Inweta na nkesa ihe oriri na-ejikọta ihe ndị na-eri nri na àgwà akụkọ ihe mere eme nke ndụ. Iji kwụọ ụgwọ maka adịghị ike na nri ụfọdụ n'oge ndụ dị iche iche, ụmụ ahụhụ nwere ike inweta ihe oriri ndị a site na nri mgbakwunye, dịka ọmụmaatụ, site na iri nri na ihe ndị na-esi n'akpụkpọ anụ n'ime usoro a maara dị ka ọdọ mmiri. Anụmanụ Anopheles arabiani yiri ka ọ naghị eri nri nke ọma, ya mere, ọ chọrọ ihe oriri maka metabolism na ịmụpụta. Ebumnuche nke ọmụmụ ihe a bụ inyocha ma An. arabiensis na-agbagharị na mmamịrị ehi maka inweta ihe oriri na-eme ka njirimara akụkọ ihe mere eme nke ndụ ka mma.
Hụ na ọ dị mma. arabiensis dọtara isi nke mmamịrị ehi ọhụrụ, awa 24, awa 72, na awa 168, yana ụmụ nwanyị ndị na-achọ onye ọbịa na ndị na-enye ọbara (awa 48 mgbe ha risịrị nri ọbara), a tụkwara ụmụ nwanyị dị ime maka ule ịmụ nwa. E jiri nyocha kemịkalụ na electrophysiological jikọtara ọnụ chọpụta ihe ndị na-arụ ọrụ na mmamịrị ehi na klas afọ anọ niile. E lere ngwakọta nke ihe ndị na-arụ ọrụ na kemịkalụ anya na nnwale Y-tube na ubi. Iji nyochaa mmamịrị ehi na urea nwere nitrogen dị ka nri mgbakwunye maka ndị na-efe efe ịba, a tụrụ paramita nri na njirimara akụkọ ihe mere eme ndụ. A tụlere oke nke anwụnta nwanyị na ọnụọgụ mmamịrị ehi na urea a na-amịkọrọ. Mgbe e nyesịrị ha nri, a lere ụmụ nwanyị anya maka ndụ, ịgba ọsọ, na ịmụ nwa.
Chọọ ọbara na nri onye ọbịa. N'ọmụmụ ihe gbasara ụlọ nyocha na ubi, ndị Arab na-enwe mmasị na isi eke na nke e ji emepụta mmamịrị ehi ọhụrụ na nke ochie. Ụmụ nwanyị dị ime enweghị mmasị na mmeghachi omume mmamịrị ehi n'ebe a na-amụ nwa. Ụmụ nwanyị na-achọ onye ọbịa na ndị na-aṅụ ọbara na-amịkọrọ mmamịrị ehi na urea ma na-ekenye akụrụngwa ndị a dịka mgbanwe akụkọ ihe mere eme nke ndụ si dị dịka ọrụ nke ọnọdụ ahụike maka ịgba ọsọ, ndụ, ma ọ bụ ịmụ nwa.
Inweta na nkesa nke mmamịrị ehi Anopheles arabinis maka mma njirimara akụkọ ihe mere eme ndụ. Nri mgbakwunye nke mmamịrị ehi na-emetụta ikike vektọ ozugbo site na ịbawanye ndụ kwa ụbọchị na njupụta vektọ, yana n'ụzọ na-apụtaghị ìhè site na ịgbanwe ọrụ ụgbọ elu ya mere ekwesịrị ịtụle ya na ụdị ndị ga-eme n'ọdịnihu.
Inweta na nkesa ihe oriri na-ejikọta ihe ndị na-eri nri na njirimara akụkọ ihe mere eme nke ndụ [1,2,3]. Ụmụ ahụhụ nwere ike ịhọrọ ma nweta nri ma nye ha nri dabere na nri dị na ihe ndị a chọrọ [1, 3]. Nkesa nke ihe oriri na-adabere na usoro ndụ na akụkọ ihe mere eme ma nwee ike ibute ihe dị iche iche achọrọ maka ịdị mma na ọnụọgụ nri na ọkwa ndụ dị iche iche nke ụmụ ahụhụ [1, 2]. Iji kwụọ ụgwọ maka adịghị ike na ihe oriri ụfọdụ, ụmụ ahụhụ nwere ike nweta ihe oriri ndị a site na nri mgbakwunye, dị ka n'apịtị, nsị dị iche iche na mmiri nke vertebrates, na anụ ọhịa, usoro a maara dị ka ọdọ mmiri [2]. Ọ bụ ezie na a na-akọwakarị ụdị urukurubụba na nla, oghere ịgbara mmiri na-emekwa n'usoro ụmụ ahụhụ ndị ọzọ, mmasị na iri nri na ụdị ihe ndị a nwere ike inwe mmetụta dị ukwuu na ahụike na àgwà ndụ ndị ọzọ [2, 4, 5, 6], 7]. Anwụnta ịba Anopheles gambiae sensu lato (sl) na-apụta dị ka onye toro eto 'na-anaghị eri nri' [8], yabụ ịgbara mmiri nwere ike ịrụ ọrụ dị mkpa na njirimara akụkọ ihe mere eme ndụ ya, mana omume a nwere ruo ugbu a, a leghaara ya anya. Iji ihe na-akpali akpali eme ihe dị ka ụzọ isi mee ka nri dịkwuo mma n'ụgbọala dị mkpa a kwesịrị nlebara anya n'ihi na nke a nwere ike inwe mmetụta dị mkpa na ọrịa na-efe efe.
Iri Nitrogen n'ime anwụnta Anopheles nke ndị toro eto nwere oke n'ihi obere kalori a na-enweta site na ọkwa nwamba na enweghị ike iji nri ọbara eme ihe nke ọma [9]. Nwanyị Ann.gambiae sl na-akwụghachi ụgwọ maka nke a site na ịgbakwunye nri ọbara mgbakwunye [10, 11], si otú a na-etinye ọtụtụ mmadụ n'ihe ize ndụ nke ibute ọrịa ahụ ma na-etinye anwụnta n'ihe ize ndụ nke igbu anụ. N'aka nke ọzọ, anwụnta nwere ike iji nri mgbakwunye nke ihe ndị dị n'ime vertebrate iji nweta ihe ndị dị na nitrogen nke na-eme ka mgbanwe na ike ịnyagharị dịkwuo mma, dịka ụmụ ahụhụ ndị ọzọ gosiri [2]. N'akụkụ a, mmasị siri ike na nke pụrụ iche nke otu n'ime ụdị nwanne dị n'ime An. Usoro ụdị sl nke Gambian, Anopheles arabinis, mmamịrị ehi ọhụrụ na nke meworo agadi [12,13,14], na-adọrọ mmasị. Anopheles arabinis nwere ohere na mmasị ndị ọbịa ya ma a maara na ọ na-ejikọ ma na-azụ ehi. Mmanya ehi bụ ihe bara ụba na ngwakọta nitrogen, yana urea na-aza 50-95% nke nitrogen zuru oke na mmamịrị ọhụrụ [15, 16]. Dịka mmamịrị ehi Ndị nje bacteria na-eji ihe ndị a eme ihe iji belata mgbagwoju anya nke ihe ndị na-emepụta nitrogen n'ime awa 24 [15]. Ka mmụba ngwa ngwa nke ammonia, nke jikọtara ya na mbelata na nitrogen organic, nje bacteria alkalophilic (ọtụtụ n'ime ha na-emepụta ihe ndị na-egbu egbu nye anwụnta) na-etolite [15], nke nwere ike ịbụ nwanyị Ann.arabiensis na-adọtakarị mmamịrị mgbe awa 24 ma ọ bụ ihe na-erughị ya [13, 14].
N'ọmụmụ ihe a, a chọrọ Ans ndị a na-elekọta na ndị a na-enye ọbara. N'oge usoro gonadotropin mbụ ya, a tụlere arabiensis maka inweta ihe ndị dị na nitrogenous, gụnyere urea, site na ịgwakọta mmamịrị. Mgbe nke ahụ gasịrị, e mere usoro nnwale iji chọpụta otu anwụnta nwanyị si ekenye ihe ndị a nwere ike inye maka ndụ ka mma, ịmụpụta na ịchọgharị ihe. N'ikpeazụ, a tụlere isi nke mmamịrị ehi ọhụrụ na nke meworo agadi iji chọpụta ma ndị a nyere ihe ngosi a pụrụ ịdabere na ya maka An ndị a na-elekọta na ndị a na-enye ọbara. N'ịchọ ihe ndị a nwere ike inye nri, arabiensis chọpụtara njikọ kemịkalụ n'azụ mma dị iche iche a hụrụ. A nyochakwuru ngwakọta isi simenti nke ihe ndị na-agbanwe agbanwe (VOCs) achọpụtara na mmamịrị dị afọ 24 n'okpuru ọnọdụ ubi, na-agbatị nsonaazụ enwetara n'okpuru ọnọdụ ụlọ nyocha ma na-egosi mmetụta nke isi mmamịrị ehi na ọnọdụ ahụike dị iche iche. Mmanya anwụnta. Nsonaazụ enwetara na-akwado na An. arabiensis na-enweta ma na-ekesa ihe ndị dị na nitrogenous dị na mmamịrị vertebrate iji metụta njirimara akụkọ ihe mere eme ndụ. A na-atụle nsonaazụ ndị a n'ihe gbasara ihe ndị nwere ike ibute ọrịa na otu esi eji ha maka nlekota na njikwa vector.
A na-echekwa ụdị Anopheles arabic (ụdị Dongola) na okpomọkụ 25 ± 2 °C, 65 ± 5% RH na okirikiri ìhè: ọchịchịrị nke awa 12:12. A na-azụ ụmụ ahụhụ n'ime tray plastik (20 cm × 18 cm × 7 cm) juputara na mmiri a gwakọtara agwakọta ma nye nri azụ Tetramin® (Tetra Werke, Melle, DE). A na-anakọta ụmụ ahụhụ n'ime iko 30 ml (Nolato Hertila, Åstorp, SE) wee bufee ha na cages Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science, Taichung, Taiwan) iji mee ka ndị toro eto pụta. E nyere ndị toro eto ihe ngwọta sucrose 10% ad libitum ruo ụbọchị anọ mgbe ha pụtachara (dpe), mgbe ahụ a na-enye ụmụ nwanyị na-achọ onye ọbịa nri ozugbo tupu nnwale ahụ, ma ọ bụ a na-enye ha mmiri a gwakọtara agwakọta n'abalị tupu nnwale ahụ, dịka akọwara n'okpuru. A na-agụ ụmụ nwanyị ejiri mee nnwale ụgbọ elu maka naanị 4-6 awa iri mmiri na libitum. Iji kwadebe anwụnta na-amị ọbara maka nyocha bio ọzọ, e nyere ụmụ nwanyị 4 dpe ọbara atụrụ defibrotic (Håtunalab, Bro, SE) site na iji usoro nri membrane (Hemotek Discovery Workshops, Accrington, UK). E zigara ụmụ nwanyị jupụtara na mkpọchi n'ime ụlọ ntu nke ọ bụla ma nye ha nri ozugbo, dịka akọwara n'okpuru, ma ọ bụ 10% sucrose ad libitum maka ụbọchị atọ tupu nnwale ndị a kọwara n'okpuru. E jiri ụmụ nwanyị nke ikpeazụ mee nyocha bio tube ụgbọ elu ma bufee ha na ụlọ nyocha, wee nye ha mmiri a gwakọtara agwakọta na libitum maka awa 4-6 tupu nnwale ahụ.
E jiri nyocha nri chọpụta oke mmamịrị na urea n'ime ụmụ nwanyị An.Arab toro eto. E nyere ụmụ nwanyị na-achọ onye ọbịa na ndị na-enye ọbara nri nwere 1% mmamịrị ehi ọhụrụ na nke meworo agadi, ọtụtụ urea dị iche iche, na njikwa abụọ (10% sucrose na mmiri) ruo awa 48. Na mgbakwunye, etinyere agba nri (1 mg ml-1 xylene cyanide FF; CAS 2650-17-1; Sigma-Aldrich, Stockholm, SE) na nri ahụ ma nye ya na matrix 4 × 4 na tubes microcentrifuge 250 µl (Axygen Scientific, Union City, CA, US; Foto 1A) Jupụta ruo n'ọnụ (~300 µl). Iji zere asọmpi n'etiti anwụnta na mmetụta nke agba agba, tinye anwụnta 10 n'ime nnukwu efere Petri (12 cm na dayameta na 6 cm n'ịdị elu; Semadeni, Ostermundigen, CH; Foto 1A) n'ọchịchịrị zuru oke na 25 ± 2 cm °C na 65 ± 5% metụtara ya. iru mmiri. E mere nnwale ndị a ugboro ise ruo iri. Mgbe e kpughesịrị nri, a na-etinye anwụnta na -20 Celsius ruo mgbe a ga-enyocha ha ọzọ.
Chọọ mmamịrị ehi na urea nke nwanyị na-aṅụ ọbara Anopheles arabianus na-aṅụ. N'ule iri nri (A), e nyere anwụnta nwanyị nri nke gụnyere mmamịrị ehi ọhụrụ na nke ochie, ọtụtụ urea, sucrose (10%), na mmiri a gwakọtara agwakọta (H2O). Ụmụ nwanyị na-achọ onye ọbịa (B) na ndị a ṅụrụ ọbara (C) na-aṅụ karịa sucrose karịa nri ọ bụla ọzọ a nwalere. Rịba ama na ụmụ nwanyị na-achọ onye ọbịa na-aṅụ mmamịrị ehi awa 72 na-erughị mmamịrị ehi awa 168 (B). A na-egosi mkpokọta nitrogen zuru oke (± nkewa ọkọlọtọ) nke mmamịrị na ntinye. Ụmụ nwanyị na-achọ onye ọbịa (D, F) na ndị na-aṅụ ọbara (E, G) na-aṅụ urea n'ụzọ dabere na dose. Oke nkezi nke iku ume (D, E) nwere aha mkpụrụedemede dị iche iche dị nnọọ iche na ibe ha (ANOVA otu ụzọ site na iji nyocha Tukey post hoc; p < 0.05). Ogwe njehie na-anọchite anya njehie ọkọlọtọ nke nkezi (BE). Ahịrị kwụ ọtọ na-anọchite anya ahịrị regression log-linear (F, G)
Iji wepụta nri ndị a na-amịkọrọ, e tinyere anwụnta n'otu n'otu n'ime tube microcentrifuge 1.5 ml nke nwere 230 µl nke mmiri a gwakọtara agwakọta, e wee jiri obere ihe na-enweghị eriri (VWR International, Lund, SE) mebie anụ ahụ, wee jiri centrifugation mee ihe na 10 krpm maka nkeji iri. E bufere ihe na-esi n'elu mmiri (200 µl) na microplate 96-well (Sigma-Aldrich) ma chọpụta absorbance (λ620) site na iji igwe na-agụ microplate dabere na spectrophotometer (SPECTROStar® Nano, BMG Labtech, Ortenberg, DE) nm. N'aka nke ọzọ, e gwere anwụnta ahụ na 1 ml nke mmiri a gwakọtara agwakọta, e bufere 900 µl nke ya na cuvette maka nyocha spectrophotometric (λ 620 nm; UV 1800, Shimadzu, Kista, SE). Iji tụọ oriri nri, e kwadebere usoro ọkọlọtọ site na ịgbaze 0.2 µl ruo 2.4 µl nke 1 mg ml-1 xylene cyanide. Mgbe ahụ, e jiri njupụta anya nke mkpokọta agba a maara iji chọpụta ọnụọgụ nri anwụnta ọ bụla riri.
E jiri otu ụzọ nyocha nke mgbanwe (ANOVA) nyochaa data olu, wee soro ntụnyere Tukey nke abụọ (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc., Cary, NC, US, 1989–2007). Nyocha mgbanwe dị larịị kọwara oriri urea dabere na njupụta na nzaghachi tụnyere n'etiti anwụnta na-achọ onye ọbịa na-aṅụ ọbara (GraphPad Prism v8.0.0 maka Mac, GraphPad Software, San Diego, CA, US).
E tinyere ihe dị ka µl nke ihe nlele mmamịrị site na otu afọ ọ bụla na Chromosorb® W/AW (10 mg 80/100 mesh, Sigma Aldrich) ma tinye ya na kapsụl tin (8 mm × 5 mm). E tinyere kapsụl n'ime ụlọ ọkụ nke ihe nyocha CHNS/O (Flash 2000, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, US) iji chọpụta ọdịnaya nitrogen dị na mmamịrị ọhụrụ na nke ochie dịka usoro nke onye nrụpụta si dị. A tụrụ nitrogen zuru oke (g N l-1) dabere na mkpokọta urea a maara dị ka ọkọlọtọ.
Iji chọpụta mmetụta nri nwere n'ahụ ndụ ụmụ nwanyị na-achọ onye ọbịa na-aṅụ ọbara, e tinyere anwụnta n'otu n'otu n'ime nnukwu efere Petri (dayameta 12 cm na ogologo 6 cm; Semadeni) yana oghere e kpuchiri n'ime mkpuchi (dayameta 3 cm) yana Maka ikuku na inye nri. E nyere nri ozugbo mgbe 4 dpe gachara ma gụnye 1% mmamịrị ehi ọhụrụ na nke ochie, oke urea anọ, na njikwa abụọ, 10% sucrose na mmiri. E tinyere nri ọ bụla na tampon ezé (DAB Dental AB, Upplands Väsby, SE) n'ime sirinji 5 ml (Thermo Fisher Scientific, Gothenburg, SE), wepụ plunger ahụ, ma tinye ya n'elu efere petri (foto 1).1A). Gbanwee nri gị kwa ụbọchị. Na-edebe ụlọ nyocha ahụ dịka akọwara n'elu. A gụrụ anwụnta ndị dị ndụ ugboro abụọ n'ụbọchị, ebe a tụfuru anwụnta nwụrụ anwụ ruo mgbe anwụnta ikpeazụ nwụrụ (n = 40 kwa ọgwụgwọ). E jiri usoro ọnụọgụ ndụ Kaplan-Meyer na ọkwa log-ranking nyochaa ndụ anwụnta ndị a na-enye nri dị iche iche. ule iji tụnyere ntụnyere nkesa ndụ n'etiti nri (IBM SPSS Statistics 24.0.0.0).
Igwe igwe anwụnta a na-efe efe nke e ji Attisano na ndị otu ya mee, nke e ji ogwe acrylic doro anya nke dị mm 5 (obosara ya bụ 10 cm x ogologo ya bụ 10 cm) mee nke na-enweghị ogwe ihu na azụ (Foto nke 3: n'elu). Nchikota pivot nwere tube kwụ ọtọ nke e ji kọlụm gas chromatography mee (0.25 mm id; 7.5 cm L) nke nwere nsọtụ ya nke e ji agịga ụmụ ahụhụ kwụgidere n'etiti magnet neodymium abụọ dị sentimita 9 n'otu ebe. Tube kwụ ọtọ nke e ji otu ihe ahụ mee (6.5 cm L) kewara tube kwụ ọtọ iji mepụta ogwe aka e jikọtara ọnụ na ogwe aka nke nwere obere mpempe akwụkwọ aluminom dị ka ihe mgbaàmà na-egbochi ìhè.
E nyere ụmụ nwanyị agụụ na-agụ awa iri abụọ na anọ nri dị n'elu maka nkeji iri atọ tupu e gbochie ha. E mesịa, a na-ete ụmụ nwanyị anwụnta e nyere nri nke ọma n'otu n'otu n'elu ice ruo nkeji abụọ ruo atọ ma tinye ya na ntụtụ ụmụ ahụhụ na wax (Joel Svenssons Vaxfabrik AB, Munka Ljungby, SE) wee kechie ha na ogwe aka nke tube ndị kwụ ọtọ. Igwe na-efe efe. E jiri onye na-edekọ data ahaziri ahazi dekọọ mgbanwe kwa ụgbọelu, wee chekwaa ma gosipụta ya site na iji ngwanrọ PC-Lab 2000™ (v4.01; Velleman, Gavere, BE). E tinyere igwe na-efe efe n'ime ụlọ a na-achịkwa ihu igwe (awa 12:12, ìhè: ọchịchịrị, 25 ± 2 °C, 65 ± 5% RH).
Iji hụ etu ihe si aga n'ụgbọelu, a gbakọọ anya niile e fepụrụ (m) na ọnụọgụgụ ihe omume ụgbọelu n'usoro kwa awa n'ime awa iri abụọ na anọ. Na mgbakwunye, a tụnyere anya nkezi nke ụmụ nwanyị na-efe efe n'ofe ọgwụgwọ ma nyochaa ya site na iji otu ụzọ ANOVA na nyocha Tukey post hoc (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.), ebe a na-ewere anya nkezi dị ka mgbanwe dabere, ebe ọgwụgwọ bụ ihe nwere onwe ya. Na mgbakwunye, a na-agbakọ ọnụọgụgụ nkezi nke agba gburugburu na mmụba nkeji iri.
Iji chọpụta mmetụta nri nwere na arụmọrụ ọmụmụ nke An.arabiensis, e bufere ụmụ nwanyị isii (4 dpe) ozugbo na nkata Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm) mgbe a chịkọtara ọbara wee nye nri nnwale ahụ ruo awa 48 dịka akọwara n'elu. E wepụziri nri ma nye iko mmiri (30 ml; Nolato Hertila) nke e ji mmiri a gwakọtara agwakọta 20 ml n'ụbọchị nke atọ ruo awa 48, na-agbanwe kwa awa 24. Megharịa usoro nri ọ bụla ugboro 20-50. A gụrụ àkwá ma dekọọ maka igbe nnwale ọ bụla. E jiri obere ihe atụ nke àkwá nyochaa nha nha na ogologo nke àkwá nke ọ bụla (n ≥ 200 kwa nri) site na iji igwe mikroskopu Dialux-20 (DM1000; Ernst Leitz Wetzlar, Wetzlar, DE) nke nwere igwefoto Leica (DFC) 320 R2; Leica Microsystems Ltd., DE). E debere àkwá ndị fọdụrụ n'ime ụlọ a na-achịkwa ihu igwe n'okpuru ọnọdụ ịzụ nwa nkịtị ruo awa 24, a tụkwara obere ihe atụ nke ụmụ ahụhụ mbụ apụtala ọhụrụ (n ≥ 200 kwa nri), dịka akọwara n'elu. E jiri ọnụọgụ àkwá na nha àkwá na ụmụ ahụhụ tụnyere n'etiti ọgwụgwọ na iji otu ụzọ ANOVA na nyocha Tukey post hoc (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
A na-anakọta mmamịrị ndị dị ọhụrụ site na ihe nlele e nwetara n'anụ ehi Zebu, Arsi, site na ihe nlele ndị a na-anakọta, awa 24, awa 72 na awa 168. Maka ịdị mma, a na-anakọta mmamịrị n'isi ụtụtụ mgbe ehi ndị ahụ ka nọ n'ụlọ nri. A na-anakọta mmamịrị n'aka mmadụ iri ma bufee 100-200 ml nke ihe nlele ọ bụla na akpa achịcha polyamide nke ọ bụla (Toppits Cofresco, Frischhalteprodukte GmbH na Co., Minden, DE) na polyamide lita 3 nwere mkpuchi. A na-anakọta ihe ndị dị n'elu isi site na ihe nlele mmamịrị ehi ọ bụla ozugbo (ọhụrụ) ma ọ bụ mgbe ọ tochara na okpomọkụ ụlọ maka awa 24, awa 72 na awa 168, ya bụ, ihe nlele mmamịrị ọ bụla nọchiri anya otu afọ ọ bụla.
Maka nchịkọta ihe ndị na-agbanwe agbanwe n'isi, e jiri sistemụ mechiri emechi gbasaa mmiri gas nke a na-eme ka carbon dị ọcha (100 ml min-1) site na akpa polyamide gaa na kọlụm adsorption ruo awa 2.5 site na iji ọkpọkọ vacuum diaphragm (KNF Neuberger, Freiburg, DE). Dịka njikwa, e ji akpa polyamide efu mee nchịkọta oghere isi. E ji Teflon tubing (5.5 cm x 3 mm id) mee kọlụm adsorption ahụ nke nwere 35 mg nke Porapak Q (50/80 mesh; Waters Associates, Milford, MA, US) n'etiti plọg ajị iko. Tupu e jiri ya, e ji n-hexane 1 ml nke a na-emegharị emegharị (Merck, Darmstadt, DE) na 1 ml pentane (99.0% glycolate glycolate dị ọcha, Sigma Aldrich) sachaa kọlụm ahụ. E ji 400 μl nke pentane nke a na-etinye n'ime ihe ndị ... nyocha.
Mmeghachi omume nke ịchọ onye ọbịa na iri ọbara An. E nyochachara ihe ndị na-agbanwe agbanwe nke Headspace nke a nakọtara site na mmamịrị ọhụrụ, awa 24, awa 72, na awa 168 maka ihe ndị na-agbanwe agbanwe sitere na anwụnta Arabidopsis site na iji olfactometer tube iko kwụ ọtọ [18]. Emere nnwale ndị a n'oge ZT 13-15, oge kachasị elu nke ọrụ ịchọ ụlọ nke An. Arab [19]. E jiri 3 ± 1 lx nke ìhè uhie si n'elu nwuo ọkụ nke tube iko (80 cm × 9.5 cm id). Ikuku e tinyere n'ime coal ma mee ka ọ dị mmiri mmiri (25 ± 2 °C, 65 ± 2% iru mmiri) gafere bioassay na 30 cm s-1. A na-agafe ikuku site na usoro ihe mkpuchi ígwè anaghị agba nchara, na-emepụta mmiri laminar na nhazi plum dị iche. Ihe na-ekesa tampon ezé (4 cm × 1 cm; L:D; DAB Dental AB), nke a kwụnyere site na eriri 5 cm na njedebe ikuku nke olfactometer, yana mgbanwe ihe mkpali kwa nkeji ise. Maka nyocha, ejiri 10 μl nke ihe ọ bụla e si n'isi wepụta, nke a gwakọtara agwakọta 1:10, dị ka ihe mkpali. Ejiri pentane hà nhata mee ihe dị ka ihe njikwa. E tinyere anwụnta ndị na-achọ onye ọbịa ma ọ bụ ndị na-aṅụ ọbara n'ime ụlọ mwepụta nkeonwe awa 2-3 tupu mmalite nke nnwale ahụ. E tinyere ụlọ mwepụta ahụ n'akụkụ ala nke olfactometer, a hapụkwara anwụnta ka ha na-abanye maka nkeji 1, wee mepee valvụ urukurubụba nke ụlọ nkwakọba ahụ ka ọ tọhapụ. E nyochachara mmasị na ọgwụgwọ ma ọ bụ njikwa dị ka oke anwụnta ndị batara na isi mmalite ahụ n'ime nkeji ise nke ntọhapụ. E megharịrị ihe ọ bụla e si n'isi wepụta na njikwa na-agbanwe agbanwe ugboro 30, iji zere mmetụta nke otu ụbọchị, a nwalere otu ọnụọgụ ọgwụgwọ na njikwa ahụ n'ụbọchị nnwale ọ bụla. Chọọ azịza sitere na onye ọbịa na onye a na-enye ọbara. E jiri usoro Arabic megide isi kpuchie ya site na iji nhazi logistic aha wee soro ntụnyere abụọ maka oke dị iche iche (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Nzaghachi nke ịmụ nwa. A nyochachara ihe ndị e si na mmamịrị ehi ọhụrụ na nke ochie wepụta n'ime ụlọ Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science). Iko plastik (30 mL; Nolato Hertila) e ji mmiri 20 mL nke e tinyere mmiri gbazere agbaze mee ka ihe e ji amụ nwa dị ndụ ma tinye ha n'akụkụ dị iche iche nke ụlọ ahụ, 24 cm iche. A gbanwere iko ọgwụgwọ site na 10 μl nke ihe e si na isi ọ bụla wepụta na mmiri 1:10. E jiri pentane hà nhata dozie iko njikwa ahụ. A gbanwere iko ọgwụgwọ na iko njikwa n'etiti nnwale ọ bụla iji chịkwaa mmetụta ọnọdụ. E wepụtara ụmụ nwanyị iri e ji ọbara nye n'ime ụlọ nnwale na ZT 9-11 ma gụọ àkwá dị n'ime iko awa 24 ka e mesịrị. Usoro maka ịgbakọ ihe ndeksi ịmụ nwa bụ: (ọnụọgụ àkwá e tinyere n'ime iko ọgwụgwọ - ọnụọgụ àkwá e tinyere n'ime iko njikwa)/(ọnụọgụ àkwá e tinyere). A na-emeghachi ọgwụgwọ ọ bụla ugboro 8.
E mere nyocha nke ihe gbasara gas chromatographic na electron antenna (GC-EAD) nke nwanyị An.arabiensis dịka akọwara na mbụ [20]. N'ụzọ dị mkpirikpi, e kewara ihe ndị na-agbanwe agbanwe site na isi ọhụrụ site na iji Agilent Technologies 6890 GC (Santa Clara, CA, US) nke nwere kọlụm HP-5 (30 m × 0.25 mm id, ọkpụrụkpụ ihe nkiri 0.25 μm, Agilent Technologies). na mmamịrị na-aka nká. Ejiri hydrogen mee ihe dị ka usoro mkpanaka yana nkezi ọsọ nke 45 cm s-1. A gbara ihe nlele ọ bụla (2 μl) ruo sekọnd 30 na ọnọdụ enweghị nkewa yana okpomọkụ ntinye nke 225 °C. Emere mmemme okpomọkụ oven GC site na 35 °C (njide nkeji 3) ruo 300 °C (njide nkeji 10) na 10 °C min-1. Na ihe nkesa GC, etinyere 4 psi nke nitrogen ma kewaa 1:1 na Gerstel 3D/2 obere olu nwụrụ anwụ (Gerstel, Mülheim, DE) n'etiti ihe nchọpụta ionization ọkụ na EAD. E tinyere capillary GC maka EAD site na ahịrị nnyefe Gerstel ODP-2, nke na-esochi okpomọkụ oven GC gbakwunyere 5 °C, n'ime tube iko (10 cm × 8 mm), ebe agwakọtara ya na ikuku carbon, nke e ji mmiri mee (1.5 l min−1). E tinyere antenna ahụ. E tinyere antenna ahụ. 0.5 cm site na mpụta nke ọkpọkọ ahụ. Anwụnta ọ bụla nwere otu ihe ọ bụla ọzọ, nakwa maka anwụnta ndị na-achọ onye ọbịa, e mere ihe karịrị ugboro atọ n'ime ihe nlele mmamịrị nke afọ ọ bụla.
Nchọpụta nke ihe ndị na-arụ ọrụ n'ime mkpokọta mmiri ara ehi ọhụrụ na nke ochie site na iji igwe GC na igwe spectrometer jikọtara ọnụ (GC-MS; 6890 GC na 5975 MS; Agilent Technologies) iji nweta nzaghachi antenna na nyocha GC-EAD, na-arụ ọrụ na ọnọdụ ionization mmetụta elektrọn na 70 eV. E tinyere GC na kọlụm HP-5MS nke ejiri UI kpuchie (60 m × 0.25 mm dayameta ime, ọkpụrụkpụ ihe nkiri 0.25 μm) site na iji helium dị ka usoro mkpanaka yana ọnụego mmiri nkezi nke 35 cm s-1. Ejiri otu ntọala injector na okpomọkụ oven gbanye ihe nlele 2 μl dịka maka nyocha GC-EAD. Achọpụtara ihe ndị a dabere na oge nchekwa ha (Ndekọ Kovát) na oke spectra ma e jiri ya tụnyere ọbá akwụkwọ omenala na ọbá akwụkwọ NIST14 (Agilent). E kwadoro ihe ndị a chọpụtara site na itinye ụkpụrụ ziri ezi (Ndekọ Ndị Ọzọ 1: Tebụl S2). Maka nhazi, heptyl acetate (10 ng, 99.8% ọcha kemịkalụ, Aldrich) ka a gbara ọgwụ dị ka ọkọlọtọ mpụga.
Ịtụle uru nke ngwakọta isi sịntetik nke mejupụtara ihe ndị na-arụ ọrụ na mmamịrị ọhụrụ na nke ochie iji dọta ndị na-achọ onye ọbịa na ndị na-aṅụ ọbara Ans.arabiensis, site na iji otu olfactometer na usoro ahụ dị n'elu. Ngwakọta sịntetik yiri nhazi na oke nke ihe mejupụtara na ihe ndị na-agbanwe agbanwe na isi agwakọta nke mmamịrị ọhụrụ, awa 24, awa 48, awa 72, na awa 168 (Foto 5D-G; Faịlụ Mgbakwunye 1: Tebụl S2). Maka nyocha, jiri 10 μl nke ngwakọta sịntetik 1:100, yana ọnụego ntọhapụ zuru oke site na ihe dị ka 140-2400 ng h-1, maka ịtụle ịma mma nye anwụnta na-aṅụ ọbara. Mgbe nke ahụ gasịrị, a na-eme nnwale ahụ na ngwakọta zuru oke, ebe a na-ewepụ ngwakọta dị iche iche nke otu ihe mejupụtara ngwakọta zuru oke. Chọọ azịza sitere na onye ọbịa na onye a na-enye ọbara Ans.Arab vs ngwakọta sịntetik na nke a na-enye na nke a na-enye na-eji nhazi logistic aha wee soro ntụnyere abụọ maka ihe na-adịghị mma. oke (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Iji chọpụta ma mmamịrị ehi nwere ike ịbụ ihe nnọchianya ebe obibi maka anwụnta ịba, mmamịrị ehi ọhụrụ na nke ochie, nke a chịkọtara dịka akọwara n'elu, ma tinye mmiri n'ime bọket lita atọ (100 ml) ma tinye ya n'ọnyà anụ ehi ndị ọbịa. (Ụdị BG-HDT; BioGents, Regensburg, DE). A na-etinye ọnyà iri n'ebe dị anya mita 50 n'ebe ịta nri, mita 400 site na obodo nta (Silay, Ethiopia, 5°53´24´N, 37°29´24´E) na enweghị ehi, n'ebe a na-azụ ụmụ na obodo nta. A na-ekpo ọkụ ọnyà ise iji mee ka ọnụnọ nke onye ọbịa dị, ebe a na-ahapụ ọnyà ise ka ọ ghara ikpo ọkụ. A na-atụgharị ebe ọgwụgwọ ọ bụla kwa abalị ruo abalị ise. Ejiri usoro nhazi na nkesa beta binomial tụnyere ọnụọgụ anwụnta ejidere n'ọnyà ndị afọ dị iche iche.
N'obodo nta nke ọrịa ịba na-efe efe dị nso n'obodo Maki, mpaghara Oromia, Etiopia (8° 11′ 08″ N, 38° 81′ 70″ E; Foto 6A). Emere nnyocha a n'etiti etiti ọnwa Ọgọst na etiti Septemba tupu mmiri ọgwụ kwa afọ n'ime ụlọ, yana oge mmiri ozuzo ogologo. A họpụtara ụlọ abụọ abụọ (mita 20–50 site na ibe ha) dị n'akụkụ obodo ahụ maka ọmụmụ ihe a (Foto 6A). Ihe e ji ahọrọ ụlọ ndị ahụ bụ: a naghị ekwe ka anụmanụ nọrọ n'ụlọ, a naghị ekwe ka esi nri n'ime ụlọ (ịse osisi ma ọ bụ icheku ọkụ) (ma ọ dịkarịa ala n'oge nnwale ahụ), na ụlọ ndị nwere mmadụ abụọ bi na ha, na-ehi ụra n'ime ọgwụ ndị na-enweghị ụmụ ahụhụ. n'okpuru ọgwụ anwụnta a gwọrọ. Ụlọ Ọrụ Nnyocha Omume Nnyocha nke Ụlọ Ọrụ (IRB/022/2016) nke Faculty of Natural Sciences (CNS-IRB), Mahadum Addis Ababa enyela nkwenye omume, dịka ntuziaka nke Nkwupụta nke World Medical Association nke Helsinki si dị. E nyere onye isi ezinụlọ ọ bụla nkwenye site n'enyemaka nke ndị ọrụ mgbatị ahụike. Ndị ọchịchị mpaghara na ọkwa mpaghara na ngalaba ('kebele') kwadoro usoro ahụ dum. Nhazi nnwale ahụ sochiri imewe square Latin 2 × 2, nke e kenyere ngwakọta na njikwa sịntetik na ụlọ abụọ n'abalị mbụ ma gbanwee n'etiti ụlọ n'abalị nnwale na-esote. E meghachiri usoro a ugboro iri. Na mgbakwunye, iji chọpụta ọrụ anwụnta n'ụlọ ahọpụtara, e debere ọnyà CDC ka ọ rụọ abalị ise n'usoro na mmalite, etiti na njedebe nke nnwale ubi n'otu oge ahụ n'ụbọchị.
A gbazere ngwakọta sịntetik nwere ihe isii na-arụ ọrụ ndụ na heptane (97.0% glycoside GC grade, Sigma Aldrich) wee wepụta ya na 140 ng h-1 site na iji ihe na-enye owu wick [20]. Ihe na-enye wick ahụ kwere ka a tọhapụ ihe niile n'ogo mgbe niile n'ime nnwale awa 12 ahụ. Ejiri Heptane mee ihe dị ka njikwa. A kwụgidere karama ahụ n'akụkụ ebe ntinye nke ọnyà ọkụ Centers for Disease Control and Prevention (CDC) (John W. Hock Company, Gainesville, FL, US; Foto 6A). A kwụgidere ọnyà ndị ahụ n'elu ala 0.8 – 1 m, nso ụkwụ akwa ahụ, otu onye ọrụ afọ ofufo wee dina n'okpuru ụgbụ anwụnta a na-agwọghị ma rụọ ọrụ n'etiti elekere 18:00 na elekere 6:30. E mechara jiri nyocha polymerase chain reaction (PCR) nyochaa anwụnta ndị e jidere site na mmekọahụ na ọnọdụ anụ ahụ (anaghị enye nri, nye nri, dị ime ọkara, na dị ime [21] iji chọpụta ụdị ndị a chọpụtara n'ụdị A. gambiae sl. Ndị otu nke mgbagwoju anya ahụ [23]. N'ọmụmụ ihe ubi ahụ, e jiri usoro nhazi ihe nlereanya nke ụlọ abụọ ahụ nyochaa ọnyà e jikọnyere ọnụ, ebe mmasị bụ mgbanwe dabere na ya na ọgwụgwọ (ngwakọta sịntetik vs njikwa) bụ mmetụta edobere (JMP® 14.0. 0. SAS Institute Inc.). N'ebe a, anyị na-akọ akụkọ χ2 na uru p site na ule nkesa ohere.
Nyochaa ma ọ dị mma. arabiensis nwere ike inweta mmamịrị, isi iyi nitrogen ya, urea, site na inye ya nri ozugbo, n'ime awa 48 nke nchịkwa maka ụbọchị anọ mgbe a nwalechara onye ọbịa na ule nri ụmụ nwanyị a na-enye ọbara (Foto 1A). Ma ụmụ nwanyị na-achọ onye ọbịa na ndị na-aṅụ ọbara riri shuga karịa nri ma ọ bụ mmiri ọ bụla ọzọ (F(5,426) = 20.15, p < 0.0001 na F(5,299) = 56.00, p < 0.0001, n'otu n'otu; Fig. 1B,C). Ọzọkwa, ụmụ nwanyị na-achọ onye ọbịa riri obere mmamịrị n'ime awa 72 ma e jiri ya tụnyere mmamịrị n'ime awa 168 (Foto 1B). Mgbe e nyere ha nri nwere urea, ụmụ nwanyị na-achọ onye ọbịa riri urea dị ukwuu na 2.69 mM ma e jiri ya tụnyere mkpokọta na mmiri ndị ọzọ niile, ebe a naghị amata ọdịiche dị na 10% sucrose (F(10,813) = 15.72, p < 0.0001; Foto 1D). Nke a dị iche na mmeghachi omume nke ụmụ nwanyị na-aṅụ ọbara, bụ́ ndị na-amịkarị nri nwere urea karịa mmiri, ọ bụ ezie na ọ dịghị ihe karịrị 10% sucrose (F(10,557) = 78.35, p < 0.0001; Foto 1).1E). Ọzọkwa, mgbe a na-atụnyere ha n'etiti ọnọdụ ahụ ike abụọ ahụ, ụmụ nwanyị a na-amịkọrọ phlebotom na-amịkọrọ urea karịa ụmụ nwanyị na-achọ nnabata na oke kachasị ala, ụmụ nwanyị a na-amịkọrọ urea yiri nke ahụ na oke dị elu (F(1,953)= 78.82, p < 0.0001; Foto 1F, G). Ọ bụ ezie na oriri sitere na nri nwere urea yiri ka ọ nwere ụkpụrụ kacha mma (Foto 1D,E), ụmụ nwanyị nọ n'ọnọdụ ahụ ike abụọ ahụ nwere ike ịgbanwe ọnụọgụ urea a na-amịkọrọ n'elu oke urea niile n'ụdị log-linear (Foto 1F,G). ). N'otu aka ahụ, anwụnta yiri ka ha na-achịkwa nnabata nitrogen ha site n'ịhazi ọnụọgụ mmamịrị ha na-amịkọrọ, ebe ọ bụ na ọnụọgụ nitrogen dị na mmamịrị na-apụta ìhè na ọnụọgụ mmanụ ha na-amịkọrọ (Foto 1B, C na B insets).
Iji chọpụta mmetụta nke mmamịrị na urea nwere n'ahụ anwụnta ndị na-achọ onye ọbịa na ndị na-aṅụ ọbara, e nyere ụmụ nwanyị mmamịrị dị afọ anọ niile (ọhụrụ, awa 24, awa 72, na awa 168 mgbe e wepụsịrị ya) yana ọtụtụ urea, tinyere mmiri e siri esi na 10% sucrose jere ozi dị ka ihe njikwa (Foto 2A). Nyocha ndụ a gosiri na nri nwere mmetụta dị ukwuu na ndụ zuru oke n'ime ụmụ nwanyị na-achọ onye ọbịa (mmiri: χ2 = 108.5, df = 5, p < 0.0001; urea: χ2 = 122.8, df = 5, p < 0.0001; Fig. 2B, C) na ụmụ nwanyị na-enye ọbara (mmiri: χ2 = 93.0, df = 5, p < 0.0001; urea: χ2 = 137.9, df = 5, p < 0.0001; Foto 2D,E). Na mkpokọta Nnwale ndị e mere gosiri na ụmụ nwanyị riri mmamịrị, urea, na mmiri nwere obere ọnụọgụ ndụ dị ala karịa ụmụ nwanyị riri nri sucrose (Foto 2B-E). Ụmụ nwanyị na-achọ onye ọbịa nyere mmamịrị ọhụrụ na nke ochie gosiri ọnụego ndụ dị iche iche, ebe ndị e nyere mmamịrị ochie awa 72 (p = 0.016) nwere ohere kacha nta ịlanarị (Foto 2B). Ọzọkwa, ụmụ nwanyị na-achọ onye ọbịa nyere 135 mM urea dị ndụ ogologo oge karịa njikwa mmiri (p < 0.04) (Foto 2C). Ma e jiri ya tụnyere mmiri, ụmụ nwanyị e nyere mmamịrị ọhụrụ na mmamịrị awa 24 dị ndụ ogologo oge (p = 0.001 na p = 0.012, n'otu n'otu; Foto 2D), ebe ụmụ nwanyị e nyere mmamịrị awa 72 dị ndụ ogologo oge karịa ndị e nyere nri. <0.013; Foto 2E).
Ndụ nke ụmụ nwanyị Anopheles arabinis na-aṅụ ma na-aṅụ ọbara. Na nyocha bio (A), e nyere ụmụ anwụnta nwanyị nri nke gụnyere mmamịrị ehi ọhụrụ na nke ochie, ọtụtụ urea, sucrose (10%) na mmiri a gwakọtara agwakọta (H2O). A na-edekọ ndụ nke anwụnta na-achọ onye ọbịa (B, C) na-aṅụ ọbara (D, E) kwa awa iri na abụọ ruo mgbe ụmụ nwanyị niile riri mmamịrị (B, D) na urea (C, E), ma na-achịkwa, Sucrose na mmiri, nwụrụ.
Ogologo na ọnụọgụ nke agba agba a chọpụtara na ule igwe na-agba ọsọ n'ime awa 24 dị iche n'etiti anwụnta na-achọ onye ọbịa na ndị na-aṅụ ọbara, nke gosiri obere ọrụ ụgbọelu n'ozuzu ya (Foto 3). Anwụnta na-achọ onye ọbịa nke nyere mmamịrị ọhụrụ na nke ochie ma ọ bụ sucrose na mmiri gosipụtara usoro ụgbọelu dị iche iche (Foto 3), ebe ụmụ nwanyị na-enye mmamịrị ọhụrụ na-arụsi ọrụ ike n'isi ụtụtụ, ebe ndị a na-enye anwụnta dị awa 24 na 168 ndị na-eri mmamịrị gosipụtara usoro ụgbọelu dị iche iche ma bụrụ nke a na-ahụkarị kwa ụbọchị. Anwụnta ndị inyom na-enye sucrose ma ọ bụ mmamịrị awa 72 gosipụtara ọrụ n'ime awa 24, ebe ụmụ nwanyị na-enye mmiri na-arụsi ọrụ ike karịa n'etiti oge. Anwụnta ndị e nyere sucrose gosipụtara ọkwa kachasị elu nke ọrụ n'abalị na n'isi ụtụtụ, ebe ndị riri mmamịrị dị awa 72 nwetara mbelata na ọrụ n'ime awa 24 (Foto 3).
Achọpụtara etu ụmụ nwanyị na-achụ nta na-aṅụ ọbara, bụ́ Anopheles arabinis, si mba ọzọ, si eri mmamịrị ehi na urea. N'ule igwe na-agba ọsọ, anwụnta nwanyị na-eri mmamịrị ehi ọhụrụ na nke ochie, e jikọtara ọtụtụ urea, sucrose (10%), na mmiri e tinyere mmiri (H2O) na aka kwụ ọtọ, na-agbagharị n'enweghị nsogbu (n'elu). Maka ụmụ nwanyị na-achọ onye ọbịa (n'aka ekpe) na ndị na-aṅụ ọbara (n'aka nri), e dekọrọ anya na ọnụọgụ ụgbọelu niile kwa elekere maka nri ọ bụla n'ime awa 24 (ọchịchịrị: isi awọ; ìhè: ọcha). A na-egosi anya nkezi na ọnụọgụgụ nke ọgụ n'aka nri nke eserese ọrụ circadian. Ogwe njehie na-anọchite anya njehie ọkọlọtọ nke nkezi. Nyocha ọnụọgụgụ lee ederede
N'ozuzu, ọrụ ụgbọelu nke ụmụ nwanyị na-achọ onye ọbịa sochiri usoro yiri nke njem ụgbọelu n'ime awa 24. Nri e riri (F(5, 138) = 28.27, p < 0.0001), ụmụ nwanyị na-achọ onye ọbịa riri mmamịrị awa 72 feere ogologo oge karịa nri ndị ọzọ niile (p < 0.0001), anwụnta ndị e riri sucrose fekwara ogologo oge karịa anwụnta ọhụrụ (p = 0.022) na mmamịrị awa 24 (p = 0.022). N'adịghị ka usoro njem ụgbọelu nke nri mmamịrị kọwara, ụmụ nwanyị na-achọ onye ọbịa na urea gosipụtara ọrụ njem ụgbọelu na-aga n'ihu n'ime awa 24, na-arị elu n'oge ọkara nke abụọ nke oge gbara ọchịchịrị (Foto 3). Ọ bụ ezie na usoro ọrụ ahụ yiri nke ahụ, ụmụ nwanyị na-achọ onye ọbịa na-enye urea mụbara nke ukwuu nkezi anya ụgbọelu dabere na ntinye ahụ (F(5, 138) = 1310.91, p < 0.0001). Ụmụ nwanyị na-achọ onye ọbịa na-enye nri urea ọ bụla na-efe ogologo oge karịa ka ụmụ nwanyị na-enye ma mmiri ma ọ bụ sucrose (p < 0.03).
N'ozuzu, ọrụ njegharị nke anwụnta na-amị ọbara kwụsiri ike ma nọgide na-adịru ihe karịrị awa 24 n'ime nri niile, yana mmụba nke ọrụ mmamịrị n'oge ọkara nke abụọ nke oge ọchịchịrị maka ụmụ nwanyị a na-enye mmiri yana ụmụ nwanyị a na-enye ọhụrụ na awa 24 (foto 3). Ọ bụ ezie na nri mmamịrị metụtara nke ukwuu anya ụgbọelu nkezi n'ime ụmụ nwanyị a na-enye ọbara (F(5, 138) = 4.83, p = 0.0004), nri urea emeghị (F(5, 138) = 1.36, p = 0.24) .na mmamịrị na nri njikwa ndị ọzọ (ọhụrụ, p = 0.0091; awa 72, p = 0.0022; awa 168, p = 0.001; sucrose, p = 0.0017; dH2O, p = 0.036).
A tụlere mmetụta nke mmamịrị na nri urea na paramita ọmụmụ nwa na nyocha bio-tit àkwá (Foto 4A) ma nyochaa ya dabere na ọnụọgụ àkwá nke nwanyị ọ bụla tụbara, nha àkwá, na larvae mbụ a mụrụ ọhụrụ. Ọnụọgụ àkwá ndị a tụbara. Ụmụ nwanyị Arab ndị a tụbara mmamịrị dịgasị iche iche site na nri (F(5,222) = 4.38, p = 0.0008; Fig. 4B). Ụmụ nwanyị riri mmamịrị awa 24, nri ọbara tụbara àkwá karịa ụmụ nwanyị riri nri mmamịrị ndị ọzọ ma yie nke sucrose a tụrụ (Foto 4B). N'otu aka ahụ, nha àkwá nke ụmụ nwanyị a tụrụ mmamịrị tụbara dịgasị iche iche site na nri (F(5, 209) = 12.85, p < 0.0001), yana mmamịrị awa 24 na ụmụ nwanyị a tụrụ mmamịrị tubara àkwá buru ibu karịa ụmụ nwanyị a tụrụ mmiri, ebe àkwá nke ụmụ nwanyị a tụrụ mmamịrị awa 168 pere mpe nke ukwuu (Foto 4C). Na mgbakwunye, nri mmamịrị metụtara nha larvae nke ukwuu (F(5, 187) = 7.86, p < 0.0001), yana nnukwu ụmụ ahụhụ na-esi n'àkwà ndị ụmụ nwanyị dị awa 24 na 72 na-aṅụ mmamịrị apụta karịa àkwá ndị e tinyere n'àkwà. Ụmụ nwanyị ndị e nyere mmiri na ndị e nyere mmamịrị awa 168 (Foto 4D).
Mmepụta ọmụmụ nke ụmụ nwanyị Anopheles arabinis na-eri mmamịrị ehi na urea. E nyere anwụnta nwanyị a na-enye ọbara nri nke gụnyere mmamịrị ehi ọhụrụ na nke ochie, ọtụtụ urea, sucrose (10%), na mmiri a gbazere agbaze (H2O) ruo awa 48 tupu etinye ha na nyocha bio ma nweta ihe ndị na-etinye àkwá awa 48 (A). Ọnụọgụ àkwá (B, E), nha àkwá (C, F) na nha larvae (D, G) metụtara nke ukwuu site na nri enyere (mmụba ehi: BD; urea: EG). Ihe e ji tụnyere paramita ọ bụla site na iji aha mkpụrụedemede dị iche iche dị iche na ibe ha (ANOVA otu ụzọ site na iji nyocha Tukey post hoc; p < 0.05). Ogwe njehie na-anọchite anya njehie ọkọlọtọ nke nkezi
Dịka ihe dị mkpa na mmamịrị nitrogen, urea, mgbe enyere ụmụ nwanyị ndị a na-enye ọbara nri, metụtara nke ukwuu na oke ọmụmụ nwa n'ọmụmụ ihe niile. Ọnụọgụ àkwá ụmụ nwanyị na-enye urea, mgbe ha risịrị nri ọbara, dabere na oke urea (F(11, 360) = 4.69; p < 0.0001), ụmụ nwanyị na-enye oke urea n'etiti 134 µM na 1.34 mM na-etinye àkwá karịa (Foto 4E). Ụmụ nwanyị na-enye oke urea nke 134 µM ma ọ bụ karịa na-etinye àkwá buru ibu karịa ụmụ nwanyị na-enye mmiri (F(10, 4245) = 36.7; p < 0.0001; Foto 4F), na nha larval, ọ bụ ezie na oke urea yiri nke ahụ metụtara ndị nne (F(10, 3305) = 37.9; p < 0.0001) dị iche iche karịa (Foto 4G).
Mmasị zuru oke na ihe ndị na-agbanwe agbanwe na mmamịrị ehi na-achọ. Arabiensis a tụlere na tube iko olfactometer (Foto 5A) metụtara nke ukwuu site na afọ mmamịrị (χ2 = 15.9, df = 4, p = 0.0032; Foto 5B). Nyocha mgbe hoc gasịrị gosiri na isi mmamịrị na-adịghị mma n'ime awa 24 kpatara oke mma karịa ọgwụgwọ ndị ọzọ niile (awa 72: p = 0.0060, awa 168: p = 0.012, pentane: p = 0.00070), E wezụga isi mmamịrị ọhụrụ (p = 0.13; Foto 5B). Ọ bụ ezie na mmasị zuru oke nke anwụnta na-aṅụ ọbara na isi mmamịrị adịghị iche nke ukwuu (χ2 = 8.78, df = 4, p = 0.067; Foto 5C), achọpụtara na ụmụ nwanyị a na-adọrọ mmasị karịa ihe ndị na-agbanwe agbanwe na isi ma e jiri ya tụnyere mmamịrị dị awa 72 ma e jiri ya tụnyere njikwa (p = 0.0066; Foto 5C).
Mmeghachi omume omume nye isi mmamịrị ehi sitere n'okike na nke e ji aka mee n'ịchọ onye ọbịa na onye a na-enye ọbara. Anopheles arabianus. Usoro nke olfactometer nke tube iko (A). Mmata nke ihe ndị na-agbanwe agbanwe site na mmamịrị ehi ọhụrụ na nke ochie gaa na anwụnta (B) na anwụnta na-aṅụ ọbara (C). Chọta mmeghachi omume tentacle nke Lord An. A na-egosi ihe ndị a na-ewepụta site na mmamịrị ehi ochie (D), awa 24 (E), awa 72 (F), na awa 168 (G). Ihe ndị a na-achọpụta na nchọpụta antenna eletrọnịkị (EAD) na-egosi mgbanwe voltaji na nzaghachi na ihe ndị na-arụ ọrụ na mbara isi nke a na-ewepụ site na gas chromatograph ma chọpụta site na ihe nchọpụta ionization ọkụ (FID). Ogwe nha ahụ na-anọchite anya oke nzaghachi (mV) na oge njide (s). A na-egosi njirimara na ọnụego ntọhapụ (µg h-1) nke ihe ndị na-arụ ọrụ na bayoloji. Otu akara mmuke (*) na-egosi nzaghachi dị ala na-agbanwe agbanwe. Akara mmuke abụọ (**) na-egosi azịza a na-apụghị imepụtaghachi. Chọta onye ọbịa (H) na onye na-aṅụ ọbara (I) An.arabiensis nwere mmasị dị iche iche na ngwakọta sịntetik nke isi mmamịrị ehi ọhụrụ na nke ochie. Nkezi oke anwụnta dọtara na aha mkpụrụedemede dị iche iche dị nnọọ iche na ibe ha (otu ụzọ ANOVA site na iji nyocha Tukey post hoc; p < 0.05). Ogwe njehie na-anọchite anya njehie ọkọlọtọ nke nha ahụ
Nwanyị Ann.arabiensis, awa 72 na awa 120 mgbe e risịrị nri ọbara, n'oge a na-amụ nwa, egosighi mmasị ọ bụla maka ihe ndị na-agbanwe agbanwe sitere na mmamịrị ehi ọhụrụ na nke ochie ma e jiri ya tụnyere njikwa pentane (χ2 = 3.07, p > 0.05; Faịlụ mgbakwunye 1: Fig. S1).
Maka ụmụ nwanyị Ann.arabiensis, nyocha GC-EAD na GC-MS chọpụtara ihe mejupụtara ihe ndị na-arụ ọrụ n'ime ahụ mmadụ asatọ, isii, atọ na atọ (Foto 5D-G). Ọ bụ ezie na a hụrụ ọdịiche dị n'ọnụọgụgụ ihe mejupụtara ihe ndị na-akpata nzaghachi electrophysiological, ọtụtụ n'ime ihe ndị a dị na ihe mejupụtara isi ọ bụla nke na-agbanwe agbanwe nke a na-anakọta site na mmamịrị ọhụrụ na nke ochie. Ya mere, maka ihe mejupụtara ọ bụla, naanị ihe mejupụtara ihe ndị mepụtara nzaghachi anụ ahụ sitere na antennae nwanyị dị n'elu oke ka etinyere na nyocha ndị ọzọ.
Oke mwepụta nke ihe ndị na-arụ ọrụ n'ime ihe ndị na-eme ka ihe dị ndụ pụta ìhè n'ime ihe ndị a na-anakọta n'isi mụbara site na 29 µg h-1 na mmamịrị ọhụrụ ruo 242 µg h-1 na mmamịrị dị awa 168, ọkachasị n'ihi p-cresol na m-formaldehyde Phenol na-abawanye yana phenol. N'ụzọ dị iche, ọnụego mwepụta nke ihe ndị ọzọ, dị ka 2-cyclohexen-1-one na decanal, belatara ka afọ mmamịrị na-abawanye, nke jikọtara ya na mbelata a hụrụ na ike mgbaàmà (ọnụọgụ) na chromatogram (Fig. 5D)-G panel aka ekpe) na nzaghachi physiological na ihe ndị a (Fig. 5D-G panel aka nri).
N'ozuzu, ngwakọta sịntetik ahụ nwere nha eke yiri nke ihe ndị na-arụ ọrụ n'ime ihe ndị a chọpụtara na ihe ndị na-agbanwe agbanwe nke oghere isi mmamịrị ọhụrụ na nke ochie (Foto 5D–G) ma o yighị ka ọ na-akpali mmasị dị ukwuu n'ịchọ onye ọbịa (χ2 = 8.15, df = 4, p = 0.083; Fig. 5H) ma ọ bụ anwụnta na-aṅụ ọbara (χ2 = 4.91, df = 4, p = 0.30; Fig. 5I). Agbanyeghị, ntụnyere abụọ dị n'etiti ọgwụgwọ gosiri na anwụnta na-achọ onye ọbịa mara mma nke ukwuu na ngwakọta sịntetik nke mmamịrị dị afọ 24 ma e jiri ya tụnyere njikwa pentane (p = 0.0086; Foto 5H).
Iji chọpụta ọrụ nke ihe mejupụtara ya n'ime ngwakọta sịntetik nke mmamịrị dị awa 24, a tụlere ngwakọta isii na-ewepụ ihe ndị mejupụtara ya n'ime nnwale Y-tube, nke ewepụrụ ihe mejupụtara ya n'otu n'otu. Maka anwụnta na-achọ onye ọbịa, iwepụ ihe mejupụtara ya n'ime ngwakọta ahụ nwere mmetụta dị ukwuu na nzaghachi omume (χ2 = 19.63, df = 6, p = 0.0032; Faịlụ mgbakwunye 1: Foto S2A), ngwakọta niile na-ewepụ ihe ndị mejupụtara ya mara mma karịa Obere karịa agwakọtara ya kpamkpam. N'ụzọ dị iche, iwepụ ihe mejupụtara ya n'ime ngwakọta ahụ emetụtaghị mmeghachi omume omume nke anwụnta na-aṅụ ọbara (χ2 = 11.38, df = 6, p = 0.077), ewezuga decanal, nke butere ọkwa dị ala ma e jiri ya tụnyere ihe mejupụtara ya zuru oke Mmasị (p = 0.022; Faịlụ mgbakwunye 1: Foto S2B).
N'obodo nta nke ịba juru ebe niile na Etiopia, a tụlere uru nke ngwakọta mmamịrị ehi awa 24 n'ịdọta anwụnta n'ọnọdụ ubi ruo abalị iri (Foto 6A). E jidere ma chọpụta ọnụọgụ anwụnta 4,861, nke 45.7% bụ Anthropus.gambiae sl, 18.9% bụ Anopheles pharoensis na 35.4% bụ Culex spp. (Nkọwa ọzọ 1: Tebụl S1). Anopheles arabinis bụ naanị otu n'ime ụdị An.Gambian nke nyocha PCR chọpụtara. Na nkezi, e jidere anwụnta 320 kwa abalị, n'oge ahụ ọnyà ndị nwere ihe e ji mee ihe na-ejide anwụnta karịa ọnyà ndị e ji mee ihe na-enweghị ngwakọta (χ2(0, 3196) = 170.0, p < 0.0001). E tinyere ọnyà ndị na-abụghị nke e ji mee ihe na nke ọ bụla n'ime abalị ise a na-achịkwa na mmalite, etiti, na njedebe nke nnwale ahụ. E jidere ọnụọgụ anwụnta ndị yiri ya na nke ọ bụla n'ime ụzọ abụọ nke ọnyà, nke na-egosi enweghị mmasị n'etiti ụlọ (χ2(0, 1665) = 9 × 10-13, p > 0.05) na enweghị mbelata ọnụọgụgụ mmadụ n'oge ọmụmụ ihe ahụ. Ma e jiri ya tụnyere ọnyà njikwa, ọnụọgụ anwụnta jidere n'ọnyà ndị nwere ngwakọta sịntetik mụbara nke ukwuu: ịchọ onye ọbịa (χ2(0, 2107) = 138.7, p < 0.0001), inye ọbara n'oge na-adịbeghị anya (χ2(0, 650) = 32.2, p < 0.0001) na afọ ime (χ2(0, 228) = 6.27, p = 0.0123; Faịlụ mgbakwunye 1: Tebụl S1). Nke a na-egosipụtakwa na mkpokọta ọnụọgụ anwụnta ejidere: ịchọ onye ọbịa > ịra ọbara > ime > nwa dị ime > nwoke.
Nnyocha ubi nke irè nke ngwakọta isi mmamịrị ehi sịntetik nke awa 24. E mere nnwale ubi na ndịda etiti Etiopia (map), dị nso na obodo Maki (tinye), site na iji ọnyà ọkụ Centers for Disease Control (CDC) (aka nri) n'ụlọ ndị ejikọtara ọnụ, yana imewe square Latin (foto ikuku) (A). Foto CDC nke e ji isi mee na-adọta ma jide Anopheles arabesques nwanyị (B), mana ọ bụghị Anopheles farroes (C), n'ụzọ dị iche, mmetụta dabere na ọnọdụ ahụ. Na mgbakwunye, ọnyà ndị a jidere ọnụọgụgụ dị elu nke anwụnta Culex a na-anabata. (D) Ma e jiri ya tụnyere njikwa. Ogwe ndị dị n'aka ekpe na-anọchite anya nkezi ndeksi nhọrọ nke anwụnta ejidere na ụzọ abụọ nke ihe na-esi ísì ụtọ (akwụkwọ ndụ akwụkwọ ndụ) na ọnyà njikwa (emeghe) (N = 10), ebe ogwe ndị dị n'aka nri na-anọchite anya nkezi ndeksi nhọrọ na ụzọ abụọ nke ọnyà njikwa (emeghe; N = 5). ). Akara ngosi na-egosi ọkwa dị mkpa na ọnụọgụgụ (*p = 0.01 na ***p < 0.0001)
E jidere ụdị atọ ahụ n'ụzọ dị iche iche n'ọnyà ndị nwere ngwakọta sịntetik. Na-achọ onye ọbịa (χ2(1, 1345) = 71.7, p < 0.0001), inye ọbara (χ2(1, 517) = 16.7, p < 0.0001) na afọ ime (χ2(1, 180) = 6.11, p = 0.0134) a nwụchiri .arabiensis n'ọnyà ahụ na-ewepụta ngwakọta sịntetik (Fig. 6B), ebe ọnụọgụ An adịghị iche. A hụrụ Pharoensis n'ọnọdụ dị iche iche nke ahụ mmadụ (Fig. 6C). Maka Culex, naanị mmụba dị ukwuu na ọnụọgụ anwụnta na-achọ ndị ọbịa ka a hụrụ n'ọnyà ndị e ji ngwakọta sịntetik dọọ (χ2(1,1319) = 12.6, p = 0.0004; Fig. 6D), ma e jiri ya tụnyere ọnyà njikwa.
E jiri ọnyà ndị ọbịa dị n'èzí ebe ndị nwere ike ịnọ n'etiti ebe a na-azụ ụmụ na obodo ime obodo na Etiopia chọpụta ma anwụnta ịba na-eji isi mmamịrị ehi dị ka ihe nnọchianya ebe obibi. N'enweghị ihe akaebe, okpomọkụ, na enweghị isi mmamịrị ehi ma ọ bụ na-enweghị ya, anwụnta ejideghị (Faịlụ ọzọ 1: Foto S3). Agbanyeghị, n'ihu okpomọkụ dị elu na isi mmamịrị ehi, a dọtara ma jide anwụnta ịba nwanyị, n'agbanyeghị na ha dị obere, n'agbanyeghị afọ mmamịrị (χ2(5, 25) = 2.29, p = 0.13; Faịlụ ọzọ 1: Foto S3). N'ụzọ dị iche, njikwa mmiri ejideghị anwụnta ịba na okpomọkụ dị elu (Faịlụ ọzọ 1: Foto S3).
Anwụnta ịba na-enweta ma na-ekesa ihe ndị nwere nitrogen site na nri na-akwụghachi ụgwọ na mmamịrị ehi (ya bụ, ọdọ mmiri) iji melite àgwà ndụ, dị ka ụmụ ahụhụ ndị ọzọ [2, 4, 24, 25, 26]. Mmanya ehi bụ ihe dị mfe ịnweta mmeghari ohuru nke jikọtara ya na ebe izu ike maka ndị na-efe efe ịba, dị ka ebe a na-azụ ehi na osisi ndị dị ogologo dị nso n'ụlọ ime obodo na ebe a na-amụ nwa. Anwụnta nwanyị na-achọta ihe a site na isi ísì ma nwee ike ịchịkwa nnabata nke ihe ndị na-efe efe nitrogen na mmamịrị, gụnyere urea, ihe bụ isi nitrogen dị na mmamịrị [15, 16]. Dabere na ọnọdụ ahụ ike nke anwụnta nwanyị, a na-ekenye ihe oriri dị na mmamịrị iji melite ọrụ ụgbọ elu na ndụ nke anwụnta nwanyị na-achọ onye ọbịa, yana njirimara ndụ na ọmụmụ nke ndị mmadụ na-eri ọbara n'oge usoro gonadotropic mbụ. Ya mere, ngwakọta mmamịrị na-arụ ọrụ dị mkpa maka ndị na-efe efe ịba nke mechiri emechi dị ka ndị okenye na-eri nri na-adịghị mma [8], ebe ọ na-enye anwụnta nwanyị ikike inweta ihe ndị dị mkpa nitrogen site na isonye na nri dị obere. Nchọpụta a nwere nnukwu ihe ndị na-ebute ọrịa, ka ụmụ nwanyị na-abawanye ndụ ha, ọrụ. na mmepụta ọmụmụ, nke niile na-emetụta ikike vektọ. Ọzọkwa, omume a nwere ike ịbụ ihe mgbaru ọsọ nke mmemme njikwa vektọ n'ọdịnihu.