Туклыклы матдәләрне алу һәм тарату бөҗәкләрнең азык эзләү һәм яшәү тарихы үзенчәлекләрен берләштерә. Төрле яшәү этапларында билгеле бер туклыклы матдәләрнең җитмәвен компенсацияләү өчен, бөҗәкләр бу туклыклы матдәләрне өстәмә туклану аша ала ала, мәсәлән, умырткалы хайваннар бүлендекләре белән туклану, бу процесс күлмәкләр дип атала. Anopheles arabiani чебеннәре туклыклы булмаган кебек күренә, шуңа күрә метаболизм һәм үрчү өчен туклыклы матдәләр кирәк. Бу тикшеренүнең максаты - An. arabiensis сыер сидекләрендә туклыклы матдәләрне алу өчен болгату яшәү тарихы үзенчәлекләрен яхшыртамы-юкмы икәнен бәяләү.
Аның куркынычсызлыгына инаныгыз. arabiensis яңа, 24 сәгатьлек, 72 сәгатьлек һәм 168 сәгатьлек сыер сидек исенә җәлеп ителде, һәм хуҗа эзләүче һәм кан белән тукланган (кан ашаганнан соң 48 сәгать) ана кошлар Y-труба олфактометрында үлчәнде, ә йөкле ана кошлар уылдык чыгару тесты өчен бәяләнде. Аннары дүрт яшь төркемендә дә сыер сидекендәге биоактив матдәләрне ачыклау өчен берләштерелгән химик һәм электрофизиологик анализ кулланылды. Биоактив матдәләрнең синтетик катнашмалары Y-трубада һәм кыр сынауларында бәяләнде. Малярия векторлары өчен потенциаль өстәмә диета буларак сыер сидекләрен һәм аның төп азотлы мочевина кушылмасын тикшерү өчен, туклану параметрлары һәм яшәү тарихы үзенчәлекләре үлчәнде. Ана чебеннәрнең өлеше һәм сеңдерелгән сыер сидекләре һәм мочевина күләме бәяләнде. Тукланганнан соң, ана кошларның исән калуы, бәйләнгән очышы һәм үрчүе бәяләнде.
Хуҗаның канын һәм туклануын эзләгез. Лаборатория һәм кыр тикшеренүләрендә гарәпләр яңа һәм карт сыер сидекләренең табигый һәм синтетик исенә тартылганнар. Йөкле ана кошлар уылдык чәчү урыннарындагы сыер сидек реакцияләренә битараф булганнар. Хуҗа эзләүче һәм кан суыручы ана кошлар сыер сидекләрен һәм мочевинаны актив рәвештә үзләштерәләр һәм бу ресурсларны очу, исән калу яки үрчү өчен физиологик халәт функциясе буларак яшәү тарихы компромиссларына карап бүләләр.
Anopheles arabinis сыер сидеген җыю һәм тарату, гомер тарихы үзенчәлекләрен яхшырту өчен. Сыер сидеген өстәмә тукландыру көндәлек яшәү дәрәҗәсен һәм вектор тыгызлыгын арттыру юлы белән вектор сыйдырышлыгына турыдан-туры тәэсир итә, һәм очу активлыгын үзгәртү юлы белән турыдан-туры тәэсир итә, шуңа күрә киләчәк модельләрдә каралырга тиеш.
Туклыклы матдәләрне алу һәм тарату бөҗәкләрнең азык эзләү һәм яшәү тарихы үзенчәлекләрен берләштерә [1,2,3]. Бөҗәкләр азыкны сайлый һәм ала, шулай ук ​​азыкның булуына һәм туклыклы матдәләргә ихтыяҗларына нигезләнеп компенсатор туклану башкара ала [1, 3]. Туклыклы матдәләрнең таралышы яшәү тарихы процессына бәйле һәм бөҗәкләрнең төрле яшәү стадияләрендә диета сыйфаты һәм күләме өчен төрле таләпләргә китерергә мөмкин [1, 2]. Аерым туклыклы матдәләрнең җитмәвен компенсацияләү өчен, бөҗәкләр бу туклыклы матдәләрне өстәмә туклану аша ала ала, мәсәлән, балчык, төрле тизәкләр һәм умырткалы хайваннарның бүлендекләре, һәм үләксәләр, бу процесс күлләвекләр дип атала [2]. Күбәләк һәм күбәләк төрләренең төрлелеге, нигездә, тасвирланса да, башка бөҗәк төркемнәрендә дә сугару урыннары очрый, һәм бу төр ресурсларга тартылу һәм алар белән туклану сәламәтлеккә һәм башка яшәү тарихы үзенчәлекләренә зур йогынты ясый ала [2, 4, 5, 6], 7]. Малярия чебеннәре Anopheles gambiae sensu lato (sl) "тукланмаган" өлкән хайван буларак күренә [8], шуңа күрә сугару аның яшәү тарихы үзенчәлекләрендә мөһим роль уйнарга мөмкин, ләкин бу тәртип әлегә кадәр игътибарсыз калдырылган. Бу мөһим транспорт чарасында туклыклы матдәләр куллануны арттыру чарасы буларак кузгатуны куллану игътибарга лаек, чөнки бу мөһим эпидемиологик нәтиҗәләргә китерергә мөмкин.
Өлкән ана Anopheles чебеннәрендә азот куллану чикләнгән, чөнки алар личинка стадиясеннән алып киленгән түбән калория запаслары һәм кан онын нәтиҗәле кулланмау аркасында [9]. Ана Ann.gambiae sl гадәттә моны өстәмә кан оннары белән компенсацияли [10, 11], шуның белән күбрәк кеше авыру йоктыру куркынычына дучар була һәм чебеннәрне ерткычлык куркынычына дучар итә. Икенче яктан, чебеннәр башка бөҗәкләр күрсәткәнчә [2], адаптацияне һәм очу маневрын яхшыртучы азотлы кушылмалар алу өчен умырткалы хайваннарның өстәмә туклануын куллана алалар. Бу яктан, An. Гамбия sl төр комплексы эчендәге бер туган төрнең көчле һәм аерым җәлеп итүчәнлеге, яңа һәм карт сыер сидеге Anopheles arabinis [12,13,14], кызыклы. Anopheles arabinis хуҗасының өстенлекләрендә оппортунистик һәм терлекләр белән бәйләнештә булуы һәм туклануы билгеле. Сыер сидеге - азотлы кушылмаларга бай ресурс, мочевина яңа сидектәге гомуми азотның 50-95% ын тәшкил итә [15, 16]. Сыер сидеге картаю белән, микроорганизмнар бу ресурсларны 24 сәгать эчендә азотлы кушылмаларның катлаулылыгын киметү өчен кулланалар [15]. Органик азот кимү белән бәйле аммиакның тиз артуы белән, алкалофиль микроорганизмнар (аларның күбесе чебеннәр өчен зарарлы кушылмалар җитештерә) үрчи [15], бу ана Ann.arabiensis 24 сәгать яки аннан да азрак яшьтә сидеккә өстенлекле рәвештә тартыла [13, 14].
Бу тикшеренүдә хуҗа һәм кан белән тукланган Ans эзләнде. Беренче гонадотропин циклы вакытында arabiensis сидек кушу юлы белән азотлы кушылмаларны, шул исәптән мочевинаны алуга бәяләнде. Аннары, ана чебеннәрнең бу потенциаль туклыклы ресурсны яшәүне яхшырту, үрчү һәм алга таба азык эзләү өчен ничек бүлеп бирүен бәяләү өчен берничә эксперимент үткәрелде. Ниһаять, яңа һәм карт сыер сидекләренең исе, аларның хуҗа һәм кан белән тукланган An өчен ышанычлы дәлилләр бирүен билгеләү өчен бәяләнде. Бу потенциаль туклыклы ресурсны эзләү барышында arabiensis күзәтелгән аермалы җәлеп итүчәнлек артындагы химик корреляцияләрне ачыклады. 24 сәгатьлек карт сидектә ачыкланган очучан органик кушылмаларның (VOC) синтетик ис катнашмалары кыр шартларында өстәмә бәяләнде, лаборатория шартларында алынган нәтиҗәләрне киңәйтте һәм сыер сидекләре исенең төрле физиологик халәтләргә йогынтысын күрсәтте. Чебеннәрне җәлеп итү. Алынган нәтиҗәләр An. arabiensisның яшәү тарихы үзенчәлекләренә йогынты ясау өчен умырткалы хайваннар сидекләрендә табылган азотлы кушылмаларны алуын һәм таратуын раслый. Бу нәтиҗәләр потенциаль эпидемиологик нәтиҗәләр һәм аларны векторларны күзәтү һәм контрольдә тоту өчен ничек кулланырга мөмкинлеге контекстында карала.
Anopheles arabicans (Dongola штаммы) 25 ± 2 °C температурада, 65 ± 5% ныграк һава торышында һәм 12:12 сәгатьлек яктылык: караңгы циклда тотылды. Личинкалар дистилляцияләнгән су белән тутырылган пластик табакларда (20 см × 18 см × 7 см) үстерелде һәм Tetramin® балык азыгы белән тукландырылды (Tetra Werke, Melle, DE). Курчаклар 30 мл стаканнарда (Nolato Hertila, Åstorp, SE) җыелды, аннары өлкән балыклар чыгу өчен Бугдорм читлекләренә күчерелде (30 см × 30 см × 30 см; MegaView Science, Тайчжун, Тайвань). Өлкән балыкларга чыгудан соң 4 көнгә кадәр (dpe) 10% сахароза эремәсе ad libitum бирелде, бу вакытта хуҗа эзләүче ана балыкларга эксперимент алдыннан турыдан-туры диета тәкъдим ителде, яки эксперимент алдыннан төнлә дистилляцияләнгән су белән ач тотылды, түбәндә тасвирланганча. Очыш трубкасы экспериментлары өчен кулланылган ана балыклар нибары 4-6 көн ач тотылды. сәгатьләр дәвамында су белән, теләсә нинди вакыт эчендә. Кан суыручы чебеннәрне киләсе биоанализлар өчен әзерләү өчен, 4 dpe ана чебенгә мембраналы тукландыру системасы (Hemotek Discovery Workshops, Аккрингтон, Бөекбритания) кулланып, дефибротик сарык каны (Håtunalab, Bro, SE) бирелде. Тулысынча тыгыз ана чебеннәр аннары аерым читлекләргә күчерелде һәм түбәндә тасвирланганча турыдан-туры тукландырылды, яки түбәндә тасвирланган экспериментлар алдыннан 3 көн дәвамында 10% сахароза, теләсә нинди вакыт эчендә бирелде. Соңгы ана чебеннәр очу торбасы биоанализлары өчен кулланылды һәм лабораториягә күчерелде, аннары эксперимент алдыннан 4-6 сәгать дәвамында дистилляцияләнгән су кулланылды.
Ашау анализлары өлкән Ан.Араб анасының сидек һәм мочевина куллануын санлаштыру өчен кулланылды. Хуҗа эзләүче һәм кан белән тукланган аналарга 48 сәгать дәвамында 1% сыекландырылган яңа һәм карт сыер сидек, төрле концентрациядәге мочевина һәм ике контроль төркем (10% сахароза һәм су) булган диета бирелде. Моннан тыш, диетага азык буягычлары (1 мг мл-1 ксилол цианид FF; CAS 2650-17-1; Sigma-Aldrich, Стокгольм, Көньяк-Көнчыгыш) өстәлде һәм 250 мкл микроцентрифуга пробиркаларында 4 × 4 матрицада бирелде (Axygen Scientific, Union City, CA, АКШ; 1А рәсем). Читенә кадәр тутырыгыз (~300 мкл). Чиркейләр арасындагы көндәшлекне һәм буяу төсенең потенциаль йогынтысын булдырмас өчен, 10 чиркейне зур Петри савытына (диаметры 12 см һәм биеклеге 6 см; Semadeni, Ostermundigen, CH; 1А рәсем) 25 ± 2 см °C һәм 65 ± температурада тулы караңгылыкта урнаштырыгыз. 5% чагыштырма дымлылык. Бу тәҗрибәләр 5-10 тапкыр кабатланды. Азык белән тәэсир иткәннән соң, чебеннәр -20 °C температурада тотылды, аннары анализлар үткәрелде.
Хуҗа һәм кан суыручы ана Anopheles arabianus тарафыннан сеңдерелгән сыер сидеген һәм мочевинаны эзләгез. Ашау сынауында (A) ана чебеннәргә яңа һәм карт сыер сидеге, төрле концентрациядәге мочевина, сахароза (10%) һәм дистилляцияләнгән су (H2O) булган диета бирелгән. Хуҗа эзләүче (B) һәм кан белән тукланган (C) ана чебеннәр сыналган башка диеталарга караганда күбрәк сахароза сеңдергәннәр. Хуҗа эзләүче ана чебеннәрнең 72 сәгатьлек сыер сидеген 168 сәгатьлек сыер сидегеннән (B) кимрәк сеңдергәннәренә игътибар итегез. Сидекнең уртача гомуми азот күләме (± стандарт тайпылыш) өстәмәдә күрсәтелгән. Хуҗа эзләүче (D, F) һәм кан суыручы (E, G) ана чебеннәр мочевинаны дозага бәйле рәвештә кабул итәләр. Төрле хәреф исемнәре белән уртача суланган күләмнәр (D, E) бер-берсеннән сизелерлек аерылып торган (Tukey'ның пост-хок анализын кулланып берьяклы ANOVA; p < 0.05). Хата сызыклары уртачаның стандарт хатасын күрсәтә (BE). Туры өзек сызык логарифмик-сызыклы регрессия сызыгын күрсәтә (F, G).
Сеңә торган ризыкны чыгару өчен, чебеннәр аерым-аерым 230 мкл дистилляцияләнгән су салынган 1,5 мл микроцентрифуга пробиркаларына урнаштырылды һәм тукымалар бер тапкыр кулланыла торган пестл һәм чыбыксыз мотор (VWR International, Lund, SE) ярдәмендә ватылды, аннары 10 минут дәвамында 10 әйләнешле центрифугаланды. Өслек катламы (200 мкл) 96 чокырлы микропластинкага (Sigma-Aldrich) күчерелде һәм сеңдерүчәнлек (λ620) спектрофотометр нигезендәге микропластинка укучысы (SPECTROStar® Nano, BMG Labtech, Ortenberg, DE) nm ярдәмендә билгеләнде. Икенче вариант буларак, чебеннәр 1 мл дистилляцияләнгән суга тартылды, шуның 900 мкл спектрофотометрик анализ өчен кюветка күчерелде (λ 620 нм; UV 1800, Shimadzu, Kista, SE). Туклану күләмен санлаштыру өчен, 0,2 мклдан 2,4кә кадәр сыекландыру юлы белән стандарт сызык әзерләнде. мкл 1 мг мл-1 ксилол цианид. Аннары, һәр чиркей ашаган ризык күләмен билгеләү өчен билгеле буяу концентрацияләренең оптик тыгызлыгы кулланылды.
Күләм мәгълүматлары берьяклы дисперсия анализы (ANOVA) ярдәмендә анализланды, аннары Тукиның пост-хок парлы чагыштырулары кулланылды (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc., Cary, NC, АКШ, 1989–2007). Сызыклы регрессия анализлары концентрациягә бәйле мочевина куллануын тасвирлады һәм хуҗа эзләүче һәм кан суыручы чебеннәр арасындагы җавапларны чагыштырды (GraphPad Prism v8.0.0 for Mac, GraphPad Software, San Diego, CA, АКШ).
Һәр яшь төркеменнән якынча 20 мкл сидек үрнәкләре Chromosorb® W/AW (10 мг 80/100 меш, Sigma Aldrich) капсулаларына бәйләнде һәм калай капсулаларга (8 мм × 5 мм) салынды. Капсулалар CHNS/O анализаторының (Flash 2000, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, АКШ) яну камерасына кертелде, яңа һәм карт сидектәге азот күләмен җитештерүче протоколы буенча билгеләү өчен. Гомуми азот (g N l-1) стандарт буларак кулланылган билгеле мочевина концентрацияләренә нигезләнеп санлаштырылды.
Хуҗа эзләүче һәм кан суыручы ана кошларның исән калуына диетаның йогынтысын бәяләү өчен, чебеннәр аерым-аерым зур Петри савытларына (диаметры 12 см һәм биеклеге 6 см; Семадени) салынды, капкачында челтәр белән капланган тишек (диаметры 3 см) вентиляция һәм азык белән тәэмин итү өчен кулланылды. 4 дпедан соң турыдан-туры диеталар бирелде һәм анда 1% сыекландырылган яңа һәм карт сыер сидеге, дүрт концентрациядәге мочевина һәм ике контроль сыер сидеге, 10% сахароза һәм су кертелде. Һәр диета 5 мл шприцка кертелгән теш тампонына (DAB Dental AB, Upplands Väsby, SE) пипетка белән куелды (Thermo Fisher Scientific, Гетеборг, SE), поршень алынды һәм Петри савытына куелды (1 нче рәсем).1А). Диетаны көн саен үзгәртегез. Лабораторияне югарыда тасвирланганча тотыгыз. Исән калган чебеннәр көненә ике тапкыр саналды, ә үлгән чебеннәр соңгы чебен үлгәнче ташланды (дәвалауга n = 40). Төрле диеталар белән тукланган чебеннәрнең исән калуы статистик яктан анализланды. Диеталар арасында яшәү вакыты бүленешен чагыштыру өчен Каплан-Мейер яшәү кәкреләре һәм логарифм-ранг тестлары (IBM SPSS Statistics 24.0.0.0).
Аттисано һ.б. [17] нигезендә ясалган махсус чиркей очу тегермәне, алгы һәм арткы панельләрсез (10 см киңлектә х 10 см озынлыкта х 10 см биеклектә) 5 мм калынлыктагы үтә күренмәле акрил панельләрдән ясалган (3 нче рәсем: өске өлеше). Газ хроматографиясе колонкасыннан (0,25 мм идентификатор; 7,5 см озынлыкта) ясалган вертикаль трубка белән әйләндергеч җыелма, очлары 9 см арадагы неодим магнитлары пары арасына эленгән бөҗәк энәсенә ябыштырылган. Шул ук материалдан (6,5 см озынлыкта) ясалган горизонталь трубка вертикаль трубканы икегә бүлеп, бәйләнгән кул һәм яктылыкны өзүче сигнал буларак кечкенә алюминий фольга кисәген йөртә торган кул барлыкка китергән.
24 сәгать ач торган ана чиркейләргә тыю алдыннан 30 минут дәвамында югарыда күрсәтелгән диета бирелде. Тулысынча тукланган ана чиркейләр аннары бозда 2-3 минут дәвамында аерым наркозланды һәм бөҗәкләргә балавыз белән беркетелде (Joel Svenssons Vaxfabrik AB, Munka Ljungby, SE), аннары горизонталь торбаларның култыкларына бәйләнде. Очу тегермәне. Бер очыштагы әйләнешләр махсус эшләнгән мәгълүмат теркәгече ярдәмендә теркәлде, аннары PC-Lab 2000™ программасы ярдәмендә сакланды һәм күрсәтелде (v4.01; Velleman, Gavere, BE). Очу тегермәне климат көйләнгән бүлмәгә урнаштырылды (12 сәгать:12 сәгать, якты: караңгы, 25 ± 2 °C, 65 ± 5% ныграк һава торышы).
Очу активлыгы схемасын күз алдына китерү өчен, 24 сәгатьлек чорда бер сәгатькә очылган гомуми ара (м) һәм бер-бер артлы очу активлыгының гомуми саны исәпләнде. Моннан тыш, аерым ана кошларның очкан уртача аралары төрле ысуллар белән чагыштырылды һәм берьяклы ANOVA һәм Tukey'ның пост-хок анализы (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.) ярдәмендә анализланды, анда уртача ара бәйле үзгәрүчән дип саналды, ә эшкәртү бәйсез фактор булып тора. Моннан тыш, раундларның уртача саны 10 минутлык интерваллар белән исәпләнә.
An.arabiensisның репродуктив эшчәнлегенә диетаның йогынтысын бәяләү өчен, кан алынганнан соң алты ана кош (4 dpe) турыдан-туры Бугдорм читлекләренә (30 см × 30 см × 30 см) күчерелде һәм аннары югарыда тасвирланганча 48 сәгать дәвамында эксперименталь диета белән тәэмин ителде. Аннары диеталар алынды һәм өченче көнне 20 мл дистилляцияләнгән су белән тутырылган уылдык чыгару савытлары (30 мл; Nolato Hertila) 48 сәгать дәвамында бирелде, һәр 24 сәгать саен алышынып торылды. Һәр диета режимын 20-50 тапкыр кабатлагыз. Һәр эксперименталь читлек өчен йомыркалар саналды һәм теркәлде. Leica камерасы (DFC) 320 R2 белән җиһазландырылган Dialux-20 микроскопы (DM1000; Ernst Leitz Wetzlar, Wetzlar, DE) ярдәмендә аерым йомыркаларның уртача зурлыгы һәм озынлыгы үзгәрүен (диета өчен n ≥ 200) бәяләү өчен йомыркаларның үрнәкләре кулланылды; Leica Microsystems Ltd., DE). Калган йомыркалар стандарт тәрбия шартларында 24 сәгать дәвамында климат контроле астында булган бүлмәдә тотылды, һәм югарыда тасвирланганча, күптән түгел чыккан беренче яшь личинкаларының үрнәкләре (бер диетада n ≥ 200) үлчәнде. Йомыркалар саны һәм йомыркаларның зурлыгы дәвалау ысуллары арасында чагыштырылды һәм берьяклы ANOVA һәм Tukey's post hoc анализы (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.) кулланылды.
Яңа (үрнәк алганнан соң 1 сәгать), 24 сәгать, 72 сәгать һәм 168 сәгатьлек сидектән алынган баш киңлеге очучан матдәләр Зебу һәм Арси токымлы сыерлардан җыелган үрнәкләрдән җыелды. Уңайлылык өчен, сидек үрнәкләре иртәнге сәгатьләрдә, сыерлар абзарда булганда җыелды. Сидек үрнәкләре 10 кешедән җыелды һәм һәр үрнәктән 100-200 мл аерым полиамид пешерү капчыкларына (Toppits Cofresco, Frischhalteprodukte GmbH and Co., Minden, DE) винилхлоридлы пластик барабаннарда капкачлы 3 л полиамидта күчерелде. Һәр сыер сидек үрнәгеннән баш киңлеге очучан матдәләр турыдан-туры (яңа) яки өлгергәннән соң бүлмә температурасында 24 сәгать, 72 сәгать һәм 168 сәгать дәвамында җыелды, ягъни һәр сидек үрнәге һәр яшь төркеме өчен чагылыш тапты.
Баш киңлегендәге очучан матдәләрне җыю өчен, ябык цикллы система ярдәмендә активлаштырылган күмер белән фильтрланган газ агымы (100 мл мин-1) полиамид капчыгы аша адсорбция колоннасына диафрагма вакуум насосы (KNF Neuberger, Фрайбург, DE) ярдәмендә 2,5 сәгать дәвамында әйләндерелде. Контроль буларак, баш киңлеген буш полиамид капчыгыннан җыю башкарылды. Адсорбция колоннасы пыяла мамык тыгыннар арасында 35 мг Porapak Q (50/80 меш; Waters Associates, Милфорд, MA, АКШ) булган тефлон торбалардан (5,5 см x 3 мм id) ясалган. Кулланыр алдыннан колонна 1 мл яңадан дистилляцияләнгән n-гексан (Merck, Darmstadt, DE) һәм 1 мл пентан (99,0% саф эреткеч GC маркасы, Sigma Aldrich) белән юылды. Адсорбцияләнгән очучан матдәләр 400 мкл пентан белән элюцияләнде. Баш киңлекләре җыелмалары берләштерелде һәм аннары -20°C температурада киләчәктә анализ өчен кулланылганчы сакланды.
Хуҗа эзләүче һәм кан ашаучы An-ның үз-үзен тотыш реакцияләре. Яңа, 24 сәгатьлек, 72 сәгатьлек һәм 168 сәгатьлек сидектән җыелган баш киңлеге очучан экстрактлары туры пыяла трубкалы олфактометр ярдәмендә Arabidopsis чебеннәреннән очучан экстрактларга анализланды [18]. Тәҗрибәләр ZT 13-15 вакытында, An-ның өй эзләү активлыгының иң югары чорында үткәрелде. Arab [19]. Пыяла трубкалы олфактометр (80 см × 9,5 см id) өстән 3 ± 1 люкс кызыл яктылык белән яктыртылды. Күмер белән фильтрланган һәм дымландырылган һава агымы (25 ± 2 °C, 65 ± 2% чагыштырма дымлылык) биоанализны 30 см с-1 тизлектә үтте. Һава берничә дат басмас корыч челтәр экраннар аша үткәрелә, ламинар агым һәм бердәм төер структурасы барлыкка китерә. Теш тампон диспенсеры (4 см × 1 см; Уз:К; DAB Dental AB), 5 см спиральдән эленгән. Олфактометрның җил ягындагы очы, стимулятор һәр 5 минут саен алышынып тора. Анализ өчен, һәр баш киңлеге экстрактыннан 10 мкл, 1:10 нисбәтендә сыекландырылган, стимул буларак кулланылды. Контроль буларак тигез күләмдә пентан кулланылды. Эксперимент башланганчы 2-3 сәгать алдан хуҗа эзләүче яки кан суыручы аерым чиркейләр аерым чыгарылу читлекләренә урнаштырылды. Чыгару читлеге олфактометрның җил ягына урнаштырылды, һәм чиркейләргә 1 минутка акклиматизацияләнергә рөхсәт ителде, аннары читлекнең күбәләк клапаны чыгарылу өчен ачылды. Дәвалауга яки контрольгә тартылу чыгарылудан соң 5 минут эчендә чыганак белән контактка кергән чиркейләр өлеше буларак анализланды. Һәр баш киңлегенең очучан экстракт һәм контроль экстракт ким дигәндә 30 тапкыр кабатланды, һәм теләсә нинди көннең йогынтысыннан качу өчен, һәр эксперимент көнендә шул ук санда дәвалау һәм контроль сынап каралды. Хуҗадан һәм кан белән тукланган кешеләрдән җаваплар эзләгез. Җавап. Гарәп һәм баш киңлеге җыелмалары номиналь логистик регрессия ярдәмендә анализланды, аннары парлы чагыштырулар ярдәмендә так нисбәтләр өчен чагыштырулар үткәрелде. (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Анның уылдык чәчү реакциясе. Яңа һәм карт сыер сидекләреннән алынган баш киңлеге экстрактлары Бугдорм читлекләрендә анализланды (30 см × 30 см × 30 см; MegaView Science). 20 мл дистилляцияләнгән су белән тутырылган пластик стаканнар (30 мл; Nolato Hertila) уылдык чәчү субстратын тәэмин итте һәм читлекнең капма-каршы почмакларына, 24 см ара белән урнаштырылды. Дәвалау стаканнарына һәр баш киңлеге экстрактыннан 10 мкл 1:10 нисбәтендә суюлтылып көйләнде. Контроль стаканны көйләү өчен тигез күләмдә пентан кулланылды. Позиция эффектларын контрольдә тоту өчен һәр эксперимент арасында дәвалау һәм контроль стаканнар алышынды. ZT 9-11 дә кан белән тукланган ун ана уылдык эксперименталь читлекләргә чыгарылды һәм 24 сәгатьтән соң стаканнардагы йомыркалар саналды. Уылдык чәчү индексын исәпләү формуласы: (дәвалау стаканында салынган йомыркалар саны - контроль стаканында салынган йомыркалар саны) / (тутырылган йомыркаларның гомуми саны). Һәр дәвалау 8 тапкыр кабатланды.
Ана An.arabiensisның газ хроматографик һәм электрон антенна үрнәген ачыклау (GC-EAD) анализы элек тасвирланганча башкарылды [20]. Кыскасы, яңа очучан экстрактлар HP-5 колонкасы белән җиһазландырылган Agilent Technologies 6890 GC (Санта-Клара, Калифорния, АКШ) ярдәмендә аерылды (30 м × 0,25 мм id, 0,25 мкм пленка калынлыгы, Agilent Technologies). һәм картаючы сидек. Күчмә фаза буларак водород кулланылды, уртача сызыклы агым тизлеге 45 см с-1 иде. Һәр үрнәк (2 мкл) 30 секунд дәвамында бүленмәгән режимда, керү температурасы 225 °C булганда кертелде. GC мич температурасы 35 °C (3 минут тоту) тан 300 °C (10 минут тоту) ка кадәр 10 °C мин-1 температурада программалаштырылды. GC агынты бүлгечендә 4 psi азот өстәлде һәм ялкын ионизациясе детекторы һәм EAD арасында Gerstel 3D/2 түбән үле күләмле кисешкәндә (Gerstel, Mülheim, DE) 1:1 нисбәтендә бүленде. EAD өчен GC агынты капилляры GC мич температурасын + 5 °C күзәтүче Gerstel ODP-2 тапшыру линиясе аша пыяла торбага (10 см × 8 мм) үткәрелде, анда ул углерод белән фильтрланган, дымландырылган һава белән кушылды (1,5 л мин−1). Антенна урнаштырылды Труба чыгу урыныннан 0,5 см ераклыкта. Һәрбер чиркейдән бер кабатлану туры килде, ә хуҗа эзләүче чиркейләр өчен һәр яшьтәге сидек үрнәкләрендә ким дигәндә өч кабатлану үткәрелде.
Яңа һәм карт сыер сидекләренең баш киңлегендәге коллекцияләрдәге биоактив кушылмаларны GC-EAD анализында антенна җавапларын алу өчен берләштерелгән GC һәм масса-спектрометр (GC-MS; 6890 GC һәм 5975 MS; Agilent Technologies) кулланып ачыклау, электрон тәэсир ионизациясе режимында 70 эВ эшли. GC HP-5MS UI белән капланган эретелгән кремний капилляр колонкасы белән җиһазландырылган (эчке диаметры 60 м × 0,25 мм, пленка калынлыгы 0,25 мкм), гелийны хәрәкәтчән фаза буларак кулланып, уртача сызыклы агым тизлеге 35 см с-1 булган. 2 мкл үрнәк GC-EAD анализындагы кебек үк инжектор көйләүләре һәм мич температурасы ярдәмендә кертелде. Кушылмалар аларның саклану вакыты (Коват индексы) һәм махсус китапханә һәм NIST14 китапханәсе (Agilent) белән чагыштырганда масса-спектрлар нигезендә билгеләнде. Аныкланган кушылмалар аутентик стандартларны кертү юлы белән расланды (Өстәмә файл 1: S2 таблицасы). Саннарны билгеләү өчен, гептил ацетат (10 нг, 99,8% химик сафлык, Aldrich) тышкы стандарт буларак кертелде.
Яңа һәм карт сидектә ачыкланган биоактив кушылмалардан торган синтетик ис катнашмасының нәтиҗәлелеген бәяләү, хуҗа эзләүче һәм кан суыручы Ans.arabiensis, югарыдагы кебек үк олфактометр һәм протокол кулланып. Синтетик катнашмалар яңа, 24 сәгатьлек, 48 сәгатьлек, 72 сәгатьлек һәм 168 сәгатьлек карт сидекнең катнаш баш киңлеге очучан экстрактларындагы кушылмаларның составын һәм нисбәтен кабатлады (5D-G рәсеме; Өстәмә файл 1: S2 таблицасы). Анализ өчен, хуҗа һәм кан суыручы чебеннәр өчен җәлеп итүчәнлекне бәяләү өчен, гомуми чыгару тизлеге якынча 140-2400 нг h-1 арасында булган тулысынча синтетик катнашманың 1:100 сыекландырылган 10 мкл кулланыгыз. Шуннан соң, сынау тулы катнашмаларда үткәрелә, анда тулы катнашманың аерым кушылмаларының субтрактив катнашмалары алып ташлана. Хуҗа һәм кан белән тукланган кешеләрдән җаваплар эзләү Ans.Arab vs синтетик һәм субтрактив катнашмалар номиналь логистик регрессия ярдәмендә анализланды, аннары парлы чагыштырулар үткәрелде. так нисбәтләр (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Сыер сидекләре малярия чебеннәре өчен яшәү урыны билгесе булып хезмәт итә алуын бәяләү өчен, югарыда тасвирланганча җыелган яңа һәм карт сыер сидекләре һәм су 3 литрлы чиләкләргә (100 мл) салынып, хуҗа җимнәре өчен тозакларга урнаштырылды. (BG-HDT версиясе; BioGents, Regensburg, DE). Көтүлектә 50 м аралы, авыл җәмгыятеннән 400 м ераклыкта (Силай, Эфиопия, 5°53´24´´N, 37°29´24´´E) һәм терлексез, даими үрчетү урыннарында һәм авылларда ун тозак урнаштырылды. Биш тозак хуҗаның булуын симуляцияләү өчен җылытылды, ә биш тозак җылытылмыйча калдырылды. Һәр эшкәртү урыны төн саен барлыгы биш төн әйләндерелә. Төрле яшьтәге сидек белән җимләнгән тозакларда тотылган чебеннәр саны бета биномиаль бүленеш белән логистик регрессия ярдәмендә чагыштырылды (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Эфиопиянең Оромия өлкәсенең Маки шәһәре янындагы малярия таралган авылда (8° 11′ 08″ N, 38° 81′ 70″ E; 6А рәсем). Тикшеренү август уртасыннан сентябрь уртасына кадәр, ел саен өй эчендә калдык сиптерү башланганчы һәм озак яңгыр сезоны башланганчы үткәрелде. Тикшеренү өчен авыл читендә урнашкан биш пар йорт (аралары 20–50 м) сайланды (6А рәсем). Йортларны сайлау өчен кулланылган критерийлар: йортка хайван кертмәскә, өйдә ашарга пешерергә (утын яки күмер белән) рөхсәт ителмәскә (кимендә сынау чорында), һәм иң күбе ике кеше яшәгән йортларда инсектицидларга каршы дарулар белән йокларга. эшкәртелгән чиркей челтәре астында. Аддис-Абеба университетының Табигать фәннәре факультетының (CNS-IRB) Институциональ тикшеренүләр этикасын карау советы (IRB/022/2016) тарафыннан, Бөтендөнья медицина ассоциациясенең Хельсинки декларациясендә билгеләнгән күрсәтмәләргә туры китереп, этик раслау бирелгән. Һәр гаилә башлыгының ризалыгы сәламәтлек саклау өлкәсендәге хезмәткәрләр ярдәме белән алынган. Бөтен процесс район һәм округ ('кебеле') дәрәҗәсендә җирле администрацияләр тарафыннан хуплана. Эксперименталь дизайн 2 × 2 латин квадрат дизайнын кулланып эшләнгән, анда синтетик катнашмалар һәм контроль беренче төндә парлы йортларга билгеләнгән һәм киләсе эксперименталь төндә йортлар арасында алыштырылган. Бу процесс ун тапкыр кабатланган. Моннан тыш, сайланган йортларда чиркей активлыгын бәяләү өчен, CDC тозаклары кыр сынауларының башында, уртасында һәм ахырында көннең бер үк вакытында биш төн рәттән эшләргә көйләнгән.
Алты биоактив кушылма булган синтетик катнашма гептанда (97,0% эреткеч GC классы, Sigma Aldrich) эретелде һәм мамык фитиль диспенсеры ярдәмендә 140 нг h-1 концентрациясендә чыгарылды [20]. Фитиль диспенсеры барлык кушылмаларның да 12 сәгатьлек эксперимент дәвамында даими пропорцияләрдә чыгарылуына мөмкинлек бирде. Контроль буларак гептан кулланылды. Флакон Авыруларны контрольдә тоту һәм профилактикалау үзәкләренең (CDC) яктылык тозагының керү ноктасы янында эленгән (John W. Hock Company, Gainesville, FL, АКШ; 6A рәсем). Тозаклар җирдән 0,8-1 м биеклектә, карават аягы янында эленгән, һәм волонтер эшкәртелмәгән чиркей челтәре астында йоклаган һәм 18:00 һәм 06:30 арасында операция ясаган. Җенесе һәм физиологик хәле буенча тотылган чиркейләр (тукланмаган, тукланган, ярым йөкле һәм йөкле [21]) соңыннан полимераз чылбыр реакциясе (ПЦР) анализы ярдәмендә тикшерелде, морфологик яктан A. gambiae sl буларак билгеләнгән төрне ачыклау өчен. Комплекс әгъзалары [23]. Кыр тикшеренүендә парлы йортларның тозак тозаклары номиналь логистик туры килү моделен кулланып анализланды, анда җәлеп итү бәйле үзгәрүчән, ә эшкәртү (синтетик катнашма vs контроль) билгеләнгән эффект булды (JMP® 14.0.0. SAS Institute Inc.). Монда без ихтималлык коэффициенты тестыннан алынган χ2 һәм p-кыйммәтләрен күрсәтәбез.
Куркынычсызлыгын бәяләгез. arabiensis сидек, аның төп азот чыганагы, мочевинаны, (dpe) хуҗа эзләүче һәм кан ашаучы ана кошларны тукландыру сынауларыннан соң 4 көн дәвамында турыдан-туры тукландыру юлы белән ала алган (1А рәсем). Хуҗа эзләүче һәм кан суыручы ана кошлар башка диета яки су белән чагыштырганда сахарозаны күпкә күбрәк сеңдергәннәр (F(5,426) = 20.15, p < 0.0001 һәм F(5,299) = 56.00, p < 0.0001, тиешенчә; 1B,C рәсемнәре). Моннан тыш, хуҗа эзләүче ана кошлар 72 сәгать эчендә сидек белән азрак ашаганнар, 168 сәгатьтәге сидек белән чагыштырганда (1B рәсем). Мочевиналы диета тәкъдим ителгәндә, хуҗа эзләүче ана кошлар 2.69 мМ да башка барлык концентрацияләр һәм су белән чагыштырганда мочевинаны күпкә күбрәк сеңдергәннәр, шул ук вакытта 10% сахарозадан аерылгысыз (F(10,813) = 15.72, p < 0.0001; 1D рәсем). Бу кан белән тукланган хатын-кызларның реакциясеннән аерылып тора, алар гадәттә судан күпкә күбрәк мочевиналы диеталарны үзләштерәләр, гәрчә 10% сахарозадан күпкә кимрәк булса да (F(10,557) = 78.35, p < 0.0001; 1 нче рәсем).1E). Моннан тыш, ике физиологик халәтне чагыштырганда, флеботомияләнгән хатын-кызлар иң түбән концентрацияләрдә хуҗа эзләүче хатын-кызларга караганда күбрәк мочевина үзләштерәләр, һәм бу хатын-кызлар югары концентрацияләрдә мочевинаның охшаш күләмен үзләштерәләр (F(1,953) = 78.82, p < 0.0001; 1F рәсем, G). Мочевиналы диетадан кабул итү оптималь күрсәткечләргә ия булса да (1D, E рәсем), ике физиологик халәттәге хатын-кызлар мочевина концентрацияләренең бөтен диапазонында үзләштерелгән мочевина күләмен логарифмик рәвештә модуляцияли алганнар (1F, G рәсем). ).Шулай ук, чебеннәр азот сеңдерүне сидек сеңдерү күләмен көйләү юлы белән контрольдә тоталар кебек, чөнки сидектәге азот күләме сеңдерелгән күләмдә чагыла (1B, C һәм B рәсемнәре).
Сидек һәм мочевинаның хуҗа эзләүче һәм кан суыручы чиркейләрнең исән калуына йогынтысын бәяләү өчен, ана чиркейләргә дүрт яшьтәге сидек (яңа, утырганнан соң 24 сәгать, 72 сәгать һәм 168 сәгать) һәм төрле мочевина концентрацияләре, шулай ук ​​дистилляцияләнгән су һәм контроль буларак 10% сахароза бирелгән (2А рәсем). Бу исән калу анализы күрсәткәнчә, диета хуҗа эзләүче ана чиркейләрнең (сидек: χ2 = 108.5, df = 5, p < 0.0001; мочевина: χ2 = 122.8, df = 5, p < 0.0001; 2B, C рәсемнәре) һәм кан белән тукланучы ана чиркейләрнең (сидек: χ2 = 93.0, df = 5, p < 0.0001; мочевина: χ2 = 137.9, df = 5, p < 0.0001; 2D, E рәсемнәре) гомуми исән калуга зур йогынты ясый. Экспериментларда сидек, мочевина һәм су белән тукланган ана хайваннарның яшәү күрсәткечләре сахароза белән тукланган ана хайваннарга караганда күпкә түбәнрәк булган (2B-E рәсем). Яңа һәм искергән сидек белән тукланган хуҗа эзләүче ана хайваннарның яшәү күрсәткечләре төрлечә булган, 72 сәгатьлек искергән сидек белән тукланганнарның яшәү ихтималы иң түбән булган (2B рәсем). Моннан тыш, 135 мМ мочевина белән тукланган хуҗа эзләүче ана хайваннар су контроленә караганда озаграк яшәгән (p < 0,04) (2C рәсем). Су белән чагыштырганда, яңа сидек һәм 24 сәгатьлек сидек белән тукланган хатын-кызлар озаграк яшәгән (p = 0,001 һәм p = 0,012, тиешенчә; 2D рәсем), ә 72 сәгатьлек сидек белән тукланган хатын-кызлар кыска яңа сидек һәм 24 сәгатьлек иске сидек белән тукланган ана хайваннарга караганда озаграк яшәгән (p < 0,0001 һәм p = 0,013, тиешенчә; 2D рәсем). 135 мМ мочевина белән тукланганда, кан белән тукланган ана хайваннар мочевина һәм суның башка барлык концентрацияләренә караганда озаграк яшәгән (p <0,013; 2E рәсем).
Сыер сидеге һәм мочевина белән тукланучы хуҗа һәм кан суыручы ана чебеннәрнең исән калуы. Биоанализда (A) ана чебеннәргә яңа һәм карт сыер сидеге, төрле концентрациядәге мочевина, сахароза (10%) һәм дистилляцияләнгән су (H2O) булган ризык бирелде. Хуҗа эзләүче (B, C) һәм кан суыручы (D, E) чебеннәрнең исән калуы 12 сәгать саен теркәлде, сидек (B, D) һәм мочевина (C, E) белән тукланган барлык ана чебеннәр, һәм контроль, сахароза һәм су белән тукланганнар үлгәнче.
24 сәгатьлек чорда очу фабрикасы сынауында билгеләнгән гомуми ара һәм әйләнешләр саны хуҗа эзләүче һәм кан суыручы чебеннәр арасында аерылып торды, алар гомумән алганда азрак очу активлыгы күрсәттеләр (3 нче рәсем). Яңа һәм карт сидек яки сахароза һәм су белән тәэмин итүче хуҗа эзләүче чебеннәр төрле очу үрнәкләрен күрсәттеләр (3 нче рәсем), яңа сидек белән тукланучы ана чебеннәр таң атуга активрак булдылар, ә 24 һәм 168 сәгатьлек карт сидек белән тукланган чебеннәр төрле очу үрнәкләрен күрсәттеләр һәм күбесенчә көндезге эшчәнлек белән шөгыльләнделәр. Сахароза яки 72 сәгатьлек сидек белән тәэмин итүче ана чебеннәр 24 сәгатьлек чор дәвамында активлык күрсәттеләр, ә су белән тәэмин итүче ана чебеннәр чор уртасында активрак булдылар. Сахароза белән тукланган чебеннәр төнлә һәм иртән иң югары активлык дәрәҗәсен күрсәттеләр, ә 72 сәгатьлек карт сидек ашаучылар 24 сәгать эчендә активлыкның тотрыклы кимүен күзәттеләр (3 нче рәсем).
Аучы эзләүче кан суыручы ана чебеннәрнең очу күрсәткечләре, сыер сидеге һәм мочевина белән туклана. Очыш фабрикасында сынау барышында яңа һәм карт сыер сидеге, төрле концентрациядәге мочевина, сахароза (10%) һәм дистилляцияләнгән су (H2O) белән тукланган ана чебеннәр горизонталь, ирекле әйләнүче кулларга бәйләнгән (өстә). Хуҗа эзләүче (сулда) һәм кан суыручы (уңда) ана чебеннәр өчен 24 сәгатьлек чорда һәр диета өчен гомуми ара һәм сәгатенә очышлар саны теркәлгән (караңгы: соры; ачык: ак). Уртача ара һәм уртача очышлар саны циркадиан активлык графигының уң ягында күрсәтелгән. Хата сызыклары уртачаның стандарт хатасын күрсәтә. Статистик анализ текстка карагыз.
Гомумән алганда, хуҗа эзләүче ана кошларның гомуми очыш активлыгы 24 сәгатьлек чорда очыш ераклыгына охшаш схема буенча үтте. Уртача очыш ераклыгына ашалган ризык сизелерлек йогынты ясады (F(5, 138) = 28.27, p < 0.0001), һәм 72 сәгать сидек ашаган хуҗа эзләүче ана кошлар башка барлык диеталар белән чагыштырганда күпкә озаграк очтылар (p < 0.0001), һәм сахароза белән тукланган чебеннәр яңа (p = 0.022) һәм 24 сәгатьлек сидек (p = 0.022) белән тукланган чебеннәргә караганда озаграк очтылар. Сидек белән тукланган очыш активлыгы схемасыннан аермалы буларак, мочевина белән тукланган хуҗа эзләүче ана кошлар 24 сәгатьлек чорда даими очыш активлыгы күрсәттеләр, караңгы фазаның икенче яртысында иң югары ноктасына җиттеләр (3 нче рәсем). Активлык схемалары охшаш булса да, мочевина белән тукланган хуҗа эзләүче ана кошлар сеңдерелгән концентрациягә карап уртача очыш ераклыгын сизелерлек арттырдылар (F(5, 138) = 1310.91, p < 0,0001). Мочевинаның теләсә нинди концентрациясе белән тукланган хуҗа эзләүче ана кошлар, су яки сахароза белән тукланган ана кошларга караганда озаграк очканнар (p < 0,03).
Кан суыручы чебеннәрнең гомуми очыш активлыгы барлык диеталарда да 24 сәгать дәвамында тотрыклы һәм сакланган, караңгы чорның икенче яртысында су белән тукланган аналарда, шулай ук ​​яңа һәм 24 сәгатьлек яшендә тукланган аналарда сидек активлыгы арткан (3 нче рәсем). Сидек диетасы кан белән тукланган аналарда уртача очыш ераклыгына сизелерлек йогынты ясаса да (F(5, 138) = 4.83, p = 0.0004), мочевина диетасы башка сидек һәм контроль диета белән (яңа, p = 0.0091; 72 сәгать, p = 0.0022; 168 сәгать, p = 0.001; сахароза, p = 0.0017; dH2O, p = 0.036) тәэсир итмәгән.
Сидек һәм мочевина белән туклануның репродуктив параметрларга йогынтысы йомырка салу биоанализларында бәяләнде (4А рәсем) һәм һәр ана кошның салган йомыркалары санына, йомырка зурлыгына һәм яңа чыккан беренче яшь личинкаларына карап тикшерелде. Йомыркалар саны. Сидек белән тукланган гарәп ана кошлары диета буенча төрлечә иде (F(5,222) = 4.38, p = 0.0008; 4B рәсем). 24 сәгатьлек сидек, кан белән тукланган ана кошлар башка сидек белән тукланган ана кошларга караганда күпкә күбрәк йомырка салдылар һәм сахароза белән тукланган ана кошларга охшаш иде (4B рәсем). Шулай ук, сидек белән тукланган ана кошлар салган йомыркаларның зурлыгы диета буенча төрлечә иде (F(5, 209) = 12.85, p < 0.0001), 24 сәгатьлек сидек һәм сахароза белән тукланган ана кошлар су белән тукланган ана кошларга караганда күпкә зуррак йомырка салдылар, ә 168 сәгатьлек сидек белән тукланган ана кошларның йомыркалары күпкә кечерәк иде (4C рәсем). Моннан тыш, сидек белән туклану личинка зурлыгына сизелерлек йогынты ясады (F(5, 187) = 7.86, p < 0.0001), 24 һәм 72 сәгатьлек сидек белән тукланган ана кошлар салган йомыркалардан чыккан личинкалар, йомыркалардан салынган личинкаларга караганда, күпкә зуррак. Су белән тукланган һәм 168 сәгатьлек сидек белән тукланган ана кошлар (4D рәсем).
Сыер сидеге һәм мочевина белән тукланган ана Anopheles arabinis токымлы чиркейләрнең репродуктив күрсәткечләре. Кан белән тукланган ана чиркейләргә биоанализларга салу һәм йомырка салу өчен субстратлар алу алдыннан 48 сәгать дәвамында яңа һәм карт сыер сидеге, төрле концентрациядәге мочевина, сахароза (10%) һәм дистилляцияләнгән су (H2O) белән туклыклы ризыклар бирелде (A). Йомырка саны (B, E), йомырка зурлыгы (C, F) һәм личинка зурлыгы (D, G) бирелгән ризыкка сизелерлек тәэсир итте (сыер сидеге: BD; мочевина: EG). Төрле хәреф исемнәре белән үлчәнгән һәр параметр өчен уртача күрсәткечләр бер-берсеннән сизелерлек аерылып торды (Tukey's post hoc анализын кулланып берьяклы ANOVA; p < 0.05). Хата сызыклары уртача күрсәткечнең стандарт хатасын күрсәтә.
Сидекнең төп азотлы компоненты буларак, мочевина, кан белән тукланган аналарга азык буларак бирелгәндә, барлык тикшеренүләрдә дә репродуктив параметрларга сизелерлек йогынты ясаган. Кан белән тукланганнан соң мочевина белән тукланган аналарның салган йомыркалары саны, мочевина концентрациясенә карап (F(11, 360) = 4.69; p < 0.0001), 134 мкМ һәм 1.34 мМ арасындагы мочевина концентрацияләре белән тукланган аналарның йомыркалары күбрәк салган (4E рәсем). 134 мкМ яки аннан да югарырак мочевина концентрацияләре белән тукланган аналарның йомыркалары су белән тукланган аналарга караганда зуррак булган (F(10, 4245) = 36.7; p < 0.0001; 4F рәсем) һәм личинка зурлыгы, гәрчә аналарның мочевина концентрацияләре охшаш булса да (F(10, 3305) = 37.9; p < 0.0001), төрлерәк булган (4G рәсем).
Хуҗа эзләүче сыер сидек баш киңлеге очучан экстрактларына гомуми җәлеп итүчәнлек. Пыяла трубкалы олфактометрда бәяләнә торган арабиенсис (5А рәсем) сидек яшенә сизелерлек йогынты ясаган (χ2 = 15.9, df = 4, p = 0.0032; 5B рәсем). Пост-хок анализы күрсәткәнчә, 24 сәгать эчендә искергән сидек исе башка барлык дәвалау ысуллары белән чагыштырганда (72 сәгать: p = 0.0060, 168 сәгать: p = 0.012, пентан: p = 0.00070), яңа сидек исеннән кала (p = 0.13; 5B рәсем). Кан суыручы чебеннәрнең сидек исенә гомуми җәлеп итүчәнлеге сизелерлек аерылмаса да (χ2 = 8.78, df = 4, p = 0.067; 5C рәсем), бу ана чебеннәрнең 72 сәгатьлек карт сидек белән чагыштырганда баш киңлеге очучан экстрактларына сизелерлек җәлеп итүчәнрәк булуы ачыкланган. контроль элементлар (p = 0,0066; 5C рәсем).
Хуҗа һәм кан белән тукланган Anopheles arabianus эзләүдә табигый һәм синтетик сыер сидек исләренә үз-үзеңне тоту реакцияләре. Пыяла трубкалы олфактометр схемасы (A). Яңа һәм карт сыер сидекләреннән алынган очучан экстрактларның хуҗа (B) һәм кан суыручы (C) чебеннәргә тартылуы. Лорд Анның тентакл реакциясен табыгыз. Яңа (D), 24 сәгатьлек (E), 72 сәгатьлек (F) һәм 168 сәгатьлек (G) карт сыер сидекләреннән аерылган баш киңлеге экстрактлары күрсәтелгән. Электрон антенна детекторы (EAD) эзләре газ хроматографыннан алынган һәм ялкын ионизациясе детекторы (FID) белән ачыкланган баш киңлегендәге биоактив кушылмаларга җавап буларак көчәнеш үзгәрешләрен күрсәтә. Шкала сызыгы җавап амплитудасын (mV) саклау вакытына (с) карата күрсәтә. Биологик актив кушылмаларның үзлекләре һәм чыгарылу тизлекләре (µg h-1) күрсәтелгән. Бер йолдызча (*) даими түбән амплитудалы җавапны күрсәтә. Ике йолдызча (**) җитештерелмәгән җавапларны күрсәтә. Табыгыз Хуҗа (H) һәм кан суыручы (I) An.arabiensis яңа һәм карт сыер сидек исләренең синтетик катнашмаларына төрлечә карыйлар. Төрле хәреф исемнәренә тартылган чебеннәрнең уртача нисбәте бер-берсеннән шактый аерылып торган (Tukey'ның post hoc анализын кулланып берьяклы ANOVA; p < 0,05). Хата сызыклары шкаланың стандарт хатасын күрсәтә.
Ана Ann.arabiensis, кан ашаганнан соң 72 һәм 120 сәгать узгач, уылдык чәчү вакытында, пентан контроль төркеме белән чагыштырганда, яңа һәм карт сыер сидекләреннән алынган очучан экстрактларга өстенлек бирелмәгән (χ2 = 3.07, p > 0.05; Өстәмә файл 1: S1 рәсем).
Ана Ann.arabiensis өчен GC-EAD һәм GC-MS анализлары сигез, алты, өч һәм өч биоактив кушылма ачыклады (5D-G рәсем). Электрофизиологик җаваплар китереп чыгарган кушылмалар санында аермалар күзәтелсә дә, бу кушылмаларның күбесе яңа һәм карт сидектән җыелган һәр баш киңлегендәге очучан экстрактта булган. Шуңа күрә һәр экстракт өчен, ана антенналарыннан физиологик җавап бирүче кушылмалар гына алга таба анализларга кертелгән.
Баш киңлеге коллекциясендәге биоактив кушылмаларның гомуми очучан бүленеп чыгу тизлеге яңа сидектәге 29 мкг h-1 дән 168 сәгатьлек сакланган сидектә 242 мкг h-1 гә кадәр арткан, бу нигездә p-крезол һәм м-формальдегид, фенол артуы һәм фенол аркасында булган. Киресенчә, 2-циклогексен-1-он һәм деканал кебек башка кушылмаларның бүленеп чыгу тизлеге сидек яше арткан саен кимегән, бу хроматограммада сигнал интенсивлыгының (күплек) кимүе белән бәйле (5D рәсем) -G сул панель) һәм бу кушылмаларга физиологик җаваплар белән бәйле (5D рәсем - G уң панель).
Гомумән алганда, синтетик катнашма яңа һәм карт сидек башлары киңлекләренең очучан экстрактларында табылган биоактив кушылмаларның охшаш табигый нисбәтенә ия иде (5D–G рәсем) һәм хуҗа эзләгәндә (χ2 = 8.15, df = 4, p = 0.083; 5H рәсем) яки кан суыручы чебеннәрдә (χ2 = 4.91, df = 4, p = 0.30; 5I рәсем) сизелерлек җәлеп итүчәнлек тудырмады. Ләкин, дәвалау арасындагы пост-хок парлы чагыштырулар хуҗа эзләүче чебеннәрнең пентан контроль төркеменә караганда 24 сәгатьлек карт сидекнең синтетик катнашмасына сизелерлек җәлеп итүчән булуын күрсәтте (p = 0.0086; 5H рәсем).
24 сәгатьлек сидекнең синтетик катнашмаларында аерым компонентларның ролен бәяләү өчен, Y-төпчә анализында алты субтрактив катнашма тулы катнашмалар белән чагыштырганда бәяләнде, анда аерым кушылмалар алынды. Хуҗа эзләүче чебеннәр өчен, тулы катнашмадан аерым кушылмаларны алу үз-үзен тотыш реакцияләренә сизелерлек йогынты ясады (χ2 = 19.63, df = 6, p = 0.0032; Өстәмә файл 1: S2A рәсем), барлык субтрактив катнашмалар да Кечкенәдән тулысынча кушылганга караганда җәлеп итүчәнрәк иде. Киресенчә, тулысынча синтетик катнашмадан аерым кушылмаларны алу кан суыручы чебеннәрнең үз-үзен тотыш реакцияләренә тәэсир итмәде (χ2 = 11.38, df = 6, p = 0.077), деканалдан кала, бу тулы катнашма белән чагыштырганда түбәнрәк дәрәҗәләргә китерде (p = 0.022; Өстәмә файл 1: S2B рәсем).
Эфиопиядәге малярия таралган авылда, кыр шартларында чебеннәрне җәлеп итүдә 24 сәгатьлек сыер сидекләренең синтетик катнашмасының нәтиҗәлелеге ун төн дәвамында бәяләнде (6А рәсем). Барлыгы 4861 чебен тотылды һәм ачыкланды, шуларның 45,7% Anthropus.gambiae sl, 18,9% Anopheles pharoensis һәм 35,4% Culex spp. (Өстәмә файл 1: S1 таблицасы). Anopheles arabinis - ПЦР анализы ярдәмендә ачыкланган An.Gambian төр комплексының бердәнбер әгъзасы. Уртача алганда, төнлә 320 чебен тотылды, бу вакыт эчендә синтетик катнаш җимнәр белән вакытлы тозаклар катнашмасыз парлы тозакларга караганда күбрәк чебен тотты (χ2(0, 3196) = 170,0, p < 0,0001). Сынау башында, уртасында һәм ахырында биш контроль төннең һәрберсендә җимсез тозаклар куелды. Охшаш саннар Һәр капкын парында берничә чиркей тотылган, бу йортлар арасында бернинди аерма булмавын күрсәтә (χ2(0, 1665) = 9 × 10-13, p > 0.05) һәм тикшеренү чорында популяция кимүе күзәтелмәгән. Контроль капкыннар белән чагыштырганда, синтетик катнашма булган капкыннарда тотылган чиркейләр саны сизелерлек арткан: хуҗа эзләү (χ2(0, 2107) = 138.7, p < 0.0001), күптән түгел кан ашау (χ2(0, 650) = 32.2, p < 0.0001) һәм йөклелек (χ2(0, 228) = 6.27, p = 0.0123; Өстәмә файл 1: S1 таблицасы). Бу шулай ук ​​тотылган чиркейләрнең гомуми санында да чагыла: хуҗа эзләү > кан суыручы > йөкле > ярым йөкле > ата чиркей.
24 сәгатьлек синтетик сыер сидек исе катнашмасының нәтиҗәлелеген кырда бәяләү. Кыр сынаулары Эфиопиянең көньяк-үзәк өлешендә (карта), Маки шәһәре янында (кертмә), Авыруларны контрольдә тоту үзәкләренең (CDC) яктырткыч тозагы (уңда) парлы йортларда, латин квадрат дизайны белән (һавадан төшерелгән рәсем) (А) үткәрелде. Синтетик ис белән җимләнгән CDC фото тозаклары ана Anopheles arabesques (B) чиркейләрен җәлеп итә һәм тота, ләкин Anopheles farroes (C) чиркейләрен түгел, ә башка ысул белән, физиологик халәткә бәйле эффект белән. Моннан тыш, бу тозаклар хуҗа Culex чиркейләренең санын сизелерлек арттырган.(D) Контроль белән чагыштырганда. Сул яктагы баганаларда исле җим (яшел) һәм контроль (ачык) тозакларда тотылган чиркейләрнең уртача сайлау индексы күрсәтелгән (N = 10), ә уң яктагы баганаларда контроль тозаклар парларында уртача сайлау индексы күрсәтелгән (ачык; N = 5). Йолдызчыклар статистик әһәмиятлелек дәрәҗәләрен күрсәтә (*p = 0.01 һәм ***p < 0.0001)
Өч төр синтетик катнашмалар булган тозакларда төрлечә тотылган. Хуҗа эзләгәндә (χ2(1, 1345) = 71.7, p < 0.0001), кан белән туклану (χ2(1, 517) = 16.7, p < 0.0001) һәм йөклелек (χ2(1, 180) = 6.11, p = 0.0134) синтетик катнашманы чыгарып, тозакка .arabiensis эләккән (6B рәсем), ә An күләме аерылып тормаган. Төрле физиологик халәтләрдәге Pharoensis табылган (6C рәсем). Culex өчен, контроль тозаклар белән чагыштырганда, синтетик катнашма белән җимләнгән тозакларда хуҗа эзләүче чиркейләр санының сизелерлек артуы гына ачыкланган (χ2(1,1319) = 12.6, p = 0.0004; 6D рәсем).
Эфиопиядәге үрчү урыннары һәм авыл җәмгыятьләре арасында потенциаль хуҗалардан тыш урнашкан хуҗа җим тозаклары малярия чебеннәренең сыер сидек исен хуҗа яшәү урыны билгесе итеп куллану-кулланмавын бәяләү өчен кулланылды. Хуҗа билгеләре булмаганда, эсселектә һәм сыер сидек исе булганда яки булмаганда, бернинди чебен дә тотылмады (Өстәмә файл 1: S3 рәсем). Ләкин, югары температура һәм сыер сидек исе булганда, ана малярия чебеннәре җәлеп ителде һәм тотылды, сидек яшенә бәйсез рәвештә, аз санда булса да (χ2(5, 25) = 2.29, p = 0.13; Өстәмә файл 1: S3 рәсем). Киресенчә, су контроле чебеннәрен югары температурада тотмадылар (Өстәмә файл 1: S3 рәсем).
Малярия чебеннәре, башка бөҗәкләр кебек үк, тормыш тарихы үзенчәлекләрен яхшырту өчен, сыер сидеге (ягъни күллекләр) белән компенсатор туклану аша азотлы кушылмаларны ала һәм тарата [2, 4, 24, 25, 26]. Сыер сидеге - малярия векторлары өчен ял итү урыннары, мәсәлән, сыер абзарлары һәм авыл йортлары һәм уылдык чәчү урыннары янындагы биек үсемлекләр белән тыгыз бәйләнгән җиңел табыла торган яңартыла торган ресурс. Ана чебеннәр бу ресурсны ис буенча табалар һәм сидектәге азотлы кушылмаларны, шул исәптән сидектәге төп азотлы компонент булган мочевинаны үзләштерүне көйли алалар [15, 16]. Ана чебеннең физиологик торышына карап, сидектәге туклыклы матдәләр хуҗа эзләүче ана чебеннәрнең очу активлыгын һәм исән калуын, шулай ук ​​беренче гонадотроп цикл вакытында кан белән тукланган кешеләрнең исән калуын һәм репродуктив үзенчәлекләрен яхшырту өчен бүленеп бирелә. Шуңа күрә сидек катнашмасы туклыклы булмаган олы яшьтәгеләр кебек ябык малярия векторлары өчен мөһим туклыклы роль уйный [8], чөнки ул ана чебеннәргә түбән куркынычлы туклану белән шөгыльләнеп, мөһим азотлы кушылмаларны үзләштерү мөмкинлеген бирә. Бу ачыш эпидемиологик нәтиҗәләргә китерә, чөнки ана чебеннәр саны арта. аларның гомер озынлыгы, активлыгы һәм репродуктив күләме, болар барысы да вектор сыйдырышлыгына тәэсир итә. Моннан тыш, бу тәртип киләчәктә векторлар белән идарә итү программаларының максаты булырга мөмкин.