Helitaanka iyo qaybinta nafaqada waxay isku daraysaa raadinta cayayaanka iyo sifooyinka taariikhda nolosha. Si loo magdhabo yaraanta nafaqooyinka gaarka ah ee marxaladaha kala duwan ee nolosha, cayayaanka waxay heli karaan nafaqooyinkan iyada oo loo marayo quudin dheeraad ah, tusaale ahaan, iyagoo quudinaya dheecaanka laf-dhabarta ee habka loo yaqaan balliyada. Kaneecada Anopheles arabiani waxay u muuqataa inay nafaqo darro hayso, sidaas darteedna, waxay u baahan tahay nafaqooyin labadaba dheef-shiid kiimikaadka iyo taranka. Ujeeddada daraasaddan waxay ahayd in la qiimeeyo in kicinta An. arabiensis ee kaadida lo'da ee helitaanka nafaqada ay hagaajinayso astaamaha taariikhda nolosha.
Hubi inay ammaan tahay. arabiensis waxay soo jiidatay urta kaadida lo'da cusub, 24-saacadood, 72-saacadood, iyo 168-saacadood, iyo dheddigga martida loo yahay iyo kuwa dhiigga la quudiyo (48-saacadood cuntada ka dib dhiigga) ayaa lagu cabiray olfactometer Y-tube, dheddigga uurka lehna waxaa lagu qiimeeyay baaritaanka dhalmada. Kadib waxaa la isticmaalay falanqayn kiimiko iyo elektrofisiyoolajiyadeed oo isku dhafan si loo aqoonsado isku-dhafka noolaha ee kaadida lo'da ee dhammaan afarta fasal ee da'da. Isku-darka isku-dhafka ah ee isku-dhafka noolaha ayaa lagu qiimeeyay tijaabooyinka Y-tube iyo goobta. Si loo baaro kaadida lo'da iyo urea-da ugu weyn ee ay ku jirto nitrogen sida cuntooyinka dheeraadka ah ee suurtagalka ah ee loogu talagalay cudurrada duumada, xuduudaha quudinta iyo astaamaha taariikhda nolosha ayaa la cabbiray. Saamiga kaneecada dheddigga ah iyo xaddiga kaadida lo'da iyo urea-da la nuugo ayaa la qiimeeyay. Ka dib quudinta, dheddigga waxaa lagu qiimeeyay badbaadada, duulimaadka ku xiran, iyo taranka.
Raadi dhiigga iyo nafaqada martida. Daraasadaha shaybaarka iyo goobta, Carabta waxaa soo jiitay carafka dabiiciga ah iyo kan macmal ah ee kaadida lo'da cusub iyo tan duugga ah. Dumarka uurka leh ma aysan dan ka lahayn jawaabaha kaadida lo'da ee goobaha dhalmada. Dumarka martida loo yahay iyo kuwa dhiigga nuugaya waxay si firfircoon u nuugaan kaadida lo'da iyo urea waxayna u qoondeeyaan kheyraadkan iyadoo loo eegayo is-weydaarsiga taariikhda nolosha iyadoo loo eegayo xaaladda jireed ee duulimaadka, badbaadada, ama taranka.
Helitaanka iyo qaybinta kaadida lo'da ee Anopheles arabinis si loo hagaajiyo astaamaha taariikhda nolosha. Quudinta dheeraadka ah ee kaadida lo'da waxay si toos ah u saamaysaa awoodda vector-ka iyadoo kordhinaysa badbaadada maalinlaha ah iyo cufnaanta vector-ka, iyo si dadban iyadoo la beddelayo dhaqdhaqaaqa duulimaadka sidaas darteedna waa in lagu tixgeliyaa moodooyinka mustaqbalka.
Helitaanka iyo qaybinta nafaqada waxay isku daraysaa raadinta cayayaanka iyo astaamaha taariikhda nolosha [1,2,3]. Cayayaanku waxay awoodaan inay doortaan oo helaan cunto oo ay sameeyaan quudin magdhow ah oo ku salaysan helitaanka cuntada iyo baahiyaha nafaqada [1, 3]. Qaybinta nafaqooyinka waxay ku xiran tahay habka taariikhda nolosha waxayna keeni kartaa shuruudo kala duwan oo ku saabsan tayada cuntada iyo tirada marxaladaha nolosha ee kala duwan ee cayayaanka [1, 2]. Si loo magdhabo yaraanta nafaqooyinka gaarka ah, cayayaanka waxay heli karaan nafaqooyinkan iyagoo adeegsanaya quudin dheeraad ah, sida dhoobada, saxaro kala duwan iyo dheecaanka laf-dhabarta, iyo bakhtiga, oo ah hab loo yaqaan balliyada [2]. In kasta oo noocyada balanbaalisyada iyo aboorku ay si gaar ah u sharraxaan, godadka waraabinta ayaa sidoo kale ka dhaca noocyada kale ee cayayaanka, soo jiidashada iyo quudinta noocyadan kheyraadka waxay yeelan kartaa saameyn weyn oo ku saabsan caafimaadka iyo sifooyinka kale ee taariikhda nolosha [2, 4, 5, 6], 7]. Kaneecada duumada Anopheles gambiae sensu lato (sl) waxay u soo baxdaa sidii qof weyn oo 'nafaqo la'aan' ah [8], sidaa darteed waraabintu waxay door muhiim ah ka ciyaari kartaa astaamaha taariikhda nolosha, laakiin dhaqankan wuxuu leeyahay ilaa hadda waa la dayacay. Isticmaalka kicinta oo ah hab lagu kordhinayo qaadashada nafaqada ee gaarigan muhiimka ah ayaa u baahan fiiro gaar ah maadaama tani ay yeelan karto cawaaqib xumo muhiim ah oo ku saabsan cudurrada faafa.
Qaadashada Nitrogen-ka ee kaneecada Anopheles ee dheddigga qaangaarka ah waa mid xaddidan sababtoo ah kaydka kalooriga yar ee laga qaado marxaladda dirxiga iyo isticmaalka aan waxtarka lahayn ee cuntada dhiigga [9]. Dumarka Ann.gambiae sl waxay caadi ahaan magdhowdaa tan iyadoo ku kabaysa cuntooyinka dhiigga dheeraadka ah [10, 11], taasoo dad badan gelinaysa khatar ah inay qaadaan cudurka oo ay kaneecada gelinayso khatar weyn oo ugaarsi ah. Taas beddelkeeda, kaneecadu waxay isticmaali kartaa quudinta dheeraadka ah ee saxarada laf-dhabarta si ay u helaan isku-dhisyo nitrogenous ah oo kor u qaada la qabsiga iyo dhaqdhaqaaqa duulista, sida ay muujiyeen cayayaanka kale [2]. Marka la eego arrintan, soo jiidashada xooggan iyo tan gaarka ah ee mid ka mid ah noocyada walaalaha ah ee ku jira An. Isku-dhafka noocyada sl ee Gambia, Anopheles arabinis, kaadida lo'da cusub iyo tan da'da ah [12,13,14], waa mid xiiso leh. Anopheles arabinis waa fursad-doon doorbidkeeda martida waxaana la ogyahay inay la xiriirto oo ay quudiso lo'da. Kaadida lo'du waa kheyraad qani ku ah isku-dhisyo nitrogenous ah, iyadoo urea ay ka dhigan tahay 50-95% wadarta nitrogen ee kaadida cusub [15, 16]. Kaadida lo'da Da'da, noolaha yaryar waxay adeegsadaan kheyraadkan si ay u yareeyaan isku-dhafka isku-dhafka nitrogenous 24 saacadood gudahood [15]. Iyadoo kororka degdegga ah ee ammonia, oo lala xiriiriyo hoos u dhaca nitrogen-ka dabiiciga ah, noolaha yaryar ee alkaloofyada ah (kuwaas oo badankoodu soo saaraan isku-dhisyo sun u ah kaneecada) way koraan [15], kuwaas oo laga yaabo inay yihiin dheddig Ann.arabiensis waxaa si gaar ah u soo jiita kaadida markay jirto 24 saacadood ama ka yar [13, 14].
Daraasaddan, waxaa la raadiyay Ans-ka martida loo yahay iyo kuwa dhiigga lagu quudiyo. Intii lagu jiray wareeggeedii ugu horreeyay ee gonadotropin, arabiensis waxaa lagu qiimeeyay helitaanka isku-darka nitrogenous, oo ay ku jiraan urea, iyadoo la isku darayo kaadida. Marka xigta, taxane tijaabo ah ayaa la sameeyay si loo qiimeeyo sida kaneecada dheddigga ah ay u qoondeeyaan kheyraadkan nafaqada ee suurtagalka ah si loo wanaajiyo badbaadada, taranka iyo raadinta dheeraadka ah. Ugu dambeyntii, urta kaadida lo'da cusub iyo tan da'da ah ayaa la qiimeeyay si loo go'aamiyo in kuwani ay bixiyeen tilmaamo lagu kalsoonaan karo oo loogu talagalay martida loo yahay iyo kuwa dhiigga lagu quudiyo. Iyagoo raadinaya kheyraadkan nafaqada ee suurtagalka ah, arabiensis waxay ogaatay isku xirnaanta kiimikada ee ka dambeysa soo jiidashada kala duwan ee la arkay. Isku darka urta synthetic ee isku-darka organic-ga ee isbeddelaya (VOCs) ee lagu aqoonsaday kaadida da'da 24-saacadood ah ayaa si dheeraad ah loogu qiimeeyay xaaladaha goobta, iyagoo ballaarinaya natiijooyinka laga helay xaaladaha shaybaarka iyo muujinta saameynta urta kaadida lo'da ee xaaladaha kala duwan ee jirka. Soo jiidashada kaneecada. Natiijooyinka la helay waxay xaqiijinayaan in An. arabiensis uu helo oo uu qaybiyo isku-darka nitrogenous ee laga helo kaadida laf-dhabarta si uu u saameeyo astaamaha taariikhda nolosha. Natiijooyinkan waxaa looga hadlay macnaha guud ee cawaaqibka cudurrada faafa ee suurtagalka ah iyo sida loogu isticmaali karo la socodka iyo xakamaynta vector-ka.
Anopheles arabicans (nooca Dongola) waxaa lagu hayay heerkul ah 25 ± 2 °C, 65 ± 5% RH iyo wareeg iftiin: mugdi ah oo ah 12:12 saacadood. Dirxiga waxaa lagu koriyay saxaarado balaastig ah (20 cm × 18 cm × 7 cm) oo lagu buuxiyay biyo la sifeeyay oo lagu quudiyay cuntada kalluunka Tetramin® (Tetra Werke, Melle, DE). Pupae waxaa lagu soo ururiyay 30 ml koob (Nolato Hertila, Åstorp, SE) ka dibna waxaa loo wareejiyay qafisyada Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science, Taichung, Taiwan) si loogu oggolaado soo bixitaanka dadka waaweyn. Dadka waaweyn waxaa la siiyay xal sucrose ah oo ah 10% ilaa 4 maalmood ka dib soo ifbaxa (dpe), markaas oo dumarka martida loo yahay la siiyay cunto isla markiiba ka hor tijaabada, ama waxaa la siiyay biyo la sifeeyay habeenkii ka hor tijaabada, sida hoos lagu sharaxay. Dumarka loo isticmaalo tijaabooyinka tuubada duulimaadka waxaa la gaajoonayay 4-6 oo keliya. saacado biyo iyo libitum ah. Si loo diyaariyo kaneecada dhiigga nuugta ee baaritaannada bio ee xiga, 4 dpe dheddig ah ayaa la siiyay dhiigga idaha ee defibrotic (Håtunalab, Bro, SE) iyadoo la adeegsanayo nidaamka quudinta xuubka (Hemotek Discovery Workshops, Accrington, UK). Dheddigga si buuxda u ciriiriga ah ayaa markaa loo wareejiyay qafisyo shaqsiyeed waxaana si toos ah loo siiyay cunto, sida hoos lagu sharaxay, ama 10% sucrose ad libitum muddo 3 maalmood ah ka hor tijaabooyinka hoos lagu sharraxay. Dheddigga dambe waxaa loo isticmaalay baaritaannada bio ee tuubada duulimaadka waxaana loo wareejiyay shaybaarka, ka dibna waxaa la siiyay biyo iyo libitum 4-6 saacadood ka hor tijaabada.
Baaritaannada quudinta ayaa loo isticmaalay in lagu cabbiro isticmaalka kaadida iyo urea ee dumarka An.Carabta ah ee qaangaarka ah. Haweenka martida loo yahay iyo kuwa dhiigga nuugaya waxaa la siiyay cunto ay ku jirto 1% kaadida lo'da cusub iyo tan da'da ah ee la qasi jiray, tiro kala duwan oo urea ah, iyo laba xakameyn (10% sucrose iyo biyo) muddo 48 saacadood ah. Intaa waxaa dheer, midabaynta cuntada (1 mg ml-1 xylene cyanide FF; CAS 2650-17-1; Sigma-Aldrich, Stockholm, SE) ayaa lagu daray cuntada waxaana lagu bixiyay matrix 4 × 4 ah oo ku jira tuubooyin 250 µl microcentrifuge ah (Axygen Scientific, Union City, CA, US; Jaantuska 1A) Buuxi ilaa geeska (~300 µl). Si looga fogaado tartanka ka dhexeeya kaneecada iyo saameynta suurtagalka ah ee midabka dheeha, dhig 10 kaneeco saxan weyn oo Petri ah (12 cm dhexroor iyo 6 cm dherer ah; Semadeni, Ostermundigen, CH; Jaantuska 1A) mugdi buuxa oo ah 25 ± 2 cm °C iyo 65 ± 5% qaraabo ah. qoyaanka. Tijaabooyinkan waxaa lagu celceliyay 5 ilaa 10 jeer. Ka dib markii la cuno, kaneecada waxaa la dhigay -20 °C ilaa baaritaan dheeraad ah.
Ka raadi kaadida lo'da iyo urea-da ay nuugaan dheddigga martida loo yahay iyo kuwa dhiigga nuugaya ee Anopheles arabianus. Tijaabada quudinta (A), kaneecada dheddigga ah waxaa la siiyay cunto ka kooban kaadi lo'aad cusub iyo mid duug ah, tirooyin kala duwan oo urea ah, sucrose (10%), iyo biyo la safeeyey (H2O). dheddigga martida loo yahay (B) iyo kuwa dhiigga nuugaya (C) waxay nuugaan sucrose ka badan cunto kasta oo kale oo la tijaabiyey. Ogsoonow in dheddigga martida loo yahay ay nuugaan kaadida lo'da 72-saacadood ah wax ka yar kaadida lo'da 168-saacadood (B). Celceliska wadarta guud ee nitrogen-ka (± heerka caadiga ah) ee kaadida waxaa lagu matalaa gudaha. dheddigga martida loo yahay (D, F) iyo nuugista dhiigga (E, G) waxay qaataan urea si ku xiran qiyaasta. Mugga celceliska neefsiga (D, E) oo leh magacyo xarfo kala duwan ayaa si weyn uga duwanaa midba midka kale (ANOVA hal-dhinac ah iyadoo la adeegsanayo falanqaynta Tukey ee hoc; p < 0.05). Baararka qaladka waxay matalaan qaladka caadiga ah ee celceliska (BE). Khadadka toosan ee la jiiday waxay matalaan khadka dib-u-celinta ee log-linear (F, G)
Si loo sii daayo cuntada la nuugo, kaneecada waxaa si gaar ah loogu riday tuubooyin microcentrifuge ah oo 1.5 ml ah oo ay ku jiraan 230 µl oo biyo la sifeeyay, unugyadana waxaa lagu kala diray iyadoo la isticmaalayo matoor la tuuri karo iyo matoor aan fiilooyin lahayn (VWR International, Lund, SE), ka dibna waxaa lagu shubay 10 krpm muddo 10 daqiiqo ah. Dusha sare (200 µl) waxaa loo wareejiyay qalab microplate ah oo 96-ceel ah (Sigma-Aldrich) waxaana la go'aamiyay nuugista (λ620) iyadoo la isticmaalayo qalab microplate ah oo ku salaysan spectrophotometer (SPECTROStar® Nano, BMG Labtech, Ortenberg, DE) nm). Taas beddelkeeda, kaneecada waxaa lagu shiiday 1 ml oo biyo la sifeeyay ah, 900 µl oo ka mid ah waxaa loo wareejiyay qalab cuvette ah si loo falanqeeyo spectrophotometric (λ 620 nm; UV 1800, Shimadzu, Kista, SE). Si loo qiyaaso qaadashada cuntada, waxaa la diyaariyey qalooc caadi ah iyadoo la isticmaalayo isku-darka si loo soo saaro 0.2 µl ilaa 2.4 µl oo ah 1 mg ml-1 xylene cyanide. Kadib, cufnaanta indhaha ee uruurinta rinjiga la yaqaan ayaa loo isticmaalay in lagu go'aamiyo xaddiga cuntada kaneecada kasta liqdo.
Xogta mugga waxaa lagu falanqeeyay iyadoo la adeegsanayo falanqaynta hal-dhinac ee kala duwanaanshaha (ANOVA) oo ay ku xigto isbarbardhigga labada dhinac ee Tukey kadib hoc (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc., Cary, NC, US, 1989–2007). Falanqaynta dib-u-noqoshada toosan waxay qeexday qaadashada urea-da ku tiirsan xoogga iyo jawaabaha la barbar dhigay ee u dhexeeya kaneecada raadinta martida loo yahay iyo kuwa nuugaya dhiigga (GraphPad Prism v8.0.0 ee Mac, GraphPad Software, San Diego, CA, US).
Qiyaastii 20 µl oo muunadaha kaadida ah oo ka yimid koox da' kasta ah ayaa lagu xidhay Chromosorb® W/AW (10 mg 80/100 mesh, Sigma Aldrich) waxaana lagu dahaadhay kaabsul (8 mm × 5 mm). Kaabsulyada waxaa la geliyay qolka gubashada ee falanqeeyaha CHNS/O (Flash 2000, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, US) si loo go'aamiyo waxa ku jira nitrogen ee kaadida cusub iyo tan duugga ah sida waafaqsan hab-raaca soo saaraha. Wadarta nitrogen (g N l-1) waxaa lagu qiyaasay iyadoo lagu saleynayo uruurinta urea ee la yaqaan ee loo isticmaalo heer caadi ah.
Si loo qiimeeyo saameynta cuntadu ku leedahay badbaadada dheddigga ee raadinta iyo nuugista dhiigga, kaneecada waxaa si gaar ah loogu riday saxanno waaweyn oo Petri ah (12 cm dhexroor iyo 6 cm dherer ah; Semadeni) oo leh god daboolan oo ku yaal daboolka (3 cm dhexroor) oo leh hawo-qaadis iyo sahay cunto. Cuntooyinka waxaa si toos ah loo bixiyay ka dib 4 dpe waxaana ku jiray 1% kaadida lo'da cusub iyo tan duugga ah ee la qasi jiray, afar fiirsasho oo urea ah, iyo laba kontarool, 10% sucrose iyo biyo. Cunto kasta waxaa lagu shubay tuubada ilkaha (DAB Dental AB, Upplands Väsby, SE) oo lagu geliyay sirinj 5 ml ah (Thermo Fisher Scientific, Gothenburg, SE), baloogga ayaa laga saaray, oo la saaray saxan petri ah dushiisa (sawirka 1).1A). Beddel cuntadaada maalin kasta. Ku hay shaybaarka sida kor lagu sharaxay. Kaneecada badbaaday waxaa la tiriyay laba jeer maalintii, halka kaneecada dhimatayna la tuuray ilaa kaneecada ugu dambeysay ay dhimato (n = 40 daaweyn kasta). Badbaadinta kaneecada lagu quudiyo cuntooyin kala duwan ayaa si tirakoob ah loo falanqeeyay iyadoo la adeegsanayo qalooca badbaadada Kaplan-Meyer iyo darajada log-ka. tijaabooyin lagu barbar dhigo isbarbardhigga qaybinta badbaadada ee u dhexeeya cuntooyinka (IBM SPSS Tirakoobka 24.0.0.0).
Warshad duusha kaneecada oo gaar ah oo ku salaysan Attisano et al.[17], oo laga sameeyay 5 mm oo dhumuc weyn oo ah looxyo acrylic ah (10 cm ballac x 10 cm dheer x 10 cm sare) oo aan lahayn looxyo hore iyo gadaal ah (Jaantuska 3: sare). Isku-dubarid wareeg ah oo leh tuubo toosan oo laga sameeyay tiir gaas ah oo koromatografi ah (0.25 mm id; 7.5 cm L) oo leh darafyo lagu dhejiyay irbad cayayaan ah oo u dhaxaysa labo birlab neodymium ah oo 9 cm u jira. Tuubo jiif ah oo laga sameeyay isla walax (6.5 cm L) ayaa kala qaybisay tuubada toosan si ay u samayso gacan isku xiran iyo gacan sidda gabal yar oo aluminium ah oo ah calaamad muujinaysa kala go'a iftiinka.
Dumarka gaajaysan ee 24 saacadood jira waxaa la siiyay cuntada kor ku xusan muddo 30 daqiiqo ah ka hor inta aan la xakamayn. Kaneecada dheddigga ah ee si buuxda loo quudiyo ayaa markaa si gaar ah loogu suuxiyay barafka muddo 2-3 daqiiqo ah waxaana lagu dhejiyay biinanka cayayaanka iyadoo la adeegsanayo shamac shinni ah (Joel Svenssons Vaxfabrik AB, Munka Ljungby, SE) ka dibna lagu xiray gacmaha tuubooyinka toosan. Shidaalka Duulista. Isbeddellada duulimaad kasta waxaa duubay diiwaan-haye xog-ururin oo gaar ah, ka dibna lagu kaydiyay oo lagu soo bandhigay iyadoo la adeegsanayo software PC-Lab 2000™ (v4.01; Velleman, Gavere, BE). Warshadda duulimaadka waxaa la dhigay qol ay cimilada nidaamisay (12 saacadood:12 saacadood, iftiin: mugdi, 25 ± 2 °C, 65 ± 5% RH).
Si loo sawiro qaabka dhaqdhaqaaqa duulimaadka, wadarta masaafada la duulay (m) iyo wadarta tirada hawlaha duulimaadka ee isku xiga ayaa la xisaabiyay saacaddii muddo 24 saacadood ah. Intaa waxaa dheer, celceliska masaafada ay duuliyeen dheddigga shaqsiga ah ayaa la barbar dhigay daawaynta waxaana lagu falanqeeyay iyadoo la adeegsanayo hal-dhinac ANOVA iyo falanqaynta Tukey ee hoc kadib (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.), halkaas oo celceliska masaafada loo tixgeliyey doorsoome ku tiirsan, halka daaweyntu ay tahay arrin madax-bannaan. Intaa waxaa dheer, celceliska tirada wareegyada waxaa lagu xisaabiyaa 10-daqiiqo oo kordhin ah.
Si loo qiimeeyo saameynta cuntadu ku leedahay waxqabadka taranka ee An.arabiensis, lix dheddig ah (4 dpe) ayaa si toos ah loogu wareejiyay qafisyada Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm) ka dib ururinta dhiigga ka dibna la siiyay cuntada tijaabada ah muddo 48 saacadood ah sida kor lagu sharaxay. Cuntooyinka ayaa markaa laga saaray oo koob dhalmo ah (30 ml; Nolato Hertila) oo lagu buuxiyay 20 ml oo biyo la sifeeyay ayaa la bixiyay maalintii saddexaad muddo 48 saacadood ah, iyadoo la beddelayo 24 saacadood kasta. Ku celi nidaam kasta oo cunto ah 20-50 jeer. Ukunta ayaa la tiriyay oo la duubay qafis kasta oo tijaabo ah. Muunado hoosaadyo ukun ah ayaa loo isticmaalay in lagu qiimeeyo celceliska cabbirka iyo kala duwanaanshaha dhererka ee ukunta shaqsiga ah (n ≥ 200 cunto kasta) iyadoo la isticmaalayo mikroskoobka Dialux-20 (DM1000; Ernst Leitz Wetzlar, Wetzlar, DE) oo ku qalabaysan Kamarad Leica (DFC) 320 R2; Leica Microsystems Ltd., DE). Ukunta hartay waxaa lagu hayay qol cimilada lagu xakameeyo iyadoo la raacayo xaaladaha caadiga ah ee korinta muddo 24 saacadood ah, waxaana la cabbiray qayb ka mid ah dirxiga 1aad ee dhawaan soo baxay (n ≥ 200 cunto kasta) sida kor lagu sharaxay. Tirada ukunta iyo cabbirka ukunta iyo dirxiga ayaa la barbar dhigay daaweynta iyo iyadoo la isticmaalayo falanqaynta hal-dhinac ah ee ANOVA iyo falanqaynta kadib hoc ee Tukey (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Kaadida madaxa ee cusub (1 saac ka dib baaritaanka), kaadida 24 saacadood, 72 saacadood iyo 168 saacadood jir ah ayaa laga soo ururiyay muunado laga soo ururiyay lo'da Zebu, Arsi races. Si loogu fududeeyo, muunado kaadi ah ayaa la soo ururiyay subaxdii hore intii lo'du ay wali ku jirtay bakhaarka. Muunado kaadi ah ayaa laga soo ururiyay 10 qof, 100-200 ml oo muunad ah ayaa loo wareejiyay bacaha dubista ee polyamide shaqsiga ah (Toppits Cofresco, Frischhalteprodukte GmbH iyo Co., Minden, DE) oo ku jira 3 litir oo polyamide ah oo leh dabool leh durbaanno balaastig ah oo vinyl chloride ah. Qulqulayaasha madaxa ee muunad kasta oo kaadida lo'da ah ayaa si toos ah loo soo ururiyay (cusub) ama ka dib markii ay bislaadaan heerkulka qolka muddo 24 saacadood, 72 saacadood iyo 168 saacadood ah, tusaale ahaan muunad kasta oo kaadi ah waxay matashay koox da' kasta ah.
Ururinta walxaha kacsan ee madaxa, nidaam wareeg xiran ayaa loo isticmaalay in lagu wareejiyo durdur gaas oo kaarboon-shaandheeyay (100 ml daqiiqad-1) iyada oo loo marayo bac polyamide ah ilaa tiirka nuugista muddo 2.5 saacadood ah iyadoo la adeegsanayo bamka faakiyuumka diaphragm (KNF Neuberger, Freiburg, DE). Sida xakamaynta, ururinta meelaha madaxa waxaa laga sameeyay bac polyamide madhan. Tiirka nuugista waxaa laga sameeyay tuubo Teflon ah (5.5 cm x 3 mm id) oo ka kooban 35 mg oo Porapak Q ah (50/80 mesh; Waters Associates, Milford, MA, US) inta u dhaxaysa furayaasha dhogorta galaaska. Kahor isticmaalka, tiirka waxaa lagu nadiifiyay 1 ml oo n-hexane dib loo warshadeeyay (Merck, Darmstadt, DE) iyo 1 ml pentane (99.0% dareere saafi ah oo GC ah, Sigma Aldrich). Kuwa kacsan ee la nuugay waxaa lagu shubay 400 μl oo pentane ah. Ururinta meelaha madaxa ayaa la isku geeyay ka dibna lagu kaydiyay -20°C ilaa loo isticmaalo si dheeraad ah. falanqayn.
Jawaabaha dhaqanka ee raadinta martida iyo cunista dhiigga An. Soo-saarista kacsan ee Headspace laga soo ururiyay kaadi cusub, 24-saacadood, 72-saacadood, iyo 168-saacadood ah ayaa lagu falanqeeyay soo-saarista kacsan ee ka timid kaneecada Arabidopsis iyadoo la adeegsanayo olfactometer tuubo galaas ah oo toosan [18]. Tijaabooyinka waxaa la sameeyay intii lagu jiray ZT 13-15, xilligii ugu sarreeyay ee hawsha raadinta guriga ee An. Carab [19]. Cabbirka olfactometer-ka ee tuubada galaaska (80 cm × 9.5 cm id) ayaa lagu iftiimiyay 3 ± 1 lx oo iftiin cas ah oo ka yimid kor. Socodka hawada ee la sifeeyay oo la qoyay dhuxusha (25 ± 2 °C, 65 ± 2% qoyaan qaraabo ah) ayaa ka gudbay baaritaanka bioassay 30 cm s-1. Hawada waxaa lagu dhex mariyaa taxane shaashado bir ah oo aan miridh lahayn, taasoo abuuraysa socod laminar ah iyo qaab-dhismeed isku mid ah oo tuubo ah. Qaybiyaha tampon-ka ilkaha (4 cm × 1 cm; L:D; DAB Dental AB), oo laga laalaaday gariirad 5 cm ah oo ku taal dhammaadka dabaysha ee olfactometer-ka, iyadoo kiciyayaashu isbeddelaan 5tii daqiiqoba mar. Falanqaynta, 10 μl oo ah soosaar kasta oo madax ah, oo lagu qasi jiray 1:10, ayaa loo isticmaalay kicin ahaan. Xaddi siman oo pentane ah ayaa loo isticmaalay xakameyn ahaan. Kaneecada martida loo yahay ama nuugaysa dhiigga ayaa la dhigay qafisyo gaar ah 2-3 saacadood ka hor bilowga tijaabada. Qafiska sii deynta waxaa la dhigay dhinaca hoos u dhaca ee olfactometer-ka, kaneecadana waxaa loo oggolaaday inay la qabsato 1 daqiiqo, ka dibna waalka balanbaalis ee qafiska ayaa la furay si loo sii daayo. Soo jiidashada daaweynta ama xakamaynta ayaa la falanqeeyay iyadoo la eegayo saamiga kaneecada ee la kulantay isha 5 daqiiqo gudahood markii la sii daayay. Soosaar kasta oo madax ah oo isbeddelaya iyo xakamaynta ayaa la soo celiyay ugu yaraan 30 jeer, si looga fogaado saameynta maalin kasta, tiro isku mid ah oo daaweyn iyo kontaroolo ah ayaa la tijaabiyay maalin kasta oo tijaabo ah. Raadi jawaabaha martida loo yahay iyo kuwa dhiigga lagu quudiyo Jawaabaha. Carabiga iyo qaybaha madaxa ee la falanqeeyey ayaa la isticmaalay iyadoo la adeegsanayo dib-u-celinta saadka magacaaban oo ay ku xigto isbarbardhigga labada dhinac ee saamiyada aan caadiga ahayn (JMP Pro, v14.0.0, Machadka SAS Inc.).
Jawaabta dhalmada ee An. Soo saarista madaxa ee kaadida lo'da cusub iyo tan duugga ah ayaa lagu falanqeeyay qafisyada Bugdorm (30 cm × 30 cm × 30 cm; Sayniska MegaView). Koobabka balaastikada ah (30 mL; Nolato Hertila) oo lagu buuxiyay 20 mL oo biyo la sifeeyay ayaa bixiyay substrate-ka dhalmada waxaana la dhigay geesaha ka soo horjeeda qafiska, 24 cm oo kala fog. Koobabka daaweynta waxaa lagu hagaajiyay 10 μl oo ah soosaar kasta oo madax ah oo lagu qasi karo 1:10. Xaddi isku mid ah oo pentane ah ayaa loo isticmaalay in lagu hagaajiyo koobka xakamaynta. Koobabka daaweynta iyo xakamaynta ayaa la isweydaarsaday intii lagu jiray tijaabo kasta si loo xakameeyo saameynta booska. Toban dumar ah oo dhiig ku daatay ayaa lagu sii daayay qafisyo tijaabo ah ZT 9-11 ukumaha koobabka ku jirana waxaa la tiriyay 24 saacadood ka dib. Qaaciddada lagu xisaabinayo tusmada dhalmada waa: (tirada ukunta lagu riday koobka daaweynta - tirada ukunta lagu riday koobka xakamaynta)/(tirada guud ee ukunta la dhigay). Daawaynta kasta waxaa lagu celiyay 8 jeer.
Falanqaynta qaabka anteenada elektarooniga ah ee gaaska iyo elektarooniga (GC-EAD) ee An.arabiensis dheddig ayaa la sameeyay sidii hore loogu sharraxay [20]. Si kooban, soosaarka cusub ee madaxa ee kacsan ayaa la kala saaray iyadoo la isticmaalayo Agilent Technologies 6890 GC (Santa Clara, CA, US) oo lagu qalabeeyay tiir HP-5 ah (30 m × 0.25 mm id, dhumucda filimka 0.25 μm, Agilent Technologies). iyo kaadida gabowday. Haydarojiin waxaa loo isticmaalay marxaladda guurguurta iyadoo celcelis ahaan heerka socodka toosan uu yahay 45 cm s-1. Muunad kasta (2 μl) waxaa lagu duray 30 ilbiriqsi qaab aan kala go 'lahayn iyadoo heerkul gudaha ah uu yahay 225 °C. Heerkulka foornada GC waxaa laga qorsheeyay 35 °C (3 daqiiqo oo haynta ah) ilaa 300 °C (10 daqiiqo oo haynta ah) 10 °C daqiiqo-1. Kala-qaybiyaha wasakhda GC, 4 psi oo nitrogen ah ayaa lagu daray waxaana loo kala qaybiyay 1:1 iskutallaabta mugga dhimashada ee Gerstel 3D/2 ee u dhaxaysa qalabka ionization ololka iyo EAD. Xididdada wasakhda GC ee EAD waxaa loo mariyay khadka wareejinta Gerstel ODP-2, kaas oo la socda heerkulka foornada GC iyo 5 °C, oo loo geliyay tuubo galaas ah (10 cm × 8 mm), halkaas oo lagu qasay hawo qoyan oo kaarboon lagu sifeeyay (1.5 l daqiiqo−1). Anteenada ayaa la dhigay. 0.5 cm u jirta meesha uu ka baxo tuubada. Kaneecada kasta waxay ahayd hal nuqul, kaneecada martida loo yahayna, ugu yaraan saddex nuqul ayaa lagu sameeyay muunado kaadi ah oo da' kasta ah.
Aqoonsiga isku-dhafka noolaha firfircoon ee ururinta kaadida lo'da cusub iyo kuwa duugga ah iyadoo la adeegsanayo GC iyo spectrometer isku dhafan (GC-MS; 6890 GC iyo 5975 MS; Agilent Technologies) si loo soo saaro jawaabo anteeno ah falanqaynta GC-EAD, oo ku shaqeysa qaabka ionization ee saameynta elektarooniga ah 70 eV. GC waxaa lagu qalabeeyay tiir silica ah oo isku dhafan oo HP-5MS UI ah (60 m × 0.25 mm dhexroor gudaha ah, dhumucda filimka 0.25 μm) iyadoo la adeegsanayo helium marxaladda guurguura oo leh celcelis ahaan heerka socodka toosan ee 35 cm s-1. Muunad 2 μl ah ayaa lagu duray iyadoo la isticmaalayo isla dejimaha duritaanka iyo heerkulka foornada sida falanqaynta GC-EAD. Isku-dhafka waxaa lagu aqoonsaday iyadoo lagu saleynayo waqtiga haynta (tusmada Kovát) iyo spectra cufnaanta marka la barbar dhigo maktabadda gaarka ah iyo maktabadda NIST14 (Agilent). Isku-dhafka la aqoonsaday waxaa lagu xaqiijiyay duritaanka heerarka saxda ah (Faylka Dheeraadka ah 1: Shaxda S2). Si loo qiyaaso, heptyl acetate (10 ng, 99.8% nadiifnimo kiimiko ah, Aldrich) ayaa lagu duray heer dibadeed.
Qiimaynta waxtarka isku darka urta macmal ah oo ka kooban iskudhisyo firfircoon oo bayooloji ah oo lagu aqoonsaday kaadida cusub iyo tan duugga ah si loo soo jiito martida raadinaysa iyo nuugaysa dhiigga Ans.arabiensis, iyadoo la adeegsanayo isla olfactometer-ka iyo hab-raaca sida kor ku xusan. Isku-darka macmal ah waxay ku daydaan isku-darka iyo saamiga iskudhisyada ee isku-dhafka ah ee soosaarka isbedbeddelaya ee kaadida cusub, 24-saacadood, 48-saacadood, 72-saacadood, iyo 168-saacadood ah (Jaantuska 5D-G; Faylka Dheeraadka ah 1: Shaxda S2). Falanqaynta, isticmaal 10 μl oo ah 1:100 oo ah isku-darka si buuxda loo sameeyay, oo leh heer sii-deyn guud oo u dhexeeya qiyaastii 140-2400 ng h-1, si loo qiimeeyo soo jiidashada kaneecada martida loo yahay iyo kuwa dhiigga nuugaya. Ka dib, baaritaanka waxaa lagu sameeyaa isku-darka dhammaystiran, kaas oo laga saaro isku-darka kala-goynta ee isku-darka hal-hal ah ee isku-darka dhammaystiran. Raadi jawaabaha martida loo yahay iyo kuwa dhiigga nuugaya Ans.Arab iyo isku-darka macmal ah iyo kuwa kala-goynta ayaa lagu falanqeeyay iyadoo la adeegsanayo dib-u-habayn xog-ururin ah oo ay ku xigto isbarbardhigyo laba-geesood ah oo loogu talagalay kuwa aan caadiga ahayn. saamiga (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Si loo qiimeeyo in kaadida lo'du ay u adeegi karto calaamad deegaan oo loogu talagalay kaneecada duumada, kaadida lo'da cusub iyo tan duugga ah, oo la ururiyey sida kor lagu sharaxay, biyahana waxaa la dhigay baaldiyo 3 litir ah oo la jarjaray (100 ml) waxaana lagu dhejiyay dabinada sed ee martida loo yahay. (Nooca BG-HDT; BioGents, Regensburg, DE). Toban dabino ayaa la dhigay meel 50 mitir u jirta daaqa, 400 mitir u jirta bulshada tuulada (Silay, Itoobiya, 5°53´24´´N, 37°29´24´´E) oo aan lahayn lo', meelaha taranka joogtada ah iyo tuulooyinka. Shan dabino ayaa la kululeeyay si loo matalo joogitaanka martida, halka shan dabino laga tagay iyagoon kululayn. Goob kasta oo daaweyn ah ayaa la wareejiyaa habeenkii oo dhan shan habeen. Tirada kaneecada ee lagu qabtay dabinada lagu dabo kaadida ee da'doodu kala duwan tahay ayaa la barbar dhigay iyadoo la isticmaalayo dib-u-habayn logistic ah oo leh qaybinta beta binomial (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Tuulo ku taal meel u dhow magaalada Maki, gobolka Oromia, Itoobiya (8° 11′ 08″ N, 38° 81′ 70″ E; Jaantuska 6A). Daraasaddan waxaa la sameeyay intii u dhaxaysay bartamihii Agoosto iyo bartamihii Sebtembar ka hor buufinta haraaga ah ee gudaha ee sanadlaha ah, oo ay weheliso xilli roobaad dheer. Shan lammaane oo guri ah (20-50 m u jira) oo ku yaal duleedka tuulada ayaa loo doortay daraasadda (Jaantuska 6A). Shuruudaha loo isticmaalay in lagu xusho guryaha waxay ahaayeen: xayawaan looma oggola guriga, karinta gudaha (sawirka qoryo ama dhuxul) lama oggola (ugu yaraan inta lagu jiro muddada tijaabada), iyo guryaha ay ku nool yihiin ugu badnaan laba qof, oo ku seexda cayayaanka aan cayayaanka lahayn. iyadoo la raacayo maro kaneecada la daweeyay. Ansixinta anshaxa waxaa bixiyay Guddiga Dib-u-eegista Anshaxa Cilmi-baarista Hay'adda (IRB/022/2016) ee Kulliyadda Sayniska Dabiiciga ah (CNS-IRB), Jaamacadda Addis Ababa, iyadoo la raacayo tilmaamaha ay dejisay Baaqa Ururka Caafimaadka Adduunka ee Helsinki. Ogolaanshaha madax kasta oo qoyska ah ayaa la helay iyadoo la kaashanayo shaqaalaha fidinta caafimaadka. Geeddi-socodka oo dhan waxaa ansixiyay maamullada maxalliga ah ee heerka degmada iyo waaxaha ('kebele'). Naqshadeynta tijaabada waxay raacday naqshad laba jibbaaran oo 2 × 2 Latin ah, kaas oo isku-darka iyo kontaroolada macmal ah loo qoondeeyay guryaha lammaaneeyay habeenkii ugu horreeyay oo lagu beddelay guryaha habeenka tijaabada ee xigay. Habkan waxaa lagu celiyay toban jeer. Intaa waxaa dheer, si loo qiyaaso dhaqdhaqaaqa kaneecada ee guryaha la xushay, dabinada CDC waxaa loo dejiyay inay socdaan shan habeen oo isku xigta bilowga, bartamaha iyo dhammaadka tijaabada goobta isla waqtigaas maalintii.
Isku darka isku-dhafka ah oo ka kooban lix isku-dhisyo firfircoon ayaa lagu milmay heptane (97.0% heerka dareeraha GC, Sigma Aldrich) waxaana lagu sii daayay 140 ng h-1 iyadoo la adeegsanayo qaybiyaha shabagga cudbiga ah [20]. Shabagga shabagga ayaa u oggolaaday in dhammaan isku-dhisyada lagu sii daayo cabbir joogto ah intii lagu jiray tijaabada 12-ka saacadood ah. Heptane waxaa loo isticmaalay sidii xakameyn. Dhalada waxaa lagu laalay meel u dhow meesha laga galo ee dabinka iftiinka ee Xarumaha Xakamaynta iyo Kahortagga Cudurrada (CDC) (John W. Hock Company, Gainesville, FL, US; Jaantuska 6A). Dabinnada waxaa la sudhay 0.8 - 1 m dhulka korkiisa, meel u dhow cagta sariirta, qof mutadawiciin ahna wuxuu seexday shabag kaneeco oo aan la daaweyn waxaana la shaqeeyay inta u dhaxaysa 18:00 iyo 06:30. Kaneecada lagu qabtay jinsiga iyo xaaladda jir ahaaneed (aan la quudin, la quudin, uur yar, iyo uur leh [21] ka dib waxaa la baaray iyadoo la adeegsanayo falanqaynta falcelinta silsiladda polymerase (PCR) si loo aqoonsado noocyada qaab-dhismeedka loo aqoonsaday A. gambiae sl. Xubnaha isku-dhafka ah [23]. Daraasadda goobta, dabinka guryaha lammaaneeyay waxaa lagu falanqeeyay iyadoo la adeegsanayo qaab ku habboonaanta saadka, halkaas oo soo jiidashada ay ahayd doorsoomaha ku tiirsan iyo daaweynta (isku darka synthetic vs control) ay ahayd saameynta go'an (JMP® 14.0. 0. SAS Institute Inc.). Halkan, waxaan ku soo sheegaynaa qiimaha χ2 iyo p ee laga soo qaatay tijaabada saamiga suurtogalnimada.
Qiimee inay ammaan tahay. arabiensis waxay awooday inay hesho kaadi, oo ah isha ugu weyn ee nitrogen, urea, iyadoo si toos ah u quudinaysa, 48 saacadood gudahood markii la maamulay muddo 4 maalmood ah ka dib (dpe) tijaabooyinka quudinta martida loo yahay iyo kuwa dhiigga la siiyo dumarka (Jaantuska 1A). Labada dumar ee martida loo yahay iyo kuwa dhiigga nuugaya labaduba waxay nuugeen sucrose aad uga badan cunto kasta ama biyo kale (F(5,426) = 20.15, p < 0.0001 iyo F(5,299) = 56.00, p < 0.0001, siday u kala horreeyaan; Sawirka 1B,C). Intaa waxaa dheer, dumarka martida loo yahay waxay wax yar ka cuneen kaadida 72 saacadood marka la barbar dhigo kaadida 168 saacadood (Jaantuska 1B). Markii la siiyay cunto ay ku jirto urea, dumarka martida loo yahay waxay nuugeen xaddi aad u badan oo urea ah 2.69 mM marka la barbar dhigo dhammaan fiirsashada kale iyo biyaha, halka aan laga kala saari karin 10% sucrose (F(10,813) = 15.72, p < 0.0001; Jaantuska 1D). Tani waxay ka duwanayd jawaabta dumarka dhiigga nuuga, kuwaas oo caadiyan nuuga cuntooyin ka kooban urea oo aad uga badan biyaha, inkastoo ay aad uga yar tahay 10% sucrose (F(10,557) = 78.35, p < 0.0001; Jaantuska 1).1E). Intaa waxaa dheer, marka la barbar dhigo labada xaaladood ee jir ahaaneed, dumarka la nuugay waxay nuugeen urea ka badan dumarka martida loo yahay ee xaddiga ugu hooseeya, dumarkanina waxay nuugeen xaddi isku mid ah oo urea ah oo heer sare ah (F(1,953)= 78.82, p < 0.0001; Jaantuska 1F, G). In kasta oo qaadashada cuntada ka kooban urea ay u muuqatay inay leedahay qiimayaal wanaagsan (Jaantuska 1D,E), dumarka labada xaaladood ee jir ahaaneed waxay awood u yeesheen inay hagaajiyaan xaddiga urea ee nuuga dhammaan heerarka urea qaab toosan (Jaantuska 1F,G). Sidoo kale, kaneecadu waxay u muuqataa inay xakamayso qaadashada nitrogen-ka iyagoo nidaaminaya xaddiga kaadida ee la nuugo, maadaama xaddiga nitrogen-ka ee kaadida ku jira uu ka muuqdo xaddiga la nuugo (Jaantuska 1B, C iyo B ee ku jira).
Si loo qiimeeyo saameynta kaadida iyo urea ay ku leeyihiin badbaadada kaneecada raadinta iyo nuugista dhiigga, dheddigga waxaa la siiyay kaadi afar da'ood ah (cusub, 24 saacadood, 72 saacadood, iyo 168 saacadood ka dib markii la dhigo) iyo tiro badan oo ah urea, iyo sidoo kale biyo la sifeeyay iyo 10% sucrose ayaa loo adeegsaday sidii xakameyn (Jaantuska 2A). Falanqayntan badbaadada waxay muujisay in cuntadu ay saameyn weyn ku yeelatay badbaadada guud ee dheddigga raadinaya martida (kaadida: χ2 = 108.5, df = 5, p < 0.0001; urea: χ2 = 122.8, df = 5, p < 0.0001; Sawirka 2B, C) iyo dheddigga quudiya dhiigga (kaadida: χ2 = 93.0, df = 5, p < 0.0001; urea: χ2 = 137.9, df = 5, p < 0.0001; Sawirka 2D,E). Dhammaantood Tijaabooyin, dumarku waxay quudiyeen cunto kaadi ah, urea, iyo biyo ah ayaa si weyn hoos ugu dhacay heerarka badbaadada marka loo eego dumarka la quudiyay cunto sucrose ah (Jaantuska 2B-E). Dumarka la quudiyay ee la quudiyay kaadi cusub iyo mid duugowday ayaa muujiyay heerar badbaado oo kala duwan, iyadoo kuwa la siiyay kaadi duugowday 72 saacadood (p = 0.016) ay leeyihiin fursadda ugu hooseysa ee badbaadada (Jaantuska 2B). Intaa waxaa dheer, dumarka la quudiyay ee la quudiyay 135 mM urea waxay noolaayeen waqti ka dheer kuwa la xakameeyo biyaha (p < 0.04) (Jaantuska 2C). Marka la barbardhigo biyaha, dumarka la quudiyay kaadi cusub iyo kaadi 24 saacadood ah waxay noolaayeen waqti ka dheer (p = 0.001 iyo p = 0.012, siday u kala horreeyaan; Sawirka 2D), halka dumarka la quudiyay kaadi 72 saacadood ah ay noolaayeen waqti ka dheer kuwa la quudiyay Kaadi cusub oo gaaban oo dumar ah iyo kaadi da'deedu tahay 24 saacadood (p < 0.0001 iyo p = 0.013, siday u kala horreeyaan; Sawirka 2D). Markii la quudiyay 135 mM urea, dumarka la quudiyay ee dhiigga la siiyay waxay noolaayeen waqti ka dheer dhammaan heerarka kale ee urea iyo biyaha (p <0.013; Jaantuska 2E).
Badbaadinta dheddigga martida loo yahay iyo kuwa dhiigga nuuga ee Anopheles arabinis oo quudinaya kaadida lo'da iyo urea. Baaritaanka bio (A), kaneecada dheddigga ah waxaa la siiyay cunto ka kooban kaadi lo'aad cusub iyo mid duug ah, tiro kala duwan oo urea ah, sucrose (10%) iyo biyo la safeeyey (H2O). Badbaadinta kaneecada martida loo yahay (B, C) iyo nuugista dhiigga (D, E) waxaa la diiwaangeliyey 12kii saacadoodba mar ilaa dhammaan dheddigga ay quudiyaan kaadida (B, D) iyo urea (C, E), oo ay xakameeyaan Sucrose iyo biyaha, inay dhintaan.
Wadarta masaafada iyo tirada wareegyada lagu go'aamiyay tijaabada warshadda duulista muddo 24 saacadood ah ayaa ku kala duwanaa kaneecada raadinta martida iyo kuwa nuugaya dhiigga, taasoo muujisay dhaqdhaqaaq duulimaad oo yar guud ahaan (Jaantuska 3). Kaneecada raadinta martida ee bixisay kaadi cusub iyo mid da' ah ama sucrose iyo biyo waxay muujiyeen qaabab duulimaad oo kala duwan (Jaantuska 3), iyadoo dheddigga quudinaya kaadi cusub ay aad u firfircoon yihiin waaberiga, halka kuwa quudiyay Kaneecada da'da 24 iyo 168 saacadood ee quudiyay kaadida ay muujiyeen qaabab duulimaad oo kala duwan waxayna ahaayeen kuwo caadi ah. Kaneecada dheddigga ah ee bixisay sucrose ama kaadida 72 saacadood ah waxay muujiyeen dhaqdhaqaaq muddada 24-ka saacadood ah, halka dheddigga bixiyay biyaha ay ahaayeen kuwo firfircoon inta lagu jiro bartamaha muddada. Kaneecada quudisay sucrose waxay muujiyeen heerarka ugu sarreeya ee dhaqdhaqaaqa habeenkii iyo subaxdii hore, halka kuwa cunay kaadida da'da 72 saacadood ah ay la kulmeen hoos u dhac joogto ah oo ku yimid dhaqdhaqaaqa 24 saacadood gudahood (Jaantuska 3).
Waxqabadka duulista ee dheddigga ugaadhsatada ah ee Anopheles arabinis oo quudinaya kaadida lo'da iyo urea. Tijaabada warshadda duulista, kaneecada dheddigga ah ee lagu quudiyo kaadida lo'da cusub iyo tan duugga ah, tiro badan oo urea, sucrose (10%), iyo biyo la safeeyey (H2O) ayaa lagu xidhay gacmaha toosan oo si xor ah u wareegaya (kor). dheddigga martida loo yahay (bidix) iyo kuwa dhiigga nuugaya (midig), wadarta masaafada iyo tirada duulimaadyada saacaddii cunto kasta muddo 24 saacadood ah ayaa la duubay (madow: cawl; iftiin: caddaan). Masaafada celceliska iyo tirada celceliska ee garaacyada waxaa lagu muujiyay midigta garaafka dhaqdhaqaaqa wareegga. Baararka khaladka waxay matalaan khaladka caadiga ah ee celceliska. Falanqaynta tirakoobka eeg qoraalka
Guud ahaan, dhaqdhaqaaqa duulista guud ee dumarka raadinaya martida waxay raaceen qaab la mid ah kan masaafada duulimaadka muddo 24 saacadood ah. Celceliska masaafada duulimaadka waxaa si weyn u saameeyay cuntada la cunay (F(5, 138) = 28.27, p < 0.0001), dumarka raadinaya martidana waxay liqeen 72 saacadood oo kaadi ah waxayna duuleen masaafooyin aad u dheer marka loo eego dhammaan cuntooyinka kale (p < 0.0001), kaneecada quudisa sucrose-na waxay duushay waqti ka dheer kaneecada cusub (p = 0.022) iyo kaneecada da'da 24-saac (p = 0.022). Marka la barbardhigo qaabka dhaqdhaqaaqa duulista ee lagu sharraxay cuntada kaadida, dumarka raadinaya martida ee quudisa urea waxay muujiyeen dhaqdhaqaaq duulimaad oo joogto ah muddo 24-saac ah, taasoo gaartay heerkii ugu sarreeyay qeybtii labaad ee wejiga mugdiga ah (Jaantuska 3). Inkasta oo qaababka firfircoonidu ay isku mid ahaayeen, dumarka raadinaya martida ee quudiya urea waxay si weyn u kordhiyeen masaafada duulimaadka celceliska iyadoo ku xiran heerka nuugista (F(5, 138) = 1310.91, p < 0.0001). Dumar martigelinaya oo quudiya wax kasta oo ku jira urea waxay u duulaan waqti ka dheer inta ay dumarku quudiyaan biyo ama sucrose (p < 0.03).
Dhaqdhaqaaqa duulista guud ee kaneecada dhiigga nuugta ayaa ahaa mid deggan oo socday in ka badan 24 saacadood dhammaan cuntooyinka, iyadoo dhaqdhaqaaqa kaadida uu kordhay qeybtii labaad ee xilliga mugdiga ah ee dumarka lagu quudiyo biyaha iyo sidoo kale dumarka la quudiyo cusub iyo kuwa 24 saacadood jira (sawirka 3). Iyadoo cuntada kaadidu ay si weyn u saamaysay celceliska masaafada duulimaadka ee dumarka dhiigga nuuga (F(5, 138) = 4.83, p = 0.0004), cuntada urea ma aysan sameyn (F(5, 138) = 1.36, p = 0.24) .iyadoo la socota kaadi kale iyo cunto xakameyn ah (cusub, p = 0.0091; 72 saacadood, p = 0.0022; 168 saacadood, p = 0.001; sucrose, p = 0.0017; dH2O, p = 0.036).
Saamaynta quudinta kaadida iyo urea ee xuduudaha taranka waxaa lagu qiimeeyay baaritaannada bayoolojiga ee ukunta soo saara (Jaantuska 4A) waxaana lagu baaray iyadoo loo eegayo tirada ukunta ay dhigtay dheddig kasta, cabbirka ukunta, iyo dirxiga bilowga ah ee cusub. Tirada ukunta la dhigay. Dumarka Carabta ee kaadida la siiyay waxay ku kala duwanaayeen cuntada (F(5,222) = 4.38, p = 0.0008; Sawirka 4B). Dumarku waxay quudiyeen kaadi 24-saacadood ah, cunto dhiig ah ayaa si weyn u dhigtay ukun ka badan dumarka quudiyay cuntooyinka kale ee kaadida waxayna la mid ahaayeen kuwa sucrose la siiyay (Jaantuska 4B). Sidoo kale, cabbirka ukunta ay dhigeen dheddigga kaadida la siiyay waxay ku kala duwanaayeen cuntada (F(5, 209) = 12.85, p < 0.0001), iyadoo kaadida 24-saacadood ah iyo dheddigga sucrose la siiyay ay dhigeen ukun aad uga weyn dheddigga biyaha la siiyay, halka ukunta dheddigga la siiyay 168 saacadood oo kaadi ah ay aad uga yar yihiin (Jaantuska 4C). Intaa waxaa dheer, cuntada kaadida ayaa si weyn u saameysay cabbirka dirxiga (F(5, 187) = 7.86, p < 0.0001), iyadoo dirxi aad u weyn uu ka soo baxayo ukunta ay dhigeen dheddigga kaadida 24 iyo 72 saacadood jira marka loo eego ukunta laga soo saaray dirxiga ukunta. dheddigga kaadida 168 saacadood jira ee biyaha nuuga (Jaantuska 4D).
Waxqabadka taranka ee dheddigga Anopheles arabinis ee quudinaya kaadida lo'da iyo urea. Kaneecada dheddigga ee dhiigga lagu quudiyo waxaa la siiyay cuntooyin ka kooban kaadida lo'da cusub iyo tan duugga ah, uruurinta kala duwan ee urea, sucrose (10%), iyo biyo la safeeyey (H2O) muddo 48 saacadood ah ka hor inta aan la gelin baaritaannada bayoolojiga ah iyo helitaanka substrate-ka ukunta 48 saacadood (A). Tirada ukunta (B, E), cabbirka ukunta (C, F) iyo cabbirka dirxiga (D, G) waxaa si weyn u saameeyay cuntada la bixiyay (kaadida lo'da: BD; urea: EG). Macnaha halbeeg kasta oo lagu cabbiray magacyada xarfaha kala duwan ayaa si weyn uga duwanaa midba midka kale (ANOVA hal-dhinac ah iyadoo la adeegsanayo falanqaynta Tukey ee hoc; p < 0.05). Baararka qaladka waxay matalaan qaladka caadiga ah ee celceliska
Maadaama ay tahay qaybta ugu weyn ee kaadida ee nitrogenous-ka leh, urea, markii loo bixiyay cunto ahaan dheddigga dhiigga nuuga, waxay si weyn u saamaysay xuduudaha taranka dhammaan daraasadaha. Tirada ukumaha ay dheddigga quutaan urea, ka dib cunto dhiig ah, iyadoo ku xiran heerka urea (F(11, 360) = 4.69; p < 0.0001), dheddigga waxay quudiyaan heerka urea inta u dhaxaysa 134 µM iyo 1.34 mM waxay dhaleen ukumo badan (Jaantuska 4E). Dheddigga lagu quudiyo heerka urea ee 134 µM ama ka badan waxay dhalaan ukumo ka weyn dheddigga lagu quudiyo biyaha (F(10, 4245) = 36.7; p < 0.0001; Jaantuska 4F), iyo cabbirka dirxiga, inkastoo ay saameeyeen isku-darka urea ee hooyooyinka (F(10, 3305) = 37.9; p < 0.0001) wuu isbeddelay (Jaantuska 4G).
Soo jiidashada guud ee soo saarista kaadida lo'da ee bannaanka u baxda ee bannaanka u baxda. Arabiensis-ka lagu qiimeeyay tuubada galaaska ee olfactometer-ka (Jaantuska 5A) waxaa si weyn u saameeyay da'da kaadida (χ2 = 15.9, df = 4, p = 0.0032; Sawirka 5B). Falanqaynta kadib waxay muujisay in urta kaadida ee duugowday 24 saacadood ay keentay heerar soo jiidasho oo aad u sarreeya marka loo eego dhammaan daawaynta kale (72 saacadood: p = 0.0060, 168 saacadood: p = 0.012, pentane: p = 0.00070), Marka laga reebo urta kaadida cusub (p = 0.13; Sawirka 5B). Inkasta oo soo jiidashada guud ee kaneecada dhiigga nuugta ee urta kaadida aysan si weyn uga duwanayn (χ2 = 8.78, df = 4, p = 0.067; Sawirka 5C), dumarkan waxaa la ogaaday inay si weyn u soo jiidasho badan yihiin soo saarista bannaanka u baxda ee bannaanka u baxda marka la barbar dhigo kaadida da'da ah ee 72 saacadood marka la barbar dhigo kontaroolada (p = 0.0066; Jaantuska 5C).
Jawaabaha dhaqanka ee urta kaadida lo'da ee dabiiciga ah iyo tan macmalka ah ee raadinta martida iyo kuwa dhiigga lagu quudiyo Anopheles arabianus. Naqshadda tuubada galaaska olfactometer-ka (A). Soo jiidashada soosaarka isbedbeddelaya ee ka imanaya kaadida lo'da cusub iyo tan da'da ah ilaa kaneecada martida loo yahay (B) iyo kuwa dhiigga nuugaya (C). Soo hel falcelinta teendhada ee Lord An. Soosaarayaasha Headspace ee laga soocay kaadida lo'da ee cusub (D), 24-saacadood (E), 72-saacadood (F), iyo 168-saacadood (G) ayaa la muujiyay. Raad-raacyada ogaanshaha anteenada elektaroonigga ah (EAD) waxay muujinayaan isbeddellada danabka ee ka jawaabaya isku-dhafka noolaha firfircoon ee ku jira madaxa bannaan ee laga soo saaray chromatograph-ka gaaska oo lagu ogaaday qalabka ionization ololka (FID). Bar-ka miisaanka wuxuu matalaa baaxadda jawaabta (mV) iyo waqtiga haynta (s). Sifooyinka iyo heerarka sii deynta (µg h-1) ee isku-dhafka firfircoon ee bayoolojiga ayaa la muujiyay. Hal xiddig (*) waxay muujinaysaa jawaab celin hoose oo joogto ah. Xiddigo labanlaab ah (**) waxay muujinayaan jawaabo aan la soo saari karin. Soo hel Martigeliyaha (H) iyo nuugista dhiigga (I) An.arabiensis waxay leedahay rafcaanno kala duwan oo ku saabsan isku-darka macmal ah ee urta kaadida lo'da cusub iyo tan duugga ah. Celceliska saamiga kaneecada ee soo jiidata magacyada xarfaha kala duwan ayaa si weyn uga duwanaa midba midka kale (ANOVA hal-dhinac ah iyadoo la adeegsanayo falanqaynta Tukey ee hoc kadib; p < 0.05). Baararka qaladku waxay matalaan qaladka caadiga ah ee miisaanka
Dheddig Ann.arabiensis, 72 saacadood iyo 120 saacadood ka dib cuntada dhiigga, inta lagu jiro dhalmada, ma jirin wax doorbid ah oo laga sameeyay soo-saarista kacsan ee ka timaadda kaadida lo'da cusub iyo tan duugga ah marka la barbar dhigo kantaroolka pentane (χ2 = 3.07, p > 0.05; Faylka dheeraadka ah 1: Jaantuska S1).
Ann.arabiensis oo ah dheddig, falanqaynta GC-EAD iyo GC-MS waxay aqoonsadeen siddeed, lix, saddex iyo saddex iskudhisyo firfircoon oo bayooloji ah (Jaantuska 5D-G). Inkasta oo la arkay kala duwanaansho tirada iskudhisyada kiciya jawaabaha elektrofisiyoolajiyadeed, inta badan iskudhisyadani waxay ku jireen qayb kasta oo madaxeed oo kacsan oo laga soo ururiyey kaadi cusub oo duug ah. Sidaa darteed, soosaar kasta, kaliya iskudhisyo soo saaray jawaab jireed oo ka timid anteenooyinka dheddigga ee ka sarreeya heerka ayaa lagu daray falanqaynta dheeraadka ah.
Wadarta heerka sii deynta isbeddelka leh ee isku-dhafka firfircoon ee ku jira ururinta booska madaxa ayaa ka kordhay 29 µg h-1 kaadida cusub ilaa 242 µg h-1 kaadida 168-saacadood jir ah, inta badan waxaa sabab u ah p-cresol iyo m-formaldehyde Phenol ayaa kordha iyo sidoo kale phenol. Taas bedelkeeda, heerarka sii deynta ee isku-dhafka kale, sida 2-cyclohexen-1-one iyo decanal, ayaa hoos u dhacay iyadoo sii kordheysa da'da kaadida, taas oo la xiriirta hoos u dhaca la arkay ee xoogga calaamadaha (badanaanta) ee chromatogram-ka (Jaantuska 5D)-G ee bidixda) iyo jawaabaha fiisiyoolajiyadeed ee isku-dhafkan (Jaantuska 5D-G ee midig).
Guud ahaan, isku darka macmalka ah wuxuu lahaa saami dabiici ah oo la mid ah isku-dhafka firfircoon ee noolaha ee lagu aqoonsaday soosaarka kacsan ee meelaha madaxa kaadida ee cusub iyo kuwa duugoobay (Jaantuska 5D-G) mana u muuqan inuu soo jiitay soo jiidasho weyn raadinta martida (χ2 = 8.15, df = 4, p = 0.083; Sawirka 5H) ama kaneecada dhiigga nuugta (χ2 = 4.91, df = 4, p = 0.30; Sawirka 5I). Si kastaba ha ahaatee, isbarbardhigga labada dhinac kadib ee u dhexeeya daaweynta ayaa muujiyay in kaneecada martida doonka ah ay si weyn u soo jiidatay isku darka macmalka ah ee kaadida da'da 24-saac marka la barbar dhigo kantaroolka pentane (p = 0.0086; Sawirka 5H).
Si loo qiimeeyo doorka qaybaha shaqsiga ah ee isku-darka macmal ah ee kaadida da'da 24-saacadood, lix isku-darka kala-goynta ah ayaa lagu qiimeeyay isku-darka dhammaystiran ee tijaabada Y-tube, kaas oo laga saaray isku-darka shaqsiga ah. Kaneecada martida loo yahay, ka-goynta isku-darka shaqsiga ah ee isku-darka dhammaystiran waxay saameyn weyn ku yeelatay jawaabaha dhaqanka (χ2 = 19.63, df = 6, p = 0.0032; Faylka Dheeraadka ah 1: Jaantuska S2A), dhammaan isku-darka kala-goynta ayaa ka soo jiidasho badan kuwa ka yar kuwa si buuxda isugu qasan. Taas bedelkeeda, ka saarista isku-darka shaqsiga ah ee isku-darka si buuxda isu-darka ah ma saameyn jawaabaha dhaqanka ee kaneecada nuugta dhiigga (χ2 = 11.38, df = 6, p = 0.077), marka laga reebo decanal, taas oo keentay heerar hoose marka la barbar dhigo Soo jiidashada isku-darka oo dhammaystiran (p = 0.022; Faylka Dheeraadka ah 1: Jaantuska S2B).
Tuulo ku taal Itoobiya oo ay duumadu ku badan tahay, waxtarka isku darka kaadida lo'da ee 24-saacadood ah ee soo jiidashada kaneecada xaaladaha goobta ayaa la qiimeeyay toban habeen (Jaantuska 6A). Wadarta 4,861 kaneeco ayaa la qabtay oo la aqoonsaday, kuwaas oo 45.7% ay ahaayeen Anthropus.gambiae sl, 18.9% waxay ahaayeen Anopheles pharoensis iyo 35.4% waxay ahaayeen Culex spp. (Faylka dheeraadka ah 1: Shaxda S1). Anopheles arabinis waa xubinta kaliya ee isku dhafka noocyada An.Gambian ee lagu aqoonsaday falanqaynta PCR. Celcelis ahaan, 320 kaneeco ayaa la qabtay habeenkii, inta lagu jiro waqtigaas dabinnada leh isku darka isku-dhafka ah waxay qabteen kaneeco ka badan dabinada la isku daray ee aan isku darka lahayn (χ2(0, 3196) = 170.0, p < 0.0001). Dabinnada aan la dabin ayaa la dhigay mid kasta oo ka mid ah shan habeen oo xakameyn ah bilowga, dhexe, iyo dhammaadka tijaabada. Tiro la mid ah kaneecada ayaa lagu qabtay lammaane kasta dabino, taasoo muujinaysa inaysan jirin eex u dhexeeya guryaha (χ2(0, 1665) = 9 × 10-13, p > 0.05) iyo hoos u dhac tirada dadka ah inta lagu jiro muddada daraasadda. Marka la barbardhigo dabinada xakamaynta, tirada kaneecada lagu qabtay dabinada ay ku jiraan isku darka macmal ah ayaa si weyn loo kordhiyay: raadinta martida (χ2(0, 2107) = 138.7, p < 0.0001), quudinta dhiigga ee dhawaan (χ2(0, 650) = 32.2, p < 0.0001) iyo uurka (χ2(0, 228) = 6.27, p = 0.0123; Faylka dheeraadka ah 1: Shaxda S1). Tani waxay sidoo kale ka muuqataa tirada guud ee kaneecada la qabtay: raadinta martida > nuugista dhiigga > uurka > uurka nus-uurka > lab.
Qiimaynta goobta ee waxtarka isku darka urta kaadida lo'da ee 24-saacadood ah. Tijaabooyinka goobta waxaa lagu sameeyay koonfurta-bartamaha Itoobiya (khariidadda), meel u dhow magaalada Maki (geli), iyadoo la adeegsanayo dabinka iftiinka ee Xarumaha Xakamaynta Cudurrada (CDC) (midig) guryaha lammaaneeyay, iyadoo la adeegsanayo naqshad afargeesle ah oo Laatiin ah (sawirka hawada) (A). Sawir-qaadayaasha CDC ee urta isku-dhafan waxay soo jiitaan oo qabtaan Anopheles arabesques dheddig ah (B), laakiin maaha Anopheles farroes (C), si ka duwan, saameyn ku salaysan xaalad jireed. Intaa waxaa dheer, dabinadani waxay qabteen tiro aad u kordhay oo ka mid ah kaneecada Culex ee martida loo yahay. (D) Marka la barbardhigo xakamaynta. Baararka bidixda waxay matalaan celceliska tusmada xulashada kaneecada lagu qabtay lammaane ur xun (cagaar) iyo dabinada xakamaynta (furan) (N = 10), halka baararka midig ay matalaan tusmada xulashada celceliska lammaane ee dabinnada xakamaynta (furan; N = 5). ). Calaamaduhu waxay muujinayaan heerarka muhiimadda tirakoobka (*p = 0.01 iyo ***p < 0.0001)
Saddexda nooc ayaa si kala duwan loogu qabtay dabino ay ku jiraan isku-darka macmal ah. Raadinta martida (χ2(1, 1345) = 71.7, p < 0.0001), quudinta dhiigga (χ2(1, 517) = 16.7, p < 0.0001) iyo uurka (χ2(1, 180) = 6.11, p = 0.0134) a .arabiensis waxaa lagu xannibay dabinka sii deynaya isku-darka macmal ah (Jaantuska 6B), halka xaddiga An uusan kala duwanayn. Pharoensis xaalado kala duwan oo jireed ayaa laga helay (Jaantuska 6C). Culex, koror weyn oo ku yimid tirada kaneecada raadinaysa martida ayaa laga helay dabinada lagu dabo galay isku-darka macmal ah (χ2(1,1319) = 12.6, p = 0.0004; Sawirka 6D), marka la barbar dhigo dabinada xakamaynta.
Dabinnada sed-ka ee ku yaal meel ka baxsan hoyga martida ee u dhexeeya goobaha taranka iyo bulshooyinka miyiga ah ee Itoobiya ayaa loo isticmaalay in lagu qiimeeyo in kaneecada duumada ay u isticmaasho urta kaadida lo'da calaamad deegaan martigelin ah. Maqnaanshaha tilmaamaha martida, kulaylka, iyo joogitaanka ama la'aanta urta kaadida lo'da, ma jirin kaneeco la qabtay (Faylka Dheeraadka ah 1: Jaantuska S3). Si kastaba ha ahaatee, joogitaanka heerkulka sare iyo urta kaadida lo'da, kaneecada duumada dheddigga ah ayaa la soo jiitay oo la qabtay, inkastoo tiro yar, iyada oo aan loo eegin da'da kaadida (χ2(5, 25) = 2.29, p = 0.13; Faylka Dheeraadka ah 1: Jaantuska S3). Taas bedelkeeda, xakamaynta biyuhu ma qaban kaneecada duumada heerkul sare (Faylka Dheeraadka ah 1: Jaantuska S3).
Kaneecada duumada waxay heshaa oo qaybisaa xeryo ay ku jiraan nitrogen iyada oo loo marayo quudinta magdhowga kaadida lo'da (tusaale ahaan, balliyada) si loo horumariyo sifooyinka taariikhda nolosha, oo la mid ah cayayaanka kale [2, 4, 24, 25, 26]. Kaadida lo'du waa kheyraad la cusboonaysiin karo oo si fudud loo heli karo oo si dhow ula xiriira meelaha nasashada ee cayayaanka duumada, sida meelaha lo'da iyo dhirta dhaadheer ee u dhow guryaha miyiga iyo goobaha dhalmada. Kaneecada dheddigga waxay helaan kheyraadkan iyagoo ur ah waxayna awoodaan inay nidaamiyaan qaadashada xeryo nitrogenous ah ee kaadida, oo ay ku jiraan urea, oo ah qaybta ugu weyn ee nitrogenous ee kaadida [15, 16]. Iyada oo ku xidhan xaaladda jir ahaaneed ee kaneecada dheddigga, nafaqooyinka ku jira kaadida waxaa loo qoondeeyay si loo wanaajiyo dhaqdhaqaaqa duulista iyo badbaadada kaneecada dheddigga ah ee martida loo yahay, iyo sidoo kale astaamaha badbaadada iyo taranka ee shakhsiyaadka dhiigga lagu quudiyo inta lagu jiro wareegga gonadotropic ee ugu horreeya. Sidaa darteed, isku darka kaadidu wuxuu door muhiim ah ka ciyaaraa fayrasyada duumada ee xiran sida dadka waaweyn ee nafaqo-darrada qaba [8], maadaama ay siiso kaneecada dheddigga awood ay ku helaan xeryo nitrogenous muhiim ah iyagoo ku hawlan quudinta khatarta yar. Natiijadani waxay leedahay cawaaqib xumo faafa oo muhiim ah, maadaama dumarku ay kordhiyaan cimrigooda, firfircoonidooda. iyo wax soo saarka taranka, kuwaas oo dhammaantood saameeya awoodda vector-ka. Intaa waxaa dheer, dhaqankan wuxuu noqon karaa bartilmaameedka barnaamijyada maaraynta vector-ka mustaqbalka.