Javascript je v vašem brskalniku trenutno onemogočen. Nekatere funkcije tega spletnega mesta ne bodo delovale, če je JavaScript onemogočen.
Registrirajte se s svojimi specifičnimi podatki in specifičnim zdravilom, ki vas zanima, in vaše podatke bomo uskladili s članki v naši obsežni bazi podatkov ter vam takoj poslali kopijo v PDF obliki po e-pošti.
Sestava in karakterizacija nanoemulzije klorheksidin hidroklorida kot obetavnega antibakterijskega iriganta za koreninske kanale: študije in vitro in ex vivo
作者 Abdelmonem R., Younis MK, Hassan DH, El-Sayed Ahmed MAEG, Hassanien E., El-Batuti K., Elfaham A.
Rehab Abdelmonem, 1 Mona K. Younis, 1 Doaa H. Hassan, 1 Mohamed Abd El-Gawad El-Sayed Ahmed, 2 Ehab Hassanein, 3 Kariem El-Batuti, 3 Alaa Elfaham 31 Znanost in tehnologija, Fakulteta za farmacijo in industrijsko farmacijo, Univerza Misr, 6. oktober, Egipt; 2 Oddelek za mikrobiologijo in imunologijo, Fakulteta za farmacijo, Univerza za znanost in tehnologijo Misr, 6. oktober, Egipt; 3 Oddelek za endodontijo, Univerza Ain Shams, Kairo, Egipt Uvod in namen: Klorheksidin hidroklorid [Chx.HCl] ima širok spekter antibakterijskega delovanja, podaljšano delovanje in nizko toksičnost, zato ga priporočamo kot potencialno sredstvo za izpiranje koreninskih kanalov. Cilj te študije je bil uporabiti novo sestavo nanoemulzije Chx.HCl za povečanje penetracijske moči, čistilnega in antibakterijskega delovanja Chx.HCl ter jo uporabiti kot sredstvo za izpiranje koreninskih kanalov. Metode: Nanoemulzije Chx.HCl so bile pripravljene z uporabo dveh različnih olj: oleinske kisline in Labrafila M1944CS, dveh površinsko aktivnih snovi, Tween 20 in Tween 80, ter ko-površinsko aktivne snovi, propilen glikola. Za prikaz optimalnega sistema je bil narisan psevdoternarni fazni diagram. Pripravljene formulacije nanoemulzij so bile ocenjene glede na vsebnost učinkovine, čas emulgiranja, disperzibilnost, velikost kapljic, sproščanje učinkovine in vitro, termodinamično stabilnost, antibakterijsko delovanje in vitro ter in vitro študije izbranih formulacij. Penetrirajoče, čistilno in antibakterijsko delovanje nanoemulzije Chx.HCl 0,75 % in 1,6 % je bilo primerjano z normalno velikostjo delcev kot izpiralo za koreninske kanale. Rezultati. Izbrana formulacija je bila F6 z 2 % Labrafila, 12 % Tween 80 in 6 % propilen glikola. Majhna velikost delcev (12,18 nm), kratek čas emulgiranja (1,67 sekunde) in hitro raztapljanje po 2 minutah. Ugotovljeno je bilo, da gre za termodinamično/fizikalno stabilen sistem. V primerjavi s konvencionalno velikostjo delcev Chx.HCl je nanoemulzija Chx.HCl z višjo koncentracijo 1,6 % pokazala boljšo penetracijo zaradi manjše velikosti delcev. V primerjavi z materialom z normalno velikostjo delcev (2609,56 µm2) ima nanoemulzija Chx.HCl z 1,6 % najmanjšo povprečno površino preostalih delcev (2001,47 µm2). Zaključek: Nanoemulzijska sestava Chx.HCl ima boljšo čistilno sposobnost in antibakterijsko delovanje. Ima zelo učinkovito baktericidno delovanje proti Enterococcus faecalis, stopnja krčenja bakterijskih celic pa je visoka ali popolnoma uničena. Ključne besede: klorheksidin hidroklorid, nanoemulzija, izpiralo za koreninske kanale, penetracija, čistilni učinek, antibakterijsko izpiralo.
Nanoemulzije, razred emulzij z velikostjo kapljic v območju 50–500 nm, so v zadnjih letih deležne veliko pozornosti zaradi svojih edinstvenih lastnosti. Imajo dobre čistilne lastnosti, nanje ne vpliva trdota vode, v večini primerov imajo nizko toksičnost in odsotnost elektrostatičnih interakcij. 2 Nanotehnologija ima ultra majhne delce, veliko razmerje med površino in maso ter edinstvene fizikalne in kemijske lastnosti v primerjavi s podobnimi izdelki v razsutem stanju, poleg tega pa odpira nove perspektive pri zdravljenju in preprečevanju zobnih okužb. 3 Klorheksidin hidroklorid (Chx.HCl) je rahlo topen v vodi, zelo rahlo topen v alkoholu in se postopoma obarva na svetlobi. 4,5 SH.HCl ima širok spekter antibakterijskega delovanja, podaljšano delovanje in nizko toksičnost. Zaradi teh lastnosti se priporoča tudi kot potencialno sredstvo za izpiranje koreninskih kanalov. Glavne prednosti Chx.HCl so nizka citotoksičnost, brez vonja in neprijetnega okusa. 6-9 Za izboljšanje dezinfekcije koreninskih kanalov se uporablja več vrst laserjev. Baktericidni učinek laserjev je odvisen od valovne dolžine in energije, pa tudi od toplotne izpostavljenosti, ki povzroča spremembe v bakterijski celični steni, kar vodi do spremembe osmotskega gradienta vse do celične smrti. Interakcija med laserji in irigatorji koreninskih kanalov odpira nova obzorja pri dezinfekciji pulpe. 10 Ultrazvočna energija proizvaja visoke frekvence, vendar nizke amplitude. Pile so zasnovane tako, da nihajo pri ultrazvočnih frekvencah 25–30 kHz, ki presegajo mejo človeškega slušnega zaznavanja (> 20 kHz). Pile so zasnovane tako, da nihajo pri ultrazvočnih frekvencah 25–30 kHz, ki presegajo mejo človeškega slušnega zaznavanja (> 20 kHz). Datoteke so namenjene za nihanje ultrazvočnih frekvenc 25–30 kGc, ki se nahajajo za mejo slušnega zvoka človeka (> 20 kGc). Pile so zasnovane tako, da vibrirajo pri ultrazvočnih frekvencah 25–30 kHz, ki so zunaj dosega človeškega sluha (> 20 kHz).这些文件被设计成在25–30 kHz 的超声波频率下振荡，这超出了人类听觉感知的极限 (>20 kHz)。这些文件被设计成在 25–30 kHz Datoteke razčlenjene na nihanje na ultrazvočnih frekvencah 25–30 kGc, ki izvirajo iz meje slušnega zvoka človeka (>20 kGc). Pile so zasnovane za vibracije pri ultrazvočnih frekvencah 25-30 kHz, kar je zunaj meja človeškega sluha (>20 kHz).Delujejo s prečnim nihanjem, pri čemer vzdolž svoje dolžine določajo značilne načine vozlov in antinodov. Izraz »pasivna ultrazvočna irigacija« (PUI) je irigacijski protokol, pri katerem noben instrument ali stena ne pride v stik z endodontskimi pilami ali instrumenti. Med PUI se ultrazvočna energija prenaša iz vibrirajoče pile v irigacijsko raztopino v koreninskem kanalu. Slednja lahko povzroči zvočni tok in kavitacijo izpiralnega sredstva. 11 Na podlagi zgornjih podatkov se zdi primerno uporabiti nanotehnologijo za oceno izboljšanega penetracijskega in čistilnega delovanja Chx.HCl.
Klorheksidin hidroklorid Chx.HCl je prijazno zagotovilo podjetje Arab Drug Company for Pharmaceuticals (Kairo, Egipt). Labrafil M 1944 CS (oleoilpolioksi-6-glicerid) je velikodušno zagotovilo podjetje Gattefosse (Saint Priest, Francija). Tween 20 (polioksietilen (20) sorbitan monolavrat), Tween 80 (polioksietilen (80) sorbitan monooleat), oleinska kislina, propilen glikol podjetja Gomhorya Company (Kairo, Egipt). Ekstrakcija nekarioznih enokoreninskih zob za parodontalno ali ortodontsko zdravljenje, Oddelek za maksilofacialne vede, Fakulteta za zobozdravstvo, Univerza Ain Shams, Kairo, Egipt. Čista kultura Enterococcus faecalis (sev ATCC 29212), gojena v juhi z ekstraktom možganov in srca (BHI) (RC CLEANER, IIchung Dental Ltd., Seul, Koreja).
Preučevali smo topnost Chx.HCl v različnih medijih (oleinska kislina, Labrafil M 1944CS, Tween 20, Tween 80, propilen glikol in voda). Velik presežek Chx.HCl (50 mg) smo dali v centrifugalno epruveto in dodali 5,0 g medijske faze. Zmes smo 15 minut stresali v vrtinčnem mešalniku in nato shranili pri sobni temperaturi. Po 24 urah smo netopno tableto zdravila v epruveti centrifugirali 5 minut pri 3000 vrt/min, da smo dobili bister supernatant. Zbrali smo dovolj raztopine vzorca in jo razredčili z n-butanolom. Razredčene vzorce smo filtrirali skozi filtrirni papir Whatman 102 in nato ustrezno razredčili z n-butanolom, da smo določili koncentracijo zdravila v nasičeni raztopini. Vzorce smo analizirali z UV-spektrofotometrom pri 260 nm z n-butanolom kot kontrolo. 12.13
Za določitev natančnega razmerja posameznih komponent, potrebnih v formulaciji za doseganje optimalnih parametrov idealne nanoemulzije, je bil zgrajen psevdo-trojni fazni diagram.14 Formulacija je bila formulirana z uporabo olj (npr. oleinske kisline in Labrafila M1944CS), površinsko aktivnih snovi (npr. Tween 20 in Tween 80) in dodatne površinsko aktivne snovi, tj. propilen glikola. Najprej so bile pripravljene ločene mešanice površinsko aktivnih snovi (brez ko-površinsko aktivnih snovi) in olj v različnih volumskih razmerjih (od 1:9 do 9:1). Ko zmes titriramo z vodo (vodo dodajamo po kapljicah), pozorno spremljamo, da se zmes spremeni od bistre do motne kot končne točke. Te končne točke nato označimo na psevdo-trojnem faznem diagramu. Celoten postopek smo ponovili za mešanice površinsko aktivne snovi in ​​sekundarne površinsko aktivne snovi (Smix), pripravljene v razmerjih 2:1 in 3:1 ter zmešane z izbranimi olji15,16.
Nanoemulzijski sistemi, ki vsebujejo Chx.HCl, so bili pripravljeni z uporabo Labrafil M 1944 CS kot oljne faze in Tween 80 ali 20 površinsko aktivne snovi ter propilen glikola kot dodatne površinsko aktivne snovi in ​​na koncu vode, Tabela 1. Zdravilo je bilo raztopljeno v Labrafil M 1944 CS in združena voda površinsko aktivne snovi in ​​sekundarne površinsko aktivne snovi je bila dodana počasi s postopnim mešanjem. Količina dodane površinsko aktivne snovi in ​​ko-površinsko aktivne snovi ter odstotek oljne faze, ki ga je mogoče dodati, je bil določen z uporabo psevdo-ternarnega faznega diagrama. Za doseganje želenega razpona velikosti za disperzijo granul je bil uporabljen ultrazvočni generator (Ultrasonic LC 60 H, Elma, Nemčija). Nato je bilo treba granule uravnotežiti. 17
Testiranje disperzibilnosti je bilo izvedeno z uporabo disolucijskega aparata (Dr. Schleuniger Pharmaton, Model Diss 6000, Thun, Švica), v katerem je bilo 1 ml vsakega pripravka dodano 500 ml vode pri 37 ± 0,5 °C. Nežno mešanje je zagotovljeno s standardnimi mešalnimi lopaticami iz nerjavečega jekla, ki se vrtijo s 50 vrt/min. Nastala emulzija je bila določena vizualno in razvrščena kot bistra, prosojna z modrikastim odtenkom, mlečna ali motna. Za nadaljnje raziskave izberite bistro formulo. 18.19
Ekstrakcija Chx.HCl iz optimiziranih nanoemulzijskih sestavkov na podlagi psevdo-trojnega faznega diagrama vodi do proizvodnje n-butanola z uporabo ultrazvočne tehnologije. Po ustreznem razredčenju so bili ekstrakti spektrofotometrično analizirani pri valovni dolžini 260 nm na vsebnost Chx.HCl. dvajset
Za preizkus časa samoemulgiranja smo v čašo, napolnjeno z 250 ml destilirane vode, dodali 1 ml vsake sestave in vzdrževali pri 37 ± 1 °C ob stalnem mešanju s 50 vrt/min. Čas samoemulgiranja se šteje kot čas, v katerem predkoncentrat po redčenju tvori homogeno zmes. enaindvajset
Za analizo velikosti kapljic razredčite 50 mg optimizirane formulacije na 1000 ml vode v bučki in nežno ročno premešajte. Porazdelitev velikosti kapljic je bila določena z instrumentom Malvern Zetasizer 2000 (Malvern Instruments Ltd., Malvern, Združeno kraljestvo) pod pogoji detekcije povratnega sipanja pri 173 °C, temperaturi 25 °C in lomnem količniku 1,330. dvaindvajset
Študije raztapljanja in vitro so bile izvedene z uporabo aparature USP tipa II (lopatica) (Dr. Schleuniger Pharmaton, Diss Model 6000) pri 50 vrt/min. Kot medij za raztapljanje je bila uporabljena destilirana voda (500 ml), ki je bila vzdrževana pri temperaturi 37 ± 0,5 °C, in 5 ml pripravljene sestave je bilo po kapljicah dodanih v medij za raztapljanje. Nato je bilo v različnih intervalih odvzetih 5 ml medija za raztapljanje in količina sproščenega zdravila je bila določena spektrofotometrično pri 254 nm. Poskusi so bili izvedeni v treh ponovitvah. triindvajset
Nato so bili izmerjeni kinetični parametri sproščanja Chx.HCl in vitro iz nanoemulzij, pripravljenih na njegovi osnovi. Za izbiro kinetičnega zaporedja, ki je najbolj primerno za sproščanje Chx.HCl, so bili testirani modeli ničelne, prve in druge kinetike ter Higuchijeve difuzije.
2 ml vsake formulacije smo shranili pri sobni temperaturi 48 ur, preden smo opazili ločitev faz. 1 ml vzorcev vsake formulacije nanoemulzije Chx.HCl smo nato razredčili na 10 ml in 100 ml z destilirano vodo pri 25 °C in shranili 24 ur. Nato smo opazili ločitev faz. enaindvajset
Nato so bili vzorci po 2 ml vsake sestave ločeno preneseni v prozorne stekleničke z navojnim zamaškom in shranjeni v hladilniku pri 2 °C 24 ur. Nato so bili odstranjeni in shranjeni pri 25 °C in 40 °C. Izveden je bil en sam cikel hlajenja in odmrzovanja. Vzorce so nato opazovali glede ločevanja faz in obarjanja zdravila. enaindvajset
5 ml vzorec vsake formulacije nanoemulzije Chx.HCl smo prenesli v stekleno epruveto in jo postavili v laboratorijsko centrifugo (Shanghai Surgical Instrument Factory Microcentrifuge Model 800, Šanghaj, Ljudska republika Kitajska) ter centrifugirali pri 4000 vrt/min 5 minut. Vzorce smo nato opazovali glede ločevanja faz in obarjanja zdravila. enaindvajset
Vse poskuse je odobril Institucionalni etični odbor Univerze Ain Shams v Egiptu. Izbranih je bilo 50 nekarioznih človeških zob z eno korenino in oblikovanim vrhom. Izvlečeni zobje so bili uporabljeni po pridobitvi pisnega informiranega soglasja, ki ga je podpisal pacient. Zobje vključujejo maksilarne in spodnje čeljustne sekalce ter spodnje čeljustne premolarje. Zunanje površine korenin so bile obdelane s kireto, vsi zobje pa so bili 24 ur površinsko sterilizirani v 0,5 % NaOCl in nato shranjeni v sterilni fiziološki raztopini do uporabe. Krona je bila odstranjena z diamantnim diskom Safe Side, dolžina zoba pa je bila normalizirana na 16 mm od vrha do koronalnega roba.24,25 Glede na raztopino za izpiranje so zobje razdeljeni v naslednje skupine:
(A) Vzorce skupine (n=24) so ​​oprali z nanoemulzijo Chx.HCl. Podskupina (I) (n=12) je vzorce sprala s 5 ml nanoemulzije Chx.HCl s koncentracijo 0,75 %. Podskupina (II) (n=12) je vzorce sprala s 5 ml 1,6 % nanoemulzije Chx.HCl. (B) Skupina (n=24) vzorcev bo oprana s 5 ml 2 % Chx.HCl z normalno velikostjo delcev. Kontrolna skupina: (n=2) je oprala s 5 ml fiziološke raztopine brez aktivacije.
Izbranih je bilo 44 nekarioznih enokoreninskih človeških zob z oblikovano konico. Zobje vključujejo maksilarne in mandibularne sekalce ter mandibularne premolarje. Zunanje površine korenin so bile obdelane s kireto, vsi zobje pa so bili 24 ur površinsko sterilizirani v 0,5 % NaOCl in nato shranjeni v sterilni fiziološki raztopini do uporabe. Krone so bile odstranjene z varnostnim diamantnim diskom, dolžina zoba pa je bila normalizirana na 16 mm od vrha do koronalnega roba. 24,25,29
Mehanska priprava glavne apikalne pile velikosti 50 z uporabo standardnih metod. Med operacijo uporabite sterilno fiziološko raztopino kot izpiralo. Na koncu je bil koreninski kanal 1 minuto spran z 2 ml 17 % EDTA, da se odstrani razmaz. Celotna površina korenine, vključno z apikalnim foramenom vsakega vzorca, je bila prekrita z dvema slojema laka za nohte (cianoakrilatno lepilo), da se prepreči puščanje. Zobje so nato za lažje rokovanje in identifikacijo navpično postavljeni v blok zobnega kamna. 29-33 Vzorci so bili nato avtoklavirani pri 121 °C in 15 psi 20 minut. Po sterilizaciji so bili vsi vzorci transportirani in obdelani v sterilnih pogojih z uporabo sterilnih instrumentov. Koreninski kanali so bili kontaminirani s čisto kulturo Enterococcus faecalis (sev ATCC 29212), gojene v brozgi izvlečka možganov in srca (BHI) 24 ur pri 37 °C. S sterilno mikropipeto injicirajte bistro suspenzijo inokuluma E. faecalis v pripravljene koreninske kanale vseh zob. Bloke smo nato postavili v sterilne čaše in inkubirali pri 37 °C 24 ur. 31, 34, 35
(A) Vzorce skupine (n=24) smo oprali z nanoemulzijo Chx.HCl. Vzorce podskupine (I) (n=12) smo sprali s 5 ml nanoemulzije Chx.HCl s koncentracijo 0,75 %. Podskupina (II) (n=12) je vzorce sprala s 5 ml nanoemulzije Chx.HCl s koncentracijo 1,6 %.
Kontrolna skupina: pozitivna kontrola, (n=4) kontaminirani koreninski kanal je bil spran s 5 ml fiziološke raztopine in shranjen kot pozitivna kontrola. Negativna kontrola: (n=4) Vzorci niso bili injicirani s suspenzijo, tj. koreninski kanal ni bil kontaminiran z E. faecalis, in je bil sterilen kot negativna kontrola za potrditev sterilizacije in zanesljivosti postopka. V vsakem vzorcu uporabite 5 ml testne raztopine za izpiranje. Vsak vzorec je bil nato podvržen končnemu izpiranju z 1 ml sterilne fiziološke raztopine.
Za odvzem vzorcev iz koreninskih kanalov se uporablja sterilna papirnata konica velikosti 35. Papirnata konica je bila vstavljena v cev do delovne dolžine, puščena 10 sekund in nato prenesena na agar plošče, da se določi število kolonijskih enot (CFU) na ploščo. Plošče so bile 24 ur inkubirane pri 37 °C in nato vizualno ocenjene glede rasti bakterij. Prozorna plošča kaže popolno sterilizacijo. Zamegljene plošče se štejejo za znak pozitivne rasti. Določeno je bilo povprečno število CFU v območju rasti bakterij na ploščo in izračunano število CFU. Preživele se merijo predvsem s številom živih organizmov na kapalnih ploščah. Poleg tega je bila za štetje nizkih CFU uporabljena prelivna skodelica, za štetje visokih CFU pa razredčitev na 106. 36,37
Pripravite epruvete s 15 ml odtajanega agarja, predhodno steriliziranega v avtoklavu na isti dan kot za poskus. Enterococcus faecalis je fakultativni grampozitivni anaerobni kok, ki lahko preživi pri zelo visokem pH, kislosti in visokih temperaturah. 39 Bakterijske vzorce (Enterococcus faecalis ATCC 29212) smo pripravili z mešanjem celic iz kolonij s sterilno fiziološko raztopino. Bakterijske vzorce smo nato razredčili s fiziološko raztopino do McFarlandove raztopine 0,5, kar ustreza 108 CFU/ml. Dodana količina vzorca je bila 10 µl. 39 Standard motnosti (McFarland 0,5)40 smo pripravili tako, da smo 0,6 ml 1 % (10 g/l) raztopine barijevega klorida dihidrata vlili v 100 ml merilni valj in dopolnili do 100 ml z 1 % (10 g/l) žveplovo kislino. Standardi motnosti so bili nameščeni v iste epruvete kot vzorci juhe in shranjeni pri sobni temperaturi 6 mesecev v temi ter zaprti, da se prepreči izhlapevanje. Odprite pokrov prazne petrijevke in vzorec vlijte na sredino posode. Če se agar popolnoma strdi, obrnite ploščo in inkubirajte pri 37 °C 24 ur.
Vsi podatki so bili zbrani, tabelarično prikazani in statistično analizirani. Statistična analiza je bila izvedena z uporabo programa IBM® SPSS® Statistical Version 17 for Windows (SPSS Inc., IBM Corporation, Armonk, NY, ZDA).
Proučevali so topnost Chx.HCl v različnih oljnih fazah, raztopinah površinsko aktivnih snovi, raztopinah ko-surfaktantov in vodi. Chx.HCl ima najvišjo topnost v Labrafilu M in najnižjo v oleinski kislini. Višja topnost zdravila v oljni fazi je pomembna za nanoemulzije, ker lahko nanoemulzije ohranijo zdravilo v raztopljeni obliki, kar pomeni, da večja topnost zdravila v olju povzroči manj olja v formulaciji in s tem manj zdravila. Nalaganje Za emulgiranje oljnih kapljic je potrebna določena količina površinsko aktivne snovi in ​​ko-surfaktanta.
Za opredelitev nanoemulzijskih območij in optimizacijo koncentracij izbranih olj, površinsko aktivnih snovi in ​​dodatnih površinsko aktivnih snovi (Labrafil M, Tween 80, Tween 20 oziroma propilen glikol) je bil konstruiran psevdo-trojni fazni diagram. Chx.HCl kaže zelo nizko topnost v oleinski kislini, kar povzroči motnost, ko oleinsko kislino titriramo s prvo kapljico vode. Zato je bil sistem oleinske kisline izključen iz te študije. Druge formulacije so bile pripravljene z uporabo mešanice olja in površinsko aktivne snovi v razmerju 1:9. V tem območju pH in ionske moči so bile izbrane te površinsko aktivne snovi.
Vse pripravljene formulacije so bile bistre, razen sistema F2, ki je bil moten in je bil zato izključen iz nadaljnjih študij ocenjevanja.
Idealna formulacija nanoemulzije bi se morala ob redčenju z rahlim mešanjem popolnoma in hitro dispergirati. Formulacije nanoemulzije Chx.HCl so pokazale kratke čase emulgiranja, od 1,67 do 12,33 sekunde. Tween 80 ima najkrajši čas emulgiranja. To je mogoče pojasniti z večjo solubilizacijsko sposobnostjo Tween 80. Čas samoemulgiranja se povečuje z naraščajočo koncentracijo površinsko aktivne snovi, kar je lahko posledica povečanja viskoznosti sistema pod delovanjem površinsko aktivne snovi.
Velikost kapljic emulzije določa hitrost in obseg sproščanja zdravila. Manjša velikost kapljic emulzije pomeni krajši čas emulgiranja in večjo površino za absorpcijo zdravila. Povprečne velikosti kapljic izbranih sestavkov nanoemulzije Chx.HCl so bile 711 ± 0,44, 587 ± 15,3, 10,97 ± 0,11, 16,43 ± 4,55 in 12,18 ± 2,48, PDI pa je bil 0,76, 0,19, 0,61, 0,47 in 0,76 za F1, F2, F3 in 0,16 za F4, F5 in F6. Formulacije, ki so vsebovale Tween 80 kot površinsko aktivno snov, so pokazale manjše sferulite. To je lahko posledica njegove večje emulgirne moči. Nižja vrednost PDI kaže na ožjo porazdelitev velikosti sistema. Te formulacije imajo čist videz, ker so njihovi polmeri kapljic manjši od optične valovne dolžine vidne svetlobe (390–750 nm), pri kateri pride do minimalnega sipanja svetlobe.41
Na sliki 2 je prikazan odstotek sproščenega Chx.HCl iz formulirane formulacije. Popolno sproščanje zdravila iz pripravljenih formulacij nanoemulzije Chx.HCl je trajalo od 2 do 7 minut. Ugotovljeno je bilo, da je bila najvišja hitrost sproščanja zdravila dosežena v primeru formulacije nanoemulzije Chx.HCl F6 (2 min), kar je lahko posledica prisotnosti Tween 80, ki je pokazal višjo stopnjo emulgiranja, nastala nanoemulzija pa zagotavlja veliko površino za sproščanje zdravila, kar omogoča povečano hitrost sproščanja zdravila. Hkrati topnost propilen glikola omogoča raztapljanje velike količine hidrofilnih površinsko aktivnih snovi v olju. 40
Ugotovljeno je bilo, da sproščanje Chx.HCl in vitro sledi drugačnemu kinetičnemu redu in noben jasen kinetični red ne more odražati sproščanja zdravila iz različno pripravljenih nanoemulzij. Kinetično sproščanje zdravil F4 je kinetika prvega reda, kar pomeni, da se sproščajo sorazmerno s količino zdravila, ki ostane v njih.42 Kinetično sproščanje drugih zdravil je bilo skladno z difuzijskim modelom Higuasha, ki je pokazal, da je količina sproščenega zdravila sorazmerna s kvadratnim korenom celotnega zdravila in topnostjo zdravila v nanoemulziji.42
Izbrane formulacije so bile podvržene različni termodinamični stabilnosti s stresnim testiranjem z uporabo ciklov segrevanja in hlajenja, centrifugiranja ter ciklov zamrzovanja in odmrzovanja. Ugotovljeno je bilo, da sta formulaciji F3 in F4 po ciklih odmrzovanja pokazali obarjanje zdravila, medtem ko je F1 pokazala zgoščevanje (geliranje). F5 in F6 sta prestali cikel neprekinjenega centrifugiranja, test segrevanja in hlajenja ter test zamrzovanja in odmrzovanja. Nanoemulzije so termodinamično stabilni sistemi, ki nastanejo pri določenih koncentracijah olja, površinsko aktivne snovi in ​​vode brez ločevanja faz, emulgiranja ali razpokanja. Termična stabilnost loči nanoemulzije od emulzij, ki so kinetično stabilne in se sčasoma ločijo v faze. 19 F3 je pokazala večjo velikost delcev (587 nm) kot druge formulacije, kar lahko pojasni ločevanje faz in obarjanje zdravila v testih termodinamične stabilnosti. F4, ki je vseboval Tween 80 in ni imel so-površinsko aktivne snovi, je pokazal obarjanje zdravila, kar lahko kaže na potrebo po uporabi propilen glikola in Tween 80 za izboljšanje stabilnosti nanoemulzijskih formulacij. F1, ki je vseboval Tween 20 brez dodatnega surfaktanta, je pokazal zgoščevanje (geliranje), kar je povečanje viskoznosti ali trdnosti gela zaradi agregacije kapljic.
Rezultati stabilnosti kažejo na pomen prisotnosti dodatne površinsko aktivne snovi propilen glikola za povečanje disperzije delcev in preprečevanje obarjanja zdravila. 43 F6 je bila najboljša formulacija zaradi majhne velikosti delcev (12,18 nm), kratkega časa emulgiranja (1,67 sekunde) in hitre hitrosti raztapljanja po 2 minutah. Ugotovljeno je bilo, da je termodinamično/fizikalno stabilen sistem in je bil zato izbran za nadaljnje preučevanje.
Neuspehi po zdravljenju koreninskih kanalov postajajo vse pogostejši, kar pomeni, da je pri bolnikih večje tveganje za razvoj kompleksnejših okužb. 44,45 Biofilm je treba odstraniti med dezinfekcijo in polnjenjem koreninskih kanalov. 46,47 Zaradi kompleksnosti sistema koreninskih kanalov je težko popolnoma odstraniti bakterije iz koreninskih kanalov samo z instrumenti in izpiranjem. 48 Učinkovitost raztopin za izpiranje koreninskih kanalov je odvisna od prodiranja iriganta v DT in trajanja izpostavljenosti bakterijam. 49 Zato so bile preizkušene in testirane nove metode temeljite sterilizacije koreninskih kanalov. Konvencionalna izpiranja ne odstranijo E. faecalis popolnoma zaradi manjše penetracije DT.50
Povprečna čistilna moč izpiranja z nanoemulzijo je bila 2001,47 µm2, povprečna velikost delcev sredstva za izpiranje pa 2609,56 µm. Povprečna razlika med izpiranjem z nanoemulzijo in izpiranjem z normalno velikostjo delcev je bila 608,09 µm2. Med nanoemulzijskimi iriganti in iriganti z normalno velikostjo delcev je bila ugotovljena statistično zelo pomembna (P < 0,001) razlika z (P-vrednost 0,00052). Med nanoemulzijskimi iriganti in iriganti z normalno velikostjo delcev je bila ugotovljena statistično zelo pomembna (P < 0,001) razlika z (P-vrednost 0,00052). Med irigacijskimi raztopinami nanoemulzije in irigacijskimi raztopinami z normalno velikostjo delcev je bila opažena statistično visoko pomembna (P<0,001) razlika (pomen P 0,00052). Med nanoemulzijskimi iriganti in iriganti z normalnimi delci je bila ugotovljena statistično zelo pomembna (P < 0,001) razlika (vrednost P 0,00052).纳米乳液冲洗剂和正常粒径冲洗剂之间存在统计学上高度显着的差异＂ (P<0,001)（P 0,00052).纳米乳液冲洗剂和正常粒径冲洗剂之间存在统计学上高度显着的差异＂ (P<0,001)（P 0,00052). Med oksidatorjem z nanoemulzijo in oksidatorjem z normalno velikostjo delcev je bila statistično zelo pomembna razlika (P<0,0001) (pomen P 0,00052). Med izpiranjem z nanoemulzijo in izpiranjem z normalno velikostjo delcev je bila statistično zelo pomembna razlika (P < 0,0001) (vrednost P 0,00052).Nanoemulzija je pokazala statistično zelo pomembno razliko v primerjavi z materialom z normalno velikostjo delcev, saj je imela manjšo povprečno površino preostalih delcev, tj. nanoemulzijski material je imel najboljšo čistilno sposobnost, kot je prikazano na sliki 3.
Slika 3. Primerjava učinkovitosti čiščenja sredstev za izpiranje: (A) z aktiviranim Nano CHX laserjem, (B) z aktiviranim CHX laserjem, (C) s PUI Nano CHX, (D) brez aktivacije Nano CHX, (E) brez aktivacije CHX in (F) ) aktivacija CHX PUI.
Povprečna površina preostalih fragmentov Chx.HCl 1,6 % je bila 2320,36 µm2, povprečna površina Chx.HCl 2 % pa 2949,85 µm2. Med višjo koncentracijo nanoemulzijskih irigantov in irigantov z normalno velikostjo delcev je bila statistično zelo pomembna (P < 0,001) razlika (P-vrednost 0,00000). Med višjo koncentracijo nanoemulzijskih irigantov in irigantov z normalno velikostjo delcev je bila statistično zelo pomembna (P < 0,001) razlika (P-vrednost 0,00000). Ugotovljena je bila statistično visoko pomembna (P<0,001) razlika med večjo koncentracijo nanoemulzijskih raztopin za namakanje in raztopinami za namakanje z normalno velikostjo delcev (pomen P 0,00000). Med višjo koncentracijo nanoemulzijskih irigantov in irigantov z normalno velikostjo delcev (vrednost P 0,00000) je bila ugotovljena statistično zelo pomembna (P < 0,001) razlika.较高浓度的纳米乳液冲洗剂与正常粒径冲洗剂之间存在统计学上高度显着的差异＂ (P<0,001)（P 0,00000).较高浓度的纳米乳液冲洗剂与正常粒径冲洗剂之间存在统计学显着的差异 (P<0,001)（P 0 0,0 Ugotovljeno je bilo, da je bila statistično zelo pomembna razlika (P<0,001) med večjo visoko koncentracijo oksidanta z nanoemulzijami in oksidatorjem z normalno velikostjo delcev (pomen P 0,00000). Med višjimi koncentracijami izpiranja z nanoemulzijo in izpiranjem z normalno velikostjo delcev je bila ugotovljena statistično zelo pomembna razlika (P < 0,001).Čeprav je bila koncentracija nanoemulzijskega iriganta nižja od koncentracije iriganta z normalno velikostjo delcev, je bila ta nižja koncentracija bistveno učinkovitejša pri odstranjevanju ostankov in učinkovitejša pri čiščenju koreninskih kanalov.
PUI je imel statistično zelo pomembno razliko (p < 0,001) v primerjavi z drugimi metodami aktivacije. PUI je imel statistično zelo pomembno razliko (p < 0,001) v primerjavi z drugimi metodami aktivacije. PUI je imel statistično visoko pomembno razliko (p<0,001) v primerjavi z drugimi metodami aktivacije. PUI je imel statistično zelo pomembno razliko (p < 0,001) v primerjavi z drugimi metodami aktivacije.与其他激活方法相比，PUI 具有统计学上非常显着的差异 (p<0,001).与其他激活方法相比，PUI 具有统计学上非常显着的差异 (p<0,001). V primerjavi z drugimi metodami aktivacije PUI je bila statistično zelo pomembna razlika (p<0,001). V primerjavi z drugimi metodami aktivacije je imela PUI statistično zelo pomembno razliko (p < 0,001).Z aktivacijo ISP je bila povprečna površina preostale površine naplavin 1695,31 µm2. Povprečna razlika med PUI in laserjem je bila 987,89929, kar kaže na visoko statistično značilno (P < 0,001) razliko z (p-vrednost 0,00000). Povprečna razlika med PUI in laserjem je bila 987,89929, kar kaže na visoko statistično značilno (P < 0,001) razliko z (p-vrednost 0,00000). Srednja razlika med PUI in laserjem je znašala 987,89929, kar kaže visoko statistično pomembno (P<0,001) razliko s (p-pomen 0,00000). Povprečna razlika med PUI in laserjem je bila 987,89929, kar kaže na visoko statistično značilno (P < 0,001) razliko od (p-vrednost 0,00000). PUI 和Laser 之间的平均差异为987,89929，显示出高度统计学显着性(P<0,001) 差异(p 值0,00000)。PUI in laser Srednja razlika med PUI in laserjem je znašala 987,89929, kar kaže na visoko statistično pomembnost (P<0,001) vrednosti (p-pomen 0,00000). Povprečna razlika med PUI in laserjem je bila 987,89929, kar kaže na visoko statistično značilno (P < 0,001) razliko (p-vrednost 0,00000). Povprečna razlika med PUI in brez aktivacije je bila 712,40643, kar kaže na visoko statistično značilno (P < 0,001) razliko s p-vrednostjo 0,00098. Uporaba laserske aktivacije ali brez aktivacije se ni statistično značilno razlikovala (P > 0,05) s p-vrednostjo 0,451211. Povprečna razlika med PUI in brez aktivacije je bila 712,40643, kar kaže na visoko statistično značilno (P < 0,001) razliko s p-vrednostjo 0,00098 in p-vrednostjo 0,451211. Srednja razlika med PUI in pomanjkanjem aktivacije je znašala 712,40643, kar kaže visoko statistično pomembno (P<0,001) razliko s p-pomenom 0,00098). Povprečna razlika med PUI in brez aktivacije je bila 712,40643, kar kaže na visoko statistično značilno (P < 0,001) razliko s p-vrednostjo 0,00098.P-vrednost 0,451211. PUI 和未激活之间的平均差异为712.40643，显示高度统计学显着性差异.(P<0,001)，p为0,00098).Uporabniški vmesnik Srednji razpon med PUI in neaktivacijo je znašal 712,40643, kar kaže na visoko statistično pomembnost (P<0,001, p-pomen 0,00098). Povprečna razlika med PUI in inaktivacijo je bila 712,40643, kar kaže na visoko statistično značilnost razlike (P < 0,001, p-vrednost 0,00098).使用激光激活或不激活在统计学上没有显着差异. (P>0,05) P 值为0,451211.使用激光激活或不激活在统计学上没有显着差异. (P>0,05) P 值为0,451211. Statistično pomembne razlike (P>0,05) z lasersko aktivacijo ali brez nje ni bilo s vrednostjo P 0,451211. Ni bilo statistično značilne razlike (P>0,05) z lasersko aktivacijo ali brez nje, s P-vrednostjo 0,451211.Povprečna površina preostalih fragmentov po laserski aktivaciji je bila 2683,21 µm2. Povprečna površina preostalih fragmentov brez aktivacije je bila 2407,72 µm2. V primerjavi z lasersko aktivacijo ali brez aktivacije je imel PUI statistično manjšo povprečno površino odrezka, tj. najboljšo čistilno moč.
Povprečna čistilna moč izpiranja z nanoemulzijo je bila 2001,47 µm2, povprečna velikost delcev sredstva za izpiranje pa 2609,56 µm. Povprečna razlika med izpiranjem z nanoemulzijo in izpiranjem z normalno velikostjo delcev je bila 608,09 µm2. Med nanoemulzijskimi iriganti in iriganti z normalno velikostjo delcev je bila ugotovljena statistično zelo pomembna (P < 0,001) razlika z (P-vrednost 0,00052). Med nanoemulzijskimi iriganti in iriganti z normalno velikostjo delcev je bila ugotovljena statistično zelo pomembna (P < 0,001) razlika z (P-vrednost 0,00052). Med irigacijskimi raztopinami nanoemulzije in irigacijskimi raztopinami z normalno velikostjo delcev je bila statistično visoko pomembna (P<0,001) razlika (pomen P 0,00052). Med nanoemulzijskimi iriganti in iriganti z normalnimi delci je bila ugotovljena statistično zelo pomembna (P < 0,001) razlika (vrednost P 0,00052).纳米乳液冲洗剂与正常粒径冲洗剂之间存在统计学上高度显着的差异＂ (P<0,001）（P值0,00052）). P<0,001）(P值0,00052）). Med oksidatorjem z nanoemulzijo in oksidatorjem z normalno velikostjo delcev je bila statistično zelo pomembna razlika (P<0,0001) (pomen P 0,00052). Med izpiranjem z nanoemulzijo in izpiranjem z normalno velikostjo delcev je bila statistično zelo pomembna razlika (P < 0,0001) (vrednost P 0,00052).V primerjavi z materialom z normalno velikostjo delcev ima nanoemulzija statistično zelo pomembno razliko, saj kaže manjšo povprečno površino preostalih delcev, tj. nanoemulzijski material ima boljšo čistilno sposobnost, kot je prikazano na sliki 3.
Povprečna površina preostalih fragmentov Chx.HCl 1,6 % je bila 2320,36 µm2, povprečna površina Chx.HCl 2 % pa 2949,85 µm2. Med višjo koncentracijo nanoemulzijskih irigantov in irigantov z normalno velikostjo delcev je bila statistično zelo pomembna (P < 0,001) razlika (P-vrednost 0,00000). Med višjo koncentracijo nanoemulzijskih irigantov in irigantov z normalno velikostjo delcev je bila statistično zelo pomembna (P < 0,001) razlika (P-vrednost 0,00000). Imela je visoko statistično zanesljivo (P<0,001) razliko med visoko koncentracijo nanoemulzijskih namakalnih sredstev in namakalnih raztopin z normalno velikostjo delcev (velikost P 0,00000). Med višjo koncentracijo nanoemulzijskih irigantov in irigantov z normalno velikostjo delcev (vrednost P 0,00000) je bila ugotovljena statistično pomembna razlika (P < 0,001).较高浓度的纳米乳液冲洗剂与正常粒径冲洗剂之间存在统计学上高度显着的差异＂ (P<0,001）（P值0,00000）).较高浓度的纳米乳液冲洗剂与正常粒径冲洗剂之间存在统计学上高度显着的差异＂ (P<0,001)（P000 Ugotovljena je bila statistično visoko pomembna razlika (P <0,001) med visoko koncentracijo oksidanta z nanoemulzijo in oksidatorjem z normalno velikostjo delcev (pomen P 0,00000). Med višjimi koncentracijami izpiranja z nanoemulzijo in izpiranjem z normalno velikostjo delcev je bila ugotovljena statistično zelo pomembna razlika (P < 0,001).Čeprav je bila koncentracija nanoemulzijskega iriganta nižja od koncentracije iriganta z normalno velikostjo delcev, je bila ta nižja koncentracija bistveno učinkovitejša pri odstranjevanju ostankov in učinkovitejša pri čiščenju koreninskih kanalov.
PUI je imel statistično visoko pomembno razliko (p < 0,001) v primerjavi z drugimi metodami aktivacije. PUI je imel statistično visoko pomembno razliko (p < 0,001) v primerjavi z drugimi metodami aktivacije. PUI je imel statistično visoko pomembno razliko (p<0,001) v primerjavi z drugimi metodami aktivacije. PUI je imel statistično značilno razliko (p < 0,001) v primerjavi z drugimi metodami aktivacije.与其他激活方法相比，PUI 具有统计学上的显着差异 (p<0,001). V primerjavi z drugimi metodami aktivacije ima PUI statistično značilno razliko (p < 0,001). PUI se je statistično pomembno razlikoval (p<0,001) v primerjavi z drugimi metodami aktivacije. PUI se je statistično značilno razlikoval (p < 0,001) v primerjavi z drugimi metodami aktivacije.Med aktivacijo PUI je bila povprečna površina preostalih površinskih ostankov 1695,31 μm2. Povprečna razlika med PUI in laserjem je bila 987,89929, kar kaže na visoko statistično značilno razliko (P < 0,001) z (p-vrednost 0,00000). Povprečna razlika med PUI in brez aktivacije je bila 712,40643, kar kaže na visoko statistično značilno razliko (P < 0,001) z (p-vrednost 0,00098). Uporaba laserske aktivacije ali brez aktivacije se ni statistično značilno razlikovala (P > 0,05) z (p-vrednost 0,451211). Povprečna razlika med PUI in laserjem je bila 987,89929, kar kaže na visoko statistično značilno razliko (P<0,001) z (p-vrednost 0,00000). Povprečna razlika med PUI in brez aktivacije je bila 712,40643, kar kaže na visoko statistično značilno razliko (P<0,001) z (p-vrednost 0,00098). Uporaba laserske aktivacije ali brez aktivacije se ni statistično značilno razlikovala (P>0,05) z (p-vrednost 0,451211). Srednja razlika med PUI in laserjem je znašala 987,89929, kar kaže visoko statistično pomembno (P<0,001) razliko s (p-pomen 0,00000). Povprečna razlika med PUI in laserjem je bila 987,89929, kar kaže na visoko statistično značilno (P < 0,001) razliko z (p-vrednost 0,00000). - vrednost 0,00098). Uporaba laserske aktivacije ali odsotnost aktivacije ni imelo statistično pomembne vrednosti (P>0,05) s (P-pomen 0,451211). - vrednost 0,00098). Uporaba laserske aktivacije ali brez aktivacije je imela statistično značilno razliko (P>0,05) z (P-vrednost 0,451211). PUI 和激光之间的平均差异为987,89929，(p 值0,00000) 差异具有高度统计学意义(P<0,001)。 Povprečna razlika med PUI in laserjem je 987,89929, razlika (p < 0,00000) pa ima visok statistični pomen (P < 0,001). Srednja razlika med PUI in laserjem je znašala 987,89929, kar je bilo visoko statistično pomembno (P<0,001) s (pomen p 0,00000). Povprečna razlika med PUI in laserjem je bila 987,89929, kar je bilo statistično zelo pomembno (P < 0,001) z (p-vrednostjo 0,00000). PUI 与未激活之间的平均差异为712.40643，与(p) 差异具有高度统计学意义(P<0,001) -值0,00098). Povprečna razlika med PUI in neaktivnimi je 712,40643, razlika (p) pa ima visoko statistično značilnost (P<0,001) – vrednost 0,00098. Srednja razlika med PUI in neaktivacijo je znašala 712,40643, kar je bilo visoko statistično pomembno z razliko (p) (P<0,001 — vrednost 0,00098). Povprečna razlika med PUI in inaktivacijo je bila 712,40643, kar je bilo statistično zelo pomembno z razliko (p) (P < 0,001 – vrednost 0,00098).使用激光激活或不激活没有显着统计学差异(P>0,05) 与(P 值0,451211)。 Med aktivacijo in neaktivacijo laserja ni bilo statistično pomembne razlike (P>0,05) in (P值0,451211). Ni bilo statistično pomembne vrednosti (P>0,05) v primerjavi z (pomen P 0,451211) z lasersko aktivacijo ali brez nje. Ni bilo statistično značilne razlike (P>0,05) v primerjavi z (vrednost P 0,451211) z lasersko aktivacijo ali brez nje.Povprečna površina preostalih fragmentov med lasersko aktivacijo je bila 2683,21 μm2. Povprečna površina preostalih fragmentov brez aktivacije je bila 2407,72 μm2. V primerjavi z lasersko aktivacijo ali brez aktivacije ima PUI statistično manjšo povprečno površino čipa, tj. boljšo čistilno sposobnost.
Povprečni učinek izpiranja z nanoemulzijo na odstranjevanje ostankov je bil statistično značilno večji kot učinek izpiranja z normalno velikostjo delcev. Chx.HCl 1,6 %, PUI 1938,77 µm2, 2510,96 µm2 z laserjem. Brez aktivacije je povprečna vrednost 2511,34 µm2. Pri uporabi 2 % Chx.HCl in aktivaciji z laserjem so bili rezultati najslabši, količina ostankov pa največja. Isti rezultati so bili pridobljeni, ko 0,75 % Chx.HCl ni bilo aktivirano. Očitno so bili najboljši rezultati pridobljeni z uporabo višjih koncentracij sredstva za izpiranje v nanoemulziji. PUI je bil najučinkovitejši pri aktivaciji irigantnega sredstva in spiranju ostankov, kot je prikazano na sliki 3A-F).
Kot je prikazano v tabeli 2, je nanoemulzija Chx.HCl pokazala boljše rezultate od delcev običajne velikosti glede na število živih mikroorganizmov in je imela dobro korelacijo s penetracijo formulacije in čistilnim učinkom glede na naslednje parametre: velikost, koncentracija sredstva za izpiranje in način aktivacije.
Bakterije je mogoče popolnoma uničiti z uporabo višje koncentracije sredstva za izpiranje. Tudi pri aktivaciji s PUI je imel 0,75 % Chx.HCl najslabši antibakterijski učinek. Laserska aktivacija negativno vpliva na izpiranje z nano-emulzijo. Kot je razvidno iz vseh prejšnjih rezultatov, uporaba laserja zmanjša učinkovitost nanoemulzije Chx.HCl 0,75 %, kjer je CFU nanoChx.HCl 0,75 % 195, kar je zelo visoka vrednost, kar kaže, da so reagenti pri tej koncentraciji primerljivi z lasersko aktivacijo. Diodni laserji so fototermični, zato lahko svetloba ali toplota povzročita, da nanoemulzija izgubi svoj antibakterijski učinek. Posledica visokih koncentracij je popolno uničenje bakterij. Nano Chx.HCl 1,6 % je pokazal negativno rast bakterij v prisotnosti laserske aktivacije, kar pomeni, da laser ni vplival na antibakterijsko sposobnost nano Chx.HCl 1,6 %. Sklepamo lahko, da ima nanoemulzijski material z višjo koncentracijo boljši antibakterijski učinek.
V tem delu so bile nanoemulzije Chx.HCl pripravljene z uporabo dveh različnih olj, dveh površinsko aktivnih snovi in ​​ko-površinsko aktivne snovi, pri čemer je bila izbrana optimalna formulacija (F6) z majhno velikostjo delcev, kratkim časom emulgiranja in visoko hitrostjo raztapljanja. Poleg tega je bila (F6) preizkušena glede termodinamične/fizikalne stabilnosti. V nanoemulziji Chx.HCl pri koncentraciji 1,6 % je nanoemulzija Chx.HCl pokazala najboljšo prepustnost v dentinskih tubulih v primerjavi s tradicionalno Chx.HCl kot tekočino za izpiranje, PUI kot aktivacijska metoda pa je imela čistilno sposobnost. Poleg tega so antibakterijske študije nanoemulzije Chx.HCl pokazale popolno odstranitev bakterij. Rezultati so to potrdili. Nanoemulzijo Chx.HCl lahko štejemo za obetavno tekočino za pranje.
Zelo smo hvaležni osebju raziskovalnega laboratorija Univerze za znanost in tehnologijo Misr za njihovo veliko podporo.