v:v) ak Belsville Poultry Semen Diluent, ki gen difosfat potasyòm (1.27 g), glutamat monosodyòm monoidrat (0.867 g), fruktoz (0.5 d) asetat sodyòm anid (0.43 g), tris(idroksimetil)aminometàn (0.195 g), sitrat potasyòm monoidrat (0.064 g), monofosfat potasyòm (0.065 g), klori mayezyòm (0.034 g) ak H2O (100 ml), pH = 7, 5, osmolarite 333 mOsm/kg38. Yo te premye egzamine echantiyon espèm dilye yo anba yon mikwoskòp optik pou asire bon kalite espèm (imidite) epi answit yo te estoke yo nan yon beny dlo a 37°C jiskaske yo itilize yo nan yon demi èdtan apre yo te fin kolekte yo.
Yo dekri sinematik ak reoloji espèmatozoyid yo lè l sèvi avèk yon sistèm aparèy mikwofluidik. Yo te plis dilye echantiyon espèm yo a 1:40 nan Beltsville Avian Semen Diluent, yo te chaje yo nan yon aparèy mikwofluidik (gade anba a), epi yo te detèmine paramèt sinetik yo lè l sèvi avèk yon sistèm Analiz Espèm Enfòmatize (CASA) ki te devlope deja pou karakterizasyon mikwofluidik. Yo etidye mobilite espèmatozoyid nan medya likid (Depatman Jeni Mekanik, Fakilte Jeni, Inivèsite Assiut, peyi Lejip). Ou ka telechaje Plugin nan nan: http://www.assiutmicrofluidics.com/research/casa39. Yo te mezire vitès koub (VCL, μm/s), vitès lineyè (VSL, μm/s) ak vitès trajektwa mwayèn (VAP, μm/s). Yo te pran videyo espèmatozoyid yo lè l sèvi avèk yon mikwoskòp kontras faz Optika XDS-3 envèse (ak objektif 40x) konekte ak yon kamera Tucson ISH1000 a 30 fps pandan 3 s. Sèvi ak lojisyèl CASA a pou etidye omwen twa zòn ak 500 trajektwa espèm pou chak echantiyon. Videyo anrejistre a te trete lè l sèvi avèk yon CASA endijèn. Definisyon mobilite nan plugin CASA a baze sou vitès naj espèm nan konpare ak to koule a, epi li pa enkli lòt paramèt tankou mouvman bò kote, paske yo te jwenn ke sa a pi fyab nan koule likid. Mouvman reolojik dekri kòm mouvman selil espèm yo kont direksyon koule likid la. Spermatozoyid ki gen pwopriyete reolojik yo te divize pa kantite spermatozoyid motil; spermatozoyid ki te an repo ak spermatozoyid ki t ap deplase konvektivman yo te eskli nan kontaj la.
Tout pwodui chimik yo te itilize yo te soti nan Elgomhoria Pharmaceuticals (Cairo, Egypt) sof si gen lòt endikasyon. Aparèy la te fabrike jan El-sherry et al. dekri li 40 avèk kèk modifikasyon. Materyèl yo te itilize pou fabrike mikwo-chanèl yo te gen ladan plak an vè (Howard Glass, Worcester, MA), rezistans negatif SU-8-25 (MicroChem, Newton, CA), alkòl dyasetòn (Sigma Aldrich, Steinheim, Almay), ak poliasetòn. -184, Dow Corning, Midland, Michigan). Mikwo-chanèl yo fabrike lè l sèvi avèk litografi mou. Premyèman, yo te enprime yon mask figi pwoteksyon transparan ak konsepsyon mikwo-chanèl yo te vle a sou yon enprimant wo rezolisyon (Prismatic, Cairo, Egypt ak Pacific Arts and Design, Markham, ON). Mèt yo te fèt lè l sèvi avèk plak an vè kòm substrats. Plak yo te netwaye nan asetòn, izopropanol ak dlo deyonize epi answit yo te kouvri yo ak yon kouch 20 µm SU8-25 pa wotasyon (3000 rpm, 1 min). Apre sa, kouch SU-8 yo te seche dousman (65°C, 2 min ak 95°C, 10 min) epi yo te ekspoze a radyasyon UV pandan 50 s. Apre ekspozisyon, yo te kwit yo nan 65°C ak 95°C pandan 1 min ak 4 min pou kwaze kouch SU-8 ki ekspoze yo, epi apre sa, yo te devlope yo nan alkòl dyasetòn pandan 6.5 min. Yo te kwit gofr yo nan yon fou byen cho (200°C pandan 15 min) pou kouch SU-8 la vin pi solid.
Yo te prepare PDMS la lè yo te melanje monomè a ak ajan an pou fè l dire pi lontan nan yon rapò pwa 10:1, answit yo te degaze l nan yon desikatè vakyòm epi yo te vide l sou ankadreman prensipal SU-8 la. Yo te geri PDMS la nan yon fou (120°C, 30 min), answit yo te koupe kanal yo, separe yo de mèt la, epi yo te pèfore yo pou pèmèt tib yo tache nan antre ak sòti mikwokanal la. Finalman, yo te tache mikwokanal PDMS yo pèmanan sou lam mikwoskòp yo lè l sèvi avèk yon procesè korona pòtab (Electro-Technic Products, Chicago, IL) jan yo te dekri sa yon lòt kote. Mikwokanal yo itilize nan etid sa a mezire 200 µm × 20 µm (L × H) epi li gen 3.6 cm longè.
Koule likid ki pwovoke pa presyon idrostatik andedan mikwokanal la reyalize lè yo kenbe nivo likid la nan rezèvwa admisyon an pi wo pase diferans wotè Δh39 nan rezèvwa sòti a (Fig. 1).
kote f se koyefisyan friksyon an, defini kòm f = C/Re pou koule laminè nan yon kanal rektangilè, kote C se yon konstan ki depann de rapò aspè kanal la, L se longè mikrokanal la, Vav se vitès mwayèn andedan mikrokanal la, Dh se dyamèt idwolik kanal la, g – akselerasyon gravite. Lè w sèvi ak ekwasyon sa a, ou ka kalkile vitès mwayèn kanal la lè w sèvi ak ekwasyon sa a: