Nature.com saýtyna gireniňiz üçin sag boluň. Ulanýan brauzeriňiziň wersiýasynda CSS goldawy çäkli. Iň gowy tejribe üçin täzelenen brauzer ulanmagyňyzy maslahat berýäris (ýa-da Internet Explorer-de Gatnaşyklyk Režimini öçüriň). Şol bir wagtyň özünde, yzygiderli goldawy üpjün etmek üçin saýty stillersiz we JavaScript-siz görkezeris.
Suwuk nusgalaryň yz analiziniň ýaşaýyş ylymlarynda we daşky gurşawyň gözegçiliginde giň gerimli ulanylyşlary bar. Bu işde biz siňdirilişi örän duýgur kesgitlemek üçin metal tolkun geçiriji kapilýarlaryna (MCC) esaslanýan ykjam we arzan fotometr işläp düzdik. Optiki ýol ep-esli artdyrylyp we MWC-niň fiziki uzynlygyndan has uzyn bolup biler, sebäbi gofrirlenen tekiz metal gapdal diwarlary tarapyndan saçylan ýagtylyk düşüş burçuna garamazdan kapilýaryň içinde saklanyp bilner. Täze çyzykly däl optiki güýçlendirme we çalt nusga çalyşmagy we glýukozany anyklamak arkaly umumy hromogen reagentleri ulanyp, 5,12 nM çenli pes konsentrasiýalara ýetip bolýar.
Fotometriýa elýeterli hromogen reagentleriň we ýarymgeçiriji optoelektron enjamlaryň köp bolmagy sebäpli suwuk nusgalaryň yz analizinde giňden ulanylýar1,2,3,4,5. Adaty küweta esasynda siňdiriş kesgitlemesi bilen deňeşdirilende, suwuk tolkun geçiriji (LWC) kapilýarlary zondyň ýagtylygyny kapilýaryň içinde saklamak arkaly şöhle saçýar (TIR)1,2,3,4,5. Şeýle-de bolsa, mundan beýläk kämilleşdirilmezden, optiki ýol diňe LWC3.6-nyň fiziki uzynlygyna golaýdyr we LWC uzynlygyny 1,0 m-den köpeltmek ýagtylygyň güýçli gowşamagyna we köpürjikleriň we ş.m. ýokary howpuna sebäp bolar3, 7. Optiki ýoly gowulandyrmak üçin teklip edilýän köp şöhle saçýan öýjük babatda, anyklaýyş çägi diňe 2,5-8,9 esse gowulanýar.
Häzirki wagtda LWC-niň iki esasy görnüşi bar, ýagny Teflon AF kapilýarlary (söwülme görkezijisi diňe ~1.3 bolup, suwuňkydan pes) we Teflon AF ýa-da metal plyonkalar bilen örtülen kwarts kapilýarlary1,3,4. Dielektrik materiallaryň arasyndaky serhetde TIR gazanmak üçin pes döwülme görkezijisi we ýokary ýagtylyk düşme burçlary bolan materiallar gerek3,6,10. Teflon AF kapilýarlaryna görä, Teflon AF gözenekli gurluşy sebäpli dem alýar3,11 we suw nusgalaryndaky az mukdarda maddalary özüne siňdirip bilýär. Daşarky tarapy Teflon AF ýa-da metal bilen örtülen kwarts kapilýarlary üçin kwartsyň döwülme görkezijisi (1.45) köp suwuk nusgalardan ýokarydyr (meselem, suw üçin 1.33)3,6,12,13. Içi metal plyonka bilen örtülen kapilýarlaryň daşamak häsiýetleri öwrenildi14,15,16,17,18, ýöne örtük prosesi çylşyrymly, metal plyonkanyň ýüzüniň gödek we gözenekli gurluşy bar4,19.
Mundan başga-da, täjirçilik LWC-leriniň (AF Teflon örtülen kapilýarlary we AF Teflon örtülen kremniý kapilýarlary, World Precision Instruments, Inc.) başga-da käbir kemçilikleri bar, mysal üçin: näsazlyklar üçin. TIR3,10, (2) T-konnektorynyň uly ölü göwrümi (kapilýarlary, süýümleri we giriş/çykyş turbalaryny birikdirmek üçin) howa köpürjiklerini tutup biler10.
Şol bir wagtyň özünde, glýukoza derejesini kesgitlemek diabet, bagyr sirrozy we ruhy keselleri anyklamak üçin uly ähmiýete eýedir20. we fotometriýa (spektrofotometriýa 21, 22, 23, 24, 25 we kagyzdaky kolorimetriýa 26, 27, 28), galwanometriýa 29, 30, 31, fluorometriýa 32, 33, 34, 35, optiki polýarimetriýa 36, ​​ýüzleý plazmon rezonansy 37, Fabry-Perot boşlugy 38, elektrohimiýa 39 we kapillýar elektroforez 40,41 we ş.m. ýaly köp sanly anyklaýyş usullary. Şeýle-de bolsa, bu usullaryň köpüsi gymmat enjamlary talap edýär we birnäçe nanomolýar konsentrasiýalarda glýukozany anyklamak kyn bolmagynda galýar (meselem, fotometrik ölçegler üçin21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, glýukozanyň iň pes konsentrasiýasy). Prussiýa gök nanopartikullary peroksidazanyň mimikalary hökmünde ulanylanda çäklendirme diňe 30 nM boldy). Nanomolýar glýukoza analizleri köplenç molekulýar derejeli öýjük barlaglary üçin, mysal üçin, adamyň prostata rakynyň ösüşiniň basylyp saklanmagy42 we okeanda Prohlorokokkyň CO2 fiksasiýa häsiýeti üçin talap edilýär.
Bu makalada, ultrasensiw siňdiriş kesgitlemek üçin metal tolkun geçiriji kapillýaryna (MWC) esaslanýan ykjam, arzan fotometr, elektrik jilolanan içki ýüzi bolan SUS316L poslamaýan polat kapillýar, işlenip düzüldi. Yşyk düşüş burçuna garamazdan metal kapillýarlaryň içine düşüp bilýändigi üçin, optiki ýol gofrirlenen we tekiz metal ýüzlerde ýagtylygyň saçylmagy bilen ep-esli artdyrylyp bilner we MWC-niň fiziki uzynlygyndan has uzyndyr. Mundan başga-da, ölü göwrümi azaltmak we köpürjikleriň ilişip galmagynyň öňüni almak üçin optiki birikme we suwuklyk girişi/çykyşy üçin ýönekeý T-konnektor işlenip düzüldi. 7 sm MWC fotometr üçin, çyzykly däl optiki ýoluň täze güýçlendirilmegi we nusganyň çalt çalşygy sebäpli, anyklaýyş çägi 1 sm küwetli täjirçilik spektrofotometrine garanyňda takmynan 3000 esse gowulaşdyryldy we glýukoza anyklaýyş konsentrasiýasyna hem ýetip bolýar. umumy hromogen reagentleri ulanmak bilen diňe 5,12 nM.
1-nji suratda görkezilişi ýaly, MWC esasyndaky fotometr EP derejeli elektropolirowka edilen içki ýüzi bolan 7 sm uzynlykdaky MWC-den, linzaly 505 nm LED-den, sazlanyp bilýän güýçlendirme fotodetektorundan we optiki birleşdiriji we suwuklyk girişi üçin ikisinden ybarat. Çykyş. Gelýän nusgany üýtgetmek üçin Pike giriş turbasyna birikdirilen üç taraplaýyn klapan ulanylýar. Peek turbasy kwars plastinkasyna we MWC-e berk gabat gelýär, şonuň üçin T-konnektordaky ölü göwrüm iň pes derejede saklanýar we howa köpürjikleriniň tutulmagynyň öňüni alýar. Mundan başga-da, kollimirlenen şöhle T-bölekli kwars plastinkasy arkaly MWC-e aňsatlyk bilen we netijeli girizilip bilner.
Şöhle we suwuklyk nusgasy T-bölegi arkaly MCC-e girizilýär we MCC-den geçýän şöhle fotodetektor tarapyndan kabul edilýär. Boýalan ýa-da boş nusgalaryň gelýän erginleri üç taraplaýyn klapan arkaly MCC-e gezekli-gezek girizildi. Biriň kanunyna görä, reňkli nusganyň optiki dykyzlygy 1.10 deňlemesinden hasaplanyp bilner.
bu ýerde Vcolor we Vblank degişlilikde MCC-e reňkli we boş nusgalar girizilende fotodetektoryň çykyş signallarydyr we Vdark bolsa LED öçürilende fotodetektoryň fon signalydyr. Çykyş signalyndaky ΔV = Vcolor–Vblank üýtgeşmesi nusgalary üýtgetmek arkaly ölçelip bilner. Deňleme görä. 1-nji suratda görkezilişi ýaly, eger ΔV Vblank–Vdark-dan has kiçi bolsa, nusga alyş geçiş shemasy ulanylanda, Vblank-daky kiçi üýtgeşmeler (meselem, sürüş) AMWC gymmatyna az täsir edip biler.
MWC esasly fotometriň işini küweta esasly spektrofotometr bilen deňeşdirmek üçin, reňkiň ajaýyp durnuklylygy we gowy konsentrasiýa-siňdiriş çyzyklylygy sebäpli reňk nusgasy hökmünde gyzyl syýa ergini ulanyldy, boş nusga hökmünde DI H2O. 1-nji tablisada görkezilişi ýaly, ergin hökmünde DI H2O ulanylyp, yzygiderli suwuklandyrma usuly bilen birnäçe gyzyl syýa erginleri taýýarlanyldy. Suwuklandyrylmadyk asyl gyzyl boýag bolan 1-nji nusganyň (S1) deňeşdirilen konsentrasiýasy 1.0 hökmünde kesgitlenildi. 2-nji suratda deňeşdirilen konsentrasiýalary (1-nji tablisada görkezilen) 8.0 × 10–3 (çepde) we 8.2 × 10–10 (sagda) aralygynda bolan 11 gyzyl syýa nusgasynyň (S4-den S14-e çenli) optiki suratlary görkezilýär.
6-njy nusga üçin ölçeg netijeleri 3(a) suratda görkezilen. Boýalan we boş nusgalaryň arasyndaky geçiş nokatlary suratda goşa ok bilen “↔” görkezilen. Reňkli nusgalardan boş nusgalara we tersine geçirilende çykyş naprýaženiýesiniň çalt artýandygyny görmek bolýar. Suratda görkezilişi ýaly Vcolor, Vblank we degişli ΔV alnyp bilner.
(a) MWC esasly fotometr arkaly 6-njy nusga, (b) 9-njy nusga, (c) 13-nji nusga we (d) 14-nji nusga üçin ölçeg netijeleri.
9, 13 we 14 nusgalary üçin ölçeg netijeleri degişlilikde 3(b)-(d) suratlarda görkezilen. 3(d) suratda görkezilişi ýaly, ölçenen ΔV diňe 5 nV, bu bolsa şowhun gymmatyndan (2 nV) tas 3 esse köp. Kiçi ΔV-ni şowhundan tapawutlandyrmak kyn. Şeýlelik bilen, anyklaýyş çägi 8.2 × 10-10 deňeşdirme konsentrasiýasyna ýetdi (14-nji nusga). Deňlemeleriň kömegi bilen. 1. AMWC siňdirişini ölçenen Vcolor, Vblank we Vgaraňkylyk gymmatlaryndan hasaplap bolýar. 104 Vgaraňkylyk güýçlendirmesi bolan fotodetektor üçin -0.68 μV bolýar. Ähli nusgalar üçin ölçeg netijeleri 1-nji tablisada jemlenen we goşmaça materiallarda tapyp bolýar. 1-nji tablisada görkezilişi ýaly, ýokary konsentrasiýalarda tapylan siňdiriş doýgun ýaglar, şonuň üçin 3.7-den ýokary siňdirişini MWC esasly spektrometrler bilen ölçäp bolmaýar.
Deňeşdirmek üçin, gyzyl syýa nusgasy hem spektrofotometr bilen ölçeldi we ölçenen Akuwette siňdiriş derejesi 4-nji suratda görkezilen. 505 nm-däki Akuwette gymmatlyklary (1-nji tablisada görkezilişi ýaly) 10, 11 ýa-da 12 nusgalarynyň egrilerini (goşmaça suratda görkezilişi ýaly) esas hökmünde ulanmak arkaly alyndy. 4-nji suratda görkezilişi ýaly, anyklaýyş çägi 2,56 x 10-6 (9-njy nusga) deňeşdirme konsentrasiýasyna ýetdi, sebäbi 10, 11 we 12 nusgalarynyň siňdiriş egrileri biri-birinden tapawutlanyp bilmeýärdi. Şeýlelik bilen, MWC esasyndaky fotometr ulanylanda, anyklaýyş çägi küwete esasyndaky spektrofotometr bilen deňeşdirilende 3125 esse gowulandy.
Garaşlylyk siňdiriş-konsentrasiýasy 5-nji suratda görkezilen. Kýuweta ölçegleri üçin siňdiriş 1 sm ýol uzynlygynda syýanyň konsentrasiýasyna proporsionaldyr. MWC esasyndaky ölçegler üçin bolsa, pes konsentrasiýalarda siňdirişiň çyzykly däl artmagy syn edildi. Beeriň kanunyna görä, siňdiriş optiki ýol uzynlygyna proporsionaldyr, şonuň üçin siňdiriş gazanjy AEF (şol bir syýa konsentrasiýasynda AEF = AMWC/Akuweta hökmünde kesgitlenýär) MWC-niň kýuwetanyň optiki ýol uzynlygyna gatnaşygydyr. 5-nji suratda görkezilişi ýaly, ýokary konsentrasiýalarda AEF-iň hemişelik derejesi 7.0 töweregindedir, bu bolsa MWC-niň uzynlygy 1 sm kýuwetanyň uzynlygyndan takyk 7 esse uly bolany üçin dogrydyr. Şeýle-de bolsa, pes konsentrasiýalarda (degişli konsentrasiýa <1.28 × 10-5), AEF konsentrasiýanyň azalmagy bilen artýar we küweta esasyndaky ölçeg egrisini ekstrapolýasiýa etmek arkaly 8.2 × 10-10 degişli konsentrasiýada 803 gymmatyna ýeter. Şeýle-de bolsa, pes konsentrasiýalarda (degişli konsentrasiýa <1.28 × 10-5), AEF konsentrasiýanyň azalmagy bilen artýar we küweta esasyndaky ölçeg egrisini ekstrapolýasiýa etmek arkaly 8.2 × 10-10 degişli konsentrasiýada 803 gymmatyna ýeter. Однако при низких краханх (относительная гаря <1,28 × 10–5) AEF увеличивается с уменьшением чрацици и может достиит значения 803 при относительной чакрации 8,2 × 10 кг Şeýle-de bolsa, pes konsentrasiýalarda (otnositel konsentrasiýa <1.28 × 10–5), AEF konsentrasiýanyň azalmagy bilen artýar we küweta esasyndaky ölçeg egrisinden ekstrapolýasiýa edilende, 8.2 × 10–10 otnositel konsentrasiýada 803 gymmatyna ýetip biler.然而，在低浓度（相关浓度 <1.28 × 10-5 ）下， AEF 随着浓度的降低而增加，并且通过外推基于比色皿的测量曲线，在相关浓度为 8.2 × 10-10 时将达到 803 的值。28 1.2 × 10-10 浓度 1. AEF 随着 的 ， 为 为 为 为 .2 8.2 × 10-10 时 为 3 达到 达到 803 值。 Однако при низких кирахх (релевантные классиции <1,28 × 10-5) АЭП увеличивается с уменьшением чрациции, и при экстраполяции кривой измерения на основе кюветы она достигает знечины? Şeýle-de bolsa, pes konsentrasiýalarda (degişli konsentrasiýalar < 1.28 × 10-5) AED konsentrasiýanyň azalmagy bilen artýar we küweta esasyndaky ölçeg egrisinden ekstrapolýasiýa edilende, ol 8.2 × 10–10 803 deňeşdirilen konsentrasiýa gymmatyna ýetýär.Bu bolsa degişli optiki ýoluň 803 sm (AEF × 1 sm) bolmagyna getirýär, bu bolsa MWC-niň fiziki uzynlygyndan has uzyn we hatda iň uzyn täjirçilik taýdan elýeterli LWC-den hem uzyn (World Precision Instruments, Inc.-den 500 sm). Doko Engineering LLC-niň uzynlygy 200 sm). LWC-de siňdirilişiň bu çyzykly däl artmagy barada öň habar berilmedi.
6(a)-(c) suratda MWC böleginiň içki ýüzüniň optiki şekili, mikroskop şekili we optiki profil şekili degişlilikde görkezilýär. 6(a) suratda görkezilişi ýaly, içki ýüz tekiz we ýalpyldawuk, görünýän ýagtylygy şöhlelendirip bilýär we ýokary derejede şöhlelendirýär. 6(b) suratda görkezilişi ýaly, metalyň deformasiýa ukyplylygy we kristallik tebigaty sebäpli tekiz ýüzünde kiçijik mezalar we düzgünsizlikler peýda bolýar. Kiçi meýdany (<5 μm×5 μm) göz öňünde tutup, köp ýüzüň gödekligi 1,2 nm-den az (6-njy surat (c)). Kiçi meýdany (<5 μm×5 μm) göz öňünde tutup, köp ýüzüň gödekligi 1,2 nm-den az (6-njy surat (c)). Видуу малой площ ради (<5 мкм × 5 мкм) шероховатость большей части поверхности соверляет менее 1,2 нм (рис. 6 (в)). Kiçi meýdany (<5 µm×5 µm) sebäpli, ýüzüň köp böleginiň gödekligi 1,2 nm-den az (6-njy surat (c)).考虑到小面积（ <5 μm × 5 μm ），大多数表面的粗糙度小于 1,2 nm （图 6 （c ））。考虑到小面积（ <5 μm × 5 μm ），大多数表面的粗糙度小于 1,2 nm （图 6 （c ））。 Учитывая небольшую площадь (<5 мкм × 5 мкм), шероховатость большинства поверхностей соверляет менее 1,2 нм (рис. 6 (в)). Kiçi meýdany (<5 µm × 5 µm) göz öňünde tutup, köp ýüzleriň gödekligi 1,2 nm-den azdyr (6-njy surat (c)).
(a) Optiki surat, (b) mikroskop suraty we (c) MWC kesiminiň içki ýüzüniň optiki suraty.
7(a) suratda görkezilişi ýaly, kapillýardaky optiki ýol LOP düşme burçy θ bilen kesgitlenýär (LOP = LC/sinθ, bu ýerde LC kapillýaryň fiziki uzynlygydyr). DI H2O bilen doldurylan Teflon AF kapillýarlary üçin düşme burçy 77,8° kritiki burçdan uly bolmaly, şonuň üçin LOP has-da gowulandyrylmasyz 1,02 × LC-den azdyr3.6. MWC bilen bolsa, kapillýaryň içinde ýagtylygyň çäklendirilmegi döwülme görkezijisinden ýa-da düşme burçundan garaşsyzdyr, şonuň üçin düşme burçy azalanda, ýagtylyk ýoly kapillýaryň uzynlygyndan has uzyn bolup biler (LOP » LC). 7(b) suratda görkezilişi ýaly, gofrirlenen metal ýüzi ýagtylygyň saçylmasyna sebäp bolup biler, bu bolsa optiki ýoly ep-esli artdyryp biler.
Şonuň üçin, MWC üçin iki ýagtylyk ýoly bar: şöhlelenmeýän göni ýagtylyk (LOP = LC) we gapdal diwarlaryň arasynda köp sanly şöhlelenmeleri bolan arra dişli ýagtylyk (LOP » LC). Biriň kanunyna görä, geçirilýän göni we zigzag şöhlesiniň intensiwligi degişlilikde PS×exp(-α×LC) we PZ×exp(-α×LOP) görnüşinde beýan edilip bilner, bu ýerde α yzygiderliligi doly derejede syýa konsentrasiýasyna bagly bolan siňdiriş koeffisiýentidir.
Ýokary konsentrasiýaly syýa üçin (meselem, degişli konsentrasiýa >1.28 × 10-5), zigzag çyrasy ýokary derejede gowşaýar we onuň intensiwligi uly siňdiriş koeffisiýenti we has uzyn optiki ýol sebäpli göni çyradan has pesdir. Ýokary konsentrasiýaly syýa üçin (meselem, degişli konsentrasiýa >1.28 × 10-5), zigzag çyrasy ýokary derejede gowşaýar we onuň intensiwligi uly siňdiriş koeffisiýenti we has uzyn optiki ýol sebäpli göni çyradan has pesdir. Для чернил с высокой крациций (например, относительная края> 1,28 × 10-5) зигзагооб програмный свет сильно зухает, а его инт инсентенность намного ниже, чем у прямого света, из длинного оптического излучения. Ýokary konsentrasiýaly syýa üçin (meselem, deňeşdirme konsentrasiýasy >1.28×10-5), zigzag çyrasy güýçli gowşaýar we onuň intensiwligi uly siňdiriş koeffisiýenti we has uzyn optiki emissiýa sebäpli göni çyradan has pesdir.ýol.对于高浓度墨水（例如，相关浓度> 1,28 × 10-5 ）， Z 字形光衰减很大，其强度远低于直光，这是由于吸收系数大，光学时间更长。28 高浓度 墨水 1. 1.> 1.28 × 10-5） ， z 字形 1. 大 1. 1. 1. 长 长 长 长 长 长 长 长 长 长 长 长 长 长 长 长Для чернил с высокой крациций (например, релевантные срации> 1,28 × 10-5) зигзагооб сней свет значительно ослабляется, и его интеншенность намного нижже, чем у прямого сещещещик boлее длительного оптического времени. Ýokary konsentrasiýaly syýalar üçin (meselem, degişli konsentrasiýalar >1.28×10-5), zigzag çyrasy ep-esli gowşaýar we onuň intensiwligi uly siňdiriş koeffisiýenti we has uzyn optiki wagt sebäpli göni çyradan has pes bolýar.kiçi ýol.Şeýlelik bilen, göni ýagtylyk siňdirişiň kesgitlenmesinde agdyklyk etdi (LOP=LC) we AEF ~7.0 derejesinde sabit saklandy. Tersine, siňdiriş koeffisiýenti syýa konsentrasiýasynyň peselmegi bilen peselende (meselem, degişli konsentrasiýa <1.28 × 10-5), zigzag çyrasynyň intensiwligi göni çyranyňkydan has çalt artýar we soňra zigzag çyrasy has möhüm rol oýnap başlaýar. Tersine, siňdiriş koeffisiýenti syýa konsentrasiýasynyň peselmegi bilen peselende (meselem, degişli konsentrasiýa <1.28 × 10-5), zigzag çyrasynyň intensiwligi göni çyranyňkydan has çalt artýar we soňra zigzag çyrasy has möhüm rol oýnap başlaýar. Напротиви, когда коэфффентент поглощения уменьшается с уменьшением чранси (например, относительная чера <1,28 × 10-5) киинает играть зигзагооб Сныйный свет. Tersine, siňdiriş koeffisiýenti syýanyň konsentrasiýasynyň peselmegi bilen azalanda (meselem, deňeşdirme konsentrasiýasy <1.28×10-5), zigzag çyrasynyň intensiwligi göni çyranyňkydan has çalt artýar we soňra zigzag çyrasy çalyp başlaýar.has möhüm rol.相反，当吸收系数随着墨水浓度的降低而降低时（例如，相关浓度 <1.28 × 10-5 ）， Z 字形光的强度比直光增加得更快，然后 Z 字形光开始发挥作用一个更重要的角色。28 1.28 × 10-5） 浓度 1. 1. 1. 1. 1. 1. 1. 1. I 1. 1. 1. 1. 1. 1. 1. 1. I I I I. зигзагооб зныйный свет Кинаинает играть более важную аман. Tersine, siňdiriş koeffisiýenti syýa konsentrasiýasynyň azalmagy bilen azalanda (meselem, degişli konsentrasiýa < 1.28×10-5), zigzag çyrasynyň intensiwligi göni çyradan has çalt artýar we soňra zigzag çyrasy has möhüm rol oýnap başlaýar.rol keşbi.Şonuň üçin, arra dişli optiki ýol (LOP » LC) sebäpli, AEF 7.0-den has köp artdyrylyp bilner. MWC-niň takyk ýagtylyk geçirijilik häsiýetlerini tolkun geçirijisi režimi teoriýasyny ulanyp alyp bolýar.
Optiki ýoly gowulandyrmakdan başga-da, çalt nusga geçişi örän pes anyklaýyş çäklerine hem goşant goşýar. MCC-niň kiçi göwrümi (0,16 ml) sebäpli, MCC-däki erginleri geçiş we çalyşmak üçin gerek bolan wagt 20 sekuntdan az bolup biler. 5-nji suratda görkezilişi ýaly, AMWC-niň minimal anyklanyp bilinýän gymmaty (2,5 × 10–4) Acuvette-den (1,0 × 10–3) 4 esse pes. Kapilýardaky akýan erginiň çalt geçişi, küwetadaky saklanýan ergin bilen deňeşdirilende siňdiriş tapawudynyň takyklygyna ulgamyň şowhunynyň (meselem, sürüşmegiň) täsirini azaldýar. Mysal üçin, 3(b)-(d) suratda görkezilişi ýaly, kiçi göwrümli kapilýardaky çalt nusga geçişi sebäpli ΔV sürüş signalyndan aňsatlyk bilen tapawutlandyrylyp bilner.
2-nji tablisada görkezilişi ýaly, dürli konsentrasiýalardaky glýukoza erginleriniň toplumy DI H2O ergin hökmünde ulanylyp taýýarlanyldy. Boýalan ýa-da boş nusgalar glýukoza erginini ýa-da deionlaşdyrylan suwy glýukoza oksidazasynyň (GOD) we peroksidazanyň (POD) 37 hromogen erginleri bilen degişlilikde 3:1 möçber gatnaşygynda garyşdyrmak arkaly taýýarlanyldy. 8-nji suratda glýukoza konsentrasiýalary 2,0 mM (çepde) we 5,12 nM (sagda) aralygynda bolan dokuz boýalan nusganyň (S2-S10) optiki suratlary görkezilýär. Glýukoza konsentrasiýasynyň peselmegi bilen gyzyllyk azalýar.
4, 9 we 10 nusgalarynyň MWC esasly fotometr bilen ölçenmeginiň netijeleri degişlilikde 9(a)-(c) suratlarda görkezilen. 9(c) suratda görkezilişi ýaly, ölçenýän ΔV has durnukly bolmaýar we ölçenýän wagtynda GOD-POD reagentiniň reňki (glýukoza goşmazdan hem) ýagtylykda ýuwaş-ýuwaş üýtgeýänligi sebäpli ýuwaş-ýuwaşdan artýar. Şeýlelik bilen, glýukoza konsentrasiýasy 5.12 nM-den az bolan nusgalar üçin yzygiderli ΔV ölçenmeleri gaýtalanyp bolmaýar (nusga 10), sebäbi ΔV ýeterlik derejede kiçi bolanda, GOD-POD reagentiniň durnuksyzlygyny indi gözardy edip bolmaz. Şonuň üçin, glýukoza ergini üçin anyklaýyş çägi 5.12 nM, ýöne degişli ΔV gymmaty (0.52 µV) şowhun gymmatyndan (0.03 µV) has uly, bu bolsa kiçi ΔV-niň henizem anyklanyp bilinjekdigini görkezýär. Bu anyklaýyş çägi has durnukly hromogen reagentleri ulanmak arkaly has-da gowulandyrylyp bilner.
(a) MWC esasly fotometr arkaly 4-nji nusga, (b) 9-njy nusga we (c) 10-njy nusga üçin ölçeg netijeleri.
AMWC siňdirilişini ölçenen Vcolor, Vblank we Vdark gymmatlyklary arkaly hasaplap bolýar. 105 V güýçlendirme koeffisiýenti bolan fotodetektor üçin dark -0,068 μV deňdir. Ähli nusgalar üçin ölçegleri goşmaça materialda belläp bolýar. Deňeşdirmek üçin, glýukoza nusgalary hem spektrofotometr bilen ölçeldi we Acuvette-iň ölçenen siňdirilişi 10-njy suratda görkezilişi ýaly 0,64 µM (nusga 7) anyklaýyş çägine ýetdi.
Absorbsiýa bilen konsentrasiýanyň arasyndaky gatnaşyk 11-nji suratda görkezilen. MWC esasly fotometr bilen, küweta esasly spektrofotometr bilen deňeşdirilende, anyklaýyş çäginde 125 esse gowulaşma gazanyldy. Bu gowulaşma GOD-POD reagentiniň durnuklylygynyň pes bolmagy sebäpli gyzyl syýa synagyndan pes. Pes konsentrasiýalarda absorbsiýanyň çyzykly däl ýokarlanmagy hem syn edildi.
MWC esasly fotometr suwuk nusgalary örän duýgur anyklamak üçin işlenip düzüldi. Optiki ýol MWC-niň fiziki uzynlygyndan has uzyn we has uzyn bolup biler, sebäbi gofrirlenen tekiz metal gapdal diwarlary tarapyndan saçylan ýagtylyk düşüş burçuna garamazdan kapillýaryň içinde saklanyp bilner. Täze çyzykly däl optik güýçlendirme we çalt nusga çalyşmak hem-de glýukozany anyklamak arkaly adaty GOD-POD reagentlerini ulanyp, 5,12 nM çenli konsentrasiýalara ýetip bolýar. Bu ykjam we arzan fotometr ýaşaýyş ylymlarynda we yz analizi üçin daşky gurşawyň gözegçiliginde giňden ulanylar.
1-nji suratda görkezilişi ýaly, MWC esasly fotometr 7 sm uzynlykdaky MWC-den (içki diametri 1,7 mm, daşky diametri 3,18 mm, EP klasy elektropolirowka edilen içki ýüzi, SUS316L poslamaýan polat kapillýar), 505 nm tolkun uzynlygyndaky LED-den (Thorlabs M505F1) we linzalardan (şöhle ýaýradyşy takmynan 6,6 gradus), üýtgeýän güýçlendiriji fotodetektordan (Thorlabs PDB450C) we optiki aragatnaşyk we suwuklygyň girmegi/çykmagy üçin iki T-konnektordan ybarat. T-konnektor MWC we Peek turbalarynyň (0,72 mm ID, 1,6 mm OD, Vici Valco Corp.) berk ýerleşdirilip, ýelmeşdirilen PMMA turbasyna açyk kwarts plastinasyny ýelmeşdirmek arkaly ýasalýar. Giriş nusgasyny üýtgetmek üçin Pike giriş turbasyna birikdirilen üç taraplaýyn klapan ulanylýar. Fotodetektor kabul edilen optiki güýji P-ni güýçlendirilen naprýaženiýe signaly N×V-a öwrüp bilýär (bu ýerde V/P = 1550 nm-de 1.0 V/W, güýçlendirme N-ni 103-107 aralygynda el bilen sazlap bolýar). Gysgalyk üçin çykyş signaly hökmünde N×V-niň ýerine V ulanylýar.
Deňeşdirmek üçin, suwuk nusgalaryň siňdirilişini ölçemek üçin 1,0 sm küwetli öýjükli täjirçilik spektrofotometri (R928 ýokary netijeli fotomultiplierli Agilent Technologies Cary 300 seriýasy) hem ulanyldy.
MWC kesiminiň içki ýüzi degişlilikde 0,1 nm we 0,11 µm dik we gapdal çözgütli optiki ýüz profileri (ZYGO New View 5022) arkaly barlanyldy.
Ähli himiki maddalar (analitik derejeli, başga arassalamak gerek däl) “Sichuan Chuangke Biotechnology Co., Ltd.” kompaniýasyndan satyn alyndy. Glýukoza synag toplumlaryna glýukoza oksidaza (GOD), peroksidaza (POD), 4-aminoantipirin we fenol we ş.m. girýär. Hromogen ergin adaty GOD-POD 37 usuly bilen taýýarlanyldy.
2-nji tablisada görkezilişi ýaly, dürli konsentrasiýalardaky glýukoza erginleriniň toplumy DI H2O-ny yzygiderli suwlandyrma usuly arkaly suwlandyryjy hökmünde ulanyp taýýarlanyldy (jikme-jiklikler üçin Goşmaça materiallara serediň). Glýukoza erginini ýa-da deionlaşdyrylan suwy hromogen ergin bilen degişlilikde 3:1 möçberinde garyşdyryp, reňklenen ýa-da boş nusgalary taýýarlaň. Ähli nusgalar ölçegden öň 10 minutlap ýagtylykdan goralan 37°C temperaturada saklandy. GOD-POD usulynda reňklenen nusgalar 505 nm-de siňdiriş maksimumy bilen gyzyl reňke öwrülýär we siňdiriş glýukoza konsentrasiýasyna diýen ýaly proporsionaldyr.
1-nji tablisada görkezilişi ýaly, gyzyl syýa erginleriniň tapgyry (Ostrich Ink Co., Ltd., Tianjin, Hytaý) DI H2O-ny ergin hökmünde ulanyp, yzygiderli suwuklandyrma usuly bilen taýýarlanyldy.
Bu makalany nähili sitirlemeli: Baý, M. we başg. Metall tolkun geçiriji kapillýarlara esaslanýan kompakt fotometr: glýukozanyň nanomolýar konsentrasiýalaryny kesgitlemek üçin. ylym. 5, 10476. doi: 10.1038/srep10476 (2015).
Dress, P. we Franke, H. Suwuklyk-özenli tolkun geçirijisini ulanyp, suwuklyk analiziniň we pH-gymmatynyň gözegçiliginiň takyklygyny ýokarlandyrmak. Dress, P. we Franke, H. Suwuklyk-özenli tolkun geçirijisini ulanyp, suwuklyk analiziniň we pH-gymmatynyň gözegçiliginiň takyklygyny ýokarlandyrmak.Dress, P. we Franke, H. Suwuklyk analiziniň we pH gözegçiliginiň takyklygyny suwuklyk esasy tolkun geçirijisi bilen gowulandyrmak. Köýnek, P. & Franke, H. 使用液芯波导提高液体分析和 pH 值控制的准确性。 Köýnek, P. & Franke, H. 使用液芯波导提高液体分析和 pHDress, P. we Franke, H. Suwuklyk seljermesiniň we pH gözegçiliginiň suwuklyk esasy tolkun geçirijilerini ulanyp takyklygyny ýokarlandyrmak.Ylmy taýdan geç. metr. 68, 2167–2171 (1997).
Li, QP, Zhang, J. -Z., Millero, FJ we Hansell, DA Uzak ýolly suwuk tolkun geçiriji kapillýar öýjük bilen deňiz suwundaky ammoniumyň yzyny üznüksiz kolorimetrik kesgitlemek. Li, QP, Zhang, J.-Z., Millero, FJ we Hansell, DA Uzak ýolly suwuk tolkun geçiriji kapillýar öýjük bilen deňiz suwundaky ammoniumyň yzyny üznüksiz kolorimetrik kesgitlemek.Li, KP, Çžan, J.-Z., Millero, FJ we Hansel, DA Suwuk tolkun geçirijili kapillýar öýjük arkaly deňiz suwundaky ammoniumyň yz mukdarynyň üznüksiz kolorimetrik kesgitlenmesi. Li, QP, Zhangang, J. -Z., Millero, FJ & Hansell, DA 用长程液体波导毛细管连续比色测定海水中的痕量铵。 Li, QP, Zhangang, J.-Z., Millero, FJ & Hansell, DA.Li, KP, Çžan, J.-Z., Millero, FJ we Hansel, DA Uzak aralykly suwuk tolkun geçiriji kapillýarlary ulanyp, deňiz suwundaky ammoniumyň yz mukdaryny üznüksiz kolorimetrik kesgitlemek.Mart aýynda himiýa. 96, 73–85 (2005).
Páscoa, RNMJ, Tóth, IV & Rangel, AOSS Spektroskopik anyklaýyş usullarynyň duýgurlygyny ýokarlandyrmak üçin akym esasynda analiz usullarynda suwuk tolkun geçiriji kapillýar öýjükleriniň soňky ulanylyşlary barada syny. Páscoa, RNMJ, Tóth, IV & Rangel, AOSS Spektroskopik anyklaýyş usullarynyň duýgurlygyny ýokarlandyrmak üçin akym esasynda analiz usullarynda suwuk tolkun geçiriji kapillýar öýjükleriniň soňky ulanylyşlary barada syny.Pascoa, RNMJ, Toth, IV we Rangel, AOSS Spektroskopik anyklaýyş usullarynyň duýgurlygyny ýokarlandyrmak üçin akym seljeriş usullarynda suwuk tolkun geçiriji kapillýar öýjükleriniň soňky ulanylyşlaryna syn. Páscoa, RNMJ, Tóth, IV & Rangel, AOSS 回顾液体波导毛细管单元在基于流动的分析技术中的最新应用，以提高光谱检测方法的灵敏度。 Páscoa, rnmj, tóth, IV & rangel, aoss 回顾 液体 毛细管 中 的 的 提高 灵敏度 灵敏度 灵敏度 灵敏度 灵敏度 灵敏度 灵敏度 灵敏度 灵敏度 灵敏度 灵敏度 灵敏度 灵敏度 灵敏度 灵敏度 灵敏度 灵敏度 灵敏度 灵敏度Pascoa, RNMJ, Toth, IV we Rangel, AOSS Spektroskopik anyklaýyş usullarynyň duýgurlygyny ýokarlandyrmak üçin akym esasynda analitik usullarda suwuk tolkun geçiriji kapillýar öýjükleriniň soňky ulanylyşynyň syny.anus. Him. Kanuny 739, 1-13 (2012).
Wen, T., Gao, J., Zhang, J., Bian, B. we Shen, J. Içi boş tolkun geçirijileri üçin kapillýardaky Ag, AgI plýonkalarynyň galyňlygynyň öwrenilmegi. Wen, T., Gao, J., Zhang, J., Bian, B. we Shen, J. Içi boş tolkun geçirijileri üçin kapillýardaky Ag, AgI plýonkalarynyň galyňlygynyň öwrenilmegi.Wen T., Gao J., Zhang J., Bian B. we Shen J. Içi boş tolkun geçirijileri üçin kapillýardaky Ag, AgI plýonkalarynyň galyňlygynyň öwrenilmegi. Wen, T., Gao, J., Zhang, J., Bian, B. & Şen, J. 中空波导毛细管中 Ag 、 AgI 薄膜厚度的研究。 Wen, T., Gao, J., Zhang, J., Bian, B. we Shen, J. Howa geçirijisindäki Ag we AgI inçe örtüginiň galyňlygy boýunça gözleg.Wen T., Gao J., Zhang J., Bian B. we Shen J. Içi boş tolkun geçiriji kapillýarlarda Ag, AgI inçe plýonka galyňlygynyň öwrenilmegi.Infragyzyl fizika. tehnologiýa 42, 501–508 (2001).
Gimbert, LJ, Haygarth, PM & Worsfold, PJ Uzyn ýol uzynlygyndaky suwuk tolkun geçiriji kapillýar öýjük we gaty ýagdaý spektrofotometriki deteksiýa arkaly akym inýeksiýasyny ulanyp, tebigy suwlardaky fosfatyň nanomolýar konsentrasiýalaryny kesgitlemek. Gimbert, LJ, Haygarth, PM & Worsfold, PJ Uzyn ýol uzynlygyndaky suwuk tolkun geçiriji kapillýar öýjük we gaty ýagdaý spektrofotometriki deteksiýa arkaly akym inýeksiýasyny ulanyp, tebigy suwlardaky fosfatyň nanomolýar konsentrasiýalaryny kesgitlemek.Gimbert, LJ, Haygarth, PM we Worsfold, PJ Suwuk tolkun geçiriji kapillýar öýjük we gaty ýagdaý spektrofotometriki deteksiýa arkaly akym inýeksiýasyny ulanyp tebigy suwlardaky nanomolýar fosfat konsentrasiýalaryny kesgitlemek. Gimbert, LJ, Haýgarth, PM & Worsfold, PJ 使用流动注射和长光程液体波导毛细管和固态分光光度检测法测定天然水中纳摩尔浓度的磷酸盐。 Gimbert, LJ, Haygarth, PM & Worsfold, PJ Suwuk şpris we uzak aralykly suwuk tolkun geçiriji kapillýar turba arkaly tebigy suwdaky fosfat konsentrasiýasyny kesgitlemek.Gimbert, LJ, Haygarth, PM we Worsfold, PJ Uzyn optiki ýol we gaty ýagdaý spektrofotometriki deteksiýa bilen inýeksiýa akymyny we kapillýar tolkun geçirijisini ulanyp tebigy suwdaky nanomolýar fosfatyň kesgitlenmegi.Taranta 71, 1624–1628 (2007).
Belz, M., Dress, P., Suhitskiy, A. we Liu, S. Suwuk tolkun geçiriji kapillýar öýjükleriniň çyzyklylygy we netijeli optiki ýolunyň uzynlygy. Belz, M., Dress, P., Suhitskiy, A. we Liu, S. Suwuk tolkun geçiriji kapillýar öýjükleriniň çyzyklylygy we netijeli optiki ýolunyň uzynlygy.Belz M., Dress P., Suhitsky A. we Liu S. Kapilýar öýjüklerdäki suwuk tolkun geçirijilerinde çyzyklylyk we netijeli optiki ýol uzynlygy. Belz, M., Köýnek, P., Suhitskiý, A. & Liu, S. 液体波导毛细管细胞的线性和有效光程长度。 Belz, M., Dress, P., Suhitskiy, A. we Liu, S. Suwuk suwuň çyzyklylygy we netijeli uzynlygy.Belz M., Dress P., Suhitsky A. we Liu S. Kapilýar öýjük suwuklyk tolkunynda çyzykly we netijeli optiki ýol uzynlygy.SPIE 3856, 271–281 (1999).
Dallas, T. we Dasgupta, PK Tuneliň ahyryndaky ýagtylyk: suwuk ýadroly tolkun geçirijileriniň soňky analitik ulanylyşy. Dallas, T. we Dasgupta, PK Tuneliň ahyryndaky ýagtylyk: suwuk ýadroly tolkun geçirijileriniň soňky analitik ulanylyşy.Dallas, T. we Dasgupta, PK Tunel ujundaky ýagtylyk: suwuk ýadroly tolkun geçirijileriniň soňky analitik ulanylyşy. Dallas, T. & Dasgupta, Tuneliň ahyrynda PK Light ：液芯波导的最新分析应用。 Dallas, T. & Dasgupta, Tuneliň ahyrynda PK Light ：液芯波导的最新分析应用。Dallas, T. we Dasgupta, PK Tuneliň ahyryndaky ýagtylyk: suwuk ýadroly tolkun geçirijileriniň iň soňky analitik ulanylyşy.TrAC, trend seljermesi. Himiki maddalar. 23, 385–392 (2004).
Ellis, PS, Gentle, BS, Grace, MR we McKelvie, ID Akym seljermesi üçin köpugurly umumy içki şöhlelenme fotometriki anyklaýyş öýjük. Ellis, PS, Gentle, BS, Grace, MR we McKelvie, ID Akym seljermesi üçin köpugurly umumy içki şöhlelenme fotometriki anyklaýyş öýjük.Ellis, PS, Gentle, BS, Grace, MR we McKelvey, ID Akym seljermesi üçin uniwersal fotometrik umumy içki şöhlelenme öýjük. Ellis, PS, mylaýym, BS, Grace, MR & MakKelwi, ID 用于流量分析的多功能全内反射光度检测池。 Ellis, PS, Gentle, BS, Grace, MR we McKelvie, IDEllis, PS, Gentle, BS, Grace, MR we McKelvey, ID Akym seljermesi üçin Universal TIR fotometrik öýjük.Taranta 79, 830–835 (2009).
Ellis, PS, Lyddy-Meaney, AJ, Worsfold, PJ we McKelvie, ID Deňiz kenaryndaky suwlaryň akym inýeksiýa analizinde ulanmak üçin köpugurly fotometrik akym öýjük. Ellis, PS, Lyddy-Meaney, AJ, Worsfold, PJ we McKelvie, ID Deňiz kenaryndaky suwlaryň akym inýeksiýa analizinde ulanmak üçin köpugurly fotometrik akym öýjük.Ellis, PS, Liddy-Minnie, AJ, Worsfold, PJ we McKelvey, ID Deňiz kenaryndaky suwlaryň akymyny seljermek üçin ulanylýan köp şöhlelenýän fotometrik akym öýjük. Ellis, PS, Liddi-Meni, AJ, Worsfold, PJ & MakKelwi, ID 多反射光度流动池，用于河口水域的流动注入分析。 Ellis, PS, Lyddy-Meaney, AJ, Worsfold, PJ we McKelvie, ID.Ellis, PS, Liddy-Minnie, AJ, Worsfold, PJ we McKelvey, ID Deňiz kenaryndaky suwlarda akym inýeksiýasyny seljermek üçin köp şöhlelendiriji fotometrik akym öýjük.anus Çim. Acta 499, 81-89 (2003).
Pan, J. -Z., Yao, B. we Fang, Q. Nanolitr ölçegli nusgalar üçin suwuklyk-özenli tolkun geçirijisiniň siňdirişini anyklamaga esaslanýan el fotometri. Pan, J.-Z., Yao, B. we Fang, Q. Nanolitr ölçegli nusgalar üçin suwuklyk-özenli tolkun geçirijisiniň siňdirişini anyklamaga esaslanýan el fotometri.Pan, J.-Z., Yao, B. we Fang, K. Nanolitr ölçegli nusgalar üçin suwuk ýadroly tolkun uzynlygyny siňdirişini anyklamaga esaslanýan el fotometri. Pan, J. -Z., Oa, B. & Fang, Q. 基于液芯波导吸收检测的纳升级样品手持光度计。 Pan, J.-Z., oa, B. & Fang, S:Pan, J.-Z., Yao, B. we Fang, K. Suwuk ýadro tolkunynda siňdirilişi anyklamaga esaslanýan nanosölçegli nusgaly el fotometri.anus Chemical. 82, 3394–3398 (2010).
Zhang, J.-Z. Spektrofotometrik anyklaýyş üçin uzyn optiki ýoly bolan kapillýar akym öýjüklerini ulanmak arkaly inýeksiýa akymynyň analiziniň duýgurlygyny ýokarlandyryň. anus. ylym. 22, 57–60 (2006).
D'Sa, EJ we Steward, RG Suwuk kapillýar tolkun geçirijisiniň absorbsiýa spektroskopiýasynda ulanylyşy (Byrne we Kaltenbaheriň teswirine jogap beriň). D'Sa, EJ we Steward, RG Suwuk kapillýar tolkun geçirijisiniň absorbsiýa spektroskopiýasynda ulanylyşy (Byrne we Kaltenbaheriň teswirine jogap beriň).D'Sa, EJ we Steward, RG Suwuk kapillýar tolkun geçirijileriniň absorbsiýa spektroskopiýasynda ulanylyşy (Byrne we Kaltenbaheriň teswirlerine jogap). D'Sa, EJ & Steward, RG r Byrne 和 Kaltenbaher 的评论）。 D'Sa, EJ & Steward, RG Suwuk 毛绿波波对在 siňdiriş spektriniň ulanylmagy （回复 Börne 和 Kaltenbaher 的评论）.D'Sa, EJ we Steward, RG Absorbsiýa spektroskopiýasy üçin suwuk kapillýar tolkun geçirijileri (Byrne we Kaltenbaheriň belliklerine jogap hökmünde).limonol. Okeanolog. 46, 742–745 (2001).
Khijwania, SK we Gupta, BD Optik süýümli ejensens meýdanynyň siňdiriş sensory: Süýüm parametrleriniň we zondyň geometriýasynyň täsiri. Khijwania, SK we Gupta, BD Optik süýümli ejensens meýdanynyň siňdiriş sensory: Süýüm parametrleriniň we zondyň geometriýasynyň täsiri.Hijwaniýa, SK we Gupta, BD Optik süýümli meýdanyň siňdiriş sensory: süýüm parametrleriniň we zond geometriýasynyň täsiri. Khijwania, SK & Gupta, BD 光纤倏逝场吸收传感器：光纤参数和探头几何形状的影响。 Khijwania, SK we Gupta, BDHijwaniýa, SK we Gupta, BD Ewanescent meýdanynyň siňdiriş süýümli optiki sensorlar: süýüm parametrleriniň we zond geometriýasynyň täsiri.Optika we Kwant Elektronikasy 31, 625–636 (1999).
Biedrzycki, S., Buric, MP, Falk, J. we Woodruff, SD Içi boş, metal bilen örtülen, tolkun geçirijili Raman datçikleriniň burç çykyşy. Biedrzycki, S., Buric, MP, Falk, J. we Woodruff, SD Içi boş, metal bilen örtülen, tolkun geçirijili Raman datçikleriniň burç çykyşy.Bedjitski, S., Buriç, MP, Falk, J. we Woodruff, SD Metall örtükli içi boş tolkun geçiriji Raman datçikleriniň burç çykyşy. Biedrzycki, S., Buric, MP, Falk, J. & Woodruff, SD 空心金属内衬波导拉曼传感器的角输出。 Biedrzycki, S., Buric, MP, Falk, J. & Woodruff, SD.Bedjitski, S., Buriç, MP, Falk, J. we Woodruff, SD Ýalaňaç metal tolkun geçirijisi bolan Raman sensorynyň burç çykyşy.51-nji ýyly saýlamak üçin arza, 2023-2025 (2012).
Harrington, JA Infragyzyl geçirijilik üçin boş tolkun geçirijilerine umumy syn. süýümli integrasiýa. saýlamak üçin. 19, 211–227 (2000).