Spas ji bo serdana Nature.com. Guhertoya geroka ku hûn bikar tînin piştgiriya CSS-ê bi sînor e. Ji bo ezmûna çêtirîn, em pêşniyar dikin ku hûn gerokek nûvekirî bikar bînin (an jî Moda Lihevhatinê di Internet Explorer-ê de neçalak bikin). Di vê navberê de, ji bo ku piştgiriya domdar misoger bikin, em ê malperê bêyî şêwaz û JavaScript-ê nîşan bidin.
Berhemdariya çûkan girêdayî şiyana wan a hilanîna spermên zindî yên têra xwe ji bo demek dirêj di lûleyên hilanîna spermê (SST) de ye. Mekanîzma rastîn a ku spermatozoa dikevin SST, di nav de dimînin û ji wê derdikevin hîn jî nakok e. Sperma mirîşkên sharkasi meylek bilind a kombûnê nîşan da, û komên fîlamentî yên mobîl ên ku gelek şaneyan dihewînin çêkirin. Ji ber dijwarbûna çavdêriya tevger û tevgera spermatozoayan di lûleyek fallopî ya nezelal de, me amûrek mîkrofluidîk bi xaçerêyek mîkrokanal a dişibihe ya spermatozoayan bikar anî da ku kombûn û tevgera spermatozoayan lêkolîn bike. Ev lêkolîn nîqaş dike ka komên spermê çawa çêdibin, ew çawa diçin û rola wan a gengaz di dirêjkirina rûniştina spermê de di SST de. Me leza spermê û tevgera reolojîk lêkolîn kir dema ku herikîna şilavê di kanalek mîkrofluidîk de bi zexta hîdrostatîk (rêjeya herikînê = 33 µm/s) çêbû. Spermatozoa meyla avjeniyê li dijî herikînê dikin (reolojiya erênî) û leza koma spermatozoayan li gorî spermatozoayek yekane bi girîngî kêm dibe. Hatiye dîtin ku desteyên spermê bi awayekî spiral tevdigerin û dema ku bêtir spermên yekane têne berhevkirin, dirêjî û stûriya wan zêde dibe. Çend komên spermê hatin dîtin ku nêzîkî dîwarên kêlekê yên kanalên mîkrofluîdîk dibin û bi wan ve dizeliqin da ku bi leza herikîna şilavê ya > 33 µm/s neyên şuştin. Çend komên spermê hatin dîtin ku nêzîkî dîwarên kêlekê yên kanalên mîkrofluîdîk dibin û bi wan ve dizeliqin da ku bi leza herikîna şilavê ya > 33 µm/s neyên şuştin. Bыlo zamecheno, что пучки сперматозоидов близуаются и прилипают на bokovыm стенкам микрофлюидных каналов, чтобы избежать сметания со скоростью потока жидкости> 33 mkm/s. Hatiye dîtin ku desteyên spermê nêzîkî dîwarên kêlekê yên kanalên mîkrofluîdîk dibin û bi wan ve dizeliqin da ku di rêjeya herikîna şilavê ya >33 µm/s de neyên xwarê.观察到精子束接近并粘附在微流体通道的侧壁上，以避免被流体流速> 33 μm/s33 µm/s 扫过. Bыlo zamecheno, что пучки сперматозоидов близуаются и прилипают к боковым стенкам микрожидкостного канала, чтобы избежать сметания потоком жидкости со блискустью > 33 mkm/s. Hatiye dîtin ku desteyên spermê nêzîkî dîwarên kêlekê yên kanala mîkrofluîdîk dibin û bi wan ve dizeliqin da ku ji aliyê herikîna şilavê ya bi leza >33 µm/s ve neyên xwarê.Mîkroskopiya elektronê ya şopandin û veguhastinê eşkere kir ku komên spermê ji hêla materyalên pir û tîr ve hatine piştgirî kirin. Daneyên ku hatine bidestxistin tevgera bêhempa ya spermên mirîşka Sharkazi, û her weha şiyana spermê ya aglutinasyon û çêkirina komên mobîl nîşan didin, ku ev yek dibe alîkar ji bo têgihîştinek çêtir a hilanîna demdirêj a spermê di SMT de.
Ji bo ku mirov û piraniya ajalan fertilîzasyon pêk bînin, divê sperm û hêk di wextê rast de bigihîjin cihê fertilîzasyonê. Ji ber vê yekê, divê cotbûn berî an jî di dema ovulasyonê de çêbibe. Ji aliyekî din ve, hin memik, wek kûçik, û her weha cureyên ne-memik, wek kêzik, masî, xezalan û çûk, sperm di organên xwe yên hilberandinê de ji bo demek dirêj hildigirin heta ku hêkên wan ji bo fertilîzasyonê amade bibin (fertilîzasyona asenkron 1). Çûk dikarin ji bo 2-10 hefteyan zindîbûna spermatozoayên ku dikarin hêkan fertilîz bikin biparêzin2.
Ev taybetmendiyek bêhempa ye ku çûkan ji ajalên din cuda dike, ji ber ku ew îhtîmalek mezin a fertilîzasyonê piştî yek fertilîzasyonê ji bo çend hefteyan bêyî hevjînkirin û ovulasyonê peyda dike. Organa sereke ya hilanîna spermê, ku jê re lûleya hilanîna spermê (SST) tê gotin, di qatên mukoza navxweyî de li girêka uterus-ovaginal de ye. Heta niha, mekanîzmayên ku sperm bi wan re dikeve, dimîne û ji banka spermê derdikeve bi tevahî nayên fam kirin. Li gorî lêkolînên berê, gelek hîpotez hatine pêşkêş kirin, lê yek ji wan nehatiye piştrast kirin.
Forman4 texmîn kir ku spermatozoa bi tevgera osîlasyonî ya berdewam li dijî rêça herikîna şilavê bi rêya kanalên proteînê yên li ser hucreyên epitelyal ên SST-ê (reolojî) cihê xwe di valahiya SST-ê de diparêzin. ATP ji ber çalakiya flagelar a domdar a ku ji bo girtina sperm di lûmena SST-ê de hewce ye, kêm dibe û tevgera wê di dawiyê de kêm dibe heya ku sperm bi herikîna şilavê ji banka spermê were derxistin û rêwîtiyek nû di lûleya fallopî ya hilkişîner de dest pê bike da ku sperm fertilîze bike. Hêk (Forman4). Ev modela hilanîna spermê bi tespîtkirina akuaporînên 2, 3 û 9 ên ku di hucreyên epitelyal ên SST-ê de hene, bi rêya îmmunosîtokîmyayê tê piştgirî kirin. Heta niha, lêkolînên li ser reolojiya sperma mirîşkan û rola wê di hilanîna SST, hilbijartina sperma vajînal û pêşbaziya spermê de kêm in. Di mirîşkan de, sperm piştî hevjîna xwezayî dikeve vajînayê, lê ji %80 zêdetir spermatozoa di demek kurt de piştî hevjînê ji vajînayê têne derxistin. Ev yek nîşan dide ku vajîna cihê sereke ji bo hilbijartina spermê di çûkan de ye. Herwiha, hatiye ragihandin ku kêmtir ji %1ê spermatozoayên ku di vajînayê de têne fertilîzekirin diqedin nav SST2. Di însemînasyona sûnî ya çêlikan de di vajînayê de, hejmara spermatozoayên ku digihîjin SST 24 demjimêran piştî însemînasyonê meyla zêdebûnê dike. Heta niha, mekanîzmaya hilbijartina spermê di vê pêvajoyê de ne diyar e, û tevgera spermê dibe ku roleke girîng di kişandina spermê ya SST de bilîze. Ji ber dîwarên stûr û nezelal ên lûleyên fallopî, şopandina rasterast a tevgera spermê di lûleyên fallopî yên çûkan de dijwar e. Ji ber vê yekê, zanîna me ya bingehîn a ka spermatozoa çawa piştî fertilîzasyonê derbasî SST dibe tune ye.
Reolojî vê dawiyê wekî faktorek girîng a kontrolkirina veguhestina spermê di organên zayendî yên memikan de hatiye nas kirin. Li ser bingeha şiyana spermên tevgerbar ên ku bi awayekî berevajî koç bikin, Zaferani û hevkarên wî8 pergalek mîkrofluîdîk a corra bikar anîn da ku spermên tevgerbar ji nimûneyên spermê yên qelemkirî bi awayekî pasîf veqetînin. Ev celeb rêzkirina spermê ji bo dermankirina nelirêtiya bijîjkî û lêkolînên klînîkî girîng e, û ji rêbazên kevneşopî yên ku dem û kedê dixwin û dikarin morfolojî û yekparebûna avahîsaziyê ya spermê xirab bikin tê tercîh kirin. Lêbelê, heya niha, li ser bandora veşartinên ji organên zayendî yên mirîşkan li ser tevgera spermê ti lêkolîn nehatine kirin.
Bêyî ku mekanîzmaya hilanîna spermê di SST de çi be, gelek lêkolîneran dîtine ku sperma niştecî di SST ya mirîşkan 9, 10, bilbilan 2, û dewlikan 11 de serî bi serî li hev dicivin û komên spermê yên kombûyî çêdikin. Nivîskar pêşniyar dikin ku di navbera vê kombûnê û hilanîna demdirêj a spermatozoa di SST de de girêdanek heye.
Tingari û Lake12 têkiliyeke xurt di navbera spermatozoayan de di rijêna wergirê sperm a mirîşkê de ragihandin û pirsîn ka spermatozoayên çûkan bi heman awayî wekî spermatozoayên memikan li hev dikevin. Ew bawer dikin ku girêdanên kûr ên di navbera spermatozoayan de di vas deferens de dibe ku ji ber stresê bin ku ji ber hebûna hejmareke mezin a spermatozoayan di cîhekî piçûk de çêdibe.
Dema nirxandina tevgera spermê li ser slaytên cam ên daliqandî yên teze, nîşanên demkî yên kombûnê têne dîtin, nemaze li qiraxên dilopên spermê. Lêbelê, kombûn pir caran ji hêla çalakiya zivirî ya bi tevgera domdar ve girêdayî ve dihat têkbirin, ku xwezaya demkî ya vê diyardeyê rave dike. Lêkolîneran her wiha dît ku dema ku diluent li spermê tê zêdekirin, kombûnên şaneyên dirêjkirî yên "wek têl" xuya dibin.
Hewldanên destpêkê yên ji bo teqlîdkirina spermatozoidê bi rakirina têlek zirav ji dilopek daliqandî hatin kirin, ku di encamê de vezîkulek dirêjkirî ya mîna spermê ji dilopa spermê derket. Spermatozoa di cih de bi awayekî paralel di nav vezîkulê de rêz bûn, lê tevahiya yekîneyê ji ber sînorkirina 3D zû winda bû. Ji ber vê yekê, ji bo lêkolîna kombûna spermatozoidan, pêdivî ye ku tevgera û tevgera spermatozoidan rasterast di lûleyên hilanîna spermê yên îzolekirî de were çavdêrîkirin, ku ev yek dijwar e ku were bidestxistin. Ji ber vê yekê, pêdivî ye ku amûrek were pêşve xistin ku spermatozoidan teqlîd bike da ku piştgiriyê bide lêkolînên li ser tevgera spermê û tevgera kombûnê. Brillard û hevkarên wî13 ragihandin ku dirêjahiya navînî ya lûleyên hilanîna spermê di mirîşkên mezinan de 400-600 µm e, lê hin SST dikarin heta 2000 µm dirêj bin. Mero û Ogasawara14 rijênên semînîfer dabeş kirin nav lûleyên hilanîna spermê yên mezinbûyî û nemezinbûyî, ku her du jî di dirêjahî (~500 µm) û firehiya stûyê (~38 µm) de wekhev bûn, lê diametera navînî ya lûleyên 56.6 û 56.6 µm. . , bi rêzê ve 11.2 μm bû. Di vê lêkolînê de, me amûrek mîkrofluîdîk bi mezinahiya kanalê 200 µm × 20 µm (W × H) bikar anî, ku xaçerêya wê hinekî nêzîkî ya SST-ya zêdekirî ye. Wekî din, me tevgera spermê û tevgera kombûnê di şilava herikîn de lêkolîn kir, ku ev yek bi hîpoteza Foreman re lihevhatî ye ku şilava ku ji hêla hucreyên epitelyal ên SST ve tê hilberandin spermê di lûmenê de di rêyek dijber (reolojîk) de dihêle.
Armanca vê lêkolînê ew bû ku pirsgirêkên çavdêriya tevgera spermê di lûleya fallopî de werin çareserkirin û ji zehmetiyên lêkolîna reolojî û tevgerîna spermê di hawîrdorek dînamîk de dûr bikevin. Amûrek mîkrofluîdîk hate bikar anîn ku zexta hîdrostatîk diafirîne da ku tevgera spermê di organên zayendî yên mirîşkê de simul bike.
Dema ku dilopek ji nimûneya spermê ya şilkirî (1:40) têxin nav cîhaza mîkrokanalê, du celeb tevgera spermê dikarin werin nas kirin (spermên îzolekirî û spermên girêdayî). Wekî din, spermatozoa meyla avjeniyê li dijî herikînê dikir (reolojiya erênî; vîdyoya 1, 2). Her çend leza komên spermê ji ya spermên tenê kêmtir bû (p < 0.001), lê wan rêjeya spermên ku reotaksîyek erênî nîşan didin zêde kir (p < 0.001; Tabloya 2). Her çend leza komên spermê ji ya spermên tenê kêmtir bû (p < 0.001), lê wan rêjeya spermên ku reotaksîyek erênî nîşan didin zêde kir (p < 0.001; Tabloya 2). Spermatozoidov, ji ber vê yekê, ji ber vê yekê, ji ber vê yekê, ji ber vê yekê, ji ber vê yekê, ji ber vê yekê, ji ber vê yekê, ji bo spermatozoid (p < 0,001); Her çend leza komên spermê ji ya spermên yekane kêmtir bû (p < 0.001), lê wan rêjeya spermên ku reotaksîsa erênî nîşan didin zêde kir (p < 0.001; Tabloya 2).尽管精子束的速度低于孤独精子的速度（p < 0,001），但它们增加了显示阳性流变性的精子百分比（p < 0,001；表2）。尽管 精子束 的 速度 低于 孤独 的 速度 （p <0.001） ， 但 增加 了 显独 的 速度 （p百分比 (p <0,001 ； 2。…………… Xotya скорость пучков сперматозоидов была ниже, чем у сперматозоидов (p < 0,001), lê zêdeyî rêjeya spermatozoids poложительной реологией (p < 0,001; tab 2). Her çend leza komên spermê ji ya spermên yekane kêmtir bû (p < 0.001), lê wan rêjeya spermên bi reolojiya erênî zêde kir (p < 0.001; Tabloya 2).Reolojiya erênî ji bo spermatozoayên yekane û komên spermê bi rêzê ve bi qasî %53 û %85 tê texmînkirin.
Hatiye dîtin ku sperma mirîşkên sharkasi piştî rijandinê, desteyên xêzikî çêdikin, ku ji dehan kesan pêk tên. Ev deste bi demê re di dirêjahî û stûriyê de zêde dibin û dibe ku çend demjimêran di vitro de bimînin berî ku belav bibin (vîdyoya 3). Ev desteyên filamentoz dişibin sperma echidna ku di dawiya epididymisê de çêdibin. Hatiye dîtin ku sperma mirîşka sharkashi xwedî meylek bilind e ku di nav kêmtirî yek deqîqeyê de piştî berhevkirinê desteser bibe û desteyek torî çêbike. Ev tîrêj dînamîk in û dikarin li her dîwar an tiştên statîk ên nêzîk bizeliqin. Her çend desteyên spermê leza hucreyên spermê kêm dikin jî, eşkere ye ku bi awayekî makroskopîk ew xêzikbûna xwe zêde dikin. Dirêjahiya desteyan li gorî hejmara spermên ku di desteyan de hatine berhevkirin diguhere. Du beşên desteyê hatin veqetandin: beşa destpêkê, ku serê azad ê spermê yê desteserkirî di nav de ye, û beşa termînal, ku dûvik û tevahiya dawiya dûr a spermê di nav de ye. Bi karanîna kamerayek bilez (950 fps), serên azad ên spermên kombûyî di beşa destpêkê ya desteyê de hatin dîtin, ku ji ber tevgera wan a osîlatorî berpirsiyarê tevgera desteyê ne, yên mayî bi tevgera helîksî dikişînin nav desteyê (Vîdeo 4). Lêbelê, di desteyên dirêj de, hatiye dîtin ku hin serên spermê yên azad bi laş ve girêdayî ne û beşa dawîn a desteyê wekî fenerên tevdigerin da ku alîkariya pêşvebirina desteyê bikin.
Dema ku di herikîna hêdî ya şilavê de ne, komên spermê paralel bi hev re diçin, lêbelê, ew dest bi hevdu dikin û bi her tiştê ku bêdeng e ve diqelişin, da ku dema ku leza herikînê zêde dibe ji hêla herikîna herikînê ve neyên şuştin. Kom çêdibin dema ku çend şaneyên spermê nêzîkî hev dibin, ew dest bi tevgerê dikin û li dora hev dipêçin, û dûv re bi madeyek zeliqok ve diqelişin. Wêneyên 1 û 2 nîşan didin ka sperm çawa nêzîkî hev dibin, dema ku dûvik li dora hev dipêçin, girêdanek çêdikin.
Lêkolîneran ji bo lêkolîna reolojiya spermê, zexta hîdrostatîk bikar anîn da ku di mîkrokanalekê de herikîna şilavê çêbikin. Mîkrokanalek bi mezinahiya 200 µm × 20 µm (W × H) û dirêjahiya 3.6 µm hate bikar anîn. Di navbera konteyneran de bi şîrîngên ku li serên wan hatine danîn, mîkrokanal bikar bînin. Boyaxa xwarinê hate bikar anîn da ku kanal bêtir xuya bibin.
Kabloyên girêdana navber û aksesûarên wê bi dîwêr ve girêdin. Vîdyo bi mîkroskopa kontrastê ya fazê hatiye kişandin. Bi her wêneyekî re, mîkroskopiya kontrastê ya fazê û wêneyên nexşekirinê têne pêşkêş kirin. (A) Girêdana di navbera du herikan de ji ber tevgera helîksî li hember herikînê berxwe dide (tîra sor). (B) Girêdana di navbera komeka lûleyê û dîwarê kanalê de (tîrên sor), di heman demê de ew bi du komên din ve girêdayî ne (tîrên zer). (C) Komên spermê di kanala mîkrofluidîk de dest bi girêdana bi hev re dikin (tîrên sor), û toreke komên spermê çêdikin. (D) Avabûna toreke komên spermê.
Dema ku dilopek ji spermên şilkirî têxin nav cîhaza mîkrofluidîk û herikînek çêbibe, hat dîtin ku tîrêja spermê li dijî rêça herikînê diçe. Kom bi dîwarên mîkrokanalan ve bi hev re li hev tên, û serên azad ên di beşa destpêkê ya koman de bi hev re li wan dicivin (vîdyoya 5). Ew her weha bi her perçeyên sabît ên di rêya xwe de, wekî bermayiyan, ve dizeliqin da ku li hember herikîna avê bisekinin. Bi demê re, ev kom dibin fîlamentên dirêj ku spermatozoayên din ên yekane û komikên kurttir digirin (Vîdyo 6). Her ku herikîn dest pê dike hêdî bibe, rêzên dirêj ên spermê dest pê dikin ku toreke rêzên spermê çêbikin (Vîdyo 7; Wêne 2).
Di leza herikîna bilind de (V > 33 µm/s), tevgerên spiral ên têlan zêde dibin wekî hewldanek ji bo girtina gelek komên spermê yên ku li hember hêza herikîna çêtir berxwe didin. Di leza herikîna bilind de (V > 33 µm/s), tevgerên spiral ên têlan zêde dibin wekî hewldanek ji bo girtina gelek komên spermê yên ku li hember hêza herikîna çêtir berxwe didin. Ji ber vê çendê (V > 33 mkm/s) силе потока. Di rêjeyên herikîna bilind de (V > 33 µm/s), tevgerên helîkal ên têlan zêde dibin ji ber ku ew hewl didin gelek spermatozoayên ferdî bigirin û destan çêkin ku dikarin li hember hêza herikîna çêtir li ber xwe bidin.在高流速(V > 33 µm/s)时，螺纹的螺旋运动增加，以试图捕捉许多形成束的单个精子，从而更好地抵抗流动的漂移力。在 高 流速 (v> 33 µm/s)从而 更 地 抵抗 的 漂移力。。。。。 Pîvana nêzîkê (V > 33 mkm/s) спиральное движение нитей увеличивается в попытке захватить множество отдельных сперматозоидов, образующих пучки, чтось сопротивя лучитя сила. Di rêjeyên herikîna bilind de (V > 33 µm/s), tevgera helîkal a fîlamentan zêde dibe da ku gelek spermatozoayên ferdî yên ku komên wan çêdikin werin girtin da ku li hember hêzên driftê yên herikînê çêtir li ber xwe bidin.Wan her wiha hewl da ku mîkrokanalan li dîwarên kêlekê ve girêdin.
Çend komên spermê wekî komên serên spermê û dûvikên pêçayî bi mîkroskopiya ronahiyê (LM) hatin destnîşankirin. Çend komên spermê yên bi komên cûrbecûr jî wekî serên pêçayî û komên flagelar, dûvikên spermê yên pirjimar ên hevgirtî, serên spermê yên bi dûvikê ve girêdayî, û serên spermê yên bi navikên xwar wekî navikên pirjimar ên hevgirtî hatine destnîşankirin. mîkroskopiya elektronê ya veguhastinê (TEM). Mîkroskopiya elektronê ya şopandinê (SEM) nîşan da ku komên spermê kombûnên serên spermê yên di nav pêçan de bûn û komên spermê toreke girêdayî ya dûvikên pêçayî nîşan dan.
Morfolojî û ultraavakirina spermê, çêbûna komên spermê bi karanîna mîkroskopiya ronahiyê (nîv beş), mîkroskopiya elektrona şopandinê (SEM) û mîkroskopiya elektrona veguhastinê (TEM) hatin lêkolînkirin, smearên spermê bi porteqalî ya akridîn hatin boyaxkirin û bi karanîna mîkroskopiya epîfluoresansê hatin lêkolînkirin.
Boyaxkirina spermê bi porteqalî ya akridînê (Wêne 3B) nîşan da ku serê spermê bi hev ve asê maye û bi madeya derdanê hatiye nixumandin, ku ev yek bûye sedema çêbûna komên mezin (Wêne 3D). Destên spermê ji komên spermê yên bi toreke dûvikên girêdayî pêk tên (Wêne 4A-C). Destên spermê ji dûvikên gelek spermên bi hev ve asê maye pêk tên (Wêne 4D). Sirr (Wêne 4E,F) serê destên spermê nixumandine.
Pêkhatina desteya spermê Bi karanîna mîkroskopiya kontrastê ya fazê û smearên spermê yên bi porteqalî ya akridîn boyaxkirî, nîşan da ku serên spermê bi hev ve girêdayî ne. (A) Pêkhatina desteya spermê ya zû bi spermêk (xeleka spî) û sê spermêk (xeleka zer) dest pê dike, spiral ji dûvikê dest pê dike û li serî diqede. (B) Fotomîkrografa smearek spermê ya bi porteqalî ya akridîn boyaxkirî serên spermê yên zeliqandî nîşan dide (tîr). Derketin serî(an) vedişêre. Mezinbûn × 1000. (C) Pêşketina tîrêjek mezin a ku bi herikînê di kanalek mîkrofluidîk de tê veguhastin (bi karanîna kamerayek bilez bi 950 fps). (D) Mîkrografa smearek spermê ya bi porteqalî ya akridîn boyaxkirî smearên mezin nîşan dide (tîr). Mezinbûn: ×200.
Mîkrografîya elektrona skankirinê ya tîrêjek spermê û spreyek spermê ya bi porteqalî ya akridîn boyaxkirî. (A, B, D, E) mîkrografiyên elektrona skankirinê yên rengîn ên dîjîtal ên spermatozoidan in, û C û F mîkrografiyên spreyên spermê yên bi porteqalî ya akridîn boyaxkirî ne ku girêdana gelek spermatozoidan nîşan didin ku tora kaudal dipêçin. (AC) Kombûnên spermê wekî toreke dûvikên girêdayî (tîr) têne nîşandan. (D) Çêbûna çend spermatozoidan (bi madeya zeliqok, xêza pembe, tîr) ku li dora dûvikê dipêçin. (E û F) Kombûnên serê spermê (nîşanker) ku bi madeya zeliqok (nîşanker) hatine nixumandin. Spermatozoayan bi çend avahiyên mîna giroverê destan çêkirine (F). (C) ×400 û (F) mezinkirinên ×200.
Bi karanîna mîkroskopiya elektronê ya veguhestinê, me dît ku komên spermê dûvikên girêdayî hebûn (Wêne 6A, C), serên girêdayî dûvikan (Wêne 6B), an serên girêdayî dûvikan (Wêne 6D). Serên spermê di komê de xwar in, di beşê de du herêmên navokî hene (Wêne 6D). Di komê birînê de, spermê seriyekî pêçayî bi du herêmên navokî û gelek herêmên flagelar hebû (Wêne 5A).
Mîkrografîya elektronîkî ya rengîn a dîjîtal ku dûvikên girêdanê yên di nav desteya spermê de û madeya aglutînasyonê ya ku serên spermê bi hev ve girêdide nîşan dide. (A) Dûvika girêdayî ya hejmareke mezin ji spermatozoayan. Bala xwe bidin ka dûvik di projeksiyona portreyê (tîr) û peyzajê (tîr) de çawa xuya dike. (B) Serê (tîr) spermê bi dûvikê (tîr) ve girêdayî ye. (C) Çend dûvikên spermê (tîr) bi hev ve girêdayî ne. (D) Materyalê aglutînasyonê (AS, şîn) çar serên spermê (mor) bi hev ve girêdide.
Mîkroskopiya elektronê ya skankirinê ji bo tespîtkirina serên spermê di komên spermê yên bi veşartin an parzûnan ve hatine nixumandin de hate bikar anîn (Wêne 6B), ku nîşan dide ku komên spermê bi madeya derveyî hucreyê ve girêdayî ne. Madeya kombûyî di serê spermê de (kombûna mîna serê mêşhingiv; Wêne 5B) kom bû û ber bi dûr ve berfireh bû, dema ku bi porteqalî ya akridînê hate boyaxkirin, di bin mîkroskopa fluoresansê de xuyangek zer a geş da (Wêne 6C). Ev made di bin mîkroskopa skankirinê de bi zelalî xuya dike û wekî girêdanek tê hesibandin. Beşên nîv-tenik (Wêne 5C) û smearên spermê yên bi porteqalî ya akridînê hatine boyaxkirin komên spermê nîşan dan ku serên bi komî pakkirî û dûvikên pêçayî dihewînin (Wêne 5D).
Mîkrografên cûrbecûr ên fotoyî ku kombûna serên spermê û dûvikên pêçayî bi karanîna rêbazên cûrbecûr nîşan didin. (A) Mîkrografîya elektronîkî ya veguhastina rengîn a dîjîtal a xaçerêyî ya komeke spermê ku seriyekî spermê yê pêçayî bi navikek du-beşî (şîn) û çend beşên flagelar (kesk) nîşan dide. (B) Mîkrografîya elektronîkî ya skankirina rengîn a dîjîtal komeke serên spermê yên mîna meduza (tîr) nîşan dide ku xuya dikin ku hatine nixumandin. (C) Beşa nîv-tenik ku serên spermê yên komkirî (tîr) û dûvikên pêçayî (tîr) nîşan dide. (D) Mîkrografîya lekeyek spermê ya bi porteqalî ya akridînê boyaxkirî kombûna serên spermê (tîr) û dûvikên pêçayî yên pêçayî (tîr) nîşan dide. Bala xwe bidinê ku madeyek zeliqok (S) serê spermê vedişêre. (D) mezinkirina × 1000.
Bi karanîna mîkroskopiya elektrona veguhestinê (Wêne 7A), her wiha hate dîtin ku serên spermê pêçayî bûn û navikên wan şiklê spiral bûn, wekî ku bi smearên spermê yên bi porteqalî ya akridînê hatine boyaxkirin û bi mîkroskopiya flûoresansê hatine lêkolînkirin (Wêne 7B) hate piştrast kirin.
(A) Mîkrografiya elektronê ya veguhestina rengîn a dîjîtal û (B) Smaşa spermê ya bi rengê porteqalî yê akridînê ku serên pêçayî û girêdana ser û dûvikên spermê nîşan dide (tîr). (B) Mezinbûna × 1000.
Dîtineke balkêş ew e ku sperma Şarkazi kom dibe û komên fîlamentoz ên mobîl çêdike. Taybetmendiyên van koman dihêle ku em rola wan a gengaz di mijandin û hilanîna spermatozoayan di SST de fam bikin.
Piştî hevjînkirinê, sperm dikevin vajînayê û pêvajoyek hilbijartinê ya dijwar derbas dikin, ku di encamê de tenê hejmareke sînorkirî ya sperm dikevin SST15,16. Heta niha, mekanîzmayên ku sperm bi wan dikevin û ji SST derdikevin ne diyar in. Di mirîşkan de, spermatozoa ji bo demek dirêj a 2 heta 10 hefteyan di SST de têne hilanîn, li gorî cureyê6. Di derbarê rewşa sperm de di dema hilanînê de di SST de nakokî hîn jî hene. Gelo ew di tevgerê de ne an di bêhnvedanê de ne? Bi gotineke din, şaneyên sperm çawa cihê xwe di SST de ewqas dirêj diparêzin?
Forman4 pêşniyar kir ku mayîn û derxistina SST dikare bi rêya tevgera spermê were ravekirin. Nivîskar texmîn dikin ku sperm bi avjeniya li dijî herikîna şilavê ya ku ji hêla epitelyûma SST ve hatî afirandin, pozîsyona xwe diparêzin û dema ku leza wan ji xala ku ew ji ber kêmbûna enerjiyê dest bi paşveçûnê dikin dadikeve, ji SST têne derxistin. Zaniboni5 hebûna akuaporînên 2, 3, û 9 di beşa apîkal a hucreyên epitelyal ên SST de piştrast kir, ku dibe ku bi awayekî nerasterast piştgirîya modela hilanîna spermê ya Foreman bike. Di lêkolîna heyî de, me dît ku hema hema nîvê spermatozoayên Sharkashi di şilava herikîn de reolojiya erênî nîşan didin, û ku komên spermê yên kombûyî hejmara spermatozoayên ku reolojiya erênî nîşan didin zêde dikin, her çend kombûn wan hêdî dike. Çawa hucreyên spermê di lûleya fallopî ya çûkan de ber bi cihê fertilîzasyonê ve diçin, bi tevahî nayê fam kirin. Di memikan de, şilava folîkulî spermatozoayan dikişîne. Lêbelê, tê bawer kirin ku kîmoatraktant spermatozoayan ber bi nêzîkbûna dûr û dirêj ve dibin7. Ji ber vê yekê, mekanîzmayên din berpirsiyarê veguhestina spermê ne. Tê ragihandin ku şiyana spermê ya rêwerdan û herikîna li dijî şilava lûleya fallopî ya piştî hevjînkirinê wekî faktorek sereke di hedefgirtina spermê de di mişkan de ye. Parker 17 pêşniyar kir ku spermatozoa bi avjeniya li dijî herikîna sîlîyar di çûk û xezalan de ji hêkên avê derbas dibin. Her çend ev yek di çûkan de bi ceribandinî nehatiye nîşandan jî, Adolphi18 yekem kes bû ku dît ku sperma çûkan encamên erênî dide dema ku qatek zirav a şilavê di navbera qapax û slaytê de bi şerîtek kaxeza fîlterê tê çêkirin. Reolojî. Hino û Yanagimachi [19] kompleksek hêkdank-lûle-malzarokê ya mişk di zengilek perfuzyonê de danîn û 1 µl mûrek têxin nav îstmusê da ku herikîna şilavê di lûleyên fallopî de bibînin. Wan tevgerek pir çalak a girjbûn û rihetbûnê di lûleya fallopî de dîtin, ku tê de hemî topên mûrekê bi domdarî ber bi ampula lûleya fallopî ve diçûn. Nivîskar girîngiya herikîna şilava lûleyê ji lûleyên fallopî yên jêrîn ber bi jorîn ve ji bo bilindkirin û fertilîzasyona spermê tekez dikin. Brillard20 ragihand ku di mirîşk û dewlikan de, spermatozoa bi tevgera çalak ji deriyê vajînayê, ku ew lê têne hilanîn, ber bi girêdana malzarokê-vajînal, ku ew li wir têne hilanîn, koç dikin. Lêbelê, ev tevger di navbera girêdana malzarokê û infundibulumê de ne hewce ye ji ber ku spermatozoa bi cihguhestina pasîf têne veguhastin. Bi zanîna van pêşniyarên berê û encamên ku di lêkolîna heyî de hatine bidestxistin, meriv dikare texmîn bike ku şiyana spermatozoa ya tevgera ber bi jor ve (reolojî) yek ji taybetmendiyên ku pêvajoya hilbijartinê li ser bingeha wê ye ye. Ev derbasbûna spermatozoa di vajînayê re û ketina wan a nav CCT ji bo hilanînê diyar dike. Wekî ku Forman4 pêşniyar kir, ev dibe ku pêvajoya ketina spermatozoa bo SST û jîngeha wê ji bo demekê û dûv re derketina dema ku leza wan dest pê dike hêdî bibe hêsan bike.
Ji aliyekî din ve, Matsuzaki û Sasanami 21 pêşniyar kirin ku spermatozoayên çûkan di rêyên hilberandina nêr û mê de ji rewşa bêçalaktiyê ber bi rewşa tevgerînê ve diguherin. Astengkirina tevgera spermê ya niştecî di SST de hatiye pêşniyar kirin ku dema dirêj a hilanîna spermê û dûv re jî ciwanbûna piştî derketina ji SST rave bike. Di bin şert û mercên hîpoksîk de, Matsuzaki û hevkarên wî 1 ragihandin ku di SST de hilberîn û berdana bilind a laktatê heye, ku dibe ku bibe sedema astengkirina tevgera spermê ya niştecî. Di vê rewşê de, girîngiya reolojiya spermê di hilbijartin û kişandina spermê de tê xuyang kirin, ne di hilanîna wan de.
Şêweya kombûna spermê wekî ravekirinek maqûl ji bo dema dirêj a hilanîna spermê di SST de tê hesibandin, ji ber ku ev şêwazek hevpar a ragirtina spermê di mirîşkan de ye2,22,23. Bakst û hevkarên wî2 dîtin ku piraniya spermatozoayan bi hev ve girêdayî ne, kombûnên fascikular çêdikin, û spermatozoayên yekane kêm kêm di CCM ya bilbilan de têne dîtin. Ji hêla din ve, Wen û hevkarên wî24 di lûmena SST de di mirîşkan de bêtir spermatozoayên belavbûyî û kêmtir komên spermatozoayan dîtin. Li ser bingeha van çavdêriyan, dikare were texmîn kirin ku meyla kombûna spermê di navbera çûkan de û di navbera spermatozoayên di heman ejakulatê de cûda dibe. Wekî din, Van Krey û hevkarên wî9 pêşniyar kirin ku veqetandina rasthatî ya spermatozoayên kombûyî berpirsiyarê ketina hêdî hêdî ya spermatozoayan nav lûmena lûleya fallopî ye. Li gorî vê hîpotezê, spermatozoayên ku kapasîteya kombûnê kêmtir e divê pêşî ji SST werin derxistin. Di vê çarçoveyê de, şiyana spermatozoayan a aglutinasyonê dibe ku faktorek be ku bandorê li encamên pêşbaziya spermê di çûkên qirêj de dike. Wekî din, her ku sperma aglutinkirî dirêjtir ji hev veqete, ew qas berhemdariya wê dirêjtir tê parastin.
Her çend di gelek lêkolînan de kombûn û kombûna spermê di nav koman de hatiye dîtin2,22,24, lê ji ber tevliheviya çavdêriya wan a kînematîkî di nav SST de ew bi berfirehî nehatine vegotin. Gelek hewl hatine dayîn ku kombûna spermê di vitro de were lêkolîn kirin. Dema ku têla zirav ji dilopa tovê daliqandî hate rakirin, kombûnek berfireh lê demkî hate dîtin. Ev dibe sedema wê rastiyê ku bilbilek dirêjkirî ji dilopê derdikeve, ku rijêna seminal teqlîd dike. Ji ber sînorkirinên 3D û demên zuwabûna dilopên kurt, tevahiya blok zû ket nav xirabûnê9. Di lêkolîna heyî de, bi karanîna mirîşkên Sharkashi û çîpên mîkrofluidîk, em karîbûn rave bikin ka ev kom çawa çêdibin û ew çawa diçin. Komên spermê tavilê piştî berhevkirina spermê çêbûn û hat dîtin ku bi spiral diçin, dema ku di herikînê de hene reolojiya erênî nîşan didin. Wekî din, dema ku bi makroskopîkî têne dîtin, hatiye dîtin ku komên spermê li gorî spermên îzolekirî xêzikiya tevgerê zêde dikin. Ev yek nîşan dide ku dibe ku kombûna spermê berî derbasbûna SST çêbibe û hilberîna spermê ji ber stresê ne bi qadeke piçûk ve sînordar e wekî ku berê hatiye pêşniyar kirin (Tingari û Lake12). Di dema çêbûna tûfan de, spermatozoa bi hev re avjeniyê dikin heta ku ew girêdanek çêdikin, dûv re dûvikên wan li dora hev dipêçin û serê spermatozoyê azad dimîne, lê dûvik û beşa dûr a spermatozoyê bi madeyek şil bi hev ve girêdayî ne. Ji ber vê yekê, serê azad ê ligamentê berpirsiyarê tevgerê ye, mayîna ligamentê dikişîne. Mîkroskopiya elektronî ya şopandina desteyên spermê serên spermê yên girêdayî nîşan da ku bi gelek materyalên şil hatine nixumandin, ku nîşan dide ku serên spermê di desteyên bêhnvedanê de girêdayî ne, ku dibe ku piştî gihîştina cîhê hilanînê (SST) çêbûbe.
Dema ku smearek spermê bi porteqalî ya akridîn tê boyaxkirin, madeya zeliqok a derveyî hucreyê li dora şaneyên spermê di bin mîkroskopa floresan de tê dîtin. Ev made dihêle ku komên spermê bi her rûber an perçeyên derdorê ve zeliqin û bi wan ve girêdayî bimînin da ku ew bi herikîna derdorê re neçin. Bi vî awayî, çavdêriyên me rola zeliqandina spermê bi şiklê komên mobîl nîşan didin. Qabîliyeta wan a avjeniyê li dijî herikînê û zeliqandina bi rûberên nêzîk dihêle ku sperm dirêjtir di SST de bimîne.
Rothschild25 kamerayek hemosîtometriyê bikar anî da ku belavbûna şemitoka ga di dilopek şilbûnê de lêkolîn bike, û bi rêya kamerayek bi mîhwera optîkî ya hem vertîkal û hem jî horizontal a mîkroskopê wêneyên mîkroskopê kişand. Encam nîşan dan ku spermatozoa ber bi rûyê odeyê ve hatine kişandin. Nivîskar pêşniyar dikin ku dibe ku di navbera sperma û rûyê de têkiliyên hîdrodînamîk hebin. Dema ku ev yek tê hesibandin, digel şiyana sperma mirîşkên Sharkashi ya çêkirina çîpên zeliqok, dibe ku îhtîmala ku sperma bi dîwarê SST ve bizeliqîne û ji bo demên dirêj were hilanîn zêde bibe.
Bccetti û Afzeliu26 ragihandin ku glîkokalîksa spermê ji bo naskirin û kombûna gametan pêwîst e. Forman10 dît ku hîdrolîza girêdanên α-glîkozîdîk di pêçên glîkoproteîn-glîkolîpîd de bi dermankirina sperma çûkan bi neuraminidase re bû sedema kêmbûna berhemdariyê bêyî ku bandorê li tevgera spermê bike. Nivîskar pêşniyar dikin ku bandora neuraminidase li ser glîkokalîksê girtina spermê li girêdana malzarok-vajînal xirab dike, bi vî rengî berhemdariyê kêm dike. Çavdêriyên wan nikarin îhtîmala ku dermankirina neuraminidase dikare naskirina sperm û oosîtan kêm bike, ji nedîtî ve werin. Forman û Engel10 dîtin ku berhemdarî kêm bû dema ku mirîşk bi sperma ku bi neuraminidase re hatî dermankirin bi rêya navvajînal hatin çandin. Lêbelê, IVF bi sperma ku bi neuraminidase re hatî dermankirin li gorî mirîşkên kontrolê bandor li ser berhemdariyê nekir. Nivîskaran gihîştin wê encamê ku guhertinên di pêça glîkoproteîn-glîkolîpîd a li dora parzûna spermê de, bi astengkirina girtina spermê li girêdana malzarokê-vajînal, şiyana spermê ya ji bo fertilîzasyonê kêm dike, ku ev yek jî ji ber leza girêdana malzarokê-vajînal windabûna spermê zêde dike, lê bandorê li naskirina sperm û hêkê nake.
Di mirîşkên sor de, Bakst û Bauchan 11 vezîkulên piçûk û perçeyên parzûnê di lûmena SST de dîtin û dîtin ku hin ji van granulan bi parzûna spermê re bûne yek. Nivîskar pêşniyar dikin ku ev têkilî dikarin bibin sedema hilanîna demdirêj a spermatozoayan di SST de. Lêbelê, lêkolîneran çavkaniya van perçeyan diyar nekir, gelo ew ji hêla hucreyên epitelyal ên CCT ve têne derxistin, ji hêla pergala hilberandina mêr ve têne hilberandin û derxistin, an ji hêla spermê bixwe ve têne hilberandin. Her weha, ev perçe berpirsiyarê kombûnê ne. Grützner û hevkarên wî27 ragihandin ku hucreyên epitelyal ên epidîdîmal proteînek taybetî hilberînin û derdixin ku ji bo avakirina rêyên seminal ên yek-por hewce ye. Nivîskar her weha radigihînin ku belavbûna van destan bi têkiliya proteînên epidîdîmal ve girêdayî ye. Nixon û hevkarên wî28 dîtin ku adnexa proteînek derdixin, osteonektîn a dewlemend bi sîsteîn a asîdî; SPARC di avakirina komên spermê de di echidna û platîpusên bi çengên kurt de beşdar e. Belavbûna van tîrêjan bi windabûna vê proteînê ve girêdayî ye.
Di vê lêkolînê de, analîza ultrastrûktûrî bi karanîna mîkroskopa elektronê nîşan da ku spermatozoa bi mîqdarek mezin ji madeyek qelew ve girêdayî ye. Tê texmîn kirin ku ev made berpirsiyarê kombûna ku di navbera û li dora serên girêdayî de kom dibe ne, lê di herêma dûvikê de bi rêjeyên kêmtir. Em texmîn dikin ku ev madeya kombûnê ji pergala hilberandina mêr (epîdîdîm an vas deferens) digel spermê tê derxistin, ji ber ku em pir caran dibînin ku sperm di dema ejakulasyonê de ji lîmf û plazmaya spermê vediqete. Hatiye ragihandin ku dema ku spermatozoa çûkan di nav epîdîdîm û vas deferens re derbas dibin, ew guhertinên têkildarî gihîştinê derbas dikin ku piştgirî didin şiyana wan a girêdana proteînan û bidestxistina glîkoproteînên girêdayî lemma plazmayê. Berdewamiya van proteînan li ser membranên spermê yên niştecî di SST de nîşan dide ku ev proteîn dikarin bandorê li bidestxistina aramiya membrana spermê bikin 30 û berhemdariya wan diyar bikin 31. Ahammad û hevkarên wî32 ragihandin ku spermatozoayên ku ji beşên cûda yên pergala hilberandina nêr (ji testisê heta vas deferensa dûr) hatine wergirtin, bêyî ku germahiya hilanînê li ber çavan were girtin, di bin şert û mercên hilanîna şilavê de zêdebûnek pêşverû di jiyanbûnê de nîşan didin, û jiyanbûna mirîşkan jî piştî çandina sûnî di lûleyên fallopî de zêde dibe.
Spermên mirîşkên Sharkashi xwedî taybetmendî û fonksiyonên cuda ne ji cureyên din ên wekî echidna, platypus, mişkên daristanê, mişkên hirçan û berazên gînê. Di mirîşkên sharkashi de, çêbûna komên spermatozoayan li gorî spermatozoayên yekane leza wan a avjeniyê kêm kir. Lêbelê, van koman rêjeya spermatozoayên reolojîk pozîtîf zêde kirin û şiyana spermatozoayan a stabîlkirina xwe di hawîrdorek dînamîk de zêde kirin. Bi vî rengî, encamên me pêşniyara berê piştrast dikin ku kombûna spermê di SST de bi hilanîna spermê ya demdirêj ve girêdayî ye. Em her weha texmîn dikin ku meyla spermê ya çêkirina komên piçûk dibe ku rêjeya windabûna spermê di SST de kontrol bike, ku dibe ku encama pêşbaziya spermê biguhezîne. Li gorî vê texmînê, spermatozoayên bi kapasîteya kombûna kêm pêşî SST berdidin, lê spermatozoayên bi kapasîteya kombûna bilind piraniya nifşan çêdikin. Çêbûna komên spermê yên yek-por sûdmend e û bandorê li rêjeya dêûbav-zarok dike, lê mekanîzmayek cûda bikar tîne. Di eşîdna û platîpusan de, spermatozoa paralel bi hev re têne rêzkirin da ku leza pêşveçûna tîrêjê zêde bikin. Komên eşîdnayan nêzîkî sê caran ji spermatozoayên yekane zûtir diçin. Baweriya wê ew e ku çêbûna komên spermê yên weha di eşîdnayan de adaptasyonek evolusyonî ye ji bo parastina serdestiyê, ji ber ku mê bêserûber in û bi gelemperî bi çend nêran re hevjîn dibin. Ji ber vê yekê, spermatozoayên ji ejakulatên cûda ji bo fertilîzasyona hêkê bi tundî pêşbaziyê dikin.
Spermayên kombûyî yên mirîşkên sharkasi bi karanîna mîkroskopiya kontrastê ya qonaxan bi hêsanî têne dîtin, ku ev yek wekî avantajek tê hesibandin ji ber ku ew dihêle ku tevgera spermatozoayan di vitro de bi hêsanî were lêkolîn kirin. Mekanîzma ku pê re çêbûna tîpa spermê zayînê di mirîşkên sharkasi de pêş dixe jî ji ya ku di hin memikên plasental de tê dîtin ku tevgera spermayê ya hevkar temsîl dikin wekî mişkên daristanê, ku hin spermatozoa digihîjin hêkan, alîkariya kesên din ên têkildar dikin ku bigihîjin hêkên wan û zirarê bidin wan, cuda ye. ji bo îspatkirina xwe. tevgera altruîst. Xwe-berhemdarkirin 34. Nimûneyek din a tevgera hevkariyê di spermatozoayan de di mişkên hirçan de hat dîtin, ku spermatozoa dikarin bi spermatozoayên herî genetîkî yên têkildar re nas bikin û bi hev re bibin yek û komên hevkariyê ava bikin da ku leza xwe li gorî spermatozoayên ne têkildar zêde bikin35.
Encamên ku di vê lêkolînê de hatine bidestxistin, teoriya Foman a depokirina demdirêj a spermê di SWS de nakok nakin. Lêkolîner radigihînin ku şaneyên spermê di herikîna şaneyên epitelyal ên ku SST dorpêç dikin de ji bo demek dirêj dimeşin, û piştî demek diyarkirî, depoyên enerjiyê yên şaneyên spermê kêm dibin, ku di encamê de leza kêm dibe, ku dihêle madeyên bi giraniya molekulî yên piçûk werin derxistin. Enerjiya spermê bi herikîna şilavê ji lûmena SST-ê Valahiya lûleya fallopî. Di vê lêkolînê de, me dît ku nîvê spermên yekane şiyana avjeniyê li dijî şilavên herikîn nîşan dan, û girêdana wan di nav desteyê de şiyana wan a nîşandana reolojiya erênî zêde kir. Wekî din, daneyên me bi yên Matsuzaki et al. 1 re li hev in ku ragihandin ku zêdebûna veşartina laktatê di SST-ê de dibe ku tevgera spermê ya niştecî asteng bike. Lêbelê, encamên me avakirina lîgamentên tevger ên spermê û tevgera wan a reolojîk di hebûna hawîrdorek dînamîk de di nav mîkrokanalek de vedibêjin da ku hewl bidin ku tevgera wan di SST-ê de ronî bikin. Lêkolînên pêşerojê dibe ku li ser destnîşankirina pêkhateya kîmyewî û eslê madeya aglutînasyonê bisekinin, ku bê guman dê ji lêkolîneran re bibe alîkar ku rêbazên nû ji bo hilanîna sperma şile û dirêjkirina dema berhemdariyê pêş bixin.
Di lêkolînê de panzdeh sharkasi yên nêr ên 30 hefteyî yên bê stû û tazî (homozygot serdest; Na Na) wekî donorên spermê hatin hilbijartin. Çûk li Çewlika Lêkolînê ya Mirîşkan a Fakulteya Çandiniyê, Zanîngeha Aşît, Parêzgeha Aşît, Misir hatin xwedîkirin. Çûk di qefesên takekesî (30 x 40 x 40 cm) de hatin bicihkirin, di bernameyek ronahiyê de (16 demjimêr ronahî û 8 demjimêr tarîtî) hatin bicihkirin û parêzek ku 160 g proteîna xav, 2800 kcal enerjiya metabolîzekirî, 35 g kalsiyûm ji bo her yekî. 5 gram fosfora berdest ji bo her kîloyek parêzê hebû, hat dayîn.
Li gorî daneyên 36, ​​37, sperm ji mêran bi masajkirina zik hatiye berhevkirin. Bi tevahî 45 nimûneyên sperm ji 15 mêran di nav 3 rojan de hatine berhevkirin. Sperm (n = 15/roj) tavilê bi rêjeya 1:1 (v:v) bi Belsville Poultry Semen Diluent ve hatiye şilkirin, ku tê de potasyûm dîfosfat (1.27 g), monosodyûm glutamat monohîdrat (0.867 g), fruktoz (0.5 d), sodyûm asetat bêav (0.43 g), trîs(hîdroksîmetîl)amînometan (0.195 g), potasyûm sîtrat monohîdrat (0.064 g), potasyûm monofosfat (0.065 g), magnezyûm klorîd (0.034 g) û H2O (100 ml) hene, pH = 7, 5, osmolarîte 333 mOsm/kg38. Nimûneyên spermê yên şilkirî pêşî di bin mîkroskopa ronî de hatin lêkolînkirin da ku qalîteya spermê (şilbûn) baş be û dûv re di serşokek avê de li 37°C heta ku di nav nîv saetê de piştî berhevkirinê werin bikar anîn hatin hilanîn.
Kînematîk û reolojiya spermatozoidan bi karanîna pergala cîhazên mîkrofluîdîk têne vegotin. Nimûneyên spermê di Beltsville Avian Semen Diluent de heta 1:40 hatin şilkirin, li cîhazek mîkrofluîdîk hatin barkirin (li jêr binêre), û parametreyên kînetîk bi karanîna pergala Analîza Spermê ya Komputerîzekirî (CASA) ku berê ji bo taybetmendiya mîkrofluîdîkê hatî pêşve xistin hatin destnîşankirin. li ser tevgera spermatozoidan di navgîna şil de (Beşa Endezyariya Mekanîkî, Fakulteya Endezyariyê, Zanîngeha Assiut, Misir). Plugin dikare li vir were dakêşandin: http://www.assiutmicrofluidics.com/research/casa39. Leza xêzê (VCL, μm/s), leza xêzikî (VSL, μm/s) û leza trajektora navînî (VAP, μm/s) hatin pîvandin. Vîdyoyên spermatozoidan bi karanîna mîkroskopa kontrastê ya qonaxa berevajî ya Optika XDS-3 (bi objektîfa 40x) ku bi kamerayek Tucson ISH1000 ve bi 30 fps ji bo 3 saniyan ve girêdayî ye hatin kişandin. Nermalava CASA bikar bînin da ku herî kêm sê dever û 500 rêyên spermê ji bo her nimûneyekê lêkolîn bikin. Vîdyoya tomarkirî bi karanîna CASA-yek malê hatiye hilberandin. Pênasîna tevgerê di pêveka CASA de li ser bingeha leza avjeniya spermê li gorî rêjeya herikînê ye, û parametreyên din ên wekî tevgera alî-bi-alî nagire nav xwe, ji ber ku ev di herikîna şilavê de pêbawertir hatiye dîtin. Tevgera reolojîk wekî tevgera şaneyên spermê li dijî rêça herikîna şilavê tê binavkirin. Spermatozoayên xwedî taybetmendiyên reolojîk li ser hejmara spermatozoayên tevgerîn hatin dabeş kirin; spermatozoayên ku di bêhnvedanê de bûn û spermatozoayên ku bi awayekî konvektîf diçin ji hejmartinê hatin derxistin.
Hemû kîmyewiyên ku hatine bikaranîn ji Elgomhoria Pharmaceuticals (Qahîre, Misir) hatine wergirtin, heya ku tiştekî din neyê gotin. Amûr wekî ku ji hêla El-sherry et al. 40 ve bi hin guhertinan hatiye vegotin, hatiye çêkirin. Materyalên ku ji bo çêkirina mîkrokanalan hatine bikaranîn plakayên cam (Howard Glass, Worcester, MA), berxwedana neyînî ya SU-8-25 (MicroChem, Newton, CA), alkola dîaseton (Sigma Aldrich, Steinheim, Almanya), û polîaseton. -184, Dow Corning, Midland, Michigan in. Mîkrokanal bi karanîna lîtografiya nerm têne çêkirin. Pêşî, maskek rûyê parastinê ya zelal bi sêwirana mîkrokanala xwestî li ser çapkerek çareseriya bilind (Prismatic, Qahîre, Misir û Pacific Arts and Design, Markham, ON) hate çapkirin. Master bi karanîna plakayên cam wekî substrat hatin çêkirin. Plak di aseton, îzopropanol û ava deîyonîze de hatin paqijkirin û dûv re bi qatek 20 µm ya SU8-25 bi pêçandina spin (3000 rpm, 1 deqe) hatin pêçandin. Paşê qatên SU-8 bi nermî hatin hişkkirin (65°C, 2 deqe û 95°C, 10 deqe) û 50 saniyeyan li ber tîrêjên UV hatin hiştin. Piştî derxistinê, ji bo girêdana qatên SU-8 yên vekirî, 1 deqe û 4 deqe li 65°C û 95°C hatin pijandin, piştre jî 6,5 deqe di alkola dîasetonê de hatin pêşve xistin. Waflan bi hişkî (200°C, 15 deqe) hatin pijandin da ku qata SU-8 bêtir hişk bibe.
PDMS bi tevlihevkirina monomer û hişkkerê bi rêjeya giraniya 10:1 hate amadekirin, dûv re di zuwakerek valahiyê de hate paqijkirin û li ser çarçoveya sereke ya SU-8 hate rijandin. PDMS di firinekê de hate hişkkirin (120°C, 30 deqe), dûv re kanal hatin birîn, ji masterê veqetiyan, û qul kirin da ku lûle li ketin û derketina mîkrokanalê werin girêdan. Di dawiyê de, mîkrokanalên PDMS bi karanîna pêvajoyek korona ya veguhêzbar (Electro-Technic Products, Chicago, IL) wekî ku li cîhek din hatî vegotin, bi domdarî bi slaytên mîkroskopê ve hatin girêdan. Mîkrokanala ku di vê lêkolînê de hatî bikar anîn 200 µm × 20 µm (W × H) dipîve û 3.6 cm dirêj e.
Herikîna şilavê ya ku ji ber zexta hîdrostatîk di hundirê mîkrokanalê de çêdibe, bi parastina asta şilavê di depoya ketinê de li jor cudahiya bilindahiyê Δh39 di depoya derketinê de tê bidestxistin (Wêne 1).
ku f katsayiya xişandinê ye, ku wekî f = C/Re ji bo herikîna lamîner di kanalek çargoşeyî de tê pênasekirin, ku C sabît e û li gorî rêjeya aliyên kanalê girêdayî ye, L dirêjahiya mîkrokanalê ye, Vav leza navînî ya di hundurê mîkrokanalê de ye, Dh diametera hîdrolîk a kanalê ye, g - lezandina gravîtasyonê ye. Bi karanîna vê hevkêşeyê, leza navînî ya kanalê dikare bi karanîna hevkêşeya jêrîn were hesibandin: