Näringsförvärv och distribution integrerar insekters födosökande och livshistoriska egenskaper. För att kompensera för brister i specifika näringsämnen i olika livsstadier kan insekter få dessa näringsämnen genom kompletterande utfodring, till exempel genom att livnära sig på ryggradsdjurssekret i en process som kallas pölar. Myggan Anopheles arabiani verkar vara undernärd och behöver därför näringsämnen för både metabolism och reproduktion. Syftet med denna studie var att bedöma om An. arabiensis-skakning på komirin för näringsförvärv förbättrar livshistoriska egenskaper.
Se till att det är säkert. arabiensis attraherades av lukten av färsk, 24-timmars, 72-timmars och 168-timmars gammal komyrin, och värdsökande och blodmatade (48 timmar efter blodmåltid) honor mättes i en Y-rörsolfaktometer, och dräktiga honor utvärderades för lektest. En kombinerad kemisk och elektrofysiologisk analys användes sedan för att identifiera bioaktiva föreningar i komyrin i alla fyra åldersklasser. Syntetiska blandningar av bioaktiva föreningar utvärderades i Y-rörs- och fältförsök. För att undersöka komyrin och dess huvudsakliga kväveinnehållande förening urea som potentiella kompletterande dieter för malariavektorer mättes utfodringsparametrar och livshistoriska egenskaper. Andelen honmyggor och mängden komyrin och urea som absorberades bedömdes. Efter utfodring bedömdes honornas överlevnad, fastbunden flygning och reproduktion.
Sök efter värdens blod och näring. I laboratorie- och fältstudier drogs araber till den naturliga och syntetiska doften av färsk och lagrad komjölk. Dräktiga honor var likgiltiga för komjölksreaktioner på lekplatser. Värdsökande och blodsugande honor absorberar aktivt komjölk och urea och fördelar dessa resurser enligt livshistoriska avvägningar som en funktion av fysiologiskt tillstånd för flygning, överlevnad eller reproduktion.
Anopheles arabinis samlar in och distribuerar komjölk för förbättrade livshistoriska egenskaper. Kompletterande utfodring med komjölk påverkar vektorkapaciteten direkt genom att öka den dagliga överlevnaden och vektortätheten, och indirekt genom att förändra flygaktiviteten och bör därför övervägas i framtida modeller.
Näringsförvärv och distribution integrerar insekters födosökande och livshistoriska egenskaper [1,2,3]. Insekter kan välja och förvärva föda och utföra kompenserande födointag baserat på födotillgänglighet och näringsbehov [1, 3]. Fördelningen av näringsämnen beror på livshistorisk process och kan leda till olika krav på kostkvalitet och kvantitet i olika livsstadier hos insekter [1, 2]. För att kompensera för brister i specifika näringsämnen kan insekter få dessa näringsämnen genom kompletterande föda, såsom på lera, olika avföringar och sekret från ryggradsdjur, och kadaver, en process som kallas pölar [2]. Även om en mängd olika fjärils- och malarter primärt beskrivs, förekommer vattenhål även i andra insektsordningar, och attraktion till och födointag på dessa typer av resurser kan ha betydande effekter på hälsan och andra livshistoriska egenskaper [2, 4, 5, 6], 7]. Malariamyggan Anopheles gambiae sensu lato (sl) framträder som en "undernärd" vuxen [8], så vattning kan spela en viktig roll i dess livshistoriska egenskaper, men detta beteende har hittills försummats. Användningen av omrörning som ett sätt att öka näringsintaget i denna viktiga vehikel förtjänar uppmärksamhet eftersom detta kan få betydande epidemiologiska konsekvenser.
Kväveintaget hos vuxna honmyggor av släktet Anopheles är begränsat på grund av låga kalorireserver som transporteras från larvstadiet och ineffektivt utnyttjande av blodmjöl [9]. Honmyggor av släktet Ann.gambiae sl kompenserar vanligtvis för detta genom att komplettera med extra blodmjöl [10, 11], vilket utsätter fler människor för risken att smittas av sjukdomen och myggor för större risk för predation. Alternativt kan myggor använda kompletterande utfodring av ryggradsdjursavföring för att få kväveföreningar som förbättrar anpassning och flygmanövrerbarhet, vilket demonstrerats av andra insekter [2]. I detta avseende är den starka och distinkta attraktionen hos en av syskonarterna inom An. Det gambiska sl-artkomplexet, Anopheles arabinis, färsk och lagrad komyrin [12,13,14], intressant. Anopheles arabinis är opportunistisk i sina värdpreferenser och är känd för att umgås med och livnära sig på nötkreatur. Komyrin är en resurs rik på kväveföreningar, där urea står för 50–95 % av det totala kvävet i färsk komyrin [15, 16]. Eftersom Medan ko-urin åldras, utnyttjar mikroorganismer dessa resurser för att minska komplexiteten hos kväveföreningar inom 24 timmar [15]. Med den snabba ökningen av ammoniak, i samband med en minskning av organiskt kväve, frodas alkalofila mikroorganismer (av vilka många producerar föreningar som är giftiga för myggor) [15], vilka kan vara honor av Ann. arabiensis som företrädesvis attraheras av urin som är lagrad 24 timmar eller mindre [13, 14].
I denna studie undersöktes värdmyggor och blodmatade mygg. Under sin första gonadotropincykel utvärderades arabiensis för förvärv av kvävehaltiga föreningar, inklusive urea, genom urinblandning. Därefter genomfördes en serie experiment för att bedöma hur honmyggor allokerar denna potentiella näringsresurs för förbättrad överlevnad, reproduktion och vidare födosök. Slutligen utvärderades lukten av färsk och lagrad komyrin för att avgöra om dessa gav tillförlitliga ledtrådar för värdmyggor och blodmatade mygg. I sitt sökande efter denna potentiella näringsresurs upptäckte arabiensis kemiska korrelationer bakom den observerade differentiella attraktionskraften. Syntetiska luktblandningar av flyktiga organiska föreningar (VOC) identifierade i 24-timmars lagrad urin utvärderades ytterligare under fältförhållanden, vilket utökade resultaten som erhölls under laboratorieförhållanden och demonstrerade effekten av lukten av bovin urin på olika fysiologiska tillstånd. Myggattraktion. De erhållna resultaten bekräftar att An. arabiensis förvärvar och distribuerar kvävehaltiga föreningar som finns i ryggradsdjursurin för att påverka livshistoriska egenskaper. Dessa resultat diskuteras i samband med potentiella epidemiologiska konsekvenser och hur de kan användas för vektorövervakning och kontroll.
Anopheles arabicans (Dongola-stam) hölls vid 25 ± 2 °C, 65 ± 5 % RF och en 12:12 timmars ljus:mörkercykel. Larverna föddes upp i plastbrickor (20 cm × 18 cm × 7 cm) fyllda med destillerat vatten och matades med Tetramin® fiskfoder (Tetra Werke, Melle, Tyskland). Puppor samlades in i 30 ml-koppar (Nolato Hertila, Åstorp, SE) och överfördes sedan till Bugdorm-burar (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science, Taichung, Taiwan) för att tillåta vuxna individer att komma fram. Vuxna individer fick en 10 % sackaroslösning ad libitum fram till 4 dagar efter uppkomst (dpe), varefter värdsökande honor erbjöds diet omedelbart före experimentet, eller svältes över natten med destillerat vatten före experimentet, enligt beskrivningen nedan. Honor som användes för flygtubsförsök svältes endast i 4–6 timmar. med vatten ad libitum. För att förbereda blodsugande myggor för efterföljande bioanalyser försågs 4 dpe-honor med defibrotiskt fårblod (Håtunalab, Bro, SE) med hjälp av ett membranutfodringssystem (Hemotek Discovery Workshops, Accrington, Storbritannien). Helt överbelastade honor överfördes sedan till individuella burar och fick diet direkt, enligt beskrivningen nedan, eller 10 % sackaros ad libitum i 3 dagar före experimenten som beskrivs nedan. De senare honorna användes för flygrörsbioanalyser och överfördes till laboratoriet, och fick sedan destillerat vatten ad libitum i 4–6 timmar före experimentet.
Matningsanalyser användes för att kvantifiera urin- och ureakonsumtion hos vuxna anarabiska honor. Värdsökande och bloduppfödda honor fick en diet innehållande 1 % utspädd färsk och lagrad komurin, olika koncentrationer av urea och två kontroller (10 % sackaros och vatten) i 48 timmar. Dessutom tillsattes livsmedelsfärg (1 mg ml-1 xylencyanid FF; CAS 2650-17-1; Sigma-Aldrich, Stockholm, SE) till kosten och levererades i en 4 × 4-matris i 250 µl mikrocentrifugrör (Axygen Scientific, Union City, CA, USA; Figur 1A). Fyll till kanten (~300 µl). För att undvika konkurrens mellan myggor och potentiella effekter av färgämnet, placera 10 myggor i en stor petriskål (12 cm i diameter och 6 cm i höjd; Semadeni, Ostermundigen, CH; Figur 1A) i fullständigt mörker vid 25 ± 2 cm °C och 65 ± 5 % relativ luftfuktighet. fuktighet. Dessa experiment upprepades 5 till 10 gånger. Efter exponering för diet placerades myggorna vid -20 °C tills vidare analys.
Leta efter nöturin och urea som absorberats av värden och den blodsugande honan Anopheles arabianus. I utfodringstestet (A) fick honmyggor en diet bestående av färsk och lagrad komurin, olika koncentrationer av urea, sackaros (10 %) och destillerat vatten (H2O). Värdsökande (B) och bloduppfödda (C) honor absorberade mer sackaros än någon annan testad diet. Observera att värdsökande honor absorberade 72-timmars komurin mindre än 168-timmars komurin (B). Den genomsnittliga totala kvävehalten (± standardavvikelse) i urin representeras i infällningen. Värdsökande (D, F) och blodsugande (E, G) honor tar upp urea på ett dosberoende sätt. Genomsnittliga inhalerade volymer (D, E) med olika bokstavsnamn skilde sig signifikant från varandra (envägs ANOVA med Tukeys post hoc-analys; p < 0,05). Felstaplar representerar standardfelet för medelvärdet (BE). Den raka streckade linjen representerar den loglinjära regressionslinjen (F, G)
För att frigöra absorberad föda placerades myggorna individuellt i 1,5 ml mikrocentrifugrör innehållande 230 µl destillerat vatten och vävnaden sönderdelades med hjälp av en engångsstöt och sladdlös motor (VWR International, Lund, SE), följt av centrifugering vid 10 krpm i 10 minuter. Supernatanten (200 µl) överfördes till en 96-brunns mikroplatta (Sigma-Aldrich) och absorbansen (λ620) bestämdes med hjälp av en spektrofotometerbaserad mikroplattläsare (SPECTROStar® Nano, BMG Labtech, Ortenberg, DE) nm). Alternativt maldes myggorna i 1 ml destillerat vatten, varav 900 µl överfördes till en kyvett för spektrofotometrisk analys (λ 620 nm; UV 1800, Shimadzu, Kista, SE). För att kvantifiera kostintaget framställdes en standardkurva genom serieutspädning för att ge 0,2 µl till 2,4 µl av 1 mg ml-1 xylen. cyanid. Därefter användes den optiska densiteten hos kända färgämneskoncentrationer för att bestämma mängden föda som varje mygga intog.
Volymdata analyserades med hjälp av envägsvariansanalys (ANOVA) följt av Tukeys post hoc parvisa jämförelser (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc., Cary, NC, USA, 1989–2007). Linjära regressionsanalyser beskrev koncentrationsberoende ureaintag och jämförde responser mellan värdsökande och blodsugande myggor (GraphPad Prism v8.0.0 för Mac, GraphPad Software, San Diego, CA, USA).
Cirka 20 µl urinprover från varje åldersgrupp bands på Chromosorb® W/AW (10 mg 80/100 mesh, Sigma Aldrich) och inkapslades i plåtkapslar (8 mm × 5 mm). Kapslarna infördes i förbränningskammaren i en CHNS/O-analysator (Flash 2000, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) för att bestämma kvävehalten i färsk och lagrad urin enligt tillverkarens protokoll. Totalt kväve (g N l-1) kvantifierades baserat på kända ureakoncentrationer som användes som standard.
För att bedöma effekten av kosten på värdsökande och blodsugande honors överlevnad placerades myggor individuellt i stora petriskålar (12 cm i diameter och 6 cm i höjd; Semadeni) med ett nätbelagt hål i locket (3 cm i diameter) för ventilation och födoförsörjning. Dieter tillhandahölls direkt efter 4 dpe och inkluderade 1 % utspädd färsk och lagrad komurin, fyra koncentrationer urea och två kontroller, 10 % sackaros och vatten. Varje diet pipetterades på en tandtampong (DAB Dental AB, Upplands Väsby, SE) som fördes in i en 5 ml spruta (Thermo Fisher Scientific, Göteborg, SE), kolven togs bort och placerades ovanpå en petriskål (figur 1).1A). Ändra din diet varje dag. Underhåll laboratoriet enligt beskrivningen ovan. Överlevande myggor räknades två gånger om dagen, medan döda myggor kasserades tills den sista myggan dog (n = 40 per behandling). Överlevnaden hos myggor som utfodrades med olika dieter analyserades statistiskt med hjälp av Kaplan-Meyer-överlevnadskurvor och log-rank-tester. för att jämföra överlevnadsfördelningen mellan dieter (IBM SPSS Statistics 24.0.0.0).
En specialbyggd flygande myggkvarn baserad på Attisano et al.[17], tillverkad av 5 mm tjocka klara akrylpaneler (10 cm breda x 10 cm långa x 10 cm höga) utan fram- och bakpaneler (Fig. 3: överst). En svängbar enhet med ett vertikalt rör tillverkat av en gaskromatografikolonn (0,25 mm innerdiameter; 7,5 cm lång) med ändar limmade till en insektsnål upphängd mellan ett par neodymmagneter 9 cm från varandra. Ett horisontellt rör tillverkat av samma material (6,5 cm lång) delade det vertikala röret i två delar för att bilda en sammanbunden arm och en arm som bar en liten bit aluminiumfolie som en ljusavbrytande signal.
24 timmar svältande honor fick ovanstående diet i 30 minuter innan de hölls i schack. Fullmatade honmyggor sövdes sedan individuellt på is i 2-3 minuter och fästes på insektsnålar med bivax (Joel Svenssons Vaxfabrik AB, Munka Ljungby, SE) och bands sedan fast vid armarna på de horisontella rören. Flygande kvarn. Varv per flygning registrerades av en specialbyggd datalogger, lagrades sedan och visades med hjälp av PC-Lab 2000™-programvara (v4.01; Velleman, Gavere, BE). Flygkvarnen placerades i ett klimatreglerat rum (12 h:12 h, ljus:mörker, 25 ± 2 °C, 65 ± 5 % RF).
För att visualisera mönstret av flygaktivitet beräknades den totala flugna sträckan (m) och det totala antalet på varandra följande flygaktiviteter per timme under en 24-timmarsperiod. Dessutom jämfördes de genomsnittliga sträckorna som flögs av enskilda kvinnor mellan behandlingarna och analyserades med hjälp av envägs ANOVA och Tukeys post hoc-analys (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.), där genomsnittlig sträcka betraktades som en beroende variabel, medan behandlingen är en oberoende faktor. Dessutom beräknas det genomsnittliga antalet skott i 10-minutersintervall.
För att bedöma kostens effekt på reproduktionsförmågan hos An.arabiensis, överfördes sex honor (4 dpe) direkt till Bugdorm-burar (30 cm × 30 cm × 30 cm) efter blodprovtagning och fick sedan experimentkosten i 48 timmar enligt beskrivningen ovan. Dieterna togs sedan bort och lekkoppar (30 ml; Nolato Hertila) fyllda med 20 ml destillerat vatten tillhandahölls på den tredje dagen i 48 timmar, med utbyte var 24:e timme. Upprepa varje diet 20–50 gånger. Äggen räknades och registrerades för varje experimentbur. Delprover av ägg användes för att bedöma variationen i medelstorlek och längd hos enskilda ägg (n ≥ 200 per diet) med hjälp av ett Dialux-20-mikroskop (DM1000; Ernst Leitz Wetzlar, Wetzlar, Tyskland) utrustat med en Leica-kamera (DFC) 320 R2; Leica Microsystems Ltd., Tyskland). De återstående äggen förvarades i ett klimatkontrollerat rum under standarduppfödningsförhållanden i 24 timmar, och ett delprov av nyligen uppkomna larver i första stadiet (n ≥ 200 per diet) mättes, enligt beskrivningen ovan. Antalet ägg och storleken på ägg och larver jämfördes mellan behandlingar och med hjälp av envägs-ANOVA och Tukeys post hoc-analys (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Flyktiga ämnen i headspace-provet från färsk (1 timme efter provtagning), 24 timmar, 72 timmar och 168 timmar lagrad urin samlades in från prover från zebu-nötkreatur, arsi-raser. För enkelhetens skull samlades urinprover in tidigt på morgonen medan korna fortfarande var i stallet. Urinprover samlades in från 10 individer och 100–200 ml av varje prov överfördes till individuella polyamid-bakpåsar (Toppits Cofresco, Frischhalteprodukte GmbH and Co., Minden, Tyskland) i 3 liters polyamid med lock i vinylkloridplastfat. Flyktiga ämnen i headspace-provet från varje nöturinprov samlades in antingen direkt (färskt) eller efter mognad vid rumstemperatur i 24 timmar, 72 timmar och 168 timmar, dvs. varje urinprov var representativt för varje åldersgrupp.
För insamling av flyktiga ämnen i gashuvudet användes ett slutet system för att cirkulera en gasström filtrerad med aktivt kol (100 ml min-1) genom en polyamidpåse till adsorptionskolonnen i 2,5 timmar med hjälp av en membranvakuumpump (KNF Neuberger, Freiburg, Tyskland). Som kontroll utfördes insamling av gashuvudet från en tom polyamidpåse. Adsorptionskolonnen var tillverkad av teflonrör (5,5 cm x 3 mm innerdiameter) innehållande 35 mg Porapak Q (50/80 mesh; Waters Associates, Milford, MA, USA) mellan glasullspluggar. Före användning spolades kolonnen med 1 ml omdestillerad n-hexan (Merck, Darmstadt, Tyskland) och 1 ml pentan (99,0 % rent lösningsmedel GC-kvalitet, Sigma Aldrich). De adsorberade flyktiga ämnena eluerades med 400 μl pentan. Insamlingarna i gashuvudet samlades och förvarades sedan vid -20 °C tills de användes för vidare analys.
Beteendemässiga reaktioner hos värdsökande och blodätande An. Flyktiga extrakt från huvudutrymmet insamlade från färsk, 24-timmars, 72-timmars och 168-timmars lagrad urin analyserades för flyktiga extrakt från Arabidopsis-myggor med hjälp av en rak olfaktometer i glasrör [18]. Experimenten utfördes under ZT 13-15, den högsta perioden för Ans hemsökande aktivitet. Arab [19]. En olfaktometer i glasrör (80 cm × 9,5 cm id) belystes med 3 ± 1 lx rött ljus ovanifrån. Kolfiltrerat och befuktat luftflöde (25 ± 2 °C, 65 ± 2 % relativ fuktighet) passerade bioanalysen vid 30 cm s-1. Luft passerar genom en serie nätskärmar i rostfritt stål, vilket skapar ett laminärt flöde och en enhetlig plymstruktur. Tandtampongdispenser (4 cm × 1 cm; L:D; DAB Dental AB), upphängd från en 5 cm spole på olfaktometerns vindvända ände, med stimulatorbyten var 5:e minut. För analys användes 10 μl av varje headspace-extrakt, utspätt 1:10, som stimulus. En lika stor mängd pentan användes som kontroll. Individuella värdsökande eller blodsugande myggor placerades i individuella frisättningsburar 2-3 timmar före experimentets start. Frisättningsburen placerades på olfaktometerns nedvindssida, och myggorna fick acklimatisera sig i 1 minut, varefter burens fjärilsventil öppnades för att släppa. Attraktion till behandling eller kontroll analyserades som andelen myggor som kom i kontakt med källan inom 5 minuter efter frisättning. Varje flyktigt headspace-extrakt och kontroll replikerades minst 30 gånger, och för att undvika effekterna av en och samma dag testades samma antal behandlingar och kontroller varje experimentdag. Sökandesvar från värd- och blodmatade Ans. Arabiska kontra headspace-uppsättningar analyserades med hjälp av nominell logistisk regression följt av parvisa jämförelser för udda förhållanden (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institutet AB).
Ans lekrespons. Huvudutrymmesextrakt från färsk och lagrad komjölk analyserades i Bugdorm-burar (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science). Plastkoppar (30 ml; Nolato Hertila) fyllda med 20 ml destillerat vatten utgjorde leksubstratet och placerades i motsatta hörn av buren, 24 cm från varandra. Behandlingskoppar justerades med 10 μl av varje huvudutrymmesextrakt i en utspädning på 1:10. En lika stor mängd pentan användes för att justera kontrollkoppen. Behandlings- och kontrollkoppar byttes mellan varje experiment för att kontrollera för positionseffekter. Tio blodmatade honor släpptes ut i experimentburar vid ZT 9-11 och äggen i kopparna räknades 24 timmar senare. Formeln för att beräkna lekindex är: (antal ägg lagda i behandlingskoppen – antalet ägg lagda i kontrollkoppen)/(det totala antalet ägg lagda). Varje behandling upprepades 8 gånger.
Gaskromatografisk analys och elektronantennmönsterdetektering (GC-EAD) av honlig An.arabiensis utfördes enligt tidigare beskrivning [20]. Kortfattat separerades färska flyktiga extrakt från headspace med hjälp av en Agilent Technologies 6890 GC (Santa Clara, CA, USA) utrustad med en HP-5-kolonn (30 m × 0,25 mm id, 0,25 μm filmtjocklek, Agilent Technologies). och åldrande urin. Väte användes som mobil fas med en genomsnittlig linjär flödeshastighet på 45 cm s-1. Varje prov (2 μl) injicerades i 30 sekunder i splitless-läge med en inloppstemperatur på 225 °C. GC-ugnstemperaturen programmerades från 35 °C (3 minuters uppehåll) till 300 °C (10 minuters uppehåll) vid 10 °C min-1. I GC-utloppsdelaren tillsattes 4 psi kväve och delades 1:1 i ett Gerstel 3D/2 lågdödvolymskors (Gerstel, Mülheim, Tyskland) mellan flamjoniseringsdetektorn och EAD. GC-utloppskapillären för EAD fördes genom en Gerstel ODP-2-överföringsledning, som spårar GC-ugnstemperaturen plus 5 °C, in i ett glasrör (10 cm × 8 mm), där det blandades med kolfiltrerad, fuktad luft (1,5 l min-1). Antennen placerades 0,5 cm från rörets utlopp. Varje enskild mygga stod för ett replikat, och för värdsökande myggor utfördes minst tre replikat på urinprover av varje ålder.
Identifiering av bioaktiva föreningar i headspace-samlingar av färsk och lagrad bovin urin med hjälp av en kombinerad GC- och masspektrometer (GC-MS; 6890 GC och 5975 MS; Agilent Technologies) för att framkalla antennresponser i GC-EAD-analys, som arbetade i elektronpåverkansjoniseringsläge vid 70 eV. GC:n var utrustad med en HP-5MS UI-belagd kapillärkolonn av smält kiseldioxid (60 m × 0,25 mm innerdiameter, 0,25 μm filmtjocklek) med helium som mobil fas och en genomsnittlig linjär flödeshastighet på 35 cm s-1. Ett 2 μl prov injicerades med samma injektorinställningar och ugnstemperatur som för GC-EAD-analysen. Föreningar identifierades baserat på deras retentionstid (Kovát-index) och masspektra jämfört med det anpassade biblioteket och NIST14-biblioteket (Agilent). Identifierade föreningar bekräftades genom att injicera autentiska standarder (ytterligare fil 1: tabell S2). För kvantifiering användes heptylacetat (10 ng, 99,8 % kemisk renhet, Aldrich) injicerades som en extern standard.
Utvärdering av effekten av en syntetisk luktblandning bestående av bioaktiva föreningar identifierade i färsk och lagrad urin för att attrahera värdsökande och blodsugande Ans.arabiensis, med samma olfaktometer och protokoll som ovan. Syntetiska blandningar imiterade sammansättningen och proportionerna av föreningar i blandade flyktiga extrakt från färsk, 24-timmars, 48-timmars, 72-timmars och 168-timmars lagrad urin (Figur 5D-G; Ytterligare fil 1: Tabell S2). För analys, använd 10 μl av en 1:100-utspädning av den helt syntetiska blandningen, med en total frisättningshastighet som sträcker sig från cirka 140-2400 ng h-1, för att bedöma attraktivitet för värd- och blodsugande myggor. Därefter utförs testet på kompletta blandningar, där subtraktiva blandningar av enskilda föreningar i den kompletta blandningen avlägsnas. Sökresponser från värd- och blodmatade Ans. Arab kontra syntetiska och subtraktiva blandningar analyserades med nominell logistisk regression följt av parvisa jämförelser för udda förhållanden. (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
För att bedöma om komurin kunde fungera som en värdhabitat för malariamyggor, placerades färsk och lagrad komurin, insamlad enligt beskrivningen ovan, och vatten i 3-liters hinkar (100 ml) med nätmaskor och placerades i betesfällor för värdmyggor. (BG-HDT-version; BioGents, Regensburg, Tyskland). Tio fällor placerades 50 m från varandra i betesmark, 400 m från bysamhället (Silay, Etiopien, 5°53´24´´N, 37°29´24´´Ö) och utan boskap, på permanenta häckningsplatser och i byar. Fem fällor värmdes upp för att simulera närvaron av en värdmygga, medan fem fällor lämnades ouppvärmda. Varje behandlingsplats roteras varje natt i totalt fem nätter. Antalet myggor som fångats i fällor betade med urin av olika åldrar jämfördes med hjälp av logistisk regression med en beta-binomialfördelning (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
I en malariaendemisk by nära staden Maki, Oromia-regionen, Etiopien (8° 11′ 08″ N, 38° 81′ 70″ Ö; Figur 6A). Studien genomfördes mellan mitten av augusti och mitten av september före den årliga inomhusbesprutningen med restsjuka, tillsammans med en lång regnperiod. Fem par hus (20–50 m från varandra) belägna i utkanten av byn valdes ut för studien (Fig. 6A). Kriterierna som användes för att välja husen var: inga djur tillåtna i huset, ingen matlagning inomhus (dragning av ved eller träkol) var tillåten (åtminstone under försöksperioden), och hus med högst två invånare, som sov i icke-insekticider. under det behandlade myggnätet. Etiskt godkännande har beviljats ​​av Institutional Research Ethics Review Board (IRB/022/2016) vid naturvetenskapliga fakulteten (CNS-IRB), Addis Abeba universitet, i enlighet med riktlinjerna som fastställts i World Medical Associations deklaration i Helsingfors. Samtycke från varje hushållsföreståndare erhölls med hjälp av hälso- och sjukvårdspersonal. Hela processen stöds av lokala förvaltningar på distrikts- och avdelningsnivå ("kebele"). Experimentdesignen följde en 2 × 2 latinsk kvadratdesign, där syntetiska blandningar och kontroller tilldelades parade hus den första natten och byttes mellan husen nästa experimentnatt. Denna process upprepades tio gånger. För att uppskatta myggaktiviteten i utvalda hus ställdes dessutom CDC-fällorna in för att köras fem på varandra följande nätter i början, mitten och slutet av fältförsöket vid samma tidpunkt på dagen.
En syntetisk blandning innehållande sex bioaktiva föreningar löstes i heptan (97,0 % lösningsmedel GC-kvalitet, Sigma Aldrich) och frisattes vid 140 ng h-1 med hjälp av en bomullsveke-dispenser [20]. Veke-dispensern tillät att alla föreningar frisattes i konstanta proportioner under hela det 12 timmar långa experimentet. Heptan användes som kontroll. Ampullen hängdes upp bredvid ingångspunkten för Centers for Disease Control and Prevention (CDC) ljusfälla (John W. Hock Company, Gainesville, FL, USA; Figur 6A). Fällorna hängdes 0,8–1 m över marken, nära fotändan av sängen, och en volontär sov under ett obehandlat myggnät och opererades mellan 18:00 och 06:30. Myggor som fångats efter kön och fysiologisk status (oätna, matade, halvdräktiga och dräktiga [21] screenades därefter med hjälp av polymeraskedjereaktionsanalys (PCR) för att identifiera arten som morfologiskt identifierats som A. gambiae sl. Medlemmar av komplexet [23]. I I fältstudien analyserades fällfångning av parhus med hjälp av en nominell logistisk anpassningsmodell, där attraktion var den beroende variabeln och behandling (syntetisk blandning vs kontroll) var den fixerade effekten (JMP® 14.0.0. SAS Institute Inc.). Här rapporterar vi χ²- och p-värdena från likelihood ratio-testet.
Utvärdera om det är säkert. arabiensis kunde få urin, dess huvudsakliga kvävekälla, urea, genom direkt utfodring, inom 48 timmar efter administrering i 4 dagar efter (dpe) utfodringsförsök med värdsökande och blodmatade honor (Fig. 1A). Både värdsökande och blodsugande honor absorberade signifikant mer sackaros än någon annan diet eller vatten (F(5 426) = 20,15, p < 0,0001 respektive F(5 299) = 56,00, p < 0,0001; Fig. 1B, C). Dessutom åt värdsökande honor mindre i urinen vid 72 timmar jämfört med urin vid 168 timmar (Fig. 1B). När de erbjöds en diet innehållande urea absorberade värdsökande honor en signifikant större mängd urea vid 2,69 mM jämfört med alla andra koncentrationer och vatten, medan den inte kunde skiljas från 10 % sackaros (F(10 813)). = 15,72, p < 0,0001; Figur 1D). Detta stod i kontrast till responsen hos bloduppfödda honor, som vanligtvis absorberade signifikant mer ureainnehållande dieter än vatten, om än signifikant mindre än 10 % sackaros (F(10 557) = 78,35, p < 0,0001; Figur 1).1E). Dessutom, vid jämförelse mellan de två fysiologiska tillstånden, absorberade flebotomiserade honor mer urea än värdsökande honor vid de lägsta koncentrationerna, och dessa honor absorberade liknande mängder urea vid högre koncentrationer (F(1 953) = 78,82, p < 0,0001; Fig. 1F, G). Medan intag från en ureainnehållande diet verkade ha optimala värden (Fig. 1D, E), kunde honor i båda fysiologiska tillstånden modulera mängden absorberad urea över hela intervallet av ureakoncentrationer på ett loglinjärt sätt (Fig. 1F, G). På liknande sätt verkar myggor kontrollera sitt kväveupptag genom att reglera mängden absorberad urin, eftersom mängden kväve i urinen återspeglas i den absorberade mängden (figur 1B, C och B i infällda bilder).
För att bedöma effekterna av urin och urea på värdsökande och blodsugande myggs överlevnad, matades honor med urin i alla fyra åldrar (färsk, 24 timmar, 72 timmar och 168 timmar efter deponering) och ett intervall av ureakoncentrationer, samt destillerat vatten och 10 % sackaros fungerade som kontroll (Figur 2A). Denna överlevnadsanalys visade att kosten hade en signifikant effekt på den totala överlevnaden hos värdsökande honor (urin: χ2 = 108,5, df = 5, p < 0,0001; urea: χ2 = 122,8, df = 5, p < 0,0001; Fig. 2B, C) och blodmatade honor (urin: χ2 = 93,0, df = 5, p < 0,0001; urea: χ2 = 137,9, df = 5, p < 0,0001; Figur 2D, E). I alla experiment hade honor som fick en diet av urin, urea och vatten signifikant lägre överlevnadsnivåer jämfört med honor som fick en sackarosdiet (Figur 2B-E). Värdsökande honor som fick färsk och gammal urin uppvisade olika överlevnadsnivåer, där de som fick 72 timmar gammal urin (p = 0,016) hade den lägsta överlevnadssannolikheten (Fig. 2B). Dessutom överlevde värdsökande honor som fick 135 mM urea längre än vattenkontroller (p < 0,04) (Fig. 2C). Jämfört med vatten överlevde kvinnor som fick färsk urin och 24-timmarsurin längre (p = 0,001 respektive p = 0,012; Figur 2D), medan kvinnor som fick 72-timmarsurin överlevde längre än de som fick färsk urin och 24-timmarsurin (p < 0,0001 respektive p = 0,013; Figur 2D). När de fick 135 mM urea... överlevde längre än alla andra koncentrationer av urea och vatten (p < 0,013; figur 2E).
Överlevnad hos värd- och blodsugande honmyggor av typen Anopheles arabinis som livnär sig på komyrin och urea. I bioanalysen (A) fick honmyggor en diet bestående av färsk och lagrad komyrin, olika koncentrationer av urea, sackaros (10 %) och destillerat vatten (H2O). Överlevnaden hos värdsökande (B, C) och blodsugande (D, E) myggor registrerades var 12:e timme tills alla honor som livnär sig på urin (B, D) och urea (C, E), och kontrollerna, sackaros och vatten, var döda.
Det totala avståndet och antalet skott som bestämdes i flygkvarnstestet under en 24-timmarsperiod skilde sig mellan värdsökande och blodsugande myggor, vilka uppvisade mindre flygaktivitet totalt sett (Fig. 3). Värdsökande myggor som tillhandahöll färsk och lagrad urin eller sackaros och vatten uppvisade distinkta flygmönster (Fig. 3), där honor som livnärde sig på färsk urin var mer aktiva i gryningen, medan de som matades med 24- och 168-timmarsgammal urin. Myggor som livnärde sig på urin uppvisade olika flygmönster och var främst dagaktiva. Honmyggor som tillhandahöll sackaros eller 72-timmarsgammal urin visade aktivitet under hela 24-timmarsperioden, medan honor som tillhandahöll vatten var mer aktiva under mitten av perioden. Myggor som matades med sackaros uppvisade de högsta aktivitetsnivåerna sent på kvällen och tidigt på morgonen, medan de som intog 72-timmarsgammal urin upplevde en stadig minskning av aktiviteten under 24 timmar (Figur 3).
Flygprestanda hos den jägare-sökande blodsugande honmyggan Anopheles arabinis som livnär sig på komurin och urea. I flygkvarnstestet fästes honmyggor som livnär sig på färsk och lagrad komurin, olika koncentrationer av urea, sackaros (10 %) och destillerat vatten (H2O) vid horisontella, fritt roterande armar (ovan). För värdsökande (vänster) och blodsugande (höger) honor registrerades det totala avståndet och antalet flygningar per timme för varje diet under en 24-timmarsperiod (mörk: grå; ljus: vit). Genomsnittligt avstånd och genomsnittligt antal flygningar visas till höger om dygnsrytmsaktivitetsgrafen. Felstaplar representerar standardfelet för medelvärdet. Statistisk analys se text
Generellt sett följde den totala flygaktiviteten hos värdsökande honor ett mönster som liknade flygsträckan över en 24-timmarsperiod. Genomsnittlig flygsträcka påverkades signifikant av intagen kost (F(5, 138) = 28,27, p < 0,0001), och värdsökande honor som intog 72 timmar urin flög signifikant längre sträckor jämfört med alla andra dieter (p < 0,0001), och sackarosmatade myggor flög längre än färska (p = 0,022) och 24 timmars lagrad urin (p = 0,022) myggor. I motsats till det flygaktivitetsmönster som beskrivs av urindieten uppvisade ureamatade värdsökande honor ihållande flygaktivitet över en 24-timmarsperiod, med en topp under den andra halvan av den mörka fasen (Fig. 3). Även om aktivitetsmönstren var likartade ökade värdsökande honor som matades med urea signifikant genomsnittlig flygsträcka beroende på den absorberade koncentrationen (F(5, 138) = 1310,91, p < 0,0001). Värdsökande honor som fick någon koncentration av urea flög längre än honor som fick antingen vatten eller sackaros (p < 0,03).
Den totala flygaktiviteten hos blodsugande myggor var stabil och upprätthöll över 24 timmar över alla dieter, med ökad urinaktivitet under andra halvan av den mörka perioden för honor som matades med vatten såväl som hos honor som matades färska och 24 timmar gamla (bild 3). Medan urindieten signifikant påverkade den genomsnittliga flygsträckan hos blodmatade honor (F(5, 138) = 4,83, p = 0,0004), gjorde ureadaten inte det (F(5, 138) = 1,36, p = 0,24) med annan urin och kontrolldiet (färsk, p = 0,0091; 72 timmar, p = 0,0022; 168 timmar, p = 0,001; sackaros, p = 0,0017; dH2O, p = 0,036).
Effekterna av urin- och ureafödande på reproduktionsparametrar utvärderades i äggläggningsbioanalyser (Figur 4A) och undersöktes utifrån antalet ägg som lagts av varje hona, äggstorlek och nykläckta larver i första stadiet. Antalet ägg som lagts. Urinmatade arabiska honor varierade beroende på diet (F(5,222) = 4,38, p = 0,0008; Fig. 4B). Honor som fick urin- och blodmjöl under 24 timmar lade signifikant fler ägg än honor som fick andra urindieter och liknade de som fick sackaros (Fig. 4B). Likaså varierade storleken på ägg som lagts av urinmatade honor beroende på diet (F(5,209) = 12,85, p <0,0001), där honor som fick urin och sackaros under 24 timmar lade signifikant större ägg än honor som fick vatten, medan äggen från honor som fick 168 timmar urin var signifikant mindre (Fig. 4C). Dessutom påverkade urindieten larvstorleken signifikant. (F(5, 187) = 7,86, p < 0,0001), med betydligt större larver som kom ut ur ägg lagda av 24- och 72-timmars gamla urinmatade honor än från ägg lagda från ägglarver. Vattenmatade och 168-timmars gamla urinmatade honor (Figur 4D).
Reproduktionsförmågan hos honmyggor av släktet Anopheles arabinis som livnär sig på komurin och urea. Blodmatade honmyggor fick dieter bestående av färsk och lagrad komurin, olika koncentrationer av urea, sackaros (10 %) och destillerat vatten (H2O) i 48 timmar innan de placerades i bioanalyser och äggläggande substrat erhölls (A). Antal ägg (B, E), äggstorlek (C, F) och larvstorlek (D, G) påverkades signifikant av den tillhandahållna kosten (komurin: BD; urea: EG). Medelvärdena för varje parameter mätt med olika bokstavsnamn skilde sig signifikant från varandra (envägs ANOVA med Tukeys post hoc-analys; p < 0,05). Felstaplarna representerar standardfelet för medelvärdet.
Urea, som är den huvudsakliga kvävehaltiga komponenten i urin, påverkade reproduktionsparametrarna signifikant i alla studier när det gavs som kost till bloduppfödda honor. Antalet ägg som lades av honor som utfodrades med urea efter en blodmåltid, beroende på ureakoncentrationen (F(11, 360) = 4,69; p < 0,0001), lade honor som utfodrades med ureakoncentrationer mellan 134 µM och 1,34 mM fler ägg (Figur 4E). Honor som utfodrades med ureakoncentrationer på 134 µM eller högre lägger större ägg än honor som utfodrades med vatten (F(10, 4245) = 36,7; p < 0,0001; Figur 4F), och larvstorleken, även om den påverkades av liknande ureakoncentrationer hos mödrarna (F(10, 3305) = 37,9; p < 0,0001), var mer variabel (Fig. 4G).
Övergripande attraktionskraft för värdsökande bovinurin-extrakt från flyktiga områden. Arabiensis-arten som bedömdes i glasrörsolfaktometern (Fig. 5A) påverkades signifikant av urinens ålder (χ² = 15,9, df = 4, p = 0,0032; Fig. 5B). Post hoc-analys visade att lukten av gammal urin vid 24 timmar orsakade signifikant högre attraktionskraft jämfört med alla andra behandlingar (72 timmar: p = 0,0060, 168 timmar: p = 0,012, pentan: p = 0,00070), förutom lukten av färsk urin (p = 0,13; Figur 5B). Även om den övergripande attraktionskraften hos blodsugande myggor till urinlukt inte skilde sig signifikant (χ² = 8,78, df = 4, p = 0,067; Fig. 5C), fann man att dessa honor var signifikant mer attraktiva för flyktiga extrakt från områden jämfört med 72 timmar lagrad urin jämfört med kontrollpersoner (p = 0,0066; Figur 5C).
Beteendemässiga reaktioner på naturliga och syntetiska lukter av komurin i sökandet efter värd- och blodmatad Anopheles arabianus. Schematisk bild av olfaktometern i glasröret (A). Attraktion av flyktiga extrakt i huvudutrymmet från färsk och lagrad komurin till värdmyggor (B) och blodsugande (C). Hitta tentaklerreaktionen hos Lord An. Extrakt i huvudutrymmet isolerade från färsk (D), 24-timmars (E), 72-timmars (F) och 168-timmars (G) lagrad komurin visas. Elektronantenndetekteringsspår (EAD) visar spänningsförändringar som svar på bioaktiva föreningar i huvudutrymmet som eluerats från gaskromatografen och detekterats av en flamjoniseringsdetektor (FID). Skalstapeln representerar responsamplitud (mV) kontra retentionstid (s). Egenskaperna och frisättningshastigheterna (µg h-1) för de biologiskt aktiva föreningarna visas. En enda asterisk (*) indikerar ett konsekvent svar med låg amplitud. Dubbla asterisker (**) indikerar icke-reproducerbara svar. Hitta värden (H) och Den blodsugande (I) An.arabiensis har olika dragningskraft jämfört med syntetiska blandningar av lukter av färsk och lagrad komurin. Medelandelen myggor som attraherades av olika bokstavsnamn skilde sig signifikant från varandra (envägs ANOVA med Tukeys post hoc-analys; p < 0,05). Felstaplarna representerar standardfelet för skalan.
Hona av typen Ann.arabiensis, 72 timmar och 120 timmar efter blodmåltid, under lekperioden, visades ingen preferens för flyktiga extrakt från färsk och lagrad komjölk jämfört med pentankontroller (χ² = 3,07, p > 0,05; Ytterligare fil 1: Fig. S1).
För honlig Ann.arabiensis identifierade GC-EAD- och GC-MS-analyser åtta, sex, tre och tre bioaktiva föreningar (Figur 5D-G). Även om skillnader i antalet föreningar som framkallade elektrofysiologiska svar observerades, fanns de flesta av dessa föreningar i varje flyktigt extrakt från headspace som samlats in från färsk och lagrad urin. Därför inkluderades för varje extrakt endast föreningar som producerade ett fysiologiskt svar från honantennerna över tröskelvärdet i ytterligare analyser.
Den totala frisättningshastigheten för flyktiga föreningar i headspace-samlingen ökade från 29 µg h-1 i färsk urin till 242 µg h-1 i 168 timmar åldrad urin, främst på grund av ökningar av p-kresol och m-formaldehydfenol samt fenol. Däremot minskade frisättningshastigheterna för andra föreningar, såsom 2-cyklohexen-1-on och dekanal, med ökande urinålder, vilket korrelerade med den observerade minskningen av signalintensitet (överflöd) i kromatogrammet (Fig. 5D) (vänstra panelen) och fysiologiska svar på dessa föreningar (Fig. 5D) (högra panelen).
Sammantaget hade den syntetiska blandningen ett liknande naturligt förhållande av bioaktiva föreningar identifierade i flyktiga extrakt från färska och åldrade urinhuvuden (Fig. 5D–G) och verkade inte framkalla någon signifikant dragningskraft i sökandet efter en värd (χ² = 8,15, df = 4, p = 0,083; Fig. 5H) eller blodsugande myggor (χ² = 4,91, df = 4, p = 0,30; Fig. 5I). Post hoc parvisa jämförelser mellan behandlingar visade dock att värdsökande myggor var signifikant attraktiva för den syntetiska blandningen av 24 timmar åldrad urin jämfört med pentankontroller (p = 0,0086; Figur 5H).
För att bedöma rollen av individuella komponenter i syntetiska blandningar av 24 timmars lagrad urin utvärderades sex subtraktiva blandningar mot kompletta blandningar i Y-rörsanalysen, där individuella föreningar avlägsnades. För värdsökande myggor hade subtraktion av individuella föreningar från den kompletta blandningen en signifikant effekt på beteendemässiga svar (χ² = 19,63, df = 6, p = 0,0032; Ytterligare fil 1: Figur S2A), alla subtraktiva blandningar var mer attraktiva än Mindre än helt blandade. Däremot påverkade borttagning av individuella föreningar från den helt syntetiska blandningen inte beteendemässiga svar hos blodsugande myggor (χ² = 11,38, df = 6, p = 0,077), med undantag för dekanal, vilket resulterade i lägre nivåer jämfört med den kompletta blandningens attraktion (p = 0,022; Ytterligare fil 1: Figur S2B).
I en malariaendemisk by i Etiopien utvärderades effekten av en syntetisk blandning av 24-timmars komurin för att locka myggor under fältförhållanden under tio nätter (Fig. 6A). Totalt 4 861 myggor fångades och identifierades, varav 45,7 % var Anthropus.gambiae sl, 18,9 % var Anopheles pharoensis och 35,4 % var Culex spp. (Ytterligare fil 1: Tabell S1). Anopheles arabinis är den enda medlemmen av An.Gambian-artkomplexet som identifierats genom PCR-analys. I genomsnitt fångades 320 myggor per natt, under vilken tid fällor med syntetiska blandade beten fångade fler myggor än parade fällor utan blandning (χ²(0, 3196) = 170,0, p < 0,0001). Icke-betade fällor placerades ut var och en av de fem kontrollnätterna i början, mitten och slutet av försöket. Liknande antal myggor fångades i varje par av fällor, vilket indikerar ingen bias mellan hus (χ²(0, 1665) = 9 × 10⁻⁴⁻¹, p > 0,05) och ingen populationsminskning under studieperioden. Jämfört med kontrollfällor ökade antalet myggor som fångades i fällorna som innehöll den syntetiska blandningen signifikant: värdsökande (χ²(0, 2107) = 138,7, p < 0,0001), nyligen blodintag (χ²(0, 650) = 32,2, p < 0,0001) och dräktighet (χ²(0, 228) = 6,27, p = 0,0123; Ytterligare fil 1: Tabell S1). Detta återspeglas också i det totala antalet fångade myggor: värdsökande > blodsugande > dräktig > halvdräktig > hane.
Fältutvärdering av effekten av en 24-timmars syntetisk komilkostluktblandning. Fältförsök genomfördes i södra centrala Etiopien (karta), nära staden Maki (infoga), med hjälp av en ljusfälla från Centers for Disease Control (CDC) (höger) i parhus, med en latinsk fyrkantig design (flygbild) (A). Syntetiska luktbetade CDC-fotofällor attraherar och fångar honmyggor av typen Anopheles arabesque (B), men inte Anopheles farroes (C), på ett annat sätt, en fysiologisk tillståndsberoende effekt. Dessutom fångade dessa fällor signifikant ökat antal värdmyggor av typen Culex. (D) Jämfört med kontroll. Staplarna till vänster representerar det genomsnittliga selektionsindexet för myggor fångade i par av luktbetsfällor (gröna) och kontrollfällor (öppna) (N = 10), medan staplarna till höger representerar det genomsnittliga selektionsindexet i par av kontrollfällor (öppna; N = 5). Asterisker indikerar statistiska signifikansnivåer (*p = 0,01 och ***p < 0,0001)
De tre arterna fångades på olika sätt i fällor innehållande syntetiska blandningar. Vid sökande efter värd (χ2(1, 1345) = 71,7, p < 0,0001), blodförtäring (χ2(1, 517) = 16,7, p < 0,0001) och dräktighet (χ2(1, 180) = 6,11, p = 0,0134) fångades en .arabiensis i fällan och frisläppte den syntetiska blandningen (Fig. 6B), medan mängden An inte skilde sig åt. Pharoensis i olika fysiologiska tillstånd hittades (Fig. 6C). För Culex observerades endast en signifikant ökning av antalet myggor som sökte värd i fällor betade med den syntetiska blandningen (χ2(1,1319) = 12,6, p = 0,0004; Fig. 6D), jämfört med kontrollfällor.
Betesfällor placerade utanför potentiella värddjur mellan häckningsplatser och landsbygdssamhällen i Etiopien användes för att bedöma om malariamyggor använder lukt av komjölk som en ledtråd till värddjurens livsmiljö. I avsaknad av ledtrådar från värddjur, värme, och med eller utan närvaro av lukt av komjölk, fångades inga myggor (Ytterligare fil 1: Figur S3). Men i närvaro av hög temperatur och lukt av komjölk attraherades och fångades honmyggor av malaria, om än i litet antal, oberoende av urinens ålder (χ²(5, 25) = 2,29, p = 0,13; Ytterligare fil 1: Figur S3). Däremot fångade inte vattenkontroller malariamyggor vid höga temperaturer (Ytterligare fil 1: Figur S3).
Malariamyggor förvärvar och distribuerar kvävehaltiga föreningar genom kompenserande födointag på ko-urin (dvs. pölar) för att förbättra livshistoriska egenskaper, liknande andra insekter [2, 4, 24, 25, 26]. Ko-urin är en lättillgänglig förnybar resurs som är nära förknippad med viloplatser för malariavektorer, såsom ladugårdar och hög vegetation nära landsbygdshem och lekplatser. Honmyggor lokaliserar denna resurs genom lukt och kan reglera upptaget av kväveföreningar i urin, inklusive urea, den viktigaste kvävekomponenten i urin [15, 16]. Beroende på honmyggans fysiologiska tillstånd allokeras näringsämnen i urinen för att förbättra flygaktiviteten och överlevnaden hos värdsökande honmyggor, samt överlevnads- och reproduktionsegenskaperna hos blodnärda individer under den första gonadotropa cykeln. Därför spelar urinblandning en viktig näringsmässig roll för malariavektorer som är slutna som undernärda vuxna [8], eftersom det ger honmyggor möjligheten att förvärva viktiga kväveföreningar genom att delta i lågriskmatning. Detta fynd har betydande epidemiologiska konsekvenser, eftersom honor ökar sin livslängd. förväntad tillväxt, aktivitet och reproduktionskapacitet, vilka alla påverkar vektorkapaciteten. Dessutom kan detta beteende vara målet för framtida vektorhanteringsprogram.