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有望な抗菌性根管洗浄剤としての塩酸クロルヘキシジンナノエマルジョンの組成と特性：in vitroおよびex vivo研究
著者 Abdelmonem R.、Younis MK、Hassan DH、El-Sayed Ahmed MAEG、Hassanien E.、El-Batuti K.、Elfaham A.
序論と目的：クロリンヘキシジン塩酸塩[Chx.HCl]は広範囲の抗菌活性、持続作用、低毒性を有するため、根管洗浄剤として有望視されている。この研究の目的は、新しい組成のChx.HClナノエマルジョンを使用してChx.HClの浸透力、洗浄力、および抗菌作用を高め、それを根管洗浄剤として使用することであった。方法：Chx.HClナノエマルジョンは、2種類の油（オレイン酸とLabrafil M1944CS）、2種類の界面活性剤（Tween 20とTween 80）、および共界面活性剤（プロピレングリコール）を使用して調製した。擬似三成分相図を作成して、最適なシステムを示した。調製したナノエマルジョン製剤は、薬物含有量、乳化時間、分散性、液滴サイズ、in vitro薬物放出、熱力学的安定性、in vitro抗菌活性、および選択された製剤のin vitro研究について評価した。Chx.HCl 0.75%および1.6%ナノエマルジョンの浸透、洗浄、および抗菌作用を、通常の粒子サイズと比較して根管洗浄剤として使用した。結果。選択された製剤は、2% ラブラフィル、12% トゥイーン 80、および 6% プロピレン グリコールを含む F6 でした。粒子サイズが小さく (12.18 nm)、乳化時間が短く (1.67 秒)、2 分後には速やかに溶解します。熱力学的/物理的に安定したシステムであることがわかりました。従来の Chx.HCl 粒子サイズと比較して、Chx.HCl 1.6% ナノエマルションの高濃度では、粒子サイズが小さいため浸透性が優れていました。通常の粒子サイズの材料 (2609.56 µm2) と比較して、1.6% Chx.HCl ナノエマルションは残留物の平均表面積が最小 (2001.47 µm2) でした。結論: ナノエマルション組成物 Chx.HCl は、洗浄能力と抗菌作用が優れています。エンテロコッカス フェカリスに対して非常に効果的な殺菌作用があり、細菌細胞の収縮率は高いか、完全に破壊されます。キーワード：塩酸クロルヘキシジン、ナノエマルジョン、根管洗浄剤、浸透性、洗浄効果、抗菌洗浄剤。
ナノエマルジョンは、液滴サイズが 50～500 nm の範囲にあるエマルジョンの一種で、その独自の特性により近年大きな注目を集めています。洗浄特性が優れており、水の硬度の影響を受けず、ほとんどの場合毒性が低く、静電相互作用がありません。2 ナノテクノロジーは、同様のバルク製品と比較して、超微細な粒子サイズ、大きな表面積対質量比、独自の物理的および化学的特性を持ち、歯科感染症の治療と予防に新たな展望を開きます。3 塩酸クロルヘキシジン (Chx.HCl) は水にわずかに溶け、アルコールに非常にわずかに溶け、光で徐々に着色します。4.5 SH. HCl は広範囲の抗菌作用、持続作用、低毒性を持っています。これらの特性により、潜在的な根管洗浄剤としても推奨されています。Chx.HCl の主な利点は、細胞毒性が低く、無臭で、不快な味がないことです。 6-9 根管消毒を改善するために、いくつかの種類のレーザーが使用されてきました。レーザーの殺菌効果は、波長とエネルギー、および熱曝露に依存します。熱曝露は細菌の細胞壁に変化を引き起こし、浸透圧勾配の変化を経て細胞死に至ります。レーザーと根管洗浄器の相互作用は、歯髄消毒に新たな展望を開きます。10 超音波エネルギーは、高周波ですが振幅は低くなります。 これらのファイルは、人間の聴覚の限界（20kHz以上）を超える25～30kHzの超音波周波数で振動するように設計されています。 これらのファイルは、人間の聴覚の限界（20kHz以上）を超える25～30kHzの超音波周波数で振動するように設計されています。 Файлы предназначены для колебаний на ультразвуковых частотах 25–30 кГц, которые находятся за пределами слухового восприятия человека (> 20 кГц)。 これらのファイルは、人間の可聴域（20kHz以上）を超える25～30kHzの超音波周波数で振動するように設計されています。これらのファイルは、人間の感覚の限界 (> 20 kHz) を超える 25 ～ 30 kHz の超音波周波数で振動するように設計されています。これらのファイルは 25 ～ 30 kHz で設計されています Файлы рассчитаны на колебания на ультразвуковых частотах 25–30 кГц, что выходит за пределы слухового восприятия человека (>20 кГц)。 これらのファイルは、人間の可聴域（20kHz以上）を超える25～30kHzの超音波周波数での振動に対応するように設計されています。これらは横振動で動作し、その長さに沿って結び目と腹の特性モードを設定します。「受動的超音波洗浄」（PUI）という用語は、器具や壁が歯内ファイルや器具に接触しない洗浄プロトコルです。PUI 中、超音波エネルギーは振動するファイルから根管内の洗浄液に伝達されます。後者は、洗浄剤の音波流とキャビテーションを引き起こす可能性があります。11 上記のデータに基づいて、Chx.HCl の浸透および洗浄作用の改善を評価するためにナノテクノロジーを使用することが適切であると考えられます。
クロルヘキシジン塩酸塩 Chx.HCl は Arab Drug Company for Pharmaceuticals (エジプト、カイロ) より提供されました。Labrafil M 1944 CS (オレオイルポリオキシ-6-グリセリド) は Gattefosse (フランス、サン・プリエスト) より提供されました。Tween 20 (ポリオキシエチレン (20) ソルビタンモノラウレート)、Tween 80 (ポリオキシエチレン (80) ソルビタンモノオレエート)、オレイン酸、プロピレングリコールは Gomhorya Company (エジプト、カイロ) より提供されました。歯周治療または矯正治療のための非う蝕単根歯の抜歯、アインシャムス大学歯学部顎顔面科学科、エジプト、カイロ。脳心臓抽出物 (BHI) ブロス (RC CLEANER、IIchung Dental Ltd.、韓国、ソウル) で培養した Enterococcus faecalis (株 ATCC 29212) の純粋培養。
Chx.HClの各種媒体（オレイン酸、Labrafil M 1944CS、Tween 20、Tween 80、プロピレングリコール、水）における溶解度を検討した。遠心分離管にChx.HClを過剰量（50 mg）入れ、媒体相5.0 gを加えた。混合物をボルテックスミキサーで15分間振とうした後、室温で保存した。24時間後、管内の不溶性薬物ペレットを3000 rpmで5分間遠心分離し、透明な上清を得た。十分な量のサンプル溶液を採取し、n-ブタノールで希釈した。希釈したサンプルをWhatman 102ろ紙でろ過し、飽和溶液中の薬物濃度を測定するためにn-ブタノールで適切に希釈した。サンプルは、n-ブタノールを対照として、260 nmでUV分光光度計を用いて分析した。12.13
理想的なナノエマルションの最適なパラメータを得るために、製剤に必要な各成分の正確な比率を決定するために、擬似三相図が作成されました。14 製剤は、油（オレイン酸およびLabrafil M1944CS）、界面活性剤（Tween 20およびTween 80）、および追加の界面活性剤であるプロピレングリコールを使用して作成されました。まず、界面活性剤（共界面活性剤なし）と油の別々の混合物を、異なる体積比（1:9から9:1まで）で準備しました。混合物を水で滴定（水を滴下）するときは、混合物が透明から濁るまでを終点として注意深く監視します。これらの終点は、擬似三相図にマークされます。界面活性剤と二次界面活性剤（Smix）の混合物（2:1および3:1の比率で準備され、選択された油15,16と混合）についても、プロセス全体が繰り返されました。
Chx.HClを含むナノエマルション系は、油相としてLabrafil M 1944 CS、界面活性剤としてTween 80または20、補助界面活性剤としてプロピレングリコール、そして最後に水を用いて調製した（表1）。薬剤をLabrafil M 1944 CSに溶解し、界面活性剤と補助界面活性剤の混合水を徐々に混合しながらゆっくりと添加した。添加する界面活性剤と補助界面活性剤の量、および添加可能な油相の割合は、擬似三成分相図を用いて決定した。顆粒を分散させるのに必要なサイズ範囲を得るために、超音波発生器（Ultrasonic LC 60 H、Elma、ドイツ）を使用した。その後、バランスを取った。17
分散性試験は、溶解試験装置（Dr. Schleuniger Pharmaton社製、モデルDiss 6000、スイス、トゥーン）を用いて実施した。各製剤1 mlを37±0.5℃の水500 mlに加えた。標準的なステンレス鋼製溶解パドルを50 rpmで回転させ、穏やかな撹拌を行った。得られたエマルジョンを目視で判定し、透明、青みがかった半透明、乳白色、または濁りに分類した。今後の研究には、透明な製剤を選択した。18.19
擬似三相図に基づく最適化されたナノエマルション組成物からのChx.HClの抽出は、超音波技術を用いてn-ブタノールの製造につながる。適切な希釈後、抽出物を分光光度計を用いて波長260 nmで分析し、Chx.HClの含有量を測定した。
自己乳化時間を試験するため、各組成物1 mlを蒸留水250 mlを入れたビーカーに加え、37 ± 1 °Cに保ち、50 rpmで撹拌した。自己乳化時間は、希釈後に前濃縮液が均一な混合物を形成するまでの時間とした。21
液滴サイズ分析のために、最適化された製剤50 mgをフラスコに入れ、水1000 mlで希釈し、手で優しく混合した。液滴サイズ分布は、Malvern Zetasizer 2000装置（Malvern Instruments Ltd.、英国マルバーン）を用いて、後方散乱検出条件173°、温度25℃、屈折率1.330で測定した。
in vitro溶出試験は、USPタイプII装置（パドル式）（Dr. Schleuniger Pharmaton、Dissモデル6000）を用いて50 rpmで実施した。溶出媒体として37±0.5℃に保った蒸留水（500 ml）を用い、調製した組成物5 mlを溶出媒体に滴下した。その後、一定時間間隔で溶出媒体5 mlを採取し、254 nmにおける吸光度を分光光度計で測定することにより、放出された薬物量を定量した。実験は3回繰り返して行った。
次に、Chx.HClを基に調製したナノエマルジョンからのin vitroにおけるChx.HCl放出の速度論的パラメータを測定した。Chx.HClの放出に最適な速度論的順序を選択するために、ゼロ次、一次、二次速度論およびHiguchi拡散モデルを検証した。
各製剤2 mlを室温で48時間保存した後、相分離を観察した。次に、各Chx.HClナノエマルジョン製剤1 mlを25℃の蒸留水で10 mlおよび100 mlに希釈し、24時間保存した。その後、相分離を観察した。21
次に、各組成物2 mlずつをスクリューキャップ付きの透明ボトルに別々に移し、2℃の冷蔵庫で24時間保管した。その後、取り出して25℃と40℃で保管した。冷却・融解サイクルを1回実施した。その後、サンプルの相分離と薬物沈殿を観察した。21
各Chx.HClナノエマルジョン製剤の5 mlサンプルをガラス管に移し、実験室用遠心分離機（上海外科器具工場製マイクロ遠心分離機モデル800、中華人民共和国上海市）に入れ、4000 rpmで5分間遠心分離した。その後、サンプル中の相分離と薬物沈殿を観察した。21
すべての実験は、エジプトのアイン・シャムス大学の倫理委員会によって承認されました。根尖が形成された非う蝕性の単根ヒト歯50本が選択されました。抜歯された歯は、患者から署名された書面によるインフォームドコンセントを得た後に使用されました。歯には、上顎および下顎切歯と下顎小臼歯が含まれます。根の外面はキュレットで処理され、すべての歯は0.5% NaOClで24時間表面滅菌され、その後、使用時まで滅菌生理食塩水に保存されました。歯冠は安全な側ダイヤモンドディスクで除去され、歯の長さは根尖から歯冠縁まで16 mmに正規化されました。24,25 洗浄液に応じて、歯は次のグループに分けられます。
(A) グループ (n=24) のサンプルを Chx.HCl ナノエマルジョンで洗浄した。サブグループ (I) (n = 12) は、サンプルを 0.75% 濃度の Chx.HCl ナノエマルジョン 5 ml でリンスした。サブグループ (II) (n=12) は、サンプルを 1.6% Chx.HCl ナノエマルジョン 5 ml でリンスした。(B) グループ (n=24) のサンプルを、通常の粒子サイズの 2% Chx.HCl 5 ml で洗浄します。コントロールグループ: (n=2) は、活性化せずに生理食塩水 5 ml で洗浄します。
歯冠が形成された、う蝕のない単根のヒト歯44本を選択した。歯には上顎および下顎切歯、下顎小臼歯が含まれる。歯根の外表面をキュレットで処理し、すべての歯を0.5%次亜塩素酸ナトリウム溶液で24時間表面殺菌した後、使用時まで滅菌生理食塩水に保存した。歯冠は安全ダイヤモンドディスクで除去し、歯根尖から歯冠縁までの長さを16mmに正規化した。24,25,29
標準的な方法を用いて、メインの根尖ファイルサイズ50の機械的形成を行った。手術中は滅菌生理食塩水を洗浄液として使用した。最後に、スメア層を除去するために、根管を17% EDTA 2 mlで1分間洗浄した。各検体の根尖孔を含む根面全体を、漏れを防ぐためにネイルポリッシュ（シアノアクリレート接着剤）2層で覆った。歯は、取り扱いと識別を容易にするために、歯石ブロックに垂直にセットした。29-33 サンプルは、121℃、15 psiで20分間オートクレーブ滅菌した。滅菌後、すべてのサンプルは滅菌器具を使用して無菌条件下で輸送および処理した。根管は、脳心臓抽出物（BHI）ブロスで37℃で24時間培養したEnterococcus faecalis（株ATCC 29212）の純粋培養で汚染した。滅菌マイクロピペットを用いて、E. faecalis接種液の透明な懸濁液を、準備したすべての歯の根管に注入した。その後、ブロックを滅菌ビーカーに入れ、37℃で24時間培養した。31、34、35
(A) グループ (n=24) のサンプルを Chx.HCl ナノエマルジョンで洗浄した。サブグループ (I) (n=12) のサンプルを 0.75% 濃度の Chx.HCl ナノエマルジョン 5 ml でリンスした。サブグループ (II) (n = 12) のサンプルを 1.6% 濃度の Chx.HCl ナノエマルジョン 5 ml でリンスした。
対照群：陽性対照（n=4）汚染された根管を5 mlの生理食塩水で洗浄し、陽性対照として保存した。陰性対照：（n=4）検体には懸濁液を注入せず、すなわち根管をE. faecalisで汚染せず、滅菌と手順の信頼性を確認するための陰性対照として無菌状態に保った。各サンプルに5 mlの試験洗浄液を使用する。その後、各サンプルを1 mlの滅菌生理食塩水で最終洗浄した。
根管からのサンプル採取には、サイズ35の滅菌済みペーパーチップを使用します。ペーパーチップをチューブに作業長まで挿入し、10秒間放置した後、寒天培地に移して、プレートあたりのコロニー形成単位（CFU）数を測定します。プレートは37℃で24時間培養し、細菌の増殖を目視で評価します。透明なプレートは完全な滅菌を示します。ぼやけたプレートは陽性増殖を示しているとみなされます。シャーレあたりの細菌増殖ゾーンにおける平均CFU数を測定し、CFU数を算出します。生存菌数は主に滴下プレート上の生菌数で測定します。さらに、低CFUのカウントには注ぎカップを使用し、高CFUのカウントには10​​⁶倍希釈液を使用します。36.37
実験当日にオートクレーブで滅菌済みの解凍した寒天培地15 mlが入った試験管を準備する。Enterococcus faecalisは、非常に高いpH、酸性度、高温でも生存できる通性グラム陽性嫌気性球菌である。39 細菌サンプル（Enterococcus faecalis ATCC 29212）は、コロニーの細胞を滅菌生理食塩水と混合して調製した。次に、細菌サンプルを生理食塩水で希釈して、McFarland 0.5（108 CFU/mLに相当）に合わせ、添加したサンプル量は10 µlであった。濁度標準液（マクファーランド0.5）40は、1%（10 g/l）塩化バリウム二水和物溶液0.6 mlを100 ml目盛付きシリンダーに注ぎ、1%（10 g/l）硫酸で100 mlに満たすことによって調製した。濁度標準液は、ブロスサンプルと同じチューブに入れ、蒸発を防ぐために密封して暗所で6か月間室温で保存した。空のペトリ皿の蓋を開け、サンプルを皿の中央に注ぐ。寒天が完全に固まったら、プレートを反転させて37℃で24時間培養する。
すべてのデータは収集、集計され、統計分析にかけられた。統計分析は、IBM® SPSS® Statistical Version 17 for Windows（SPSS Inc.、IBM Corporation、Armonk、NY、USA）を使用して実施された。
様々な油相、界面活性剤溶液、共界面活性剤溶液、および水における Chx.HCl の溶解度を調べた。Chx.Hcl は Labrafil M で最も高い溶解度を示し、オレイン酸で最も低い溶解度を示した。ナノエマルジョンでは、油相における薬物の溶解度が高いことが重要である。なぜなら、ナノエマルジョンは薬物を溶解した状態で保持できるため、油相における薬物の溶解度が高いほど、製剤中の油の量が少なくなり、したがって薬物の含有量も少なくなるからである。油滴を乳化するには、一定量の界面活性剤と共界面活性剤が必要である。
擬似三相図を作成し、ナノエマルション領域を定義し、選択した油、界面活性剤、および追加の界面活性剤（それぞれLabrafil M、Tween 80、Tween 20、およびプロピレングリコール）の濃度を最適化しました。Chx.Hclはオレイン酸への溶解度が非常に低く、オレイン酸を最初の水滴で滴定すると濁りが生じます。そのため、オレイン酸系はこの研究から除外されました。他の製剤は、油と界面活性剤の1:9混合物を使用して調製されています。pHとイオン強度の範囲が広いため、これらの界面活性剤が選択されました。
調製された製剤はすべて透明であったが、システムF2は濁っていたため、その後の評価研究から除外された。
理想的なナノエマルション製剤は、穏やかな撹拌で希釈した際に、完全にかつ迅速に分散できる必要があります。Chx.HClナノエマルション製剤は、1.67秒から12.33秒という短い乳化時間を示しました。Tween 80は最も短い乳化時間を示しました。これは、Tween 80の溶解能力が高いことによって説明できます。自己乳化時間は界面活性剤濃度の増加とともに長くなりますが、これは界面活性剤の作用による系の粘度の増加によるものと考えられます。
エマルションの液滴サイズは、薬物放出の速度と程度を決定します。エマルションの液滴サイズが小さいほど、乳化時間が短くなり、薬物吸収のための表面積が大きくなります。選択された Chx.HCl ナノエマルション組成物の平均液滴サイズは、それぞれ 711±0.44、587±15.3、10.97±0.11、16.43±4.55、および 12.18±2.48 であり、PDI は、F1、F2、F3 でそれぞれ 0.76、0.19、0.61、0.47、および 0.76、F4、F5、および F6 でそれぞれ 0.16 でした。界面活性剤として Tween 80 を含む製剤は、球晶が小さくなりました。これは、Tween 80 の乳化力が高いためと考えられます。PDI 値が低いほど、システムサイズ分布が狭くなります。これらの製剤は、液滴半径が可視光の波長（390～750 nm）よりも小さいため、光散乱が最小限に抑えられ、すっきりとした外観を呈する。41
図2は、調製した製剤から放出されたChx.HClの割合を示しています。調製したChx.HClナノエマルション製剤からの薬物の完全放出は2～7分でした。最も高い薬物放出速度はChx.HCl F6ナノエマルション製剤（2分）で得られましたが、これは、より高い乳化度を示すTween 80の存在と、その結果形成されたナノエマルションが薬物放出のための大きな表面積を提供し、薬物放出速度の向上を可能にするためと考えられます。同時に、プロピレングリコールの溶解性により、多量の親水性界面活性剤を油に溶解させることができます。40
Chx.HClのin vitroでの放出は異なる速度論的順序に従うことがわかっており、異なる方法で調製されたナノエマルション製剤からの薬物放出を反映する明確な速度論的順序は存在しない。F4薬物の放出速度論は一次速度論であり、これは、薬物が内部に残存する量に比例して放出されることを意味する。42 他の薬物の放出速度論は、放出される薬物の量がナノエマルション中の総薬物量と薬物溶解度の平方根に比例することを示したHiguasha拡散モデルと一致していた。42
選択された製剤は、加熱冷却サイクル、遠心分離、凍結融解サイクルを用いたストレス試験により、さまざまな熱力学的安定性に曝された。製剤F3とF4は融解サイクル後に薬剤の沈殿を示したが、F1は増粘（ゲル化）を示した。F5とF6は連続遠心分離サイクル、加熱冷却試験、凍結融解試験に合格した。ナノエマルジョンは、相分離、乳化、または亀裂を起こさずに、油、界面活性剤、および水の特定の濃度で形成される熱力学的に安定なシステムである。ナノエマルジョンを、運動学的に安定で最終的に相分離するエマルジョンと区別するのは熱安定性である。19 F3は他の製剤よりも大きな粒子サイズ（587 nm）を示し、これが熱力学的安定性試験における相分離と薬剤沈殿を説明する可能性がある。 Tween 80を含み、共界面活性剤を含まないF4では薬物の沈殿が見られました。これは、ナノエマルション製剤の安定性を向上させるためにプロピレングリコールとTween 80を使用する必要があることを示唆している可能性があります。Tween 20を含み、追加の界面活性剤を含まないF1では、液滴の凝集によるゲルの粘度または強度の増加である増粘（ゲル化）が見られました。
安定性試験の結果から、粒子分散性を高め、薬剤の沈殿を防ぐために、プロピレングリコール界面活性剤を添加することが重要であることが示された。43 F6は、粒子径が小さい（12.18 nm）、乳化時間が短い（1.67秒）、2分後に溶解速度が速いことから、最適な製剤であった。熱力学的にも物理的にも安定なシステムであることが判明したため、さらなる研究対象として選定された。
根管治療後の失敗はますます頻繁になっており、患者はより複雑な感染症を発症するリスクが高まっている。44,45 根管の消毒と充填の際にはバイオフィルムを除去する必要がある。46,47 根管系の複雑さのため、器具と洗浄のみで根管内の細菌を完全に除去することは困難である。48 根管洗浄液の有効性は、洗浄液のDTへの浸透と細菌への曝露時間に依存する。49 そのため、根管を徹底的に滅菌するための新しい方法が試され、検証されてきた。従来の洗浄液では、DTへの浸透が少ないため、E. faecalisを完全に除去することはできない。50
ナノエマルジョンリンスの平均洗浄力は2001.47 µm²、リンス剤の平均粒子径は2609.56 µmであった。ナノエマルジョン洗浄と通常の粒子径洗浄の平均差は608.09 µm²であった。 ナノエマルジョン洗浄液と通常の粒子サイズの洗浄液の間には、統計的に非常に有意な差（P<0.001）があり、（P値0.00052）であった。 ナノエマルジョン洗浄液と通常の粒子サイズの洗浄液の間には、統計的に非常に有意な差（P<0.001）があり、（P値0.00052）であった。 Между ирригационными растворами наноэмульсии ирригационными растворами с нормальным размером частиц наблюдалась статистически высокозначимая (P<0,001) разница (значение P 0,00052)。 ナノエマルジョン洗浄液と通常の粒子洗浄液の間には、統計的に非常に有意な差（P<0.001）（P値0.00052）が認められた。コーンエラストマー洗浄剤と通常の粒子径洗浄剤との間には、理論上顕著な差が存在する（Ｐ＜０．００１）（Ｐ値０．０００５２）。コーンエラストマー洗浄剤と通常の粒子径洗浄剤との間には、理論上顕著な差が存在する（Ｐ＜０．００１）（Ｐ値０．０００５２）。 Между ополаскивателем с наноэмульсией и ополаскивателем с нормальным размером частиц была статистически очень значимая разница (P<0,0001) (значение P 0,00052)。 ナノエマルジョンリンスと通常の粒子サイズのリンスの間には、統計的に非常に有意な差が認められた（P<0.0001、P値0.00052）。ナノエマルジョンは、通常の粒子サイズの材料と比較して統計的に非常に有意な差を示し、平均残留デブリ表面積が低く、つまりナノエマルジョン材料が最高の洗浄能力を示したことが図3に示されている。
図3. リンス剤の洗浄性能の比較：（A）ナノCHXレーザー活性化、（B）CHXレーザー活性化、（C）PUIナノCHX、（D）ナノCHX活性化なし、（E）CHX活性化なし、（F）CHX PUI活性化。
残存するChx.HCl 1.6%断片の平均表面積は2320.36 µm2であり、Chx.HCl 2%の平均表面積は2949.85 µm2であった。 高濃度のナノエマルジョン洗浄液と通常の粒子サイズの洗浄液の間には、統計的に非常に有意な差（P<0.001）が認められた（P値0.00000）。 高濃度のナノエマルジョン洗浄液と通常の粒子サイズの洗浄液の間には、統計的に非常に有意な差（P<0.001）が認められた（P値0.00000）。 Наблюдалась статистически высокозначимая (P<0,001) разница между более высокой концентрацией наноэмульсионных ирригационных растворов ирригационными растворами с нормальным размером частиц (значение P) 0,00000)。 ナノエマルジョン洗浄液の高濃度と通常の粒子サイズの洗浄液の間には、統計的に非常に有意な差（P<0.001）が認められた（P値0.00000）。より高濃度のカーボン乳液洗浄剤と通常の粒子径の洗浄剤との間には、理論上顕著な差がある（Ｐ＜０．００１）（Ｐ値０．０００００）。より高濃度のカーボン乳液洗浄剤と通常の粒子径の洗浄剤との間には、理論的に明らかな差が存在する（P<0.001）（P 0 0.0 Наблюдалась статистически очень значимая разница (P<0,001) между более высокими концентрациями ополаскивателя с наноэмульсией и ополаскивателя с нормальным размером частиц (значение P 0,00000)。 高濃度のナノエマルジョンリンスと通常の粒子サイズのリンスの間には、統計的に非常に有意な差が認められた（P<0.001、P値0.00000）。ナノエマルジョン洗浄液の濃度は通常の粒子サイズの洗浄液よりも低かったが、この低濃度の方が、歯垢の除去や根管洗浄において著しく効果的であった。
PUIは、他の活性化方法と比較して、統計的に非常に有意な差を示した（p<0.001）。 PUIは、他の活性化方法と比較して、統計的に非常に有意な差を示した（p<0.001）。 PUI имел статистически высокозначимую разницу (p<0,001) по сравнению с другими методами активации. PUIは、他の活性化方法と比較して、統計的に非常に有意な差を示した（p<0.001）。他の活性化方法と比較して、ＰＵＩには、理論的に非常に顕著な差がある（ｐ＜０．００１）。他の活性化方法と比較して、ＰＵＩには、理論的に非常に顕著な差がある（ｐ＜０．００１）。 По сравнению с другими методами активации PUI имел статистически очень значимую разницу (p<0,001)。 他の活性化方法と比較して、PUIは統計的に非常に有意な差を示した（p<0.001）。ISPの作動により、残骸の残留表面積の平均は1695.31 µm2であった。 PUIとレーザーの平均差は987.89929で、統計的に非常に有意な差（P<0.001）を示しました（p値0.00000）。 PUIとレーザーの平均差は987.89929で、統計的に非常に有意な差（P<0.001）を示しました（p値0.00000）。 Средняя разница между PUI и Laser составила 987,89929, демонстрируя высокостатистически значимую (P<0,001) разницу с (p-значение 0,00000)。 PUIとレーザーの平均差は987.89929であり、統計的に非常に有意な差（P<0.001）を示しました（p値0.00000）。 ＰＵＩとレーザーの間の平均差は９８７．８９９２９であり、高度な理論的一致性（ｐ値０．０００００）を示した。PUI 和レーザー Средняя разница между PUI и Laser составила 987,89929, что свидетельствует о высокой статистической значимости (P<0,001) разницы (p-значение 0,00000)。 PUIとレーザーの平均差は987.89929であり、統計的に有意な差（P<0.001）（p値0.00000）を示している。 PUIと非活性化の平均差は712.40643で、統計的に非常に有意な差（P<0.001）を示し、p値は0.00098でした。レーザー活性化または非活性化の使用は、統計的に有意な差（P>0.05）はなく、P値は0.451211でした。 PUIと非活性化の平均差は712.40643で、統計的に非常に有意な差（P<0.001）を示し、p値は0.00098でした。p値は0.451211でした。 Средняя разница между PUI и отсутствием активации составила 712,40643, демонстрируя высокостатистически значимую (P<0,001) разницу с p-значением 0,00098)。 PUIと非活性化との平均差は712.40643であり、統計的に非常に有意な差（P<0.001）を示し、p値は0.00098であった。P値は0.451211です。 ＰＵＩと非活性化の間の平均差は７１２．４０６４３であり、大きな着座性差を示した（Ｐ＜０．００１、ｐ値は０．０００９８）。PUI Средняя разница между PUI инактивацией составила 712,40643, что свидетельствует о высокой статистической значимости разницы (P<0,001、p-значение 0,00098)。 PUIと不活化の平均差は712.40643であり、この差は統計的に有意であることが示された（P<0.001、p値0.00098）。レーザー光を使用しても活性化または非活性化には差はなかった(P>0.05) P値は0.451211であった。レーザー光を使用しても活性化または非活性化には差はなかった(P>0.05) P値は0.451211であった。 Статистически значимой разницы (P>0,05) с лазерной активацией или без нее было со значением P 0,451211. レーザー照射の有無による統計的に有意な差は認められず（P>0.05）、P値は0.451211であった。レーザー照射後の残存破片の平均表面積は2683.21 µm2であった。照射なしの場合の残存破片の平均表面積は2407.72 µm2であった。レーザー照射ありまたは照射なしの場合と比較して、PUIは統計的に有意に平均破片表面積が小さく、すなわち最高の洗浄力を示した。
ナノエマルジョンリンスの平均洗浄力は2001.47 µm²、リンス剤の平均粒子径は2609.56 µmであった。ナノエマルジョン洗浄と通常の粒子径洗浄の平均差は608.09 µm²であった。 ナノエマルジョン洗浄液と通常の粒子サイズの洗浄液の間には、統計的に非常に有意な差（P<0.001）が認められた（P値0.00052）。 ナノエマルジョン洗浄液と通常の粒子サイズの洗浄液の間には、統計的に非常に有意な差（P<0.001）が認められた（P値0.00052）。 Между ирригационными растворами наноэмульсии ирригационными растворами с нормальным размером частиц была статистически высокозначимая (P<0,001) разница (значение P 0,00052)。 ナノエマルジョン洗浄液と通常の粒子洗浄液の間には、統計的に非常に有意な差（P<0.001）（P値0.00052）が認められた。コンパウンド乳液洗浄剤と通常の粒子径洗浄剤との間には、理論上顕著な差がある（Ｐ＜０．００１）（Ｐ値０．０００５２）。 P<0.001）（P値0.00052）。 Между ополаскивателем с наноэмульсией и ополаскивателем с нормальным размером частиц была статистически очень значимая разница (P<0,0001) (значение P 0,00052)。 ナノエマルジョンリンスと通常の粒子サイズのリンスの間には、統計的に非常に有意な差が認められた（P<0.0001、P値0.00052）。通常の粒子サイズの材料と比較して、ナノエマルジョンは統計的に非常に有意な差があり、平均残留デブリ表面積が低く、つまりナノエマルジョン材料はより優れた洗浄能力を持っていることが図3に示されています。
残存するChx.HCl 1.6%断片の平均表面積は2320.36 µm2であり、Chx.HCl 2%の平均表面積は2949.85 µm2であった。 高濃度のナノエマルジョン洗浄液と通常の粒子サイズの洗浄液の間には、統計的に非常に有意な差が認められた（P<0.001、P値0.00000）。 高濃度のナノエマルジョン洗浄液と通常の粒子サイズの洗浄液の間には、統計的に非常に有意な差（P<0.001）が認められた（P値0.00000）。 Имелась статистически высокодостоверная (P<0,001) разница между более высокой концентрацией наноэмульсионных ирригационных средств иригационными растворами с нормальным размером частиц (значение P 0,00000)。 高濃度のナノエマルジョン洗浄液と通常の粒子サイズの洗浄液の間には、統計的に有意な差（P<0.001）が認められた（P値0.00000）。より高濃度のカーボン乳液洗浄剤と通常の粒子径の洗浄剤との間には、理論上顕著な差がある（Ｐ＜０．００１）（Ｐ値０．０００００）。より高濃度のコメ乳液洗浄剤と通常の粒子径の洗浄剤との間には、理論上高い差が存在する（P<0.001）（P000） Наблюдалась статистически высокозначимая разница (P <0,001) между более высокими концентрациями ополаскивателя с наноэмульсией и ополаскивателем с нормальным размером частиц (значение P 0,00000)。 ナノエマルジョンリンスの高濃度と通常の粒子サイズのリンスの間には、統計的に非常に有意な差が認められた（P < 0.001、P値 0.00000）。ナノエマルジョン洗浄液の濃度は通常の粒子サイズの洗浄液よりも低かったが、この低濃度の方が、歯垢の除去や根管洗浄において著しく効果的であった。
PUIは、他の活性化方法と比較して、統計的に有意な差（p<0.001）を示した。 PUIは、他の活性化方法と比較して、統計的に有意な差（p<0.001）を示した。 PUI имел статистически высокую значимую разницу (p<0,001) по сравнению с другими методами активации. PUIは、他の活性化方法と比較して統計的に有意な差を示した（p<0.001）。他の活性化方法と比較して、ＰＵＩには、理論上の差異がある（ｐ＜０．００１）。 他の活性化方法と比較すると、PUIは統計的に有意な差がある（p<0.001）。 PUI は、 отличался (p<0,001) は、 другими методами активации を表示します。 PUIは、他の活性化方法と比較して統計的に有意な差があった（p<0.001）。PUIの活性化中、残留表面デブリの平均面積は1695.31μm2であった。 PUIとレーザーの平均差は987.89929で、統計的に非常に有意な差（P<0.001）を示し（p値0.00000）。PUIと非活性化の平均差は712.40643で、統計的に非常に有意な差（P<0.001）を示し（p値0.00098）。レーザー活性化または非活性化の使用は、統計的に有意な差（P>0.05）はなかった（p値0.451211）。 PUIとレーザーの平均差は987.89929で、統計的に非常に有意な差（P<0.001）を示しました（p値0.00000）。PUIと非活性化の平均差は712.40643で、統計的に非常に有意な差（P<0.001）を示しました（p値0.00098）。レーザー活性化または非活性化の使用は、統計的に有意な差（P>0.05）はありませんでした（p値0.451211）。 Средняя разница между PUI и лазером составила 987,89929, демонстрируя высокостатистически значимую (P<0,001) разницу с (p-значение 0,00000)。 PUIとレーザーの平均差は987.89929であり、統計的に非常に有意な差（P<0.001）を示しました（p値0.00000）。 - значение 0,00098).Использование лазерной активации или отсутствие активации не имело статистически значимой разницы (P>0,05) с (P-значение 0,451211)。 - 値 0.00098)。レーザー活性化の使用または活性化なしの使用は、統計的に有意な差がありました (P>0.05) (P値 0.451211)。 ＰＵＩとレーザーの間の平均差は９８７．８９９２９であり、（ｐ値０．０００００）の差は高度な理論的意義を有する（Ｐ＜０．００１）。 PUIとレーザーの平均差は987.89929であり、その差（p値0.00000）は統計的に有意である（P<0.001）。 Средняя разница между PUI и лазером составила 987,89929, что было высоко статистически значимым (P<0,001) с (значение p 0,00000)。 PUIとレーザーの平均差は987.89929で、統計的に非常に有意であった（P<0.001、p値0.00000）。 ＰＵＩと非活性化の間の平均差は７１２．４０６４３であり、（ｐ）の差は高度な理論性を有する（Ｐ＜０．００１）−値０．０００９８。 PUIと非活動状態の平均差は712.40643であり、その差（p）は統計的に有意である（P<0.001） – 値は0.00098である。 Средняя разница между PUI инактивацией составила 712,40643, что было высоко статистически значимым с разницей (p) (P<0,001 — значение 0,00098)。 PUIと不活性化の平均差は712.40643であり、統計的に非常に有意な差（p）（P<0.001 – 値0.00098）が認められた。レーザーを使用しても活性化または非活性化(P>0.05)と(P値0.451211)に差はなかった。 レーザー活性化と非活性化の間には統計的に有意な差はなかった（P>0.05およびP値0.451211）。 Не было статистически значимой разницы (P>0,05) по сравнению с (значение P 0,451211) с лазерной активацией илиそうです。 レーザー照射の有無による統計的に有意な差は認められなかった（P>0.05、P値0.451211）。レーザー照射時の残存破片の平均表面積は2683.21 μm2であった。照射なしの場合の残存破片の平均表面積は2407.72 μm2であった。レーザー照射ありまたは照射なしの場合と比較して、PUIはチップの平均表面積が統計的に小さく、つまり洗浄能力が優れている。
ナノエマルジョンリンスのデブリ除去効果の平均値は、通常の粒子サイズのリンスよりも統計的に有意に高かった。Chx.HCl 1.6%、PUI 1938.77 µm2、レーザー照射で2510.96 µm2。活性化なしの場合、平均値は2511.34 µm2である。2% Chx.HClを使用し、レーザーで活性化した場合、結果は最悪で、デブリの量は最大であった。0.75% Chx.HClを活性化しない場合も同様の結果が得られた。明らかに、ナノエマルジョン中のリンス剤の濃度が高いほど最良の結果が得られた。図3A-F)に示すように、PUIは洗浄液の活性化とデブリの洗い流しに最も効果的であった。
表2に示すように、Chx.HClナノエマルジョンは、生菌数に関して通常のサイズの粒子よりも優れた性能を示し、サイズ、洗浄剤濃度、活性化方法などのパラメータに応じて、製剤の浸透と洗浄効果と良好な相関関係を示しました。
リンス剤の濃度を高くすることで、細菌を完全に死滅させることができます。PUI活性化を行った場合でも、0.75% Chx.HClの抗菌効果は最も低いものでした。レーザー活性化はナノエマルジョンリンスに悪影響を及ぼします。これまでの結果からわかるように、レーザーの使用はChx.HCl 0.75%ナノエマルジョンの効率を低下させます。ナノChx.HCl 0.75%のCFUは195と非常に高い値であり、この濃度の試薬はレーザー活性化と同等であることを示しています。ダイオードレーザーは光熱性であるため、光または熱のいずれかによってナノエマルジョンの抗菌効果が失われる可能性があります。高濃度の結果は、細菌の完全な死滅です。ナノChx.HCl 1.6%はレーザー活性化の存在下で細菌の増殖が抑制されたため、レーザーはナノChx.HCl 1.6%の抗菌能力に影響を与えませんでした。高濃度のナノエマルジョン材料の方が抗菌効果が高いと結論付けられます。
本研究では、2種類の油、2種類の界面活性剤、および共界面活性剤を用いてChx.HClナノエマルジョンを調製し、粒子径が小さく、乳化時間が短く、溶解速度が高い最適な処方（F6）を選択した。さらに、（F6）の熱力学的／物理的安定性を試験した。濃度1.6%のChx.HClナノエマルジョンは、従来のChx.HCl洗浄液と比較して象牙細管への浸透性が最も高く、活性化方法としてのPUIは洗浄能力を示した。さらに、Chx.HClナノエマルジョンの抗菌試験では、細菌の完全な除去が確認された。これらの結果から、Chx.HClナノエマルジョンは有望な洗浄液として考えられる。
ミスル科学技術大学の研究室のスタッフの方々の多大なご支援に深く感謝いたします。