Kev nrhiav thiab faib cov khoom noj muaj txiaj ntsig sib xyaw ua ke cov kab nrhiav zaub mov thiab keeb kwm lub neej. Txhawm rau kom them rau qhov tsis txaus ntawm cov khoom noj tshwj xeeb ntawm ntau theem ntawm lub neej, cov kab tuaj yeem tau txais cov khoom noj no los ntawm kev pub ntxiv, piv txwv li, los ntawm kev noj cov kua qaub ntawm cov vertebrate hauv cov txheej txheem hu ua puddles. Tus yoov tshaj cum Anopheles arabiani zoo li tsis muaj zaub mov txaus thiab, yog li ntawd, xav tau cov khoom noj rau ob qho tib si metabolism thiab kev yug me nyuam. Lub hom phiaj ntawm txoj kev tshawb fawb no yog los ntsuas seb An. arabiensis kev sib xyaw ntawm cov zis nyuj rau kev tau txais cov khoom noj puas txhim kho cov yam ntxwv keeb kwm lub neej.
Xyuas kom tseeb tias nws muaj kev nyab xeeb. arabiensis raug nyiam los ntawm cov ntxhiab tsw ntawm cov zis nyuj tshiab, 24-teev, 72-teev, thiab 168-teev, thiab cov poj niam nrhiav tus tswv tsev thiab cov ntshav uas tau noj (48-teev tom qab noj ntshav) tau ntsuas hauv Y-tube olfactometer, thiab cov poj niam cev xeeb tub tau raug soj ntsuam rau kev xeem qe menyuam. Kev tshuaj xyuas tshuaj lom neeg thiab electrophysiological ua ke tau siv los txheeb xyuas cov tshuaj lom neeg hauv cov zis nyuj ntawm txhua plaub pawg hnub nyoog. Cov khoom sib xyaw ua ke ntawm cov tshuaj lom neeg tau raug soj ntsuam hauv Y-tube thiab kev sim hauv thaj teb. Txhawm rau tshawb nrhiav cov zis nyuj thiab nws cov tshuaj lom neeg tseem ceeb urea ua cov khoom noj ntxiv rau cov kab mob malaria, cov kev ntsuas noj thiab cov yam ntxwv keeb kwm lub neej tau raug ntsuas. Qhov sib piv ntawm cov yoov tshaj cum poj niam thiab qhov ntau ntawm cov zis nyuj thiab urea nqus tau raug soj ntsuam. Tom qab pub mis, cov poj niam tau raug soj ntsuam rau kev ciaj sia, kev ya mus los, thiab kev yug me nyuam.
Nrhiav cov ntshav thiab cov khoom noj khoom haus ntawm tus tswv tsev. Hauv kev tshawb fawb hauv chav kuaj thiab hauv thaj teb, cov neeg Arab tau nyiam cov ntxhiab tsw ntuj thiab cov tshuaj lom ntawm cov zis nyuj tshiab thiab laus. Cov poj niam cev xeeb tub tsis quav ntsej txog cov zis nyuj ntawm qhov chaw tso qe. Cov poj niam nrhiav thiab nqus ntshav nquag nqus cov zis nyuj thiab urea thiab faib cov peev txheej no raws li keeb kwm lub neej pauv pauv ua lub luag haujlwm ntawm lub xeev physiological rau kev ya, kev ciaj sia, lossis kev yug me nyuam.
Cov kab Anopheles arabinis tau txais thiab faib cov zis nyuj kom zoo dua qub. Kev pub mis ntxiv rau cov zis nyuj cuam tshuam rau lub peev xwm ntawm cov kab mob ncaj qha los ntawm kev ua kom muaj sia nyob txhua hnub thiab qhov ceev ntawm cov kab mob, thiab tsis ncaj qha los ntawm kev hloov pauv kev ya dav hlau thiab yog li ntawd yuav tsum tau xav txog hauv cov qauv yav tom ntej.
Kev tau txais thiab faib cov khoom noj khoom haus sib xyaw ua ke cov kab nrhiav zaub mov thiab keeb kwm lub neej [1,2,3]. Cov kab muaj peev xwm xaiv thiab tau txais zaub mov thiab ua kev pub zaub mov raws li kev muaj zaub mov thiab cov kev xav tau zaub mov [1, 3]. Kev faib cov khoom noj khoom haus nyob ntawm cov txheej txheem keeb kwm lub neej thiab tej zaum yuav ua rau muaj ntau yam kev xav tau rau kev noj zaub mov zoo thiab ntau npaum li cas hauv cov theem sib txawv ntawm lub neej ntawm cov kab [1, 2]. Txhawm rau them rau qhov tsis txaus ntawm cov khoom noj khoom haus tshwj xeeb, cov kab tuaj yeem tau txais cov khoom noj khoom haus no los ntawm kev pub zaub mov ntxiv, xws li ntawm cov av nkos, ntau yam quav thiab cov kua qaub ntawm cov vertebrates, thiab carrion, ib qho txheej txheem hu ua puddles [2]. Txawm hais tias ntau yam npauj npaim thiab npauj npaim feem ntau piav qhia, cov qhov dej kuj tshwm sim hauv lwm cov kab txiav txim, thiab kev nyiam thiab kev noj cov khoom siv no tuaj yeem muaj kev cuam tshuam loj rau kev noj qab haus huv thiab lwm yam cwj pwm keeb kwm lub neej [2, 4, 5, 6], 7]. Tus kab mob malaria yoov tshaj cum Anopheles gambiae sensu lato (sl) tshwm sim ua tus neeg laus 'tsis muaj zaub mov txaus' [8], yog li kev ywg dej yuav ua lub luag haujlwm tseem ceeb hauv nws cov yam ntxwv keeb kwm lub neej, tab sis tus cwj pwm no tseem tsis tau raug tso tseg. Kev siv kev ntxhov siab ua ib txoj hauv kev los ua kom muaj kev noj zaub mov ntau ntxiv hauv lub tsheb tseem ceeb no tsim nyog tau txais kev saib xyuas vim qhov no yuav muaj cov txiaj ntsig tseem ceeb ntawm kev sib kis kab mob.
Kev noj cov pa nitrogen hauv cov yoov tshaj cum Anopheles poj niam laus yog txwv vim muaj cov calorie tsawg uas nqa los ntawm theem larval thiab kev siv cov ntshav tsis zoo [9]. Cov poj niam Ann.gambiae sl feem ntau them rau qhov no los ntawm kev ntxiv cov ntshav noj ntxiv [10, 11], yog li ua rau ntau tus neeg muaj feem yuav kis tus kab mob thiab ua rau cov yoov tshaj cum muaj feem yuav raug tsiaj ntau dua. Xwb, cov yoov tshaj cum tuaj yeem siv kev pub ntxiv ntawm cov quav vertebrate kom tau txais cov tshuaj nitrogenous uas txhim kho kev hloov pauv thiab kev ya dav hlau, raws li tau pom los ntawm lwm cov kab [2]. Hauv qhov no, qhov kev nyiam muaj zog thiab sib txawv ntawm ib hom tsiaj hauv An. Cov kab Gambian sl, Anopheles arabinis, cov zis nyuj tshiab thiab laus [12,13,14], yog qhov nthuav. Anopheles arabinis yog lub sijhawm hauv nws cov kev nyiam tus tswv tsev thiab paub tias koom nrog thiab noj nyuj. Cov zis nyuj yog ib qho peev txheej nplua nuj hauv cov tshuaj nitrogenous, nrog urea suav txog 50-95% ntawm tag nrho cov nitrogen hauv cov zis tshiab [15, 16]. Thaum cov zis nyuj laus zuj zus, cov kab mob me me siv cov peev txheej no los txo qhov nyuaj ntawm cov tshuaj nitrogenous hauv 24 teev [15]. Nrog rau kev nce sai ntawm ammonia, cuam tshuam nrog kev poob qis ntawm cov organic nitrogen, cov kab mob alkalophilic (ntau yam uas tsim cov tshuaj lom rau yoov tshaj cum) vam meej [15], uas tej zaum yuav yog poj niam Ann.arabiensis nyiam cov zis hnub nyoog 24 teev lossis tsawg dua [13, 14].
Hauv kev tshawb fawb no, tus tswv tsev thiab cov ntshav Ans tau raug nrhiav. Thaum nws thawj lub voj voog gonadotropin, arabiensis tau raug soj ntsuam rau kev tau txais cov nitrogenous compounds, suav nrog urea, los ntawm kev sib xyaw cov zis. Tom ntej no, ntau qhov kev sim tau ua los ntsuas seb cov yoov tshaj cum poj niam faib cov khoom noj khoom haus no li cas rau kev ciaj sia, kev yug me nyuam thiab kev nrhiav zaub mov ntxiv. Thaum kawg, cov ntxhiab tsw ntawm cov zis nyuj tshiab thiab laus tau raug soj ntsuam los txiav txim siab seb cov no puas muab cov lus qhia txhim khu kev qha rau tus tswv tsev thiab cov ntshav An. Hauv lawv txoj kev tshawb nrhiav rau cov khoom noj khoom haus no, arabiensis tau pom cov tshuaj sib raug zoo tom qab qhov sib txawv ntawm qhov pom. Cov tshuaj tsw qab sib xyaw ntawm cov organic compounds volatile (VOCs) tau txheeb xyuas hauv cov zis laus 24 teev tau raug soj ntsuam ntxiv hauv cov xwm txheej hauv thaj chaw, txuas ntxiv cov txiaj ntsig tau txais hauv cov xwm txheej hauv chaw kuaj mob thiab qhia txog cov txiaj ntsig ntawm cov ntxhiab tsw ntawm cov zis nyuj ntawm ntau yam kev ua haujlwm ntawm lub cev. Kev nyiam yoov tshaj cum. Cov txiaj ntsig tau txais lees paub tias An. arabiensis tau txais thiab faib cov nitrogenous compounds pom hauv cov zis vertebrate los cuam tshuam rau cov yam ntxwv keeb kwm lub neej. Cov txiaj ntsig no tau tham txog hauv cov ntsiab lus ntawm cov txiaj ntsig epidemiological thiab lawv tuaj yeem siv li cas rau kev saib xyuas thiab tswj hwm vector.
Cov kab Anopheles arabicans (Dongola hom) tau khaws cia ntawm 25 ± 2 °C, 65 ± 5% RH thiab lub voj voog kaj: tsaus ntuj 12:12 teev. Cov kab menyuam tau yug hauv cov tais yas (20 cm × 18 cm × 7 cm) uas muaj dej lim thiab pub zaub mov ntses Tetramin® (Tetra Werke, Melle, DE). Cov menyuam dev tau sau rau hauv 30 ml khob (Nolato Hertila, Åstorp, SE) thiab tom qab ntawd hloov mus rau Bugdorm cages (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science, Taichung, Taiwan) kom cov kab laus tawm los. Cov kab laus tau muab 10% kua sucrose ad libitum txog 4 hnub tom qab tawm los (dpe), thaum ntawd cov poj niam nrhiav tus tswv tsev tau muab zaub mov tam sim ntawd ua ntej qhov kev sim, lossis tau tshaib plab ib hmos nrog dej lim ua ntej qhov kev sim, raws li tau piav qhia hauv qab no. Cov poj niam siv rau kev sim dav hlau tau tshaib plab tsuas yog 4-6 teev nrog dej thiab libitum. Txhawm rau npaj cov yoov tshaj cum uas haus ntshav rau kev kuaj mob tom qab, 4 tus poj niam dpe tau muab cov ntshav yaj defibrotic (Håtunalab, Bro, SE) siv lub tshuab pub mis (Hemotek Discovery Workshops, Accrington, UK). Cov poj niam uas puv nkaus tau raug xa mus rau cov tawb thiab muab zaub mov ncaj qha, raws li tau piav qhia hauv qab no, lossis 10% sucrose ad libitum rau 3 hnub ua ntej kev sim uas tau piav qhia hauv qab no. Cov poj niam tom kawg tau siv rau kev kuaj mob hauv lub raj dav hlau thiab xa mus rau chav kuaj mob, thiab tom qab ntawd tau muab dej distilled ad libitum rau 4-6 teev ua ntej kev sim.
Cov kev ntsuam xyuas pub mis tau siv los ntsuas qhov ntau ntawm cov zis thiab urea noj rau cov poj niam laus An.Arab. Cov poj niam nrhiav tus tswv tsev thiab cov poj niam noj ntshav tau muab cov khoom noj uas muaj 1% cov zis nyuj tshiab thiab laus diluted, ntau yam concentration ntawm urea, thiab ob qho kev tswj (10% sucrose thiab dej) rau 48 teev. Tsis tas li ntawd, cov xim zaub mov (1 mg ml-1 xylene cyanide FF; CAS 2650-17-1; Sigma-Aldrich, Stockholm, SE) tau ntxiv rau cov khoom noj thiab muab rau hauv 4 × 4 matrix hauv 250 µl microcentrifuge raj (Axygen Scientific, Union City, CA, US; Daim Duab 1A) Sau rau ntug (~ 300 µl). Txhawm rau kom tsis txhob muaj kev sib tw ntawm cov yoov tshaj cum thiab cov teebmeem ntawm cov xim zas, muab 10 tus yoov tshaj cum rau hauv lub tais Petri loj (12 cm hauv txoj kab uas hla thiab 6 cm hauv qhov siab; Semadeni, Ostermundigen, CH; Daim Duab 1A) hauv qhov tsaus ntuj tag nrho ntawm 25 ± 2 cm °C thiab 65 ± 5% qhov av noo. Cov no cov kev sim tau rov ua dua 5 txog 10 zaug. Tom qab raug zaub mov noj, cov yoov tshaj cum tau muab tso rau ntawm -20 ° C kom txog thaum muaj kev tshuaj xyuas ntxiv.
Nrhiav cov zis nyuj thiab urea uas tus tswv tsev thiab tus poj niam Anopheles arabianus nqus ntshav. Hauv kev sim pub mis (A), cov yoov tshaj cum poj niam tau noj cov zaub mov uas muaj cov zis nyuj tshiab thiab laus, ntau yam urea, sucrose (10%), thiab dej lim (H2O). Cov poj niam nrhiav tus tswv tsev (B) thiab cov poj niam noj ntshav (C) nqus sucrose ntau dua li lwm yam zaub mov uas tau sim. Nco ntsoov tias cov poj niam nrhiav tus tswv tsev nqus cov zis nyuj 72 teev tsawg dua 168 teev zis nyuj (B). Qhov nruab nrab ntawm tag nrho cov nitrogen (± tus qauv deviation) ntawm cov zis yog sawv cev hauv daim duab ntxig. Cov poj niam nrhiav tus tswv tsev (D, F) thiab cov poj niam nqus ntshav (E, G) noj urea raws li qhov ntau npaum li cas. Qhov nruab nrab ntawm cov pa nqus (D, E) nrog cov npe ntawv sib txawv sib txawv ntawm ib leeg (ib txoj kev ANOVA siv Tukey's post hoc analysis; p < 0.05). Cov kab yuam kev sawv cev rau qhov yuam kev tus qauv ntawm qhov nruab nrab (BE). Cov kab dashed ncaj sawv cev rau kab log-linear regression (F, G)
Yuav kom tso cov khoom noj uas nqus tau, cov yoov tshaj cum tau muab tso rau hauv 1.5 ml microcentrifuge raj uas muaj 230 µl ntawm dej distilled thiab cov ntaub so ntswg tau raug cuam tshuam siv lub pestle pov tseg thiab lub cev muaj zog tsis muaj hlua (VWR International, Lund, SE), ua raws li centrifugation ntawm 10 krpm rau 10 feeb. Lub supernatant (200 µl) tau raug xa mus rau 96-qhov microplate (Sigma-Aldrich) thiab absorbance (λ620) tau txiav txim siab siv lub spectrophotometer-based microplate nyeem ntawv (SPECTROStar® Nano, BMG Labtech, Ortenberg, DE) nm). Xwb, cov yoov tshaj cum tau raug zom hauv 1 ml ntawm dej distilled, 900 µl ntawm cov uas tau raug xa mus rau lub cuvette rau kev tshuaj xyuas spectrophotometric (λ 620 nm; UV 1800, Shimadzu, Kista, SE). Txhawm rau ntsuas kev noj zaub mov, tus qauv nkhaus tau npaj los ntawm kev sib xyaw ua ke kom tau 0.2 µl rau 2.4 µl ntawm 1 mg ml-1 xylene cyanide. Tom qab ntawd, qhov ceev ntawm cov xim uas paub lawm tau siv los txiav txim seb cov khoom noj ntau npaum li cas txhua tus yoov tshaj cum noj.
Cov ntaub ntawv ntim tau raug tshuaj xyuas siv kev tshuaj xyuas ib txoj kev sib txawv (ANOVA) ua raws li Tukey qhov kev sib piv tom qab hoc (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc., Cary, NC, US, 1989–2007). Kev tshuaj xyuas linear regression piav qhia txog kev noj urea uas nyob ntawm qhov concentration thiab piv cov lus teb ntawm cov yoov tshaj cum nrhiav tus tswv tsev thiab cov yoov tshaj cum haus ntshav (GraphPad Prism v8.0.0 rau Mac, GraphPad Software, San Diego, CA, US).
Kwv yees li ntawm 20 µl ntawm cov qauv zis los ntawm txhua pawg hnub nyoog tau khi rau ntawm Chromosorb® W/AW (10 mg 80/100 mesh, Sigma Aldrich) thiab muab tso rau hauv cov tshuaj ntsiav tin (8 mm × 5 mm). Cov tshuaj ntsiav tau muab tso rau hauv chav hlawv ntawm lub tshuab ntsuas CHNS/O (Flash 2000, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, US) los txiav txim siab cov ntsiab lus nitrogen hauv cov zis tshiab thiab cov zis laus raws li cov txheej txheem ntawm cov chaw tsim khoom. Tag nrho cov nitrogen (g N l-1) tau ntsuas raws li cov kev paub ntawm urea uas siv ua tus qauv.
Txhawm rau ntsuam xyuas qhov cuam tshuam ntawm kev noj zaub mov rau kev nrhiav tus tswv tsev thiab kev haus ntshav poj niam ciaj sia, cov yoov tshaj cum tau muab tso rau hauv cov tais Petri loj (12 cm hauv txoj kab uas hla thiab 6 cm hauv qhov siab; Semadeni) nrog lub qhov mesh-npog hauv lub hau (3 cm hauv txoj kab uas hla) nrog Rau kev ua pa thiab kev muab zaub mov. Cov zaub mov tau muab ncaj qha tom qab 4 dpe thiab suav nrog 1% diluted tshiab thiab laus nyuj zis, plaub qhov concentration ntawm urea, thiab ob qho kev tswj hwm, 10% sucrose thiab dej. Txhua qhov zaub mov tau pipetted rau ntawm lub hniav tampon (DAB Dental AB, Upplands Väsby, SE) ntxig rau hauv 5 ml koob txhaj tshuaj (Thermo Fisher Scientific, Gothenburg, SE), lub plunger tshem tawm, thiab muab tso rau saum lub tais petri (daim duab 1).1A). Hloov koj cov zaub mov txhua hnub. Tswj lub chaw kuaj mob raws li tau piav qhia saum toj no. Cov yoov tshaj cum uas ciaj sia tau suav ob zaug hauv ib hnub, thaum cov yoov tshaj cum tuag tau pov tseg kom txog thaum tus yoov tshaj cum kawg tuag (n = 40 ib qho kev kho mob). Kev ciaj sia ntawm cov yoov tshaj cum uas noj ntau yam zaub mov tau soj ntsuam los ntawm kev siv cov kab ke ciaj sia Kaplan-Meyer thiab kev xeem log-rank los sib piv kev faib tawm ntawm kev ciaj sia ntawm cov zaub mov noj (IBM SPSS Statistics 24.0.0.0).
Ib lub tshuab ua kom yoov tshaj cum ya raws li Attisano et al.[17], ua los ntawm 5 hli tuab acrylic panels (10 cm dav x 10 cm ntev x 10 cm siab) tsis muaj pem hauv ntej thiab nram qab panels (Daim duab 3: sab saum toj). Ib lub pivot sib dhos nrog ib lub raj ntsug ua los ntawm ib lub roj chromatography kem (0.25 hli id; 7.5 cm L) nrog cov kawg glued rau ib lub koob kab uas dai ntawm ib khub neodymium magnets 9 cm sib nrug. Ib lub raj kab rov tav ua los ntawm tib cov khoom siv (6.5 cm L) faib lub raj ntsug los ua ib lub caj npab tethered thiab ib lub caj npab uas nqa ib daim me me ntawm cov ntawv ci txhuas ua lub teeb liab cuam tshuam.
Cov poj niam yoov tshaj cum uas tshaib plab 24 teev tau muab cov zaub mov saum toj no rau 30 feeb ua ntej raug txwv. Cov yoov tshaj cum poj niam uas noj tag lawm ces tau muab tshuaj loog rau ntawm dej khov rau 2-3 feeb thiab muab cov quav ciab lo rau cov kab uas muaj cov koob txhaj tshuaj (Joel Svenssons Vaxfabrik AB, Munka Ljungby, SE) thiab tom qab ntawd khi rau ntawm cov kav dej kab rov tav. Lub Tshuab Ya. Kev tig ib zaug ya tau raug kaw los ntawm lub tshuab sau cov ntaub ntawv tsim tshwj xeeb, tom qab ntawd khaws cia thiab tso saib siv PC-Lab 2000™ software (v4.01; Velleman, Gavere, BE). Lub tshuab ya tau muab tso rau hauv chav uas tswj huab cua (12 teev: 12 teev, lub teeb: tsaus ntuj, 25 ± 2 °C, 65 ± 5% RH).
Yuav kom pom tau tus qauv ntawm kev ya dav hlau, tag nrho qhov deb uas ya (m) thiab tag nrho cov kev ya dav hlau sib law liag tau suav ib teev dhau ib lub sijhawm 24 teev. Tsis tas li ntawd xwb, qhov nruab nrab ntawm cov poj niam ya dav hlau tau piv rau kev kho mob thiab tshuaj xyuas siv ib txoj kev ANOVA thiab Tukey's post hoc analysis (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.), qhov twg qhov nruab nrab ntawm qhov deb tau suav tias yog qhov hloov pauv nyob ntawm tus neeg, thaum kev kho mob yog ib qho tseem ceeb ywj pheej. Tsis tas li ntawd xwb, qhov nruab nrab ntawm cov voj voog tau suav ua 10 feeb ntxiv.
Txhawm rau ntsuam xyuas qhov cuam tshuam ntawm kev noj zaub mov rau kev ua haujlwm ntawm An.arabiensis, rau tus poj niam (4 dpe) tau raug xa mus rau Bugdorm cages (30 cm × 30 cm × 30 cm) tom qab sau cov ntshav thiab tom qab ntawd muab cov zaub mov sim rau 48 teev raws li tau piav qhia saum toj no. Cov zaub mov tau raug tshem tawm thiab cov khob tso qe (30 ml; Nolato Hertila) uas muaj 20 ml dej distilled tau muab rau hnub thib peb rau 48 teev, hloov txhua 24 teev. Rov ua dua txhua qhov kev noj zaub mov 20-50 zaug. Cov qe tau suav thiab kaw rau txhua lub tawb sim. Cov qauv qe tau siv los ntsuas qhov nruab nrab qhov loj me thiab qhov ntev ntawm cov qe ib tus zuj zus (n ≥ 200 ib qho zaub mov) siv lub tshuab microscope Dialux-20 (DM1000; Ernst Leitz Wetzlar, Wetzlar, DE) nruab nrog Leica Camera (DFC) 320 R2; Leica Microsystems Ltd., DE). Cov qe seem tau khaws cia rau hauv chav tswj huab cua hauv qab cov xwm txheej yug me nyuam rau 24 teev, thiab ib qho qauv ntawm cov menyuam kab uas nyuam qhuav tawm tshiab (n ≥ 200 ib qho zaub mov) tau ntsuas, raws li tau piav qhia saum toj no. Tus naj npawb ntawm cov qe thiab qhov loj ntawm cov qe thiab cov menyuam kab tau piv ntawm kev kho mob thiab siv ib txoj kev ANOVA thiab Tukey's post hoc analysis (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Cov tshuaj uas muaj cov roj ntau ntau los ntawm cov nyuj tshiab (1 teev tom qab kuaj), 24 teev, 72 teev thiab 168 teev uas muaj hnub nyoog tau sau los ntawm cov qauv uas tau sau los ntawm Zebu nyuj, Arsi haiv neeg. Rau kev yooj yim, cov qauv zis tau sau thaum sawv ntxov thaum cov nyuj tseem nyob hauv lub tsev. Cov qauv zis tau sau los ntawm 10 tus neeg thiab 100-200 ml ntawm txhua tus qauv tau hloov mus rau cov hnab yas polyamide ci (Toppits Cofresco, Frischhalteprodukte GmbH thiab Co., Minden, DE) hauv 3 l polyamide nrog lub hau Hauv cov thoob yas vinyl chloride. Cov roj ntau ntau los ntawm txhua tus qauv zis nyuj tau sau ncaj qha (tshiab) lossis tom qab loj hlob ntawm chav tsev kub rau 24 teev, 72 teev thiab 168 teev, piv txwv li txhua tus qauv zis yog sawv cev ntawm txhua pawg hnub nyoog.
Rau kev sau cov pa roj volatiles uas muaj headspace, siv lub kaw lus kaw-loop los ncig cov pa roj carbon-filtered (100 ml min-1) los ntawm lub hnab polyamide mus rau lub kem adsorption rau 2.5 teev los ntawm kev siv lub twj tso kua mis diaphragm (KNF Neuberger, Freiburg, DE). Ua ib qho kev tswj hwm, kev sau cov pa roj headspace tau ua los ntawm lub hnab polyamide khoob. Lub kem adsorption tau ua los ntawm Teflon tubing (5.5 cm x 3 mm id) uas muaj 35 mg ntawm Porapak Q (50/80 mesh; Waters Associates, Milford, MA, US) ntawm cov plugs iav. Ua ntej siv, lub kem tau ntxuav nrog 1 ml redistilled n-hexane (Merck, Darmstadt, DE) thiab 1 ml pentane (99.0% pure solvent GC grade, Sigma Aldrich). Cov volatiles uas tau adsorbed tau eluted nrog 400 μl ntawm pentane. Cov khoom sau Headspace tau sib sau ua ke thiab tom qab ntawd khaws cia ntawm -20 ° C kom txog thaum siv rau kev tshuaj xyuas ntxiv.
Cov lus teb ntawm tus cwj pwm ntawm An nrhiav tus tswv tsev thiab noj ntshav. Cov tshuaj rho tawm uas tau sau los ntawm cov zis tshiab, 24-teev, 72-teev, thiab 168-teev tau raug soj ntsuam rau cov tshuaj rho tawm uas tau los ntawm cov yoov Arabidopsis siv lub raj iav ncaj olfactometer [18]. Cov kev sim tau ua thaum lub sijhawm ZT 13-15, lub sijhawm siab tshaj plaws ntawm An txoj haujlwm nrhiav tsev. Arab [19]. Lub raj iav olfactometer (80 cm × 9.5 cm id) tau ci nrog 3 ± 1 lx ntawm lub teeb liab los ntawm saum toj no. Cov pa luam yeeb uas tau lim thiab ua kom noo noo (25 ± 2 °C, 65 ± 2% qhov noo noo) tau dhau qhov bioassay ntawm 30 cm s-1. Cua tau dhau los ntawm cov ntxaij vab tshaus stainless hlau, tsim kom muaj kev ntws laminar thiab cov qauv plume sib xws. Lub tshuab faib hniav tampon (4 cm × 1 cm; L:D; DAB Dental AB), dai ntawm 5 cm kauj ntawm qhov kawg ntawm lub olfactometer, nrog rau kev hloov pauv stimulator txhua 5 feeb. Rau kev tshuaj xyuas, 10 μl ntawm txhua lub headspace extract, diluted 1:10, tau siv ua stimulant. Ib qho sib npaug ntawm pentane tau siv ua kev tswj hwm. Cov yoov tshaj cum nrhiav tus tswv tsev lossis cov yoov tshaj cum haus ntshav tau muab tso rau hauv cov tawb tso tawm ib leeg 2-3 teev ua ntej pib qhov kev sim. Lub tawb tso tawm tau muab tso rau ntawm sab downwind ntawm lub olfactometer, thiab cov yoov tshaj cum tau tso cai rau acclimate rau 1 feeb, thiab tom qab ntawd lub npauj npaim valve ntawm lub tawb tau qhib kom tso tawm. Kev nyiam rau kev kho mob lossis kev tswj hwm tau tshuaj xyuas raws li qhov feem pua ​​​​​​ntawm cov yoov tshaj cum uas tau kov lub hauv paus hauv 5 feeb ntawm kev tso tawm. Txhua lub headspace volatile extract thiab kev tswj hwm tau rov ua dua tsawg kawg 30 zaug, thiab kom tsis txhob muaj cov teebmeem ntawm ib hnub twg, tib tus lej ntawm kev kho mob thiab kev tswj hwm tau sim rau txhua hnub sim. Nrhiav cov lus teb los ntawm tus tswv tsev thiab cov ntshav-pub Ans. Arabic piv rau headspace teeb tsa tau tshuaj xyuas siv nominal logistic regression ua raws li kev sib piv pairwise rau khib ratios (JMP Pro, v14.0.0, SAS Lub Koom Haum Inc.).
Cov lus teb ntawm An txog kev tso qe. Cov tshuaj rho tawm ntawm cov zis nyuj tshiab thiab cov zis nyuj laus tau raug soj ntsuam hauv Bugdorm cages (30 cm × 30 cm × 30 cm; MegaView Science). Cov khob yas (30 mL; Nolato Hertila) uas muaj 20 mL dej lim tau muab cov khoom siv rau kev tso qe thiab tau muab tso rau hauv cov ces kaum sib txawv ntawm lub tawb, sib nrug 24 cm. Cov khob kho tau kho nrog 10 μl ntawm txhua lub tshuaj rho tawm ntawm lub taub hau ntawm qhov sib xyaw 1:10. Ib qho pentane sib npaug tau siv los kho lub khob tswj. Cov khob kho thiab cov khob tswj tau pauv ntawm txhua qhov kev sim kom tswj tau cov teebmeem ntawm qhov chaw. Kaum tus poj niam pub ntshav tau raug tso rau hauv cov tawb sim ntawm ZT 9-11 thiab cov qe hauv khob tau suav 24 teev tom qab. Cov mis rau kev xam cov ntsuas kev tso qe yog: (tus lej ntawm cov qe tso rau hauv lub khob kho - tus lej ntawm cov qe tso rau hauv lub khob tswj) / (tag nrho cov qe tso). Txhua qhov kev kho tau rov ua dua 8 zaug.
Kev tshuaj xyuas roj chromatographic thiab electron antenna qauv nrhiav (GC-EAD) ntawm poj niam An.arabiensis tau ua raws li tau piav qhia ua ntej [20]. Luv luv, cov tshuaj rho tawm tshiab headspace volatile tau sib cais siv Agilent Technologies 6890 GC (Santa Clara, CA, US) nruab nrog HP-5 kem (30 m × 0.25 mm id, 0.25 μm zaj duab xis tuab, Agilent Technologies). thiab cov zis laus. Hydrogen tau siv ua theem txawb nrog qhov nruab nrab ntawm cov dej ntws ntawm 45 cm s-1. Txhua tus qauv (2 μl) tau txhaj rau 30 vib nas this hauv hom tsis sib cais nrog qhov kub ntawm 225 ° C. Qhov kub ntawm qhov cub GC tau teeb tsa los ntawm 35 ° C (tuav 3 feeb) txog 300 ° C (tuav 10 feeb) ntawm 10 ° C min-1. Hauv GC effluent splitter, 4 psi ntawm nitrogen tau ntxiv thiab faib 1: 1 hauv Gerstel 3D / 2 qhov ntim tuag qis (Gerstel, Mülheim, DE) ntawm lub nplaim taws ionization ntes thiab EAD. Lub GC effluent capillary rau EAD tau dhau los ntawm Gerstel ODP-2 hloov kab, uas taug qab qhov kub ntawm qhov cub GC ntxiv rau 5 ° C, rau hauv lub raj iav (10 cm × 8 hli), qhov twg nws tau sib xyaw nrog cov pa roj carbon-lim, humidified (1.5 l min−1). Lub kav hlau txais xov tau muab tso rau. 0.5 cm ntawm qhov tawm ntawm lub raj. Txhua tus yoov tshaj cum muaj ib tus kab rov ua dua, thiab rau cov yoov tshaj cum uas nrhiav tus tswv tsev, tsawg kawg yog peb tus kab rov ua dua tau ua rau ntawm cov qauv zis ntawm txhua lub hnub nyoog.
Kev txheeb xyuas cov tshuaj bioactive hauv cov khoom sau ntawm cov zis nyuj tshiab thiab laus siv cov GC thiab mass spectrometer (GC-MS; 6890 GC thiab 5975 MS; Agilent Technologies) ua ke los nrhiav cov lus teb antennal hauv GC-EAD kev tshuaj xyuas, ua haujlwm hauv hom electron impact ionization ntawm 70 eV. Lub GC tau nruab nrog HP-5MS UI-coated fused silica capillary column (60 m × 0.25 mm sab hauv txoj kab uas hla, 0.25 μm zaj duab xis tuab) siv helium ua theem txawb nrog qhov nruab nrab linear flow rate ntawm 35 cm s-1. Ib qho qauv 2 μl tau txhaj tshuaj siv tib qho chaw txhaj tshuaj thiab qhov cub kub zoo li rau GC-EAD kev tshuaj xyuas. Cov tshuaj tau txheeb xyuas raws li lawv lub sijhawm khaws cia (Kovát index) thiab mass spectra piv rau lub tsev qiv ntawv kev cai thiab lub tsev qiv ntawv NIST14 (Agilent). Cov tshuaj tau txheeb xyuas tau lees paub los ntawm kev txhaj cov qauv tseeb (Cov Ntaub Ntawv Ntxiv 1: Rooj S2). Rau kev ntsuas, heptyl acetate (10 ng, 99.8% kev ntshiab ntawm tshuaj lom neeg, Aldrich) tau txhaj tshuaj ua tus qauv sab nraud.
Kev soj ntsuam qhov ua tau zoo ntawm cov tshuaj tsw qab uas muaj cov tshuaj bioactive uas tau txheeb xyuas hauv cov zis tshiab thiab laus kom nyiam cov neeg nrhiav tus tswv tsev thiab cov neeg haus ntshav Ans.arabiensis, siv tib lub olfactometer thiab cov txheej txheem zoo li saum toj no. Cov tshuaj sib xyaw ua ke tau ua raws li cov khoom sib xyaw thiab cov feem ntawm cov tshuaj hauv cov tshuaj sib xyaw ua ke ntawm cov zis tshiab, 24-teev, 48-teev, 72-teev, thiab 168-teev (Daim Duab 5D-G; Cov Ntaub Ntawv Ntxiv 1: Rooj S2). Rau kev tshuaj xyuas, siv 10 μl ntawm 1: 100 dilution ntawm cov tshuaj sib xyaw ua ke tag nrho, nrog rau qhov tso tawm tag nrho txij li kwv yees li 140-2400 ng h-1, rau kev ntsuas qhov nyiam rau cov yoov tshaj cum thiab cov yoov tshaj cum haus ntshav. Tom qab ntawd, qhov kev sim tau ua rau cov tshuaj sib xyaw ua ke, uas cov tshuaj sib xyaw ua ke ntawm cov tshuaj sib xyaw ua ke ntawm cov tshuaj sib xyaw ua ke raug tshem tawm. Nrhiav cov lus teb los ntawm tus tswv tsev thiab cov ntshav Ans. Arab vs cov tshuaj sib xyaw ua ke thiab cov tshuaj sib xyaw ua ke tau tshuaj xyuas siv cov kev hloov pauv nominal logistic ua raws li kev sib piv rau cov khib piv (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Yuav kom ntsuam xyuas seb cov zis nyuj puas tuaj yeem ua lub cim qhia chaw nyob rau cov yoov tshaj cum malaria, cov zis nyuj tshiab thiab cov zis nyuj laus, uas tau sau raws li tau piav qhia saum toj no, thiab dej tau muab tso rau hauv cov thoob 3 l (100 ml) thiab muab tso rau hauv cov ntxiab ntxiab. (BG-HDT version; BioGents, Regensburg, DE). Kaum lub ntxiab tau muab tso rau 50 m sib nrug hauv thaj chaw cog qoob loo, 400 m ntawm lub zej zog hauv zos (Silay, Ethiopia, 5°53´24´´N, 37°29´24´´E) thiab tsis muaj nyuj, ntawm thaj chaw yug tsiaj tas mus li thiab cov zos. Tsib lub ntxiab tau raug cua sov kom ua qauv tias muaj tus tswv tsev, thaum tsib lub ntxiab tau tso tseg tsis tau cua sov. Txhua qhov chaw kho mob tau tig txhua hmo rau tag nrho tsib hmos. Cov lej ntawm cov yoov tshaj cum uas ntes tau hauv cov ntxiab ntxiab uas tau ntxiab nrog cov zis ntawm ntau lub hnub nyoog sib txawv tau muab piv rau siv logistic regression nrog kev faib tawm beta binomial (JMP Pro, v14.0.0, SAS Institute Inc.).
Hauv ib lub zos uas muaj kab mob malaria ntau heev nyob ze lub nroog Maki, thaj tsam Oromia, Ethiopia (8° 11′ 08″ N, 38° 81′ 70″ E; Daim Duab 6A). Kev tshawb fawb no tau ua ntawm nruab nrab lub Yim Hli thiab nruab nrab lub Cuaj Hli ua ntej kev txau tshuaj tua kab mob hauv tsev txhua xyoo, nrog rau lub caij ntuj nag ntev. Tsib lub tsev (sib nrug 20–50 m) nyob ntawm ntug zos tau raug xaiv rau kev tshawb fawb (Daim Duab 6A). Cov qauv siv los xaiv cov tsev yog: tsis pub tsiaj txhu hauv tsev, tsis pub ua noj hauv tsev (kos ntoo lossis thee) (tsawg kawg thaum lub sijhawm sim), thiab cov tsev uas muaj ob tus neeg nyob, pw hauv cov tshuaj tua kab uas tsis muaj tshuaj tua kab. nyob rau hauv qab lub vas uas tau kho. Kev pom zoo txog kev coj ncaj ncees tau muab los ntawm Pawg Neeg Saib Xyuas Kev Tshawb Fawb Txog Kev Coj Ncaj Ncees (IRB/022/2016) ntawm Lub Tsev Kawm Ntawv Qib Siab ntawm Kev Tshawb Fawb Txog Ntuj (CNS-IRB), Addis Ababa University, raws li cov lus qhia uas tau tsim los ntawm World Medical Association Declaration of Helsinki. Kev pom zoo los ntawm txhua tus thawj coj ntawm tsev neeg tau txais kev pab los ntawm cov neeg ua haujlwm txuas ntxiv kev noj qab haus huv. Tag nrho cov txheej txheem tau pom zoo los ntawm cov thawj coj hauv zos ntawm lub koog tsev kawm ntawv thiab pawg ntseeg ('kebele'). Kev tsim qauv sim ua raws li 2 × 2 Latin square tsim, uas cov khoom sib xyaw thiab cov kev tswj hwm tau muab rau cov tsev sib koom ua ke rau hmo thawj zaug thiab pauv ntawm cov tsev rau hmo sim tom ntej. Cov txheej txheem no tau rov ua dua kaum zaug. Tsis tas li ntawd, txhawm rau kwv yees cov dej num ntawm cov yoov tshaj cum hauv cov tsev xaiv, cov ntxiab CDC tau teeb tsa kom khiav tsib hmos sib law liag thaum pib, nruab nrab thiab xaus ntawm kev sim hauv thaj chaw tib lub sijhawm ntawm hnub.
Ib qho khoom sib xyaw ua ke uas muaj rau lub bioactive compounds tau yaj hauv heptane (97.0% solvent GC qib, Sigma Aldrich) thiab tso tawm ntawm 140 ng h-1 siv lub tshuab dispenser paj rwb wick [20]. Lub tshuab dispenser wick tso cai rau tag nrho cov tshuaj kom raug tso tawm hauv qhov sib piv tas li thoob plaws 12 teev kev sim. Heptane tau siv ua kev tswj hwm. Lub vial tau dai ntawm ib sab ntawm qhov nkag ntawm Centers for Disease Control and Prevention (CDC) lub teeb ntxiab (John W. Hock Company, Gainesville, FL, US; Daim Duab 6A). Cov ntxiab tau dai 0.8 - 1 m saum av, ze ntawm ko taw ntawm lub txaj, thiab ib tus neeg pab dawb pw hauv qab lub vas tsis kho thiab ua haujlwm ntawm 18:00 thiab 06:30. Cov yoov tshaj cum ntes los ntawm poj niam txiv neej thiab lub cev (tsis tau noj, noj, ib nrab cev xeeb tub, thiab cev xeeb tub [21] tau raug tshuaj xyuas tom qab siv polymerase chain reaction (PCR) kev tshuaj xyuas los txheeb xyuas cov hom tsiaj morphologically txheeb xyuas raws li A. gambiae sl. Cov tswv cuab ntawm lub complex [23]. Hauv kev tshawb fawb hauv thaj teb, kev ntes cov tsev uas muaj khub tau raug soj ntsuam siv tus qauv nominal logistic fit, qhov twg kev nyiam yog qhov hloov pauv thiab kev kho mob (synthetic mixture vs control) yog qhov cuam tshuam ruaj khov (JMP® 14.0. 0. SAS Institute Inc.). Ntawm no, peb tshaj tawm cov χ2 thiab p-values ​​​​los ntawm qhov kev xeem piv rau qhov zoo sib xws.
Soj ntsuam seb nws puas muaj kev nyab xeeb. arabiensis tau txais cov zis, nws qhov chaw tseem ceeb ntawm nitrogen, urea, los ntawm kev pub ncaj qha, hauv 48 teev ntawm kev siv rau 4 hnub tom qab (dpe) kev sim pub mis rau cov poj niam nrhiav tus tswv tsev thiab pub ntshav (Daim Duab 1A). Ob leeg cov poj niam nrhiav tus tswv tsev thiab cov poj niam haus ntshav tau nqus cov sucrose ntau dua li lwm yam khoom noj lossis dej (F (5,426) = 20.15, p < 0.0001 thiab F (5,299) = 56.00, p < 0.0001, feem; Daim Duab 1B, C). Ntxiv mus, cov poj niam nrhiav tus tswv tsev noj tsawg dua hauv cov zis ntawm 72 teev piv rau cov zis ntawm 168 teev (Daim Duab 1B). Thaum muab cov khoom noj uas muaj urea, cov poj niam nrhiav tus tswv tsev tau nqus cov urea ntau dua ntawm 2.69 mM piv rau txhua lwm yam kev sib xyaw thiab dej, thaum tsis sib txawv ntawm 10% sucrose (F (10,813) = 15.72, p < 0.0001; Daim Duab 1D). Qhov no yog qhov sib txawv ntawm cov lus teb ntawm cov poj niam noj ntshav, uas feem ntau nqus cov zaub mov uas muaj urea ntau dua li dej, txawm tias tsawg dua 10% sucrose (F (10,557) = 78.35, p < 0.0001; Daim Duab 1).1E). Ntxiv mus, thaum piv ntawm ob lub xeev physiological, cov poj niam phlebotomized nqus ntau dua urea dua li cov poj niam nrhiav tus tswv tsev ntawm qhov qis tshaj plaws, thiab cov poj niam no nqus cov urea zoo sib xws ntawm cov concentration siab dua (F (1,953) = 78.82, p < 0.0001; Daim Duab 1F, G). Txawm hais tias kev noj los ntawm cov zaub mov uas muaj urea zoo li muaj cov nqi zoo tshaj plaws (Daim Duab 1D, E), cov poj niam hauv ob lub xeev physiological tau hloov kho qhov ntau ntawm urea nqus thoob plaws tag nrho cov concentration ntawm urea hauv ib txoj kev log-linear (Daim Duab 1F, G). ). Ib yam li ntawd, cov yoov tshaj cum zoo li tswj lawv cov nitrogen los ntawm kev tswj cov zis uas nqus tau, vim tias cov nitrogen hauv cov zis pom tau hauv cov zis uas nqus tau (Daim Duab 1B, C thiab B insets).
Txhawm rau ntsuam xyuas cov teebmeem ntawm cov zis thiab urea rau kev ciaj sia ntawm cov yoov tshaj cum nrhiav tus tswv tsev thiab cov yoov tshaj cum uas haus ntshav, cov poj niam tau pub cov zis ntawm txhua plaub lub hnub nyoog (tshiab, 24 teev, 72 teev, thiab 168 teev tom qab tso zis) thiab ntau yam ntawm cov urea concentration, nrog rau dej distilled thiab 10% sucrose ua tus tswj (Daim Duab 2A). Qhov kev tshuaj xyuas kev ciaj sia no qhia tau hais tias kev noj zaub mov muaj qhov cuam tshuam tseem ceeb rau kev ciaj sia tag nrho ntawm cov poj niam nrhiav tus tswv tsev (zis: χ2 = 108.5, df = 5, p < 0.0001; urea: χ2 = 122.8, df = 5, p < 0.0001; Daim Duab 2B, C) thiab cov poj niam noj ntshav (zis: χ2 = 93.0, df = 5, p < 0.0001; urea: χ2 = 137.9, df = 5, p < 0.0001; Daim Duab 2D, E). Hauv txhua qhov kev sim, Cov poj niam uas noj cov zis, urea, thiab dej muaj feem yuav ciaj sia tsawg dua piv rau cov poj niam uas noj cov zaub mov sucrose (Daim Duab 2B-E). Cov poj niam uas nrhiav tus tswv tsev uas noj cov zis tshiab thiab cov zis qub qhia txog feem yuav ciaj sia sib txawv, nrog rau cov uas noj cov zis qub 72 teev (p = 0.016) muaj feem yuav ciaj sia tsawg tshaj plaws (Daim Duab 2B). Ntxiv mus, cov poj niam uas nrhiav tus tswv tsev uas noj 135 mM urea muaj sia nyob ntev dua li cov uas tsis haus dej (p < 0.04) (Daim Duab 2C). Piv nrog dej, cov poj niam uas noj cov zis tshiab thiab cov zis 24 teev muaj sia nyob ntev dua (p = 0.001 thiab p = 0.012, raws li; Daim Duab 2D), thaum cov poj niam uas noj cov zis 72 teev muaj sia nyob ntev dua li cov uas noj Cov zis tshiab luv thiab cov zis laus 24 teev (p < 0.0001 thiab p = 0.013, raws li; Daim Duab 2D). Thaum noj 135 mM urea, cov poj niam uas noj ntshav muaj sia nyob ntev dua li lwm cov urea thiab dej. (p < 0.013; Daim Duab 2E).
Kev ciaj sia ntawm cov kab laug sab thiab cov poj niam uas haus ntshav Anopheles arabinis noj cov zis nyuj thiab urea. Hauv bioassay (A), cov yoov tshaj cum poj niam tau muab cov khoom noj uas muaj cov zis nyuj tshiab thiab laus, ntau yam concentration ntawm urea, sucrose (10%) thiab dej distilled (H2O). Kev ciaj sia ntawm cov yoov tshaj cum nrhiav tus tswv (B, C) thiab cov yoov tshaj cum haus ntshav (D, E) tau sau tseg txhua 12 teev kom txog thaum txhua tus poj niam noj cov zis (B, D) thiab urea (C, E), thiab cov tswj, Sucrose thiab dej, tuag.
Tag nrho qhov deb thiab tus naj npawb ntawm cov voj voog uas tau txiav txim siab hauv kev sim ya dav hlau hla lub sijhawm 24 teev sib txawv ntawm cov yoov tshaj cum nrhiav tus tswv thiab cov yoov tshaj cum haus ntshav, uas qhia tias muaj kev ya tsawg dua (Daim Duab 3). Cov yoov tshaj cum nrhiav tus tswv uas muab cov zis tshiab thiab cov zis laus lossis sucrose thiab dej qhia txog cov qauv ya sib txawv (Daim Duab 3), nrog rau cov poj niam noj cov zis tshiab ua haujlwm ntau dua thaum kaj ntug, thaum cov uas noj cov zis 24- thiab 168-teev Cov yoov tshaj cum uas noj cov zis qhia txog cov qauv ya sib txawv thiab feem ntau yog diurnal. Cov poj niam yoov tshaj cum uas muab sucrose lossis 72-teev zis qhia txog kev ua haujlwm thoob plaws lub sijhawm 24-teev, thaum cov poj niam uas muab dej ua haujlwm ntau dua thaum nruab nrab lub sijhawm. Cov yoov tshaj cum uas noj sucrose qhia txog qib siab tshaj plaws ntawm kev ua haujlwm thaum hmo ntuj thiab thaum sawv ntxov, thaum cov uas noj cov zis 72-teev muaj kev poob qis tas li hauv 24 teev (Daim Duab 3).
Kev ya dav hlau ntawm cov yoov tshaj cum poj niam uas nrhiav ntshav Anopheles arabinis noj cov zis nyuj thiab urea. Hauv kev sim ya dav hlau, cov yoov tshaj cum poj niam noj cov zis nyuj tshiab thiab laus, ntau yam kev sib xyaw ntawm urea, sucrose (10%), thiab dej distilled (H2O) tau khi rau kab rov tav, tig tau ywj pheej (saum toj no). Rau cov poj niam nrhiav tus tswv tsev (sab laug) thiab cov poj niam haus ntshav (sab xis), tag nrho qhov deb thiab tus lej ntawm kev ya dav hlau ib teev rau txhua qhov kev noj zaub mov dhau 24-teev tau raug kaw (tsaus: grey; kaj: dawb). Qhov nruab nrab ntawm qhov deb thiab tus lej nruab nrab ntawm kev sib tw tau qhia rau sab xis ntawm daim duab circadian activity. Cov kab yuam kev sawv cev rau qhov yuam kev txheem ntawm qhov nruab nrab. Kev tshuaj xyuas lej saib cov ntawv.
Feem ntau, tag nrho cov kev ua ub ua no ntawm cov poj niam nrhiav tus tswv tsev tau ua raws li tus qauv zoo ib yam li qhov deb ntawm kev ya mus rau lub sijhawm 24 teev. Qhov deb ntawm kev ya mus tau cuam tshuam loj heev los ntawm kev noj zaub mov (F(5, 138) = 28.27, p < 0.0001), thiab cov poj niam nrhiav tus tswv tsev tau noj 72 teev ntawm cov zis ya mus deb dua piv rau txhua yam kev noj zaub mov (p < 0.0001), thiab cov yoov tshaj cum uas noj sucrose ya mus ntev dua li cov yoov tshaj cum tshiab (p = 0.022) thiab cov yoov tshaj cum uas noj zis 24 teev (p = 0.022). Sib piv rau tus qauv kev ua ub ua no ntawm kev ya uas tau piav qhia los ntawm kev noj zaub mov zis, cov poj niam nrhiav tus tswv tsev uas noj urea tau ua rau muaj kev ua ub ua no ya mus tas li rau lub sijhawm 24 teev, nce siab tshaj plaws thaum ib nrab ntawm lub sijhawm tsaus ntuj (Daim Duab 3). Txawm hais tias cov qauv kev ua ub ua no zoo sib xws, cov poj niam nrhiav tus tswv tsev uas noj urea tau nce qhov deb ntawm kev ya mus nruab nrab ntau ntxiv nyob ntawm qhov concentration uas nqus tau (F(5, 138) = 1310.91, p < 0.0001). Cov poj niam nrhiav tus tswv tsev uas tau noj cov urea uas muaj ntau yam tshuaj lom neeg ya ntev dua li cov poj niam uas tau noj dej lossis sucrose (p < 0.03).
Tag nrho cov kev ua ub ua no ntawm cov yoov tshaj cum uas nqus ntshav tau ruaj khov thiab kav ntev li ntawm 24 teev thoob plaws txhua yam kev noj zaub mov, nrog rau kev ua haujlwm ntawm cov zis ntau ntxiv thaum lub sijhawm tsaus ntuj thib ob rau cov poj niam uas noj dej thiab cov poj niam uas noj tshiab thiab 24 teev (duab 3). Txawm hais tias kev noj zis cuam tshuam rau qhov deb ntawm kev ya ntawm cov poj niam uas noj ntshav (F(5, 138) = 4.83, p = 0.0004), kev noj urea tsis tau (F(5, 138) = 1.36, p = 0.24) nrog rau lwm cov zis thiab kev noj zaub mov tswj (tshiab, p = 0.0091; 72 teev, p = 0.0022; 168 teev, p = 0.001; sucrose, p = 0.0017; dH2O, p = 0.036).
Cov teebmeem ntawm cov zis thiab urea pub rau cov kev hloov pauv ntawm kev yug me nyuam tau raug soj ntsuam hauv cov bioassays tso qe (Daim Duab 4A) thiab tau tshawb xyuas raws li tus naj npawb ntawm cov qe uas txhua tus poj niam tso, qhov loj ntawm cov qe, thiab cov menyuam kab thawj zaug uas nyuam qhuav tawm tshiab. Tus naj npawb ntawm cov qe tso. Cov poj niam Arab uas pub zis sib txawv los ntawm kev noj zaub mov (F (5,222) = 4.38, p = 0.0008; Daim Duab 4B). Cov poj niam uas pub zis 24 teev, cov ntshav noj tau tso qe ntau dua li cov poj niam uas pub lwm yam zaub mov zis thiab zoo ib yam li cov uas pub sucrose (Daim Duab 4B). Ib yam li ntawd, qhov loj ntawm cov qe uas cov poj niam pub zis tso tau sib txawv los ntawm kev noj zaub mov (F (5, 209) = 12.85, p < 0.0001), nrog rau cov poj niam uas pub zis 24 teev thiab cov poj niam uas pub sucrose tso qe loj dua li cov poj niam uas pub dej, thaum cov qe ntawm cov poj niam uas pub zis 168 teev me dua (Daim Duab 4C). Tsis tas li ntawd, kev noj zis cuam tshuam rau qhov loj ntawm cov menyuam kab (F (5, 187) = 7.86, p < 0.0001), nrog rau cov kab menyuam loj dua los ntawm cov qe uas cov poj niam uas muaj hnub nyoog 24 thiab 72 teev tso zis dua li cov qe uas cov kab menyuam tso zis. Cov poj niam uas noj dej thiab cov poj niam uas muaj hnub nyoog 168 teev tso zis (Daim Duab 4D).
Kev ua tau zoo ntawm cov poj niam Anopheles arabinis noj cov zis nyuj thiab urea. Cov yoov tshaj cum poj niam noj ntshav tau noj cov zaub mov uas muaj cov zis nyuj tshiab thiab laus, ntau yam concentration ntawm urea, sucrose (10%), thiab dej distilled (H2O) rau 48 teev ua ntej muab tso rau hauv bioassays thiab tau txais cov substrates tso qe 48 teev (A). Tus lej qe (B, E), qhov loj ntawm qe (C, F) thiab qhov loj ntawm cov kab menyuam (D, G) tau cuam tshuam loj heev los ntawm cov zaub mov muab (cov zis nyuj: BD; urea: EG). Cov txhais tau tias rau txhua qhov ntsuas siv cov npe ntawv sib txawv tau txawv ntawm ib leeg (ib txoj kev ANOVA siv Tukey's post hoc analysis; p < 0.05). Cov kab yuam kev sawv cev rau qhov yuam kev txheem ntawm qhov nruab nrab.
Raws li cov khoom siv nitrogenous tseem ceeb ntawm cov zis, urea, thaum muab ua zaub mov rau cov poj niam noj ntshav, cuam tshuam loj heev rau cov kev hloov pauv hauv txhua qhov kev tshawb fawb. Tus naj npawb ntawm cov qe uas cov poj niam noj urea tso, tom qab noj ntshav, nyob ntawm urea concentration (F (11, 360) = 4.69; p < 0.0001), cov poj niam noj urea concentration ntawm 134 µM thiab 1.34 mM tso ntau lub qe (Daim Duab 4E). Cov poj niam noj urea concentration ntawm 134 µM lossis siab dua tso cov qe loj dua li cov poj niam noj dej (F (10, 4245) = 36.7; p < 0.0001; Daim Duab 4F), thiab qhov loj ntawm cov menyuam, txawm hais tias cuam tshuam los ntawm cov concentration zoo sib xws ntawm urea hauv cov niam (F (10, 3305) = 37.9; p < 0.0001) yog ntau dua (Daim Duab 4G).
Kev nyiam tag nrho rau cov zis nyuj uas nrhiav tus tswv tsev uas muaj cov tshuaj rho tawm uas tsis muaj zog. Cov arabiensis uas tau ntsuas hauv lub raj iav olfactometer (Daim Duab 5A) tau cuam tshuam loj heev los ntawm cov zis hnub nyoog (χ2 = 15.9, df = 4, p = 0.0032; Daim Duab 5B). Kev tshuaj xyuas tom qab hoc qhia tau tias cov ntxhiab tsw ntawm zis thaum 24 teev ua rau muaj kev nyiam ntau dua piv rau txhua yam kev kho mob lwm yam (72 teev: p = 0.0060, 168 teev: p = 0.012, pentane: p = 0.00070), Tsuas yog tsw ntawm cov zis tshiab (p = 0.13; Daim Duab 5B). Txawm hais tias qhov kev nyiam tag nrho ntawm cov yoov tshaj cum uas haus ntshav rau cov ntxhiab tsw ntawm zis tsis txawv ntau (χ2 = 8.78, df = 4, p = 0.067; Daim Duab 5C), cov poj niam no tau pom tias muaj kev nyiam ntau dua rau cov tshuaj rho tawm uas tsis muaj zog piv rau cov zis hnub nyoog 72 teev piv rau cov neeg tswj (p = 0.0066; Daim Duab 5C).
Kev teb rau tus cwj pwm rau cov ntxhiab tsw ntawm cov zis nyuj ntuj thiab tsim hauv kev tshawb nrhiav tus tswv tsev thiab cov ntshav Anopheles arabianus. Daim duab qhia txog lub raj iav olfactometer (A). Kev nyiam ntawm cov tshuaj rho tawm headspace volatile los ntawm cov zis nyuj tshiab thiab laus mus rau tus tswv tsev (B) thiab cov yoov tshaj cum haus ntshav (C). Nrhiav qhov kev cuam tshuam ntawm Lord An. Cov tshuaj rho tawm Headspace cais los ntawm cov zis nyuj tshiab (D), 24-teev (E), 72-teev (F), thiab 168-teev (G) tau qhia. Cov cim qhia txog electron antenna detection (EAD) qhia txog kev hloov pauv voltage hauv kev teb rau cov bioactive compounds hauv headspace eluted los ntawm cov roj chromatograph thiab ntes tau los ntawm lub nplaim taws ionization detector (FID). Lub scale bar sawv cev rau qhov teb amplitude (mV) piv rau lub sijhawm khaws cia (s). Cov khoom thiab cov nqi tso tawm (µg h-1) ntawm cov biologically active compounds tau qhia. Ib lub hnub qub (*) qhia txog kev teb qis-amplitude sib xws. Ob lub hnub qub (**) qhia txog kev teb tsis rov ua dua. Nrhiav tus tswv tsev (H) thiab Cov ntshav-nqus (I) An.arabiensis muaj kev thov sib txawv rau cov khoom sib xyaw ua ke ntawm cov ntxhiab tsw ntawm cov zis nyuj tshiab thiab laus. Qhov nruab nrab ntawm cov yoov tshaj cum uas nyiam cov npe ntawv sib txawv tau txawv ntawm ib leeg (ib txoj kev ANOVA siv Tukey's post hoc analysis; p < 0.05). Cov kab yuam kev sawv cev rau qhov yuam kev txheem ntawm qhov ntsuas.
Poj niam Ann.arabiensis, 72 teev thiab 120 teev tom qab noj ntshav, thaum lub sijhawm tso qe, tsis muaj kev nyiam rau cov kua txiv hmab txiv ntoo uas muaj cov pa roj ntau los ntawm cov zis nyuj tshiab thiab laus piv rau cov neeg tswj pentane (χ2 = 3.07, p > 0.05; Cov ntaub ntawv ntxiv 1: Daim duab S1).
Rau cov poj niam Ann.arabiensis, GC-EAD thiab GC-MS kev tshuaj xyuas tau txheeb xyuas yim, rau, peb thiab peb cov tshuaj bioactive (Daim Duab 5D-G). Txawm hais tias qhov sib txawv ntawm tus lej ntawm cov tshuaj uas tau txais cov lus teb electrophysiological tau pom, feem ntau ntawm cov tshuaj no tau muaj nyob rau hauv txhua lub taub hau volatile extract sau los ntawm cov zis tshiab thiab laus. Yog li ntawd, rau txhua qhov extract, tsuas yog cov tshuaj uas tsim cov lus teb physiological los ntawm cov poj niam antennae saum toj no qhov txwv tau suav nrog hauv kev tshuaj xyuas ntxiv.
Tag nrho cov volatile tso tawm ntawm cov bioactive compounds hauv headspace collection nce ntawm 29 µg h-1 hauv cov zis tshiab mus rau 242 µg h-1 hauv 168-teev cov zis laus, feem ntau yog vim p-cresol thiab m-formaldehyde Phenol nce ntxiv nrog rau phenol. Hauv kev sib piv, cov nqi tso tawm ntawm lwm cov tshuaj, xws li 2-cyclohexen-1-ib thiab decanal, txo qis nrog rau cov zis laus zuj zus, uas cuam tshuam nrog qhov pom kev txo qis hauv lub teeb liab (kev nplua mias) hauv chromatogram (Daim duab 5D) -G sab laug vaj huam sib luag) thiab kev teb rau cov tshuaj no (Daim duab 5D-G sab xis vaj huam sib luag).
Zuag qhia tag nrho, cov khoom sib xyaw ua ke muaj qhov sib piv zoo sib xws ntawm cov tshuaj bioactive uas tau txheeb xyuas hauv cov kua dej tsis haum ntawm cov zis tshiab thiab laus (Daim duab 5D-G) thiab tsis zoo li yuav ua rau muaj kev nyiam tseem ceeb hauv kev tshawb nrhiav tus tswv tsev (χ2 = 8.15, df = 4, p = 0.083; Daim duab 5H) lossis cov yoov tshaj cum uas haus ntshav (χ2 = 4.91, df = 4, p = 0.30; Daim duab 5I). Txawm li cas los xij, kev sib piv tom qab hoc ntawm kev kho mob qhia tau hais tias cov yoov tshaj cum uas nrhiav tus tswv tsev tau nyiam heev rau cov khoom sib xyaw ua ke ntawm cov zis laus 24-teev piv nrog cov tshuaj pentane tswj (p = 0.0086; Daim duab 5H).
Txhawm rau ntsuam xyuas lub luag haujlwm ntawm cov khoom sib xyaw ua ke hauv cov zis uas muaj hnub nyoog 24 teev, rau qhov sib xyaw ua ke tau raug soj ntsuam tawm tsam cov sib xyaw ua ke hauv Y-tube assay, uas cov tshuaj sib xyaw ua ke tau raug tshem tawm. Rau cov yoov tshaj cum uas nrhiav tus tswv tsev, kev rho tawm cov tshuaj sib xyaw ua ke los ntawm cov tshuaj sib xyaw ua ke tau muaj kev cuam tshuam loj rau cov lus teb tus cwj pwm (χ2 = 19.63, df = 6, p = 0.0032; Cov ntaub ntawv ntxiv 1: Daim duab S2A), txhua qhov sib xyaw ua ke tau zoo nkauj dua li me dua li sib xyaw ua ke tag nrho. Hauv kev sib piv, kev tshem tawm cov tshuaj sib xyaw ua ke los ntawm cov tshuaj sib xyaw ua ke tsis cuam tshuam rau cov lus teb tus cwj pwm ntawm cov yoov tshaj cum uas haus ntshav (χ2 = 11.38, df = 6, p = 0.077), tsuas yog decanal, uas ua rau muaj qib qis dua piv rau cov tshuaj sib xyaw ua ke tag nrho Attraction (p = 0.022; Cov ntaub ntawv ntxiv 1: Daim duab S2B).
Hauv ib lub zos uas muaj kab mob malaria ntau heev hauv Ethiopia, qhov ua tau zoo ntawm kev sib xyaw ua ke ntawm cov zis nyuj 24-teev hauv kev nyiam cov yoov tshaj cum hauv thaj chaw teb tau raug soj ntsuam rau kaum hmos (Daim Duab 6A). Tag nrho muaj 4,861 tus yoov tshaj cum tau raug ntes thiab txheeb xyuas, uas 45.7% yog Anthropus.gambiae sl, 18.9% yog Anopheles pharoensis thiab 35.4% yog Culex spp. (Cov ntaub ntawv ntxiv 1: Rooj S1). Anopheles arabinis yog tib tug tswv cuab ntawm An.Gambian hom complex uas tau txheeb xyuas los ntawm PCR kev tshuaj xyuas. Qhov nruab nrab, 320 tus yoov tshaj cum tau raug ntes ib hmos, thaum lub sijhawm ntawd cov ntxiab nrog cov ntxiab sib xyaw ua ke tau ntes cov yoov tshaj cum ntau dua li cov ntxiab khub uas tsis muaj sib xyaw (χ2(0, 3196) = 170.0, p < 0.0001). Cov ntxiab tsis muaj ntxiab tau teeb tsa rau txhua tsib hmos tswj thaum pib, nruab nrab, thiab thaum kawg ntawm kev sim. Cov naj npawb zoo sib xws ntawm cov yoov tshaj cum tau raug ntes hauv txhua khub ntxiab, qhia txog tsis muaj kev ntxub ntxaug ntawm cov tsev (χ2(0, 1665) = 9 × 10-13, p > 0.05) thiab tsis muaj cov pej xeem poob qis thaum lub sijhawm kawm. Piv nrog cov ntxiab tswj, tus naj npawb ntawm cov yoov tshaj cum ntes tau hauv cov ntxiab uas muaj cov khoom sib xyaw tau nce ntxiv: tus tswv tsev nrhiav (χ2(0, 2107) = 138.7, p < 0.0001), kev pub ntshav tsis ntev los no (χ2(0, 650) = 32.2, p < 0.0001) thiab cev xeeb tub (χ2(0, 228) = 6.27, p = 0.0123; Cov ntaub ntawv ntxiv 1: Rooj S1). Qhov no kuj tau pom tseeb hauv tag nrho cov yoov tshaj cum ntes tau: tus tswv tsev nrhiav > ntshav nqus > cev xeeb tub > ib nrab cev xeeb tub > txiv neej.
Kev ntsuam xyuas thaj chaw ntawm qhov ua tau zoo ntawm cov tshuaj sib xyaw ua ke ntawm cov zis nyuj uas muaj ntxhiab tsw qab 24 teev. Kev sim thaj chaw tau ua nyob rau sab qab teb-nruab nrab ntawm Ethiopia (daim ntawv qhia), ze ntawm lub nroog Maki (ntxig), siv lub teeb ntawm Chaw Tswj Kab Mob (CDC) lub cuab yeej ntes (sab xis) hauv cov tsev uas muaj khub, nrog rau kev tsim qauv Latin plaub fab (duab los saum ntuj) (A). Cov duab ntes CDC uas muaj ntxhiab tsw qab nyiam thiab ntes cov poj niam Anopheles arabesques (B), tab sis tsis yog Anopheles farroes (C), hauv txoj kev sib txawv, qhov cuam tshuam ntawm lub xeev. Tsis tas li ntawd, cov cuab yeej ntes tau cov yoov tshaj cum Culex uas yog tus tswv tsev ntau ntxiv. (D) Piv nrog kev tswj hwm. Cov kab ntawm sab laug sawv cev rau qhov nruab nrab ntawm cov yoov tshaj cum uas ntes tau hauv cov khub ntawm cov cuab yeej ntes ntxhiab tsw (ntsuab) thiab cov cuab yeej tswj (qhib) (N = 10), thaum cov kab ntawm sab xis sawv cev rau qhov nruab nrab ntawm cov cuab yeej xaiv hauv cov khub ntawm cov cuab yeej tswj (qhib; N = 5). Cov cim hnub qub qhia txog qib tseem ceeb ntawm kev suav lej (*p = 0.01 thiab ***p < 0.0001)
Peb hom kab no raug ntes sib txawv hauv cov ntxiab uas muaj cov khoom sib xyaw ua ke. Nrhiav tus tswv tsev (χ2(1, 1345) = 71.7, p < 0.0001), pub ntshav (χ2(1, 517) = 16.7, p < 0.0001) thiab cev xeeb tub (χ2(1, 180) = 6.11, p = 0.0134) a.arabiensis raug ntes hauv lub ntxiab thiab tso cov khoom sib xyaw ua ke (Daim Duab 6B), thaum tus nqi ntawm An tsis txawv. Pharoensis nyob rau hauv ntau yam kev mob nkeeg tau pom (Daim Duab 6C). Rau Culex, tsuas yog muaj kev nce ntxiv ntawm cov yoov tshaj cum nrhiav tus tswv tsev tau pom hauv cov ntxiab uas tau ntxiab nrog cov khoom sib xyaw ua ke (χ2(1,1319) = 12.6, p = 0.0004; Daim Duab 6D), piv nrog cov ntxiab tswj.
Cov ntxiab ntxiab uas nyob sab nraum cov chaw yug tsiaj ntawm cov chaw yug me nyuam thiab cov zej zog nyob deb nroog hauv Ethiopia tau siv los ntsuas seb cov yoov tshaj cum malaria puas siv ntxhiab tsw ntawm cov zis nyuj ua lub cim qhia chaw nyob ntawm tus tswv tsev. Yog tsis muaj cov cim qhia ntawm tus tswv tsev, cua sov, thiab muaj lossis tsis muaj ntxhiab tsw ntawm cov zis nyuj, tsis muaj cov yoov tshaj cum raug ntes (Cov ntaub ntawv ntxiv 1: Daim duab S3). Txawm li cas los xij, thaum muaj qhov kub thiab txias siab thiab ntxhiab tsw ntawm cov zis nyuj, cov yoov tshaj cum poj niam malaria raug nyiam thiab ntes, txawm tias muaj tsawg tus, tsis hais hnub nyoog ntawm cov zis (χ2(5, 25) = 2.29, p = 0.13; Cov ntaub ntawv ntxiv 1: Daim duab S3). Qhov sib txawv, kev tswj dej tsis tau ntes cov yoov tshaj cum malaria ntawm qhov kub siab (Cov ntaub ntawv ntxiv 1: Daim duab S3).
Cov yoov tshaj cum malaria tau txais thiab faib cov tshuaj nitrogen los ntawm kev pub rau cov zis nyuj (piv txwv li, cov pas dej) los txhim kho cov yam ntxwv ntawm lub neej, zoo ib yam li lwm cov kab [2, 4, 24, 25, 26]. Cov zis nyuj yog ib qho khoom siv rov ua dua tshiab uas muaj feem cuam tshuam nrog cov chaw so rau cov kab mob malaria, xws li cov tsev nyuj thiab cov nroj tsuag siab ze rau cov tsev nyob deb nroog thiab cov chaw tso qe. Cov yoov tshaj cum poj niam nrhiav tau qhov chaw no los ntawm kev hnov ​​​​​​tsw thiab muaj peev xwm tswj kev nqus cov tshuaj nitrogen hauv cov zis, suav nrog urea, cov khoom tseem ceeb nitrogen hauv cov zis [15, 16]. Nyob ntawm tus yoov tshaj cum poj niam lub xeev physiological, cov as-ham hauv cov zis tau muab faib los txhim kho kev ya thiab kev ciaj sia ntawm cov yoov tshaj cum poj niam nrhiav tus tswv tsev, nrog rau kev ciaj sia thiab cov yam ntxwv ntawm kev yug me nyuam ntawm cov neeg noj ntshav thaum lub voj voog gonadotropic thawj zaug. Yog li ntawd, kev sib xyaw cov zis ua lub luag haujlwm tseem ceeb rau cov kab mob malaria uas kaw zoo li cov neeg laus tsis muaj zaub mov zoo [8], vim nws muab cov yoov tshaj cum poj niam nrog lub peev xwm los txais cov tshuaj nitrogen tseem ceeb los ntawm kev koom nrog kev pub zaub mov tsawg. Qhov kev tshawb pom no muaj cov txiaj ntsig tseem ceeb ntawm kev sib kis, vim tias cov poj niam ua rau lawv lub neej ntev dua, kev ua ub no thiab kev yug me nyuam ntau dua, txhua yam no cuam tshuam rau lub peev xwm ntawm cov kab mob. Ntxiv mus, tus cwj pwm no yuav yog lub hom phiaj ntawm cov kev pab cuam tswj kab mob yav tom ntej.