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Composição e caracterização da nanoemulsão de cloridrato de clorexidina como um promissor irrigador antibacteriano do canal radicular: estudos in vitro e ex vivo
Por Abdelmonem R., Younis MK, Hassan DH, El-Sayed Ahmed MAEG, Hassanien E., El-Batuti K., Elfaham A.
Rehab Abdelmonem, 1 Mona K. Younis, 1 Doaa H. Hassan, 1 Mohamed Abd El-Gawad El-Sayed Ahmed, 2 Ehab Hassanein, 3 Kariem El-Batuti, 3 Alaa Elfaham 31 Ciência e Tecnologia, Faculdade de Farmácia e Farmácia Industrial, Universidade Misr, 6 October City, Egito; 2 Departamento de Microbiologia e Imunologia, Faculdade de Farmácia, Universidade Misr de Ciência e Tecnologia, 6 de outubro, Egito; 3 Departamento de Endodontia, Universidade Ain Shams, Cairo, Egito Introdução e Objetivo: O cloridrato de hexidina de cloro [Chx.HCl] tem uma atividade antibacteriana de amplo espectro, ação prolongada e baixa toxicidade, portanto, é recomendado como um potencial irrigador de canal radicular. O objetivo deste estudo foi usar uma nova composição de nanoemulsão de Chx.HCl para aumentar o poder de penetração, limpeza e ação antibacteriana de Chx.HCl e usá-la como um irrigante de canal radicular. Métodos: Nanoemulsões de Chx.HCl foram preparadas usando dois óleos diferentes: ácido oleico e Labrafil M1944CS, dois surfactantes, Tween 20 e Tween 80, e co-surfactante, propilenoglicol. Trace um diagrama de fases pseudo-ternário para indicar o sistema ótimo. As formulações de nanoemulsão preparadas foram avaliadas quanto ao conteúdo do fármaco, tempo de emulsificação, dispersibilidade, tamanho de gota, liberação do fármaco in vitro, estabilidade termodinâmica, atividade antibacteriana in vitro e estudos in vitro de formulações selecionadas. A ação penetrante, de limpeza e antibacteriana da nanoemulsão de Chx.HCl 0,75% e 1,6% foi comparada com o tamanho de partícula normal como um irrigante de canal radicular. Resultados. A formulação escolhida foi F6 com 2% de Labrafil, 12% de Tween 80 e 6% de propilenoglicol. Tamanho de partícula pequeno (12,18 nm), tempo de emulsificação curto (1,67 segundos) e dissolução rápida após 2 minutos. Foi considerado um sistema termodinamicamente/fisicamente estável. Comparado ao tamanho de partícula convencional de Chx.HCl, a maior concentração de nanoemulsão de Chx.HCl 1,6% apresentou melhor penetração devido ao menor tamanho de partícula. Comparado a um material de tamanho de partícula normal (2609,56 µm2), a nanoemulsão de Chx.HCl 1,6% tem a menor área de superfície média de detritos residuais (2001,47 µm2). Conclusão: A composição da nanoemulsão Chx.HCl tem melhor capacidade de limpeza e ação antibacteriana. Tem uma ação bactericida altamente eficaz contra Enterococcus faecalis, e a taxa de contração das células bacterianas é alta ou completamente destruída. Palavras-chave: cloridrato de clorexidina, nanoemulsão, irrigante de canal radicular, penetração, efeito de limpeza, irrigante antibacteriano.
Nanoemulsões, uma classe de emulsões com tamanhos de gotículas na faixa de 50–500 nm, têm recebido muita atenção nos últimos anos devido às suas propriedades únicas. Boas propriedades de limpeza, não são afetadas pela dureza da água, na maioria dos casos apresentam baixa toxicidade e ausência de interações eletrostáticas. 2 A nanotecnologia tem um tamanho de partícula ultrapequeno, uma grande relação entre área de superfície e massa e propriedades físicas e químicas únicas em comparação com produtos a granel semelhantes, e também abre novas perspectivas no tratamento e prevenção de infecções dentárias. 3 O cloridrato de clorexidina (Chx.HCl) é ligeiramente solúvel em água, muito ligeiramente solúvel em álcool e mancha gradualmente na luz. 4,5 SH. O HCl tem uma ação antibacteriana de amplo espectro, ação prolongada e baixa toxicidade. Devido a essas propriedades, também é recomendado como um potencial irrigador de canal radicular. As principais vantagens do Chx.HCl são baixa citotoxicidade, nenhum odor e nenhum sabor desagradável. 6-9 Vários tipos de lasers têm sido usados ​​para melhorar a desinfecção do canal radicular. O efeito bactericida dos lasers depende do comprimento de onda e da energia, bem como da exposição térmica, que causa alterações na parede celular bacteriana, o que leva a uma alteração no gradiente osmótico até a morte celular. A interação entre lasers e irrigadores de canal radicular abre novos horizontes na desinfecção pulpar. 10 A energia ultrassônica produz altas frequências, mas baixas amplitudes. Os arquivos são projetados para oscilar em frequências ultrassônicas de 25–30 kHz, que estão além do limite da percepção auditiva humana (>20 kHz). Os arquivos são projetados para oscilar em frequências ultrassônicas de 25–30 kHz, que estão além do limite da percepção auditiva humana (>20 kHz). Facilmente recomendado para coleta em ультразвуковых частотах 25–30 quilogramas, которые находятся за пределами восприятия слухового peso (> 20 kg). Os arquivos são projetados para vibrar em frequências ultrassônicas de 25-30 kHz, que estão além do alcance da audição humana (> 20 kHz).这些文件被设计成在25–30 kHz 的超声波频率下振荡，这超出了人类听觉感知的极限(>20 kHz)。Taxa de transferência de 25–30 kHz Facilmente рассчитаны на колебания на ультразвуковых частотах 25–30 kg, что выходит за пределы слухового восприятия человека (>20 kg). Os arquivos são projetados para vibrações em frequências ultrassônicas de 25-30 kHz, o que está além dos limites da audição humana (>20 kHz).Eles operam em oscilação transversal, definindo os modos característicos de nós e antinodos ao longo de sua extensão. O termo "irrigação ultrassônica passiva" (IUP) é um protocolo de irrigação no qual nenhum instrumento ou parede entra em contato com limas ou instrumentos endodônticos. Durante a IUP, a energia ultrassônica é transferida da lima vibratória para a solução de irrigação no canal radicular. Esta última pode causar fluxo sônico e cavitação do agente de irrigação. 11 Com base nos dados acima, considera-se apropriado o uso da nanotecnologia para avaliar a ação aprimorada de penetração e limpeza do Chx.HCl.
O cloridrato de clorexidina Chx.HCl foi gentilmente cedido pela Arab Drug Company for Pharmaceuticals (Cairo, Egito). O Labrafil M 1944 CS (oleoilpolioxi-6-glicerídeo) foi generosamente cedido pela Gattefosse (Saint Priest, França). Tween 20 (monolaurato de polioxietileno (20) sorbitano), Tween 80 (monooleato de polioxietileno (80) sorbitano), ácido oleico, propilenoglicol da Gomhorya Company (Cairo, Egito). Extração de dentes unirradiculares não cariados para tratamento periodontal ou ortodôntico, Departamento de Ciências Maxilofaciais, Faculdade de Odontologia, Universidade Ain Shams, Cairo, Egito. Cultura pura de Enterococcus faecalis (cepa ATCC 29212) cultivada em caldo de extrato de cérebro e coração (BHI) (RC CLEANER, IIchung Dental Ltd., Seul, Coreia).
Foi estudada a solubilidade de Chx.HCl em vários meios (ácido oleico, Labrafil M 1944CS, Tween 20, Tween 80, propilenoglicol e água). Um grande excesso de Chx.HCl (50 mg) é colocado em um tubo de centrífuga e 5,0 g da fase do meio são adicionados. A mistura foi agitada em um agitador tipo vórtice por 15 minutos e então armazenada em temperatura ambiente. Após 24 horas, o pellet insolúvel do fármaco no tubo foi centrifugado a 3000 rpm por 5 minutos para obter um sobrenadante límpido. Coletar solução de amostra suficiente e diluí-la com n-butanol. As amostras diluídas foram filtradas em papel de filtro Whatman 102 e então diluídas adequadamente com n-butanol para determinar a concentração do fármaco na solução saturada. As amostras foram analisadas com um espectrofotômetro UV a 260 nm com n-butanol como controle. 12.13
Um diagrama de fase pseudo-tripla foi construído para determinar a proporção exata de cada componente necessário na formulação para obter os parâmetros ótimos de uma nanoemulsão ideal. 14 A formulação foi formulada usando óleos (ou seja, ácido oleico e Labrafil M1944CS), surfactantes (ou seja, Tween 20 e Tween 80) e um surfactante adicional, ou seja, propilenoglicol. Primeiro, misturas separadas de surfactantes (sem cosurfactantes) e óleos foram preparadas em diferentes proporções de volume (de 1:9 a 9:1). Quando a mistura é titulada com água (adicionando água gota a gota), monitore de perto a mistura de transparente a turva como o ponto final. Esses pontos finais são então marcados em um diagrama de fase pseudo-tripla. Todo o processo foi repetido para misturas de surfactante e surfactante secundário (Smix) preparadas em proporções 2:1 e 3:1 e misturadas com óleos selecionados15,16.
Sistemas de nanoemulsão contendo Chx.HCl foram preparados utilizando Labrafil M 1944 CS como fase oleosa e surfactante Tween 80 ou 20 e propilenoglicol como surfactante adicional e, finalmente, água (Tabela 1). O fármaco foi dissolvido em Labrafil M 1944 CS e a água combinada do surfactante e do surfactante secundário foi adicionada lentamente, com mistura gradual. A quantidade de surfactante e cosurfactante adicionada, bem como a porcentagem de fase oleosa que pode ser adicionada, foi determinada usando um diagrama de fases pseudoternário. Um gerador ultrassônico (Ultrasonic LC 60 H, Elma, Alemanha) foi utilizado para atingir a faixa de tamanho desejada para a dispersão dos grânulos. Em seguida, o balanceamento foi realizado. 17
O teste de dispersibilidade foi realizado utilizando um aparelho de dissolução (Dr. Schleuniger Pharmaton, Modelo Diss 6000, Thun, Suíça), no qual 1 ml de cada preparação foi adicionado a 500 ml de água a 37 ± 0,5 °C. A agitação suave é garantida por pás de dissolução padrão de aço inoxidável, girando a 50 rpm. A emulsão resultante foi determinada visualmente e classificada como límpida, translúcida com coloração azulada, leitosa ou turva. Escolha uma fórmula límpida para pesquisas futuras. 18.19
A extração de Chx.HCl de composições nanoemulsionadas otimizadas com base no diagrama de fase pseudotripla leva à produção de n-butanol usando tecnologia ultrassônica. Após diluição adequada, os extratos foram analisados ​​espectrofotometricamente em um comprimento de onda de 260 nm para o teor de Chx.HCl. 20
Para testar o tempo de autoemulsificação, 1 ml de cada composição foi adicionado a um béquer com 250 ml de água destilada e mantido a 37 ± 1 °C, com agitação constante a 50 rpm. O tempo de autoemulsificação é considerado o tempo durante o qual o pré-concentrado forma uma mistura homogênea após a diluição. 21
Para a análise do tamanho das gotas, diluir 50 mg da formulação otimizada para 1000 ml com água em um frasco e misturar delicadamente à mão. A distribuição do tamanho das gotas foi determinada utilizando um instrumento Malvern Zetasizer 2000 (Malvern Instruments Ltd., Malvern, Reino Unido) sob condições de detecção de retroespalhamento de 173°C, temperatura de 25°C e índice de refração de 1,330. 22
Estudos de dissolução in vitro foram realizados utilizando um aparelho USP Tipo II (pá) (Dr. Schleuniger Pharmaton, Diss Modelo 6000) a 50 rpm. Água destilada (500 ml) mantida a uma temperatura de 37 ± 0,5 °C foi utilizada como meio de dissolução, e 5 ml da composição preparada foram adicionados gota a gota ao meio de dissolução. Em seguida, em intervalos variados, 5 ml do meio de dissolução foram coletados e a quantidade de fármaco liberado foi determinada espectrofotometricamente a 254 nm. Os experimentos foram realizados em triplicata. 23
Em seguida, foram medidos os parâmetros cinéticos da liberação de Chx.HCl in vitro a partir de nanoemulsões preparadas à base dele. Cinéticas de ordem zero, primeira e segunda ordem e modelos de difusão de Higuchi foram testados para selecionar a sequência cinética mais adequada para a liberação de Chx.HCl.
2 ml de cada formulação foram armazenados à temperatura ambiente por 48 horas antes da observação da separação de fases. Amostras de 1 ml de cada formulação de nanoemulsão de Chx.HCl foram então diluídas para 10 ml e 100 ml com água destilada a 25°C e armazenadas por 24 horas. Em seguida, a separação de fases foi observada. 21
Em seguida, amostras de 2 ml de cada composição foram transferidas separadamente para frascos transparentes com tampa de rosca e armazenadas em refrigerador a 2 °C por 24 horas. Em seguida, foram removidas e armazenadas a 25 °C e 40 °C. Um único ciclo de resfriamento-degelo foi realizado. As amostras foram então observadas quanto à separação de fases e à precipitação do fármaco. 21
Uma amostra de 5 ml de cada formulação de nanoemulsão de Chx.HCl foi transferida para um tubo de vidro e colocada em uma centrífuga de laboratório (Shanghai Surgical Instrument Factory Microcentrifuge Modelo 800, Xangai, República Popular da China) e centrifugada a 4000 rpm por 5 minutos. As amostras foram então observadas quanto à separação de fases e precipitação do fármaco. 21
Todos os experimentos foram aprovados pelo Comitê de Ética Institucional da Universidade Ain Shams, Egito. Foram selecionados 50 dentes humanos unirradiculares não cariados com ápice formado. Os dentes extraídos foram utilizados após obtenção do consentimento informado por escrito e assinado pelo paciente. Os dentes incluem incisivos maxilares e mandibulares e pré-molares mandibulares. As superfícies externas das raízes foram tratadas com uma cureta e todos os dentes foram submetidos à esterilização da superfície em NaOCl a 0,5% por 24 horas e então armazenados em solução salina estéril até o uso. A coroa foi removida com um disco diamantado de segurança e o comprimento do dente foi normalizado para 16 mm do ápice à margem coronal. 24,25 De acordo com a solução de enxágue, os dentes são divididos nos seguintes grupos:
(A) As amostras do grupo (n = 24) foram lavadas com nanoemulsão de Chx.HCl. O subgrupo (I) (n = 12) enxaguou as amostras com 5 ml de nanoemulsão de Chx.HCl a 0,75%. O subgrupo (II) (n = 12) enxaguou as amostras com 5 ml de nanoemulsão de Chx.HCl a 1,6%. (B) Um grupo (n = 24) de amostras será lavado com 5 ml de Chx.HCl a 2% de tamanho de partícula normal. Grupo controle: (n = 2) lavado com 5 ml de solução salina sem ativação.
Foram selecionados 44 dentes humanos unirradiculares, não cariados e com ponta formada. Os dentes incluíam incisivos maxilares e mandibulares e pré-molares mandibulares. As superfícies externas das raízes foram tratadas com cureta e todos os dentes foram submetidos à esterilização superficial em NaOCl a 0,5% por 24 horas e, em seguida, armazenados em solução salina estéril até o uso. As coroas foram removidas com um disco diamantado de segurança e o comprimento do dente foi normalizado para 16 mm do ápice à margem coronária. 24,25,29
Preparação mecânica da lima apical principal tamanho 50 usando métodos padrão. Use solução salina estéril como irrigante durante a cirurgia. Finalmente, o canal radicular foi lavado com 2 ml de EDTA a 17% por 1 minuto para remover a smear layer. Toda a superfície da raiz, incluindo o forame apical de cada espécime, foi coberta com duas camadas de esmalte (cola de cianoacrilato) para evitar vazamento. Os dentes são então colocados verticalmente em um bloco de tártaro para facilitar o manuseio e a identificação. 29-33 As amostras foram então autoclavadas a 121 °C e 15 psi por 20 minutos. Após a esterilização, todas as amostras foram transportadas e processadas em condições estéreis usando instrumentos estéreis. Os canais radiculares foram contaminados com uma cultura pura de Enterococcus faecalis (cepa ATCC 29212) cultivada em caldo de extrato de cérebro e coração (BHI) por 24 horas a 37 °C. Utilizando uma micropipeta estéril, injetar uma suspensão límpida de inóculo de E. faecalis nos canais radiculares preparados de todos os dentes. Os blocos foram então colocados em béqueres estéreis e incubados a 37°C por 24 horas. 31, 34, 35
(A) As amostras do grupo (n = 24) foram lavadas com nanoemulsão de Chx.HCl. As amostras do subgrupo (I) (n = 12) foram enxaguadas com 5 ml de nanoemulsão de Chx.HCl na concentração de 0,75%. O subgrupo (II) (n = 12) enxaguou as amostras com 5 ml de nanoemulsão de Chx.HCl na concentração de 1,6%.
Grupo controle: controle positivo, (n=4) o canal radicular contaminado foi lavado com 5 ml de solução salina e mantido como controle positivo. Controle negativo: (n=4) as amostras não foram injetadas com suspensão, ou seja, o canal radicular não foi contaminado com E. faecalis e foi mantido estéril como controle negativo para confirmar a esterilização e a confiabilidade do procedimento. Utilizar 5 ml de solução de lavagem teste em cada amostra. Cada amostra foi então submetida a uma lavagem final com 1 ml de solução salina estéril.
Uma ponta de papel estéril tamanho 35 é usada para coletar amostras de canais radiculares. A ponta de papel foi inserida no tubo até o comprimento de trabalho, deixada por 10 segundos e, em seguida, transferida para placas de ágar para determinar o número de unidades formadoras de colônias (UFC) por placa. As placas foram incubadas a 37 °C por 24 horas e, em seguida, avaliadas visualmente para crescimento bacteriano. A placa transparente mostra esterilização completa. Placas borradas são consideradas como apresentando crescimento positivo. O número médio de UFCs na zona de crescimento bacteriano por placa foi determinado e o número de UFCs foi calculado. Os sobreviventes são medidos principalmente com contagens viáveis ​​em placas de gotejamento. Além disso, um copo de despejo foi usado para contar UFCs baixas e uma diluição de 106 foi usada para contar UFCs altas. 36,37
Preparar tubos contendo 15 ml de meio ágar descongelado pré-esterilizado em autoclave no mesmo dia do experimento. Enterococcus faecalis é um coco anaeróbico Gram-positivo facultativo que pode sobreviver em pH, acidez e temperaturas muito altos. 39 Amostras bacterianas (Enterococcus faecalis ATCC 29212) foram preparadas misturando células de colônias com solução salina estéril. As amostras bacterianas foram então diluídas com solução salina para corresponder a McFarland 0,5, equivalente a 108 UFC/mL. O volume de amostra adicionado foi de 10 µl. 39 Um padrão de turbidez (McFarland 0,5)40 foi preparado despejando 0,6 ml de solução de cloreto de bário di-hidratado a 1% (10 g/l) em um cilindro graduado de 100 ml e completando até 100 ml com ácido sulfúrico a 1% (10 g/l). Os padrões de turbidez foram colocados nos mesmos tubos que as amostras de caldo e armazenados em temperatura ambiente por 6 meses, no escuro e selados para evitar evaporação. Abra a tampa da placa de Petri vazia e despeje a amostra no centro da placa. Se o ágar estiver completamente solidificado, inverta a placa e incube a 37 °C por 24 horas.
Todos os dados foram coletados, tabulados e submetidos à análise estatística. A análise estatística foi realizada utilizando o IBM® SPSS® Statistical versão 17 para Windows (SPSS Inc., IBM Corporation, Armonk, NY, EUA).
Foi estudada a solubilidade de Chx.HCl em diversas fases oleosas, soluções surfactantes, soluções cossurfactantes e água. Chx.HCl apresenta a maior solubilidade em Labrafil M e a menor solubilidade em ácido oleico. Uma maior solubilidade do fármaco na fase oleosa é importante para nanoemulsões, pois estas conseguem manter o fármaco dissolvido, o que significa que uma maior solubilidade do fármaco em óleo resulta em menos óleo na formulação e, portanto, menos fármaco. Carga: Uma certa quantidade de surfactante e cossurfactante é necessária para emulsionar as gotículas de óleo.
Um diagrama de fase pseudotripla foi construído para definir as regiões da nanoemulsão e otimizar as concentrações de óleos, surfactantes e surfactantes adicionais selecionados (Labrafil M, Tween 80, Tween 20 e propilenoglicol, respectivamente). O Chx.Hcl apresenta solubilidade muito baixa em ácido oleico, resultando em turbidez quando o ácido oleico é titulado com a primeira gota de água. Portanto, o sistema de ácido oleico foi excluído deste estudo. Outras formulações foram preparadas utilizando uma mistura 1:9 de óleo e surfactante. Devido à faixa de pH e força iônica, esses surfactantes foram escolhidos.
Todas as formulações preparadas eram límpidas, exceto o Sistema F2, que parecia turvo e, portanto, foi excluído de estudos de avaliação posteriores.
A formulação ideal de nanoemulsão deve ser capaz de se dispersar completa e rapidamente quando diluída com agitação suave. As formulações de nanoemulsão de Chx.HCl apresentaram tempos de emulsificação curtos, de 1,67 a 12,33 segundos. O Tween 80 apresentou o menor tempo de emulsificação. Isso pode ser explicado pela maior capacidade de solubilização do Tween 80. O tempo de autoemulsificação aumenta com o aumento da concentração do surfactante, o que pode ser devido ao aumento da viscosidade do sistema sob a ação do surfactante.
O tamanho da gota da emulsão determina a taxa e a extensão da liberação do fármaco. Um tamanho menor de gota na emulsão resulta em menor tempo de emulsificação e maior área de superfície para absorção do fármaco. Os tamanhos médios de gota das composições selecionadas da nanoemulsão Chx.HCl foram 711 ± 0,44, 587 ± 15,3, 10,97 ± 0,11, 16,43 ± 4,55 e 12,18 ± 2,48, e o PDI foi 0,76, 0,19, 0,61, 0,47 e 0,76 para F1, F2, F3 e 0,16 para F4, F5 e F6, respectivamente. Formulações contendo Tween 80 como surfactante apresentaram esferulitos menores. Isso pode ser devido ao seu maior poder emulsificante. Um valor de PDI menor indica uma distribuição de tamanho do sistema mais estreita. Essas formulações têm uma aparência limpa porque seus raios de gotículas são menores que o comprimento de onda óptico da luz visível (390-750 nm), no qual ocorre dispersão mínima de luz. 41
A Figura 2 mostra a porcentagem de Chx.HCl liberada da formulação formulada. A liberação completa do fármaco das formulações preparadas da nanoemulsão Chx.HCl variou de 2 a 7 minutos. Observou-se que a maior taxa de liberação do fármaco foi obtida no caso da formulação da nanoemulsão Chx.HCl F6 (2 min), o que pode ser devido à presença de Tween 80, que apresentou maior grau de emulsificação, e à nanoemulsão resultante, que proporciona uma grande área de superfície para liberação do fármaco, permitindo maiores taxas de liberação. Ao mesmo tempo, as propriedades de solubilidade do propilenoglicol permitem que uma grande quantidade de surfactantes hidrofílicos seja dissolvida no óleo. 40
Descobriu-se que a liberação de Chx.HCl in vitro segue uma ordem cinética diferente, e nenhuma ordem cinética clara pode refletir a liberação do fármaco a partir de formulações de nanoemulsão preparadas de forma diferente. A liberação cinética de fármacos F4 é uma cinética de primeira ordem, o que significa que eles são liberados proporcionalmente à quantidade de fármaco remanescente em seu interior. 42 A liberação cinética de outros fármacos foi consistente com o modelo de difusão de Higuasha, que indicou que a quantidade de fármaco liberada era proporcional à raiz quadrada do fármaco total e à solubilidade do fármaco na nanoemulsão. 42
Formulações selecionadas foram submetidas a estabilidade termodinâmica variável por meio de testes de estresse usando ciclos de calor-resfriamento, centrifugação e ciclos de congelamento-degelo. Foi observado que as formulações F3 e F4 apresentaram precipitação do fármaco após os ciclos de descongelamento, enquanto F1 apresentou espessamento (gelificação). F5 e F6 passaram no ciclo de centrifugação contínua, teste de aquecimento-resfriamento e teste de congelamento-degelo. Nanoemulsões são sistemas termodinamicamente estáveis ​​formados em certas concentrações de óleo, surfactante e água sem separação de fases, emulsificação ou craqueamento. É a estabilidade térmica que distingue as nanoemulsões das emulsões, que são cineticamente estáveis ​​e eventualmente se separarão em fases. 19 F3 apresentou tamanho de partícula maior (587 nm) do que outras formulações, o que pode explicar a separação de fases e a precipitação do fármaco em testes de estabilidade termodinâmica. O F4 contendo Tween 80 e sem cossurfactante apresentou precipitação do fármaco, o que pode indicar a necessidade de usar propilenoglicol e Tween 80 para melhorar a estabilidade das formulações de nanoemulsão. O F1 contendo Tween 20 sem surfactante adicional apresentou espessamento (gelificação), que é um aumento na viscosidade ou resistência do gel devido à agregação de gotículas.
Os resultados de estabilidade demonstram a importância da presença de um surfactante de propilenoglicol adicional para aumentar a dispersão das partículas e prevenir a precipitação do fármaco. 43 F6 foi a melhor formulação devido ao pequeno tamanho de partícula (12,18 nm), ao curto tempo de emulsificação (1,67 segundos) e à rápida taxa de dissolução após 2 minutos. Foi considerado um sistema termodinâmico/fisicamente estável e, portanto, foi selecionado para estudos posteriores.
Falhas após o tratamento de canal radicular estão se tornando mais frequentes, o que significa que os pacientes correm um risco maior de desenvolver infecções mais complexas. 44,45 O biofilme deve ser removido durante a desinfecção e obturação dos canais radiculares. 46,47 Devido à complexidade do sistema de canais radiculares, torna-se difícil remover completamente os canais radiculares bacterianos usando apenas instrumentos e irrigação. 48 A eficácia das soluções de enxágue do canal radicular depende da penetração do irrigante no DT e da duração da exposição às bactérias. 49 Portanto, novos métodos de esterilização completa do canal radicular foram experimentados e testados. Os enxágues convencionais não eliminam completamente o E. faecalis devido à menor penetração do DT.50
O poder médio de limpeza do enxágue com nanoemulsão foi de 2001,47 µm², e o tamanho médio das partículas do abrilhantador foi de 2609,56 µm². A diferença média entre a lavagem com nanoemulsão e a lavagem com tamanho de partícula normal foi de 608,09 µm². Houve uma diferença estatisticamente altamente significativa (P<0,001) entre os irrigantes de nanoemulsão e os irrigantes de tamanho de partícula normal com (valor de P 0,00052). Houve uma diferença estatisticamente altamente significativa (P<0,001) entre os irrigantes de nanoemulsão e os irrigantes de tamanho de partícula normal com (valor de P 0,00052). Você pode irrigar manualmente e irrigar normalmente estatísticas atualizadas высокозначимая (P<0,001) разница (значение P 0,00052). Houve uma diferença estatisticamente altamente significativa (P<0,001) (valor de P 0,00052) entre os irrigantes de nanoemulsão e os irrigantes de partículas normais.P 0,00052）。P 0,00052）。 Você pode usar o número de telefone e usá-lo normalmente para obter uma estatística normal очень значимая разница (P<0,0001) (valor P 0,00052). Houve uma diferença estatisticamente muito significativa (P<0,0001) entre o enxágue da nanoemulsão e o enxágue de tamanho de partícula normal (valor de P 0,00052).A nanoemulsão apresentou diferença estatisticamente muito significativa em relação ao material de tamanho de partícula normal, apresentando menor área superficial média de detritos residuais, ou seja, o material da nanoemulsão apresentou melhor capacidade de limpeza, conforme demonstrado na figura 3.
Figura 3. Comparação do desempenho de limpeza dos auxiliares de enxágue: (A) com Nano CHX ativado a laser, (B) com CHX ativado a laser, (C) com PUI Nano CHX, (D) sem ativação do Nano CHX, (E) sem ativação do CHX e (F) ativação do CHX PUI.
A área de superfície média dos fragmentos restantes de Chx.HCl 1,6% foi de 2320,36 µm2, e a área de superfície média de Chx.HCl 2% foi de 2949,85 µm2. Houve uma diferença estatisticamente altamente significativa (P<0,001) entre a maior concentração de irrigantes de nanoemulsão e os irrigantes de tamanho de partícula normal (valor de P 0,00000). Houve uma diferença estatisticamente altamente significativa (P<0,001) entre a maior concentração de irrigantes de nanoemulsão e os irrigantes de tamanho de partícula normal (valor de P 0,00000). Наблюдалась статистически высокозначимая (P<0,001) разница между более высокой концентрацией irrigação adicional растворов и ирригационными растворами с размером частиц normal (valor P 0,00000). Houve uma diferença estatisticamente altamente significativa (P<0,001) entre a maior concentração de irrigantes de nanoemulsão e irrigantes de tamanho de partícula normal (valor de P 0,00000).较高浓度的纳米乳液冲洗剂与正常粒径冲洗剂之间存在统计学上高度显着的差异（P<0,001）（P 0,00000）。较高浓度的纳米乳液冲洗剂与正常粒径冲洗剂之间存在统计学显着的差异（P<0,001）（P 0 0,0 Наблюдалась статистически очень значимая разница (P<0,001) между более высокими концентрациями ополаскивателя с наноэмульсией и use uma proporção normal (valor P 0,00000). Houve uma diferença estatisticamente muito significativa (P<0,001) entre concentrações mais altas de enxágue de nanoemulsão e enxágue de tamanho de partícula normal (valor de P 0,00000).Embora a concentração do irrigante nanoemulsão fosse menor do que a do irrigante de tamanho de partícula normal, essa concentração menor foi significativamente mais eficaz na remoção de resíduos e mais eficaz na limpeza dos canais radiculares.
A PUI apresentou diferença estatisticamente significativa (p<0,001) quando comparada a outros métodos de ativação. A PUI apresentou diferença estatisticamente significativa (p<0,001) quando comparada a outros métodos de ativação. PUI имел статистически высокозначимую разницу (p<0,001) по сравнению с другими методами активации. PUI teve uma diferença estatisticamente altamente significativa (p<0,001) em comparação com outros métodos de ativação.与其他激活方法相比, PUI 具有统计学上非常显着的差异(p<0,001)。与其他激活方法相比, PUI 具有统计学上非常显着的差异(p<0,001)。 По сравнению с другими методами активации PUI имел статистически очень значимую разницу (p<0,001). Comparado a outros métodos de ativação, o PUI apresentou diferença estatisticamente muito significativa (p<0,001).Com a ativação do ISP, a área média da superfície residual dos detritos foi de 1695,31 µm2. A diferença média entre PUI e Laser foi de 987,89929, apresentando diferença estatisticamente altamente significativa (P<0,001) com (valor de p 0,00000). A diferença média entre PUI e Laser foi de 987,89929, apresentando diferença estatisticamente altamente significativa (P<0,001) com (valor de p 0,00000). A configuração padrão de PUI e Laser é 987,89929, demonstração de valor de serviço (P<0,001) разницу с (p-valor 0,00000). A diferença média entre PUI e Laser foi de 987,89929, mostrando uma diferença altamente estatisticamente significativa (P<0,001) de (valor de p 0,00000). PUI 和Laser 之间的平均差异为987.89929，显示出高度统计学显着性(P<0,001) 差异(p 值0,00000)。PUI e Laser A taxa de serviço padrão PUI e Laser é 987,89929, que é fornecida pela sua estatística de status (P<0,001) разницы (p-значение 0,00000). A diferença média entre PUI e Laser foi de 987,89929, indicando uma diferença de alta significância estatística (P<0,001) (valor de p 0,00000). A diferença média entre PUI e nenhuma ativação foi de 712,40643, mostrando uma diferença altamente estatisticamente significativa (P<0,001) com um valor de p de 0,00098). O uso de ativação a laser ou nenhuma ativação não foi significativamente estatisticamente diferente (P>0,05) com um valor de P de 0,451211. A diferença média entre PUI e nenhuma ativação foi de 712,40643, mostrando uma diferença altamente estatisticamente significativa (P<0,001) com um valor de p de 0,00098). um valor de P de 0,451211. Средняя разница между PUI и отсутствием активации составила 712,40643, демонстрируя высокостатистически valor (P<0,001) разницу с p-значением 0,00098). A diferença média entre PUI e nenhuma ativação foi de 712,40643, mostrando uma diferença altamente estatisticamente significativa (P<0,001) com um valor de p de 0,00098).Valor de p 0,451211. PUI 和未激活之间的平均差异为712.40643，显示高度统计学显着性差异(P<0,001),p 值为0,00098)。PUI O número máximo de serviços PUI e inativos é 712,40643, que é fornecido pela sua estatística значимости разницы (P<0,001, p-valor 0,00098). A diferença média entre PUI e inativação foi de 712,40643, indicando alta significância estatística da diferença (P<0,001, valor de p 0,00098).使用激光激活或不激活在统计学上没有显着差异(P>0,05) P 值为0,451211。使用激光激活或不激活在统计学上没有显着差异(P>0,05) P 值为0,451211。 Razão estatística (P>0,05) com ativação de laser ou sem necessidade de uso com ajuste P 0,451211. Não houve diferença estatisticamente significativa (P>0,05) com ou sem ativação do laser com um valor de P de 0,451211.A área superficial média dos fragmentos remanescentes após a ativação do laser foi de 2.683,21 µm². A área superficial média dos fragmentos remanescentes sem ativação foi de 2.407,72 µm². Comparado com a ativação do laser ou sem ativação, o PUI apresentou uma área superficial média de fragmento estatisticamente menor, ou seja, o melhor poder de limpeza.
O poder médio de limpeza do enxágue com nanoemulsão foi de 2001,47 µm², e o tamanho médio das partículas do abrilhantador foi de 2609,56 µm². A diferença média entre a lavagem com nanoemulsão e a lavagem com tamanho de partícula normal foi de 608,09 µm². Houve diferença estatisticamente altamente significativa (P<0,001) entre os irrigantes de nanoemulsão e os irrigantes de tamanho de partícula normal com (valor de P 0,00052). Houve diferença estatisticamente altamente significativa (P<0,001) entre os irrigantes de nanoemulsão e os irrigantes de tamanho de partícula normal com (valor de P 0,00052). A irrigação pode ser feita de maneira normal e de irrigação normal estatísticas высокозначимая (P<0,001) разница (значение P 0,00052). Houve uma diferença estatisticamente altamente significativa (P<0,001) (valor de P 0,00052) entre os irrigantes de nanoemulsão e os irrigantes de partículas normais.纳米乳液冲洗剂与正常粒径冲洗剂之间存在统计学上高度显着的差异（P<0,001）（P值0,00052）。 P<0,001）（P值0,00052）。 Você pode usar o número de telefone e usá-lo normalmente para obter uma estatística normal очень значимая разница (P<0,0001) (valor P 0,00052). Houve uma diferença estatisticamente muito significativa (P<0,0001) entre o enxágue da nanoemulsão e o enxágue de tamanho de partícula normal (valor de P 0,00052).Comparado a um material de tamanho de partícula normal, a nanoemulsão tem uma diferença estatisticamente muito significativa, mostrando uma área de superfície residual média menor, ou seja, o material de nanoemulsão tem melhor capacidade de limpeza, conforme mostrado na Figura 3.
A área de superfície média dos fragmentos restantes de Chx.HCl 1,6% foi de 2320,36 µm2, e a área de superfície média de Chx.HCl 2% foi de 2949,85 µm2. Houve diferença estatisticamente altamente significativa (P<0,001) entre a maior concentração de irrigantes nanoemulsionados e os irrigantes de tamanho de partícula normal (valor de P 0,00000). Houve uma diferença estatisticamente altamente significativa (P<0,001) entre a maior concentração de irrigantes de nanoemulsão e os irrigantes de tamanho de partícula normal (valor de P 0,00000). A estatística de valor de valor (P<0,001) é a melhor relação custo/benefício наноэмульсионных ирригационных средств e a irrigação é feita com uma proporção normal (valor P 0,00000). Houve uma diferença estatisticamente significativa (P<0,001) entre a maior concentração de irrigantes nanoemulsionados e os irrigantes de tamanho de partícula normal (valor de P 0,00000).较高浓度的纳米乳液冲洗剂与正常粒径冲洗剂之间存在统计学上高度显着的差异（P<0,001）（P值0,00000）。较高浓度的纳米乳液冲洗剂与正常粒径冲洗剂之间存在统计学上高度显着的差异（P<0,001）（P000 A estatística de maior valor da taxa de câmbio (P <0,001) é a maior conexão de uso ополаскивателя с наноэмульсией и ополаскивателем с размером частиц normalmente (valor P 0,00000). Houve uma diferença estatisticamente altamente significativa (P < 0,001) entre concentrações mais altas de enxágue de nanoemulsão e enxágue de tamanho de partícula normal (valor de P 0,00000).Embora a concentração do irrigante nanoemulsão fosse menor do que a do irrigante de tamanho de partícula normal, essa concentração menor foi significativamente mais eficaz na remoção de resíduos e mais eficaz na limpeza dos canais radiculares.
PUI apresentou diferença estatisticamente significativa (p<0,001) quando comparado a outros métodos de ativação. PUI apresentou diferença estatisticamente significativa (p<0,001) quando comparado a outros métodos de ativação. PUI имел статистически высокую значимую разницу (p<0,001) по сравнению с другими методами активации. A PUI apresentou diferença estatisticamente significativa (p<0,001) em comparação com outros métodos de ativação.与其他激活方法相比，PUI 具有统计学上的显着差异(p<0,001)。 Comparado com outros métodos de ativação, o PUI apresenta diferença estatisticamente significativa (p<0,001). PUI статистически значимо отличался (p<0,001) по сравнению с другими методами активации. PUI foi estatisticamente significativamente diferente (p<0,001) em comparação com outros métodos de ativação.Durante a ativação do PUI, a área média de detritos superficiais residuais foi de 1695,31 μm2. A diferença média entre PUI e Laser foi de 987,89929, mostrando uma diferença altamente estatisticamente significativa (P<0,001) com (valor de p 0,00000). A diferença média entre PUI e nenhuma ativação foi de 712,40643, mostrando uma diferença altamente estatisticamente significativa (P<0,001) com (valor de p 0,00098). O uso de ativação a Laser ou nenhuma ativação não foi estatisticamente diferente (P>0,05) com (valor de p 0,451211). A diferença média entre PUI e Laser foi de 987,89929, apresentando uma diferença estatisticamente significativa (P<0,001) com (p-valor 0,00000). A diferença média entre PUI e ausência de ativação foi de 712,40643, apresentando uma diferença estatisticamente significativa (P<0,001) com (p-valor 0,00098). O uso de ativação a Laser ou ausência de ativação não apresentou diferença estatisticamente significativa (P>0,05) com (p-valor 0,451211). A taxa média de PUI e laser é 987,89929, demonstração de valor (P<0,001) разницу с (p-значение 0,00000). A diferença média entre PUI e laser foi de 987,89929, demonstrando uma diferença altamente estatisticamente significativa (P<0,001) com (valor de p 0,00000). - valor 0,00098). Razão de valor (P>0,05) com (P-значение 0,451211). - valor 0,00098). O uso de ativação a laser ou não apresentou diferença estatisticamente significativa (P>0,05) com (valor P 0,451211). PUI 和激光之间的平均差异为987.89929，与(p 值0,00000) 差异具有高度统计学意义(P<0,001)。 A diferença média entre PUI e laser é 987,89929, e a diferença (p 值0,00000) tem alta significância estatística (P < 0,001). A taxa média de PUI e laser é 987,89929, que é sua estatística de status (P<0,001) с (valor p 0,00000). A diferença média entre PUI e laser foi de 987,89929, o que foi altamente estatisticamente significativo (P < 0,001) com (valor de p 0,00000). PUI 与未激活之间的平均差异为712.40643，与(p) 差异具有高度统计学意义(P<0,001) -值0,00098)。 A diferença média entre PUI e inativo é de 712,40643, e a diferença (p) tem alta significância estatística (P<0,001) – valor 0,00098. O número máximo de PUI e inativo é 712,40643, que é sua estatística de status разницей (p) (P<0,001 — значение 0,00098). A diferença média entre PUI e inativação foi de 712,40643, o que foi altamente estatisticamente significativo com diferença (p) (P<0,001 – valor 0,00098).使用激光激活或不激活没有显着统计学差异(P>0,05) 与(P 值0,451211)。 Não houve diferença estatística significativa entre ativação e não ativação do laser (P>0,05) e (P 值0,451211). Não há uma taxa estatística (P>0,05) em uma escala (P 0,451211) com a ativação do laser ou não, não. Não houve diferença estatisticamente significativa (P>0,05) em comparação com (valor de P 0,451211) com ou sem ativação do laser.A área superficial média dos fragmentos remanescentes durante a ativação do laser foi de 2.683,21 μm². A área superficial média dos fragmentos remanescentes sem ativação foi de 2.407,72 μm². Comparado com a ativação do laser ou sem ativação, o PUI apresenta uma área superficial média do chip estatisticamente menor, ou seja, melhor capacidade de limpeza.
O efeito médio do enxágue da nanoemulsão na remoção de detritos foi estatisticamente significativamente maior do que o do enxágue de tamanho de partícula normal. Chx.HCl 1,6%, PUI 1938,77 µm², 2510,96 µm² com laser. Sem ativação, o valor médio é 2511,34 µm². Quando 2% de Chx.HCl foi usado e ativado com um laser, os resultados foram os piores e a quantidade de detritos foi máxima. Os mesmos resultados foram obtidos quando 0,75% de Chx.HCl não foi ativado. Obviamente, os melhores resultados foram obtidos usando concentrações mais altas de abrilhantador na nanoemulsão. PUI foi mais eficaz na ativação do irrigante e na lavagem de detritos, como mostrado na Figura 3A-F).
Conforme mostrado na Tabela 2, a nanoemulsão Chx.HCl teve melhor desempenho do que partículas de tamanho normal em termos de contagem de microrganismos viáveis ​​e teve uma boa correlação com a penetração da formulação e efeito de limpeza de acordo com os seguintes parâmetros: tamanho, concentração do agente de limpeza e método de ativação.
As bactérias podem ser completamente destruídas com o uso de uma concentração maior de abrilhantador. Mesmo com a ativação por PUI, 0,75% de Chx.HCl apresentou o pior efeito antibacteriano. A ativação a laser tem um efeito negativo nos enxágues de nanoemulsão. Como pode ser visto em todos os resultados anteriores, o uso de um laser reduz a eficiência da nanoemulsão de Chx.HCl 0,75%, onde a UFC de nanoChx.HCl 0,75% é 195, que é um valor muito alto, indicando que os reagentes nessa concentração são comparáveis ​​à ativação a laser. Os lasers de diodo são fototérmicos, portanto, a luz ou o calor podem fazer com que a nanoemulsão perca seu efeito antibacteriano. O resultado de altas concentrações é a destruição completa das bactérias. Nano Chx.HCl 1,6% apresentou crescimento bacteriano negativo na presença de ativação a laser, o que significa que o laser não afetou a capacidade antibacteriana de nano Chx.HCl 1,6%. Pode-se concluir que o material de nanoemulsão com maior concentração tem um melhor efeito antibacteriano.
Neste trabalho, nanoemulsões de Chx.HCl foram preparadas usando dois óleos diferentes, dois surfactantes e um co-surfactante, a formulação ótima (F6) com pequeno tamanho de partícula, curto tempo de emulsificação e alta taxa de dissolução) foi escolhida. Além disso, (F6) foi testado para estabilidade termodinâmica/física. Na nanoemulsão de Chx.HCl a uma concentração de 1,6%, a nanoemulsão de Chx.HCl mostrou a melhor permeabilidade nos túbulos dentinários em comparação com o Chx.HCl tradicional como um fluido de enxágue, e PUI como um método de ativação teve uma capacidade de limpeza. Além disso, estudos antibacterianos da nanoemulsão de Chx.HCl mostraram eliminação completa de bactérias. Os resultados confirmaram isso. A nanoemulsão de Chx.HCl pode ser considerada como um líquido de lavagem promissor.
Somos muito gratos à equipe do laboratório de pesquisa da Universidade de Ciência e Tecnologia Misr por seu grande apoio.